Abstract
Betennelse er en viktig funksjon i kreftutvikling. Tumorassosierte makrofager (TAM) kan være forbundet med enten dårlig eller forbedret prognose, avhengig av deres egenskaper og polarisering. Nåværende kunnskap om den prognostiske betydningen av TAMs i blærekreft er begrenset og ble undersøkt i denne studien. Vi analyserte 184 urothelial blærekreftpasienter som gjennomgår transuretral reseksjon av en blære svulst eller radikal cystektomi. CD68 (pan-makrofag markør), MAC387 (polarisert mot type 1 makrofager), og smart-1 /Stabilin-en (type 2 makrofager og lymfatiske /blodkar) ble oppdaget immunohistochemically. Median oppfølgingstid var 6,0 år. Høye makro teller forbundet med en høyere pT kategori og klasse. Blant pasienter som gjennomgår transuretral reseksjon, studerte markører bortsett fra CLEVER-1 /Stabilin-en var assosiert med økt risiko for progresjon og dårligere sykdomsspesifikke og total overlevelse i univariate analyser. Høye nivåer av to makro markører (CD68 /MAC387
+ /+ eller CD68 /CLEVER-en
+ /+ grupper) hadde en selvstendig prognostisk rolle etter transuretral reseksjon i multivariate analyser. I cystektomi årsklasse, MAC387, alene og i kombinasjon med CD68, var assosiert med dårligere overlevelse i univariat analyse, men ingen av markørene var uavhengige prediktorer for utfall i multivariate analyser. Som konklusjon, denne studien viser at makro fenotyper gi betydelig uavhengig prognostisk informasjon, særlig i blærekreft gjennomgår transurethral reseksjon
Citation. Boström MM, Irjala H, Mirtti T, Taimen P, Kauko T, Ålgars A, et al. (2015) Tumor-Associated Makrofager gi betydelig prognostisk informasjon i urothelial blærekreft. PLoS ONE 10 (7): e0133552. doi: 10,1371 /journal.pone.0133552
Redaktør: Hari K. Koul, Louisiana State University Health Sciences sentrum, UNITED STATES
mottatt: 14 februar 2015; Godkjent: 29 juni 2015; Publisert: 21.07.2015
Copyright: © 2015 Boström et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering:. Peter J. Boström fått støtte fra Juselius Foundation (https://www.sigridjuselius.fi/foundation) og Kreftforeningen i Finland (http: //www.cancer.fi/en/). Sirpa Jalkanen fått støtte fra den finske Medical Foundation (https://www.laaketieteensaatio.fi/fin/in_english/), Kirsti og Tor Johanssons Heart and Cancer Foundation. Minna M. Boström fått støtte fra Orion-Farmos (https://www.orion.fi/en/rd/) og Instrumentariumin tiedesäätiö (https://www.instrufoundation.fi). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Sammenhengen mellom kreftutvikling og betennelse er generelt akseptert, og tumor-fremme betennelse er en av kjennetegnene til kreft [1]. Inflammatoriske celler, kjemokiner og cytokiner er til stede i tumorer fra de tidligste stadiene, og er uunnværlige deltakere i neoplastisk prosessen [2, 3]. Tumorassosierte makrofager (TAM) avledet fra perifere blodmonocytter og rekruttert av kjemokiner er en viktig komponent i leukocytt infiltrat i tumorer. Plastisitet og mangfold er universelle funksjoner i mononukleære fagocytter, som kan ha enten en beskyttende eller en svulst fremmende rolle, avhengig microenvironmental signaler [4]. TAMs er generelt rettet mot å fremme tumorvekst og angiogenese, undertrykke adaptiv immunitet, og de har en viktig rolle i tumorcellemigrering, invasjon og metastase. Imidlertid kan makrofager også eliminere tumorceller, og er derfor ofte forbundet med bedre sykdomsprognosen [2, 5]. Til tross for fremgang i å forstå samspillet mellom betennelse og kreft, viktige spørsmål fortsatt er ubesvart. Kreft-relaterte inflammasjon varierer mellom tumortyper, og det er viktig å definere hvilke komponenter som er spesifikke for bestemte vev og svulster. Det vil være viktig å finne den optimale stimuli for å endre en svulst fremmende mikro til en svulst-hemmende ett, og for å forstå signalmekanismer involvert.
Blærekreft (BC) er en heterogen sykdom. Non-invasiv, godt differensierte svulster har en relativt lat naturhistorie, men dårlig differensierte svulster er tilbøyelige til å invadere og metastasere. I vestlige land, er BC den fjerde vanligste kreftformen hos menn [6]. Transuretral reseksjon av blære tumor (TUR-BT) blir brukt til å diagnostisere og scene alle tumorer. Mens ikke-muskel-invasiv Bachelor (NMIBC) kan ikke kreve ytterligere behandling, radikal cystektomi (RC) med eller uten perioperativ kjemoterapi regnes som gullstandarden ved behandling av invasiv BC og i NMIBC sviktende intravesikal behandling.
kun begrensede data er tilgjengelig på den prognostiske verdien av TAMs eller deres fenotype i BC, og de fleste studier har konsentrert seg om å undersøke TAMs svar på Bacillus Calmette-Guerin (BCG) immunterapi. Målet med denne studien var å undersøke sammenhengen mellom TAMs og clinicopathological variabler i hele spekteret av BC og å studere den prognostiske rolle TAMs i BC etter TUR-BT og RC hjelp immunhistokjemiske metoder.
Materialer og Metoder
Pasienter
studien protokollen ble godkjent av Forskningsetisk styret i sykehuset District of Egentliga Finland (1.8.2006 /301). Skriftlig samtykke ble innhentet fra deltakerne. Sammenhengende BC pasienter som gjennomgår TUR-BT (i 2000-2004) eller RC (i 1985-2005) ved Åbo universitetssykehus ble inkludert i studien. Etter eksklusjon, ble 184 pasienter inkludert i studien. Eksklusjonskriterier var følgende: 1) ikke-urothelial BC, 2) eventuelle intravesikal instillations (BCG eller kjemoterapi) eller systemisk kjemoterapi før studie inkludering, og 3) utilstrekkelig vev materiale tilgjengelig for histologisk ny vurdering og immunhistokjemi
.
TUR-BT ble utført ved anvendelse av standardteknikker, og umiddelbar enkelt kjemoterapi ble innpodet i 22% (20/92) av pasientene. BCG eller intravesikal kjemoterapi instillations ble administrert til T1 svulster og svulster med hyppige tilbakefall. Spesielt ble intravesikal terapi administrert til 39% av pasientene (36/92). RC ble utført for T1 svulster som ikke responderer på BCG og alle ≥T2 svulster hvis passer for kirurgi. RC inkludert fjerning av blæren, prostata, og sædvæske hos menn og livmor, eggstokker, og fremre skjedeveggen hos kvinner. Lymphadenectomy ble ikke jevnt utført, men makroskopisk mistenkelige lymfeknuter ble fjernet i løpet av studieperioden og begrenset bekken lymfeknute disseksjon ble utført fra 1995 og utover. Adjuvansterapi ble ikke administrert etter RC og systemisk kjemoterapi ble tilbudt bare på tidspunktet for metastatisk progresjon i løpet av oppfølgingen. Etter RC, ble pasientene fulgt hver 3. måned for det første året og halvårlig etterpå.
En detaljert clinicopathological databasen ble montert i ettertid, herunder opplysninger om pasienten og tumor egenskaper, samt detaljer av behandlingen og følge opp. Histologiske prøver ble evaluert for histologi, differensiering klasse, og scenen av en ekspert uropathologist. Svulstene var gradert i henhold til både Verdens helseorganisasjon (WHO) 1973 og WHO /International Society of Urin patologen (ISUP) 2004 klassifikasjoner og iscenesatt i henhold til 2010 TNM staging [7, 8].
Immunohistochemistry og å utføre
for hvert tilfelle, den mest representative formalinfiksert, parafin-innleiret vev blokken ble valgt for analyse. Seksjoner (5 um tykke) ble deparaffinized med xylen og rehydrert med en gradert alkohol serie. De primære antistoffer som brukes var monoklonalt IgG
en anti-CD68 (KP1) (konsentrasjon 1: 5; ab845, Abcam, UK) og mus monoklonalt IgG
en anti-MAC387 (konsentrasjon 1: 500; ab22506, Abcam , UK), som oppdager den myelomonocytisk L1 molekylet kalprotektin. CLEVER-1 /Stabilin-en
+ (vanlig lymfatisk endothelial og vaskulær endotel reseptor-1, også kjent som STAB1 og FEEL-1) type 2 makrofager og skip ble oppdaget med rotte IgG 2-7 antistoff (konsentrasjon 1: 5) [9, 10]. Antistoffene 3G6 (mus IgG
1 antistoff mot kylling-T-celler) [11] og MEL-14 [rotte-IgG
2a antistoff mot mus L-selectin (CD62L)] (Exbio, Tsjekkia) ble anvendt som negativ kontroller. Den primære immunoreaksjon ble utført med hjelp av mus /rotte Vectastain Elite ABC Kit (Vector Laboratories). Seksjoner for anti-CD68-og MAC387 stainings ble varme forbehandlet i citrat syre (0,01 M, pH 6,0) i et 97 ° C vannbad i 20 min. Antigen gjenfinning for Smart-1 /Stabilin-1-fargede seksjoner ble utført med proteinase K (DAKO) (10 min ved 37 ° C), og objektglassene ble vasket tre ganger med PBS etter forbehandlingen. Endogen peroksidase ble blokkert med 0,1% H
2o
2 i 30 minutter. Ikke-spesifikke seter ble blokkert med heste (CD68 og MAC387) eller kanin (Smart-1 /Stabilin-1) normalt serum ved romtemperatur i 20 min. Seksjoner ble inkubert med primære antistoffer over natten ved 4 ° C og deretter behandlet med biotinylert sekundært antistoff oppløsning i henhold til produsentens instruksjoner. Etter vasking med PBS, ble Vectastain Elite ABC-reagens tilsatt (30 minutter ved romtemperatur), ble objekt vasket, og immunoreaksjoner ble påvist ved anvendelse av 3,3′-diaminobenzidin som substrat. Lysbilder ble kontra med hematoxylin, dehydrert, re-fast i xylen, montert med distyren mykner xylen (DPX).
Hele svulsten og omkringliggende peritumoral området ble undersøkt ved lysmikroskopi. Antallet CD68
+ makrofager, MAC387
+ makrofager, og smart-1 /Stabilin-en
+ makrofager og fartøy ble scoret fra tre hotspots (områder med flest makrofager ved øyet) intratumorally og peritumoralt med en 0,0625 mm
2 rutenett bruker 40 × forstørrelse når scoring makrofager og 20 × når scoring lymfatisk /blodkar. SMART-1 /Stabilin-1
+ er ikke normalt til stede på plane vegger venyler, men det er abnormt indusert på tumorvaskulatur [12]. Scoringen ble utført uavhengig av to observatører (MB og HI) blindet til klinisk informasjon. Saker med utilstrekkelig kvalitet på immunhistokjemisk farging eller svulst morfologi ble ekskludert fra videre statistiske analyser. De gjennomsnittlige antall makrofager og fartøy i tre hotspots ble beregnet innenfor en high-powered feltet. I tilfelle av uoverensstemmelse, ble seksjonene i fellesskap vurderes for å oppnå en konsensus. MAC387
+ tumorceller ble gradert semi-kvantitativt inn i fire kategorier, fra- (negative) til +++ (rikelig). Antallet positive makrofager for hvert antistoff ble også gradert semi-kvantitativt inn i fire kategorier, fra-til +++. Som semi-kvantitative scoring og kvantitativ totale antallet analyser knyttet betydelig i alle immunoanalyses (p 0,001), detaljerte statistiske analyser, inkludert assosiasjoner mellom immunosignals og overlevelse, ble utført ved hjelp av verdier hentet fra den kvantitative scoring system. Undergrupper av pasienter ble laget ved å kombinere to makro markører. De makro markører som ble testet ble delt inn i enten lav (-) eller høy (+) grupper i henhold til middelverdien av befolkningen. De følgende undergrupper ble samlet: 1) lave nivåer av både makroundertyper (
– /-), 2) høy grad av enten makrofag subtype, lavt nivå av den andre makrofag subtype (
+/-) og 3 ) høye nivåer av både makro undergrupper (
+ /+).
Statistiske analyser
De assosiasjoner mellom CD68, MAC387, og smart-1 /Stabilin-1 uttrykk og clinicopathological variabler var evaluert med Mann-Whitney U-test og Kruskal-Wallis test. Pasientens egenskaper og resultatene av tester av normalitet for kontinuerlige variabler i den totale studiekohorten er vist i tabell S1. Kaplan-Meier metoden, log-rank test, og Cox regresjonsmodeller ble brukt til å analysere sammenhenger mellom immunosignals og utfall. For Kaplan-Meier-analyser, ble den midlere makrofag og fartøyet tellinger dikotomisert i henhold til det midlere antall. I Cox regresjonsmodeller ble markører evaluert som kontinuerlige variabler. Utfallsmål inkluderte sykdomsspesifikke og total overlevelse (DSS og OS) i RC befolkningen og DSS, OS, gjentakelse, og progresjonsfri overlevelse (PFS) i TUR-BT befolkningen. Overlevelsestiden ble beregnet fra datoen for operasjonen til datoen for siste oppfølging eller død. Enhver død på grunn av BC eller med metastatisk BC ble definert som cancer-spesifikk dødelighet. Tilbakefall ble definert i TUR-BT befolkningen som histologisk bekreftet ny svulst etter en svulst frie perioden, og progresjon ble definert som når en gjentakelse hadde en høyere klasse eller en mer avansert pT kategori enn den primære svulsten, eller hvis pasienten gjennomgikk RC for tilbakefall. Alle statistiske tester var tosidig og p-verdier ≤0.05 ble ansett for å være statistisk signifikant. Statistiske analyser ble utført med SPSS 20 (IBM) og SAS System for Windows, versjon 9.3 (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA).
Resultater
Clinicopathological kjennetegn ved studien befolkning
grunnlags~~POS=TRUNC clinicopathological pasientkarakteristika kohorten er presentert i tabell 1. de fleste av pasientene hadde NMIBC (PTA, pTcis, eller PT1) (88% av TUR-BT befolkningen og 36% av RC befolkning). Antallet svulster ble registrert i TUR-BT befolkning og av disse pasientene, 63% hadde en enkelt svulst. Ved slutten av oppfølgingsperioden, 36% av pasientene i TUR-BT befolkning og 28% av pasientene i RC-populasjonen var i live. Median oppfølgingstid var 6,9 og 4,2 år i TUR-BT og RC populasjoner, henholdsvis.
TUR-BT svulster har lavere TAM teller enn svulster fra RC
Tabell 2a viser TUR-BT og RC pasienter dikotomert i henhold til det midlere antall makrofager og fartøy, og representative eksempler på fargemønstre med ulike markører er vist i figur 1.
TUR-BT prøver farget med et negativt kontroll antistoff (a); intratumoral CD68
+ makrofager (b), MAC387
+ makrofager (c), og smart-1 /Stabilin-1
+ makrofager og fartøy (D). Fylt piler indikerer positivt farget makrofager, og ubesatte piler indikerer CLEVER-1 /Stabilin-en
+ fartøy. Forstørrelse 40 ×, skala bar 100 mikrometer.
Data representerer gjennomsnittlig antall positive celler fra tre hotspots (en high-powered felt per hotspot). Tellinger er representert som grupper dikotomisert i henhold til den midlere makrofag-teller. en, makrofag og fartøy teller. b, teller celle i henhold til ekspresjonen av to markører. Her refererer CLEVER-en farging til uttrykk i makrofager, ikke skip.
Gjennomsnittlig antall intratumorale CD68
+ makrofager var 18 per felt i TUR-BT befolkningen [standardavvik (SD ) ± 16] og 30 i RC befolkningen (SD ± 26). For MAC387, gjennomsnittsmakrotall var 19 (SD ± 24) og 34 (SD ± 38) i TUR-BT og RC populasjoner, henholdsvis. Den høyeste SMART-1 /Stabilin-1
+ makrofag-tall var 73 i TUR-BT-gruppen og 41 i RC-gruppe, og de midlere tallene var 26 (SD ± 13) og 11 (SD ± 10), respektivt . SMART-1 /Stabilin
+ lymfesystemet /blodåre tettheten varierte fra 0 til 22-positive celler per felt med en middelverdi på 8 i TUR-BT populasjonen (SD ± 5) og en i RC-populasjonen (SD ± 1 ). Markør tellinger i TUR-BT og RC kohorter er vist i S1 Fig celletall i henhold til uttrykk av to makro markører er vist i tabell 2b.
Høy CD68
+ høy MAC387
+ og lav CLEVER-1 /Stabilin-en
+ makrotall er forbundet med konvensjonelle funksjoner med høy risiko i BC
foreninger mellom svulst klasse og pT kategori og uttrykk for CD68, MAC387, og CLEVER -1 /Stabilin-1 er vist i figur 2 (alle p-verdier og 0,05). Høyt antall CD68
+ makrofager og MAC387
+ makrofager var assosiert med en høyere pT kategori og svulst klasse. Derimot ble lavere CLEVER-1 /Stabilin-en
+ makro /fartøy teller forbundet med en høyere pT kategori og klasse. Hunner hadde høyere antall SMART-1 /Stabilin-1
+ makrofager (p = 0,003, Mann-Whitney U-test, ikke vist). Det var ingen signifikant sammenheng mellom celletall og røykestatus eller alder.
Mann-Whitney U-test ble brukt for parvise sammenligninger i analyser av svulst klasse og Kruskal-Wallis rang-sum testing (KW) var brukes til sammenligning på tvers av de fire Pt kategorier. De nederste og øverste kant av boksen indikerer intra-kvartil range (IQR), linjen inne i boksen angir medianverdien, kinnskjegg som strekker seg fra hver boks indikerer omfanget av verdier som er utenfor intra-kvartil range, men nærmere enn eller lik 1,5 ganger IQR, og eventuelle punkter som er i en avstand på mer enn 1,5 ganger IQR fra boksen anses å være uteliggere [sirkler indikerer milde uteliggere (mer enn 1,5 ganger IQR) og stjernetegn ekstreme utliggere (mer enn 3 ganger IQR)].
TAM teller forutsi risikoen for progresjon etter TUR-BT
TUR-BT befolkningen.
Kaplan -Meier estimater evaluere forholdet mellom ulike makro populasjoner og PFS i TUR-BT befolkningen er vist i figur 3. Høye tall for CD68
+ makrofager og MAC387
+ makrofager var signifikant assosiert med risiko for progresjon (fig 3a og 3b) (p-verdier 0,007 og 0,008, respektivt). Den smarte-1 /Stabilin-en
+ makrofag teller ikke påvirke PFS (p = 0,69) (fig 3c). En trend (p = 0,056) mot høyere progresjon risiko ble observert med en lavere CLEVER-1 /Stabilin-en
+ fartøy count (fig 3d). Assosiasjoner mellom kombinasjoner av makro markører og PFS i TUR-BT befolkningen er vist i figur 3e og 3g. Alle pasientgrupper med høy makrotall som er definert av to ulike makro markører (dvs. dobbel høy, CD68 /MAC387
+ /+, CD68 /CLEVER-en
+ /+, og MAC387 /CLEVER-en
+ /+) hadde en kortere PFS sammenlignet med de andre gruppene. Når CD68 og MAC387 ble analysert sammen, pasienter med lave nivåer av makrofager hadde de lengste PFS. Når CLEVER-1 /Stabilin-en positivitet ble analysert sammen med CD68 eller MAC387, var det ingen forskjell i PFS mellom pasienter med tumorer var lav for begge merkene i forhold til pasienter som enten en av markørene var høy. Kaplan-Meier-estimater for DSS og OS i TUR-BT befolkningen viste lignende resultater som for PFS bortsett CLEVER-en, hvor en høyere fartøy telling var assosiert med dårligere overlevelse (S2 og S3 figurene). Derimot, det var ingen assosiasjoner observert mellom tilbakefall risiko og de testede markører alene, eller i kombinasjon (S4 fig).
Effekten av CD68
+ makrofager, MAC387
+ makrofager, og CLEVER-1 /Stabilin-en
+ makrofager /fartøy på progresjon i TUR-BT befolkningen (ad). Pasientene ble delt inn i grupper i henhold til uttrykk av to makro markører, og assosiasjoner med progresjon ble bestemt (ef).
Univariate og multivariat Cox regresjonsanalyse av faktorer som påvirker OS i TUR-BT befolkning er presentert i tabell 3. i den univariate analysen, etablerte risikofaktorer (høyt svulst klasse, avansert pT kategori, høyere alder, og et høyt antall svulster) signifikant assosiert med kortere OS. Antall CD68
+ makrofager [fare ratio (HR) 1,031 og 95% konfidensintervall (KI) 1,016 til 1,046; p 0,001] og MAC387
+ makrofager (HR 1,016 og 95% KI 1,006 til 1,027, p = 0,002) signifikant assosiert med OS i en univariat Cox regresjonsmodell; Men disse assosiasjonene mislyktes i å forbli vesentlig i multivariate analyser. CLEVER-1 /Stabilin-en
+ makrofag /fartøy teller ikke forutsi overlevelse. Når data fra to makro markører ble kombinert, alle pasienter som hadde høy ekspresjon av begge merkene hadde høyere dødelighet i univariat analyse enn andre grupper. Den CD68 /MAC387
+ /+ og CD68 /CLEVER-en
+ /+ gruppene forble å ha signifikant sammenheng med overlevelse i multivariate analyser (CD68 /MAC387
+ /+: HR 3,5 og 95% KI 1,1 til 11, p = 0,036, og CD68 /CLEVER-en
+ /+: HR 3,8 og 95% KI 1,4 til 10, p = 0,008)
Univariat og multivariat Cox proporsjonal. farer regresjonsmodeller av faktorer som påvirker DSS, PFS, og tilbakefall i TUR-BT befolkningen er presentert i S2-S4 Tables. Antall CD68
+ og MAC387
+ makrofager og smarte-1 /Stabilin-en
+ fartøy knyttet til DSS i univariate analyser, men klarte å holde seg betydelig i multivariate analyser. Den doble-high-gruppen og CD68 /MAC387
+/- gruppe også signifikant assosiert med DSS i univariate analyser, men ikke i multivariate analyser (S2 Table). Individuelle markører og grupper av to markører assosiert samme måte med PFS (S4 tabell).
RC befolkningen.
Kaplan-Meier-estimater for OS i RC befolkningen er presentert i figur 4. En høy MAC387
+ makrofag teller forbundet med en økt risiko for død (p = 0,021). Andre markører ikke forbinder med OS. Når markør data ble samlet, svulster som hadde høye nivåer av CD68
+ makrofager og MAC387
+ eller smart-en
+ makrofager hadde en kortere OS (CD68 /MAC387
+ /+ p = 0,032 og CD68 /CLEVER-en
+ /p = 0,049). Når DSS ble analysert, gruppene som kombinerer to makro markører spådd overlevelse, som med OS (S5 figur).
Effekten av CD68
+ makrofager, MAC387
+ makrofager, og smart-1 /Stabilin-en
+ makrofager /fartøy på OS i radikal cystektomi befolkningen (ad). Sammenhengen mellom OS og uttrykk for to makro markører (ef).
Univariat og multivariat Cox regresjonsanalyse av faktorer som påvirker OS i RC befolkningen og den kombinerte uttrykk for to makro markører vises i tabell 4. Tumor klasse og pT kategorien forbundet betydelig med OS. Ingen av de makro markører assosiert betydelig med OS i uni- eller multivariate analyser. Den CD68 /MAC387
+ /+ dobbel-high gruppe assosiert betydelig med OS i univariat analyse (HR 2,9 og 95% CI 1.2 til 7.2; p = 0,020). Cox regresjonsanalyser av faktorer som påvirker DSS er vist i S4 tabell. MAC387 uttrykk (HR 1,008 og 95% KI 1,001 til 1,016; p = 0,032) og CD68 /MAC387
+ /+ dual uttrykk (HR 3,5 og 95% KI 1,1 til 11, p = 0,029) forbundet betydelig med DSS i univariate analyse, men ingen av markører, alene eller i kombinasjon, betydelig spådd utfallet i multivariate analyser.
Diskusjoner
i denne studien, viser vi at intratumoral makrofag tetthet (CD68
+ og MAC387
+ makrofager) er signifikant assosiert med konvensjonelle høyrisiko funksjoner, inkludert høy klasse og avansert T kategori i BC. Videre, en høy makrofag tall var signifikant assosiert med risiko for progresjon i TUR-BT kohort og overlevelse i cystektomi kohorten ved univariate analyser. Selv enkle makro markører var ikke signifikant prediktor i multivariate analyser, kombinasjoner av to markører (CD68 med MAC387 eller smart-1) gitt uavhengig prognostisk informasjon i multivariate modeller i TUR-BT kohort når faktorer som påvirker overlevelse ble analysert. CLEVER-1 /Stabilin-en
+ makrofager var ikke forbundet med BC dødelighet, men en høy CLEVER-1 /Stabilin-en
+ fartøy teller, derimot, var assosiert med økt overlevelse i univariate modeller i TUR -BT kohort.
En høy tetthet TAM er blitt rapportert å være assosiert med dårlig prognose i forskjellige maligniteter, for eksempel brystkreft, melanom, tykktarmskreft og prostatakreft [13]. Hanada og medarbeidere viste i en mindre studie (23 MIBC og 40 NMIBC tilfeller) at invasive svulster som hadde høyere CD68
+ makrotall og høyere TAM teller var assosiert med høyere forekomst av cystektomi, fjernmetastaser, vaskulær invasjon, og dårligere overlevelsen [14]. Nylig Sjödahl og medarbeidere studerte TAM teller i MIBC å bruke vev microarray (TMA) seksjoner farget med anti-CD3 for T-celler, anti-CD8 for cytotoksiske T-celler, anti-foxp3 for regulatoriske T-celler (tregs), og to makrofag -spesifikke markører, CD68 og CD163. De bemerket at den kliniske fasen kombinert med tumor CD68 /CD3-forholdet kan være en potensiell verktøy for forutsigelse [15]. Vi har imidlertid lagt merke til at makrofager vises i klynger innen svulster, og dermed bruke hele seksjoner i stedet for TMA er sannsynlig å være mer nøyaktig, som TMA kjerner utgjør bare små porsjoner av hele prøven. Videre noen av pasientene i studien hadde fått BCG instillasjoner eller neoadjuvant kjemoterapi, noe som kan ha påvirket resultatene.
NMIBC svulster med høy TAM teller har også vist seg å ha dårligere utfall og å være mindre lydhør overfor BCG behandling [16-18]. Inflammatoriske prosesser i blæren som respons på BCG-bakterier er blitt anvendt for å ødelegge tumorvevet. Celler av urothelium reagerer på behandling med en inflammatorisk kaskade og frigjøre cytokiner, for eksempel interleukin (IL) -8 og tumornekrosefaktor (TNF), og rekruttering av nøytrofiler til å ødelegge maligne celler [19]. I vår studie, pasienter som fikk intravesikal installasjoner (BCG eller kjemoterapi) ble ekskludert på grunn av det faktum at disse behandlingene endre inflammatorisk mikromiljøet av svulstene og dermed kunne endre resultatene.
Det er flere utfordringer i BC omsorg . Tilbakefall av NMIBC er høy, og hyppige prosedyrer og intense oppfølgingsresultater i BC å være en av de mest kostbare kreftformene å behandle [20]. Behandlingstilbud for avanserte sykdommer er begrenset, og nye behandlingsformer er nødvendig, inkludert nye biomarkører for å diagnostisere aggressive saker som krever mer intensiv behandling. CD68, MAC387, og smart-1 /Stabilin-en, spesielt når de brukes i kombinasjon, kan potensielt brukes til å identifisere aggressive tilfeller blant BC pasienter. Disse makrofager kan også være målene for nye behandlinger for avansert BC. Nylig har PD-L1-hemmere vist potensial effekt på metastatisk BC, og mer forskning i BC immunologi er nødvendig [21].
antistoff brukes oftest for påvisning av TAMs er den pan-makrofag markør CD68 og det har blitt vist å assosiere med dårlig overlevelse i BC [14]. I denne studien har vi også brukt MAC387 til å oppdage ulike makro populasjoner. En sammenheng mellom et høyt MAC387
+ makrofag telle og dårlig utfall har blitt rapportert i ulike tumorer, slik som brystkreft og kolangiokarsinom [22-24]. Til vår beste kunnskap, har MAC387 blitt undersøkt som en markør for squamous differensiering i BC [25, 26], og vårt arbeid er den første til å oppdage en sammenheng mellom MAC387
+ makrofag tetthet og dårlig utfall i BC pasienter. Begge MAC387
+ makrofager og tumorceller ble evaluert, men antallet MAC387-positive tumorceller ikke forbinder med overlevelse (data ikke vist). MAC387 gjenkjenner myelo-relatert protein (MRP) 14 og, i mindre grad, den MRP8 /MRP14 hetero (calprotectin). MRP14 er en pro-inflammatorisk molekylet uttrykkes under akutt betennelse på nylig infiltrere monocytter /makrofager, mens MRP8 uttrykkes på makrofager under kronisk betennelse. Vevsmakrofager er blitt vist å uttrykke et MRP8 /MRP14 kompleks under enkelte forhold: for eksempel på steder med kronisk betennelse i revmatoid artritt, sarkoidose og tuberkulose, men ikke i normalt vev uten noen inflammasjon [27, 28]. SOULAS og medarbeidere har vurdert MAC387
+ celler for å være pro-inflammatorisk og anti-tumor M1-polariserte makrofager [27]. Dette er imidlertid ikke sikkert, og det er fortsatt mangel på en endelig overflate markør for pro-inflammatoriske type 1 makrofager.
I tillegg til CD68 og MAC387, brukte vi CLEVER-1 /Stabilin-en til å oppdage type 2 aktiverte makrofager. SMART-1 /Stabilin-en er en stor scavenger reseptor på en undergruppe av immunundertrykkende og protumoral type 2 makrofager med flere funksjoner [29, 30]. CLEVER-1 /Stabilin-en er også uttrykt i afferent og efferent lymfesystemet og sinusformet endotelceller [10]. CLEVER-1 /Stabilin-en
+ makro tall ble ikke assosiert med pasientens overlevelse i BC, i motsetning til våre tidligere studier i kolorektal kreft [12]. Interessant, var det en klar sammenheng mellom lav CLEVER-1 /Stabilin-en
+ fartøy teller og økende tumorstadium og høyere klasse. Videre en høy CLEVER-1 /Stabilin-en
+ fartøy telling var assosiert med bedre overlevelse etter RC i BC pasienter. Grunnen til SMART-1 /Stabilin-en
+ fartøy som opptrer i en beskyttende måte er uklart og videre studier er garantert. Til vår beste kunnskap, MAC387
+ makrofager og smart-1 /Stabilin-en er ikke undersøkt i BC før.
I tillegg til mulig prognostisk rolle makro markører alene, studerte vi makro populasjoner videre ved å kombinere to markører. Den CD68 /MAC387
+ /+, CD68 /CLEVER-en
+ /+ og MAC387 /CLEVER-en
+ /+ gruppene hadde bedre OS i TUR-BT befolkningen, og CD68 /MAC387
+ /+ og CD68 /CLEVER-en
+ /+ grupper var uavhengige prognostiske faktorer. Som markører oppdage ulike populasjoner av TAM (CD68 oppdager makrofager generelt, mens MAC387 oppdager type 1 polariserte makrofager og smart-1 /Stabilin-en oppdager type 2 makrofager), ved hjelp av disse markørene i kombinasjon kan bedre identifisere svulster som ble forskjøvet enten mot M1 fenotype (CD68
+ /MAC387
+ og MAC387
+ /CLEVER-en
-) eller M2 type (CD68
+ /CLEVER-en
+ og MAC387
– /CLEVER-en
+). Men i vår studie, den generelle makrofagen telling hadde den mest avgjørende rolle i prognosen av BC, og overraskende, dette var tilfelle uansett om de makrofager ble overveiende type 1 eller type 2.
Denne studien har de kjente begrensninger retrospektive kohortstudier. Det var en lang oppfølgingstid i RC befolkningen, og noen kliniske praksis kan ha endret seg i løpet av denne tiden. I denne perioden ble karaktersystemet for BC endret og 2004 WHO /ISUP klassifisering ble definert etter 1973 WHO klassifisering.
