Abstract
epidermal vekstfaktor reseptor tyrosinkinasehemmere gefitinib og erlotinib har blitt mye brukt hos pasienter med ikke-småcellet lungekreft. Dessverre er effekten av EGFR-TKI begrenset på grunn av naturlig og ervervet resistens. Som en ny cytobeskyttende mekanisme for tumorcelle for å overleve under ugunstige betingelser, og autophagy blitt foreslått å spille en rolle i medikamentresistens av tumorceller. Hvorvidt autofagi kan aktiveres ved gefitinib eller erlotinib og derved nedsette følsomheten av målrettet terapi til lungekreftceller er ukjent. Her har vi først rapporterer at gefitinib eller erlotinib kan forårsake et høyt nivå av autophagy, som ble fulgt av inhibering av PI3K /Akt /mTOR-signalreaksjonsveien. Videre cytotoksisitet indusert av gefitinib eller erlotinib ble kraftig forbedret etter autofagi hemming av den farmakologiske inhibitor klorokin (CQ) og sirnas målretting ATG5 og ATG7, de viktigste komponentene for dannelse av autophagosome. Interessant, kan EGFR-TKI fortsatt indusere celle autofagi selv etter EGFR uttrykk ble redusert med EGFR spesifikke sirnas. I konklusjonen, fant vi at autofagi kan aktiveres ved EGFR-TKI i lungekreftceller og hemming av autofagi utvidet den veksthemmende virkning av EGFR-TKI. Autophagy hemming representerer således en lovende tilnærming for å forbedre effekten av EGFR-TKI i behandling av pasienter med avansert ikke-småcellet lungekreft
Citation. Han W, Pan H, Chen Y, Sun J, Wang Y, Li J, et al. (2011) EGFR tyrosinkinasehemmere Aktiver Autophagy som Cellebeskyttende Response i Human lungekreft celler. PLoS ONE seks (6): e18691. doi: 10,1371 /journal.pone.0018691
Redaktør: Lin Zhang, University of Pennsylvania, USA
mottatt: 11. november 2010. Godkjent: 15 mars 2011; Publisert: 02.06.2011
Copyright: © 2011 Han et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av Natural Science Foundation National of China (stipend nummer 30901740, www.nsfc.gov.cn), China National Ministry of Education Grant (tilskudd nummer 20090101120124, www.moe.edu.cn), Zhejiang naturvitenskap Foundation Grant ( innvilge nummer Y2090166, www.zjnsf.net:81), og forskningsprosjekter av Zhejiang Institutt Education (tilskudd nummer Y200805751, www.zjedu.gov.cn) til W. Han, og de grunnleggende forskning Midler til de sentrale universitetene til H. Jin. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Lungekreft er den ledende årsak til kreft dødsfall på verdensbasis [1]. Kjemoterapi er likevel ikke effektiv nok for pasienter med avansert ikke-småcellet lungekreft (NSCLC) og svarfrekvensen er bare 20% til 35% med en median overlevelsestid på 10 til 12 måneder [2], [3]. Ved å målrette molekyler kritiske til kreftutvikling, målrettet terapi alene eller i kombinasjon med andre behandlinger ble nylig anerkjent som en lovende strategi for å erobre kreft inkludert NSCLC [4].
Som en av reseptor tyrosin kinaser (RTK) viktig å kreftcellevekst, proliferasjon, invasjon og metastase, epidermal vekstfaktor-reseptor (EGFR) ble hyppig deregulert i NSCLCs [5]. EGFR over-uttrykk ble observert hos omtrent 62% av plateepitelkreft og adenokarsinom subtyper [6]. EGF kan indusere aktivering av tre signalveier som er viktige for initiering og progresjon av kreft, Ras /MAPK, PI3K /Akt, og JAK /statistikk [7]. Som et resultat ble EGFR ett av molekylene for utvikling av målrettet terapi til NSCLC. Ved å hemme tyrosin kinase aktivitet av EGFR, to tyrosinkinasehemmere (TKI) som heter gefitinib (Iressa, Astrazeneca) og erlotinib (Tarceva, Genentech) er utviklet for behandling av NSCLC. Gefitinib og erlotinib kan hemme tumorvekst både in vitro og in vivo. Klinisk, både EGFR-TKI viste god toleranse og antitumor aktivitet i NSCLC pasienter med sykdommen utvikler seg etter første platinumbasert kjemoterapi [5], [8], [9]. Imidlertid er effektiviteten av EGFR-TKI betydelig redusert ved naturlig og ervervet resistens. Mekanismen er fremdeles i stor grad ukjent selv om EGFR mutasjoner er blitt foreslått å være en av mekanismene for å påvirke sensitiviteten av EGFR til disse inhibitorene [10], [11].
Macroautophagy (heretter referert til som autophagy) er en selv-proteolyse prosess i eukaryote celler som resulterer i nedbryting av intracellulært materiale innenfor macroautophagosome eller lysosomer [12], [13]. Under cellulære stressbetingelser slik som næringsfattig miljø, er autophagy raskt aktivert for å tilveiebringe en alternativ energikilde og således gjøre det mulig celler for å overleve [14]. Autophagy ble oppregulert under senere trinn av tumorvekst på grunn av induksjon autophagy tillater tumorceller til å overleve i microenvironments mangel på næringsstoffer og oksygen [15]. Gjennom å fremme overlevelsen av tumorceller under ugunstige betingelser, ble autophagy foreslått som en alternativ mekanisme for legemiddelresistens. For eksempel, bidrar autophagy til motstanden av brystkreftceller for behandling med bortezomib [16]. Inhibering av autophagy kan sensibilisere tumorceller for mange cytotoksiske medikamenter eller reversere resistens overfor kjemoterapeutiske medikamenter, som representerer en lovende strategi for å forbedre effektiviteten ved kreftbehandling [17].
signalveier nedstrøms av EGFR og andre RTK’er, for eksempel PI3K /Akt sti er involvert i reguleringen av autophagy, noe som indikerer en mulig kobling mellom RTK hemming og autofagi. En annen TKI navngitt som imatinib faktisk kan aktivere autofagi i respektive celletyper [18], [19]. I tillegg blokade av macroautophagosome formasjon forbedrer effektiviteten av anti-HER2-monoklonalt antistoff trastuzumab (Tzb) [20]. Men om autophagy er forbundet med gefitinib og erlotinib behandling i lungecancerceller er ukjent. I denne studien, må vi først vise at gefitinib eller erlotinib aktivert autofagi i lungekreftceller og blokkering av autofagi forsterket effekten av gefitinib eller erlotinib.
Materialer og metoder
Reagenser og antistoffer
De kjemikalier som ble brukt var gefitinib (J K kjemisk Ltd., G304000), erlotinib (J K kjemisk Ltd., E625000) og klorokin (CQ) (J K kjemisk Ltd., 147236). Den primære antistoffer var antistoffer mot microtubule-assosiert protein en lett kjede 3 (LC3) (Cell Signaling Technology, # 2775), ATG5 (Cell Signaling Technology, # 2630), ATG7 (Cell Signaling Technology, # 2631), fosfor-mTOR ( S2448) (Cell Signaling Technology, # 2971), total mTOR (Cell Signaling Technology, # 2983), fosfor-P70S6K (T389) (Cell Signaling Technology, # 9234), fosfor-AKT (S473) (Cell Signaling Technology, # 4051 ), total AKT (Cell Signaling Technology, # 9272), GAPDH (Cell Signaling Technology, # 3683). De sekundære antistoffer var HRP-konjugert anti-kanin (Santa Cruz Biotechnology, sc-2357) og anti-mus IgG (Santa Cruz Biotechnology, sc-2371).
Cellekulturer
lungekreft cellelinjer (A549, NCI-H1299, NCI-H292, NCI-H1650 og SK-MES-1) ble kjøpt fra cellen bank (Chinese Academy of Sciences). Monolagskultur av kreftceller ble opprettholdt i RPMI 1640 supplert med 10% (v /v) FBS og antibiotika. Stamløsning av gefitinib eller erlotinib ble fremstilt i dimetyl-sulfoksyd (DMSO) (Sigma, D4540), og fortynnet med medium før bruk. Sluttkonsentrasjonen av DMSO var mindre enn. 0,1%
Cytotoksisitet assay
Cytotoksisiteten av kjemikalier mot lungecancercellelinjer ble bestemt ved MTT-assay. Celler ble sådd ut i 96-brønners plater (dyrket over natten for adherente celler) og behandlet med kjemikalier med forskjellige konsentrasjoner. Etter 48-timers inkubering, ble 20 ul MTT (5 mg /ml) tilsatt til hver brønn for 4-timers inkubering. Deretter ble supernatanten fjernet, og 150 ul DMSO ble tilsatt til hver brønn for å oppløse de blå-purpur krystaller av formazan. Absorbansen ble så målt ved hjelp av en modell ELX800 Micro Plate Reader (Bio-Tek Instruments, Inc.) ved 570 nm.
Immunofluorescent konfokal laser mikros For LC3 og lysosome samlokalisering
lysosome var for det første merket ved inkubering med Lyso Tracker (Invitrogen, L7528), et lysosom reporter fargestoff, i 90 min ved 37 ° C. Celler ble oppsamlet, fiksert og permeabilisert med 1% CHAPS-buffer (150 mM NaCl, 10 mM HEPES, 1,0% CHAPS) ved romtemperatur i 10 minutter, inkubert med anti-LC3 i 2 timer ved romtemperatur, og vasket med PBS, inkubert for en annen 45 min med FITC-konjugert geite-anti-kanin-IgG (Beyotime, A0562). Deretter ble cellekjerner farget med DAPI (Sigma, D9564). Prøver ble undersøkt under et Zeiss LSM 710 konfokalt mikroskop system (Carl Zeiss, Tyskland). Bildet ble behandlet med ZEN LE programvare.
Elektronmikros
Behandlet cellene ble vasket og fikset for 30 min i 2,5% glutaraldehyd. Prøvene ble behandlet med 1,5% osmium-tetroksyd, dehydrert med aceton og innleiret i Durcupan harpiks. Tynne snitt ble poststained med bly citrate og undersøkt i Tecnai 10 elektronmikroskop (Philips, Holland) ved 60 kV.
Western blot analyse
Western blotting ble utført som tidligere rapportert [21] . Proteinet ble påført på en passende konsentrasjon av SDS-polyakrylamid-gel, overført til en PVDF-membran, og deretter detektert av de riktige primære og sekundære antistoffer før visualisering med et kjemiluminescens kit. Visualisering ble gjort med bilde Quant LAS-4000 (Fujifilm, Tokyo, Japan) med bilde Multi-Gauge programvare (Fujifilm, Tokyo, Japan).
RNA interferens
Celler ble transfektert med enten uspesifikk siRNA (Qiagen, 1.027.280), ATG5 siRNA (Qiagen, SI02655310), ATG7 siRNA (Qiagen, SI02655373) eller EGFR siRNA (Cell Signaling Technology, # 6481) (siRNA endelig konsentrasjon, 100 nmol /L) via LipofectAMINE RNAi max (Invitrogen, 13778150) i henhold til produsentens instruksjoner. Cellene ble deretter inkubert i 48 timer før Western blot eller MTT-analyse.
real-time PCR
Total RNA ble isolert ved anvendelse av Trizol fremgangsmåte og cDNA ble syntetisert fra mRNA ved PrimeScipt MMLV RT reagent Kit (Takara, # 6110). Sanntids kvantitativ PCR-reaksjonen ble utført ved anvendelse av SYBR grønn som det fluorescerende reporter (Bio-Rad, 170-8882). QPCR forsøk ble gjort på en ABI-7500 og GAPDH ble servert som en endogen kontroll. Hver prøve ble normalisert på basis av dets GAPDH innhold. I alt 40 sykluser (5-r denaturering ved 95 ° C, 34-s annealingt /forlengelse ved 55 ° C) ble kjørt for hver primer. Primer sekvenser var som følger: for ATG5, TTC AAT CAG GTT TGG TGG AGG C (fornuft) og ATG GCA GTG GAG GAA AGC AGA G (antisense); for ATG7, ATG CCT GGG CAT CCA GTG AAC TTC (fornuft) og CAT CAT TGC AGA AGT AGC AGC CA (antisense); for GAPDH, GGA GTC AAC GGA TTT GGT (fornuft) og GTG ATG GGA TTT CCA TTG AT (anti).
Statistiske analyser
Med mindre annet er angitt, data ble uttrykt som gjennomsnitt ± SD og analysert ved Student t-test.
Resultater
EGFR-TKI indusere autofagi i lungekreftceller
for å vurdere aktivering av autofagi av EGFR-TKI, konvertering av LC3-i inn i LC3-II før og etter TKI behandling ble bestemt ved western blotting-analyse. I A549 og NCI-H1299-celler, kan både gefitinib og erlotinib indusere bryteren LC3-I til LC3-II i dose- og tidsavhengig måte, noe som indikerer at autophagy kan bli aktivert av både TKI (figur 1A og B). For ytterligere å bekrefte det, ble compartmentalization av LC3 i celler før og etter TKI behandling overvåkes ved indirekte immunfluorescens farging. Faktisk TKI indusert colocalization av LC3-II med lysosome, noe som viser dannelsen av autolysosome (figur 1C og Figur S1). Ultra analyse ved elektronmikroskopi bekreftet videre at mange store autophagic vakuoler med typisk to-lags membran inneholdende organelle rester som er presentert i gefitinib-behandlede A549-celler snarere enn ubehandlede celler (figur 2A, B og C). Lignende resultater ble oppnådd med erlotinib (figur 2D og E).
A og B, lungekreftceller ble inkubert med varierende konsentrasjoner av gefitinib eller erlotinib i 24 timer og inkubert med 25 pM gefitinib eller erlotinib for passende mellomrom. Bryteren fra LC3-I til LC3-II ble påvist ved immunblotting. C, A549 eller NCI-H1299-celler ble behandlet med DMSO eller 25 uM gefitinib i 24 timer. Celler ble merket med fluorescens og avbildes ved konfokalmikroskop. Rød, lyso tracker-merket lysosomer; Green, FITC-merket LC3; Blå, DAPI-merket kjernen. Den overlegg ble vist i høyre kolonne. De oransje-farget celler indikerte LC3 samlokalisert med lysosomer
A549 celler ble behandlet med 25 mikrometer gefitinib i 24 timer (A, DMSO, b., Gefitinb, lavt strømforbruk, C, Gefitinb høy makt). D (lav oppløsning) og E (høy oppløsning), ble AGS celler behandlet med 25 mikrometer erlotinib i 24 timer (D, erlotinib, lavt strømforbruk, E, erlotinib, høy effekt). Mange autophagical vakuoler med typisk to-lags membran som inneholder organelle restene ble markert med piler. Bar = 1 mikrometer.
Vi neste undersøkte effekten av EGFR-TKI på uttrykk for ATG5 og ATG7, to kritiske komponenter i å regulere dannelsen av autophagosomes [22]. Både EGFR-TKI økt ATG5 og ATG7 ved mRNA eller proteinnivåer (figur 3), noe som bekrefter induksjon av autophagy av EGFR-TKI.
A, A549-celler ble behandlet med 25 uM gefitinib i 6 timer og den mRNA nivået av ATG5 /7 ble målt ved Sanntid RT-PCR som beskrevet i M M. RQ, relative mengden. svart, gefitinib-behandlede celler; grå, kontroll celler. B, Immunoblotting for Atg5 eller Atg7 ved hjelp av lysater fra A549 ble behandlet med varierende konsentrasjoner av gefitinib eller erlotinib i 24 timer. Data ble uttrykt som gjennomsnitt ± SD, og analysert ved Students t test. ** P. 0,01
Hemming av Akt /mTOR /p70S6K signalveien ved EGFR-TKI
Tidligere studier har vist at PI3K /Akt /mTOR /p70S6K aksen spiller en viktig rolle ved inhibering av autophagy [23], [24], vi derfor undersøke effekten av gefitinib og erlotinib på denne autofagi undertrykkende signalveien. Faktisk, fosforylering av AKT, mTOR og p70S6K i både A549 og H1299 celler ble signifikant redusert ved gefitinib og erlotinib på en tidsavhengig måte (figur 4A og B). Det ble imidlertid ikke endringer av PTEN uttrykk oppdaget etter TKI behandling (figur 4C og D).
fosforylering av mTOR, Akt og p70s6k i A549 (A) eller NCI-H1299 (B) celler behandlet med gefitinib eller erlotinib ble bestemt ved western blotting. Ekspresjonen av PTEN i A549 (C) eller NCI-H1299 (D) celler behandlet med varierende konsentrasjoner av gefitinib eller erlotinib ble påvist ved western blotting.
Blokkering av autophagy forbedre EGFR-TKI indusert celledød
Mange studier har vist at autofagi kan tjene som en beskyttende respons forebygge tumorceller fra terapi-fremkalt celledød [17], [20], [25], [26], [27], [28], [29], [30]. I lungekreft cellelinje NCI-H292 og NCI-H1650 som er relativt følsom for gefitinib og erlotinib ble ingen autofagi oppdaget etter gefitinib eller erlotinib behandling (figur 5A). Imidlertid autophagy ble detektert i EGFR-TKI behandlede kreftceller som er relativt motstandsdyktige mot EGFR-TKI, slik som A549, NCI-H1299 og SK-MES-1-celler (figur 1 og 5A). Disse data indikerte at autofagi kan svekke følsomheten av kreftceller til EGFR-TKI. For å teste dette forbruket sammenlignet vi den veksthemmende virkning av gefitinib eller erlotinib på kreftceller før og etter farmakologisk og genetisk hemming av autophagy. Som vist i figur 5B, CQ som kan svekke funksjonen til lysosomer og hemme autofagi ved sent stadium betydelig øket veksthemming indusert ved gefitinib eller erlotinib i A549, NCI-H1299 og SK-MES-1, som er forholdsvis motstandsdyktig mot EGFR-TKI. Men det kunne ikke inhibere lungecancer-cellevekst ved sin egen. (Figur 5B). Tilsvarende ble vekstinhibering indusert ved gefitinib eller erlotinib i A549-celler forsterket etter autofagi ble hemmet av knockdown av ATG5 eller ATG7 (figur 5C og D), to vesentlige komponenter for dannelse av autophagosome, noe som bekrefter at Autophagy beskyttet tumorceller fra EGFR TKI indusert celledød.
A, Autophagy ble indusert av EGFR-TKI i resistente men ikke sensitive lungekreftceller. LC3 uttrykk i lungekreft celler inkubert med 25 mikrometer gefitinib eller erlotinib i 24 timer ble analysert ved immunoblotting. B, ble Levedyktigheten av kreftceller behandlet med 12,5 uM gefitinib eller erlotinib i 48 timer med eller uten 5 uM CQ målt ved MTT-analyse. C, The uttrykk for ATG5 og ATG7 i A549 celler transient transfektert med negativ kontroll siRNA, Atg7 eller Atg5 siRNA ble bestemt ved immunoblotting. D, celler transient transfektert med negativ kontroll siRNA, Atg7 eller Atg5 siRNA ble behandlet med 12,5 pM gefitinib eller 25 uM erlotinib i 48 timer. Effekten av EGFR-TKI på kreftceller med eller uten ATG5 eller ATG7 knockdown ble analysert ved MTT-assay. NC, kontroll siRNA. Data ble uttrykt som gjennomsnitt ± SD, og analysert ved Students t test. * P 0,05, ** P. 0,01
EGFR-TKI indusere autofagi i kreftceller med EGFR-knockdown
Neste, vi vil gjerne vite hvilken rolle EGFR i den gefitinib eller erlotinib indusert autofagi. To spesifikke sirnas ble brukt til å knockdown EGFR uttrykk. SiRNA en kunne redusere EGFR-ekspresjon i stor grad mens siRNA 2 som hadde moderat effekt på EGFR-ekspresjon (figur 6A og B). Interessant, autofagi aktiveres ved enten gefitinib eller erlotinib ble ikke hemmet, men utvidet etter EGFR uttrykk ble dramatisk redusert med siRNA 1 (figur 6C og D). I motsetning til dette, siRNA 2 hadde knapt noen innflytelse på autofagi indusert av både EGFR-TKI (figur 6C og D).
EGFR-ekspresjon i A549 (A) eller (B) H1299-celler transfektert med kontroll siRNA, EGFR siRNA1 eller siRNA2 ble bestemt ved western blotting. LC3 uttrykk i EGFR-TKI behandlet A549 (C) eller H1299 (D) celler med eller uten EGFR knockdown ble bestemt ved western blotting.
Diskusjoner
Autophagy ble utpekt som programmert celle død type II, mens apoptose er kjent som programmert celledød type I. Men nylig autofagi ble funnet å fremme celle overlevelse under ugunstige forhold som berøvelse av aminosyrer eller ATPs, avslører en ny rolle autofagi i kreftutvikling.
Autophagy er morfologisk preget av utseendet av «dobbel-membran» vakuoler (autophagosomes) i cytoplasma. I tillegg pattedyr homolog av gjær-protein Apg8p, (også kalt LC3), er funnet å være en spesifikk biokjemisk markør for autophagy. Nylig syntetisert LC3 betegnes LC3-1 er jevnt fordelt over hele cytoplasma. Ved induksjon av autophagy, er noe LC3-I omdannes til LC3-II, som er tett bundet til autophagosomal membranene som danner ringformede strukturer i cytosol. Vi bekreftet biokjemisk og morfologisk at autofagi kan aktiveres av gefitinib eller erlotinib, to godt brukt EGFR-TKI, i to uavhengige lungekreftcellelinjer. Interessant, en svært fersk papir rapportert at autofagi kan være forårsaket av anti-EGFR-antistoffer [31]. Begge EGFR antistoffer og EGFR-TKI er mye brukt til å behandle kreft pasient ved hemming av EGFR, avslører en ny kobling mellom EGFR hemming og autofagi aktivering.
Autophagy kan aktiveres som den cellulære respons på kreftbehandling. En rekke av kreftbehandling, inkludert DNA-skadende kjemoterapeutika, endokrine terapi (for eksempel tamoxifen) og strålebehandling har blitt funnet å indusere autophagy in vitro og in vivo [32], [33], [34]. Nylig ble det funnet at autofagi kan aktiveres og beskyttet svulstceller fra målrettet terapi, slik som imatinib mesylat i Philadelphia kromosom-positive celler [18], trastuzumab ved brystkreft [20], Src-familie-kinase-inhibitorer i prostatakreft [35 ], proteasomhemmere i prostata kreft [16]. Konsekvent, fant vi at autofagi kan aktiveres ved gefitinib og erlotinib i lungekreft og fremmer celle overlevelse i målet behandling med EGFR-TKI. Blokkering av autofagi av farmakologiske eller genetiske metoder i stor grad forbedret veksthemmende virkning av gefitinib eller erlotinib. Inhibering av autophagy har potensiale til å forbedre den kliniske effekten av EGFR-TKI for behandling av kreft.
Som en sensor av aminosyrer og ATP, mTOR regulerer autophagy negativt. Faktisk fant vi at både TKI kan hemme aktivering av mTOR samt dens oppstrøms regulator, PI3K /Akt. En annen signalveien viktig å autofagi er Raf /MAPK vei [23]. Men vi klarte å finne en klar sammenheng mellom Raf /MAPK sti og autofagi i cellelinjer vi brukte. Dette er sannsynligvis på grunn av onkogene mutasjoner hovedsakelig skjedd i Ras /MAPK veier. For eksempel ble K-ras-genet kjent for å bli mutert i A549-celler. Klinisk pasienter med K-ras mutasjoner klarte å svar på TKI behandling. Det ville være interessant å vite om pasienter med K-ras mutasjoner kan dra nytte av kombinasjonen av TKI og hemmere av autofagi.
Interessant, våre resultater viste at gefitinib eller erlotinib indusert autofagi kan være EGFR uavhengig. Som vist i figur 6, kan både EGFR-TKI indusere autofagi selv EGFR-ekspresjon ble sterkt redusert. Selv gefitinib og erlotinib ble utviklet som spesifikke inhibitorer rettet mot kinase domene av EGFR, men nylige resultater, som er oppført at disse to inhibitorer kan ha andre mål, slik som ikke-reseptor-tyrosinkinaser som fungerer også oppstrøms for PI3K /Akt /mTOR pathway [36]. Konsekvent, storskala kliniske studier bekreftet at måling av EGFR uttrykk ved immunhistokjemi var ikke nyttig for å plukke opp pasienter til å bli dratt nytte av gefitinib terapi. Ja, vi kan fortsatt ikke helt utelukke relevans av EGFR i gefitinib eller erlotinib indusert autofagi siden viss EGFR ble likevel oppdaget etter knockdown av EGFR sirnas. Faktisk EGFR-TKI aktivert autofagi var mye mer forsterket av siRNA en som vises bedre knockdown effektivitet enn siRNA 2 (figur 6B). Derfor må vi ytterligere undersøkelser for å avklare hvilken rolle EGFR i gefitinib eller erlotinib-indusert autofagi. Likevel EGFR-TKI og EGFR siRNA hadde en synergistisk effekt på induksjon av autophagy, noe som kan være spesielt hemmet å øke den kliniske effekten av målrettet terapi.
I sammendraget, vårt arbeid forsterket forestillingen om at kreftceller kan overleve i et stressende miljø, etter hemming av kritiske onkogene veier, ved å fremkalle autofagi. Disse kreftceller er primet å gjenoppta spredning når legemiddelkonsentrasjonen faller etter seponering på grunn av toksisitet eller mutasjoner utvikle seg til å gi resistens. Derfor, i kombinasjon av terapeutiske strategier som tar sikte på å hemme autofagi hos pasienter behandlet med konvensjonell kjemoterapi eller roman målrettet behandling med EGFR-TKI representerer en lovende tilnærming med høyere effekt for kreftpasienter.
Hjelpemiddel Informasjon
Figur S1 .
Kvantifisering av autofagi i lungekreft celler behandlet med gefitinib. Prosentandelen av celler med oransje signalene ble beregnet ved å telle cellene i 3-4 felt henhold mikroskop. Dataene ble representert som gjennomsnitt ± SD
doi:. 10,1371 /journal.pone.0018691.s001 plakater (TIF)
