Abstract
De biologiske roller østrogen reseptor 1 (
ERS1
), østrogen reseptor 2 (
ERS2
), og aromatase (
CYP19A1
) gener i utviklingen av ikke-småcellet lungekreft (NSCLC) er uklart, så er bruken av sitt uttrykk som en prognostisk faktor. Hensikten med denne studien var å undersøke den prognostiske verdien av østrogenreseptorer og aromatase mRNA uttrykk, sammen med aromatase proteinkonsentrasjonen i resected NSCLC pasienter. Tumor og non-svulst lunge vevsprøver ble analysert for mRNA uttrykk for
ERS1
,
ERS2 Hotell og
CYP19A1
av RT-PCR. Aromatase Konsentrasjonen ble målt med en ELISA. Totalt 96 pasienter ble inkludert.
ERS1
uttrykk var betydelig høyere i ikke-svulstvev enn i tumorprøver. To genekspresjon kategorier ble opprettet for hvert gen (og protein): høy og lav.
ERS1 høy
kategorien viste økt total overlevelse (OS) i forhold til den lave uttrykk kategorien. Aromatase-proteinkonsentrasjonen var signifikant høyere i tumorprøver. Høyere
ERS1
uttrykk i tumorvev ble knyttet til lengre total overlevelse. Analysen av genuttrykk kombinasjoner gir bevis for lengre OS når både
ERS1 Hotell og
ERS2
er sterkt uttrykt.
ESR1
, alene eller i kombinasjon med
ERS2
eller
CYP19A
1, er den mest avgjøre prognostisk faktor i de analyserte 3 gener. Det virker som
ERS1
kan spille en rolle i NSCLC prognose, alene eller i kombinasjon med andre gener som
ERS2
eller
Cyp19a1
.
ERS2
i kombinasjon med aromatasehemmer konsentrasjon kan ha en lignende funksjon
Citation. Aresti U, Carrera S, Iruarrizaga E, Fuente N, Marrodan jeg, de Lobera AR, et al. (2014) Østrogen Reseptor en Gene Expression og dens kombinasjon med østrogen reseptor 2 eller aromatase Expression Spår Overlevelse i ikke-småcellet lungekreft. PLoS ONE 9 (10): e109659. doi: 10,1371 /journal.pone.0109659
Redaktør: Harriet Wikman, Universitetssykehuset Hamburg-Eppendorf, Tyskland
mottatt: 8 april 2014; Godkjent: 02.09.2014; Publisert: 13 oktober 2014
Copyright: © 2014 Aresti et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. Den forfatterne bekrefter at for godkjente grunner, noen tilgangsbegrensninger gjelder datagrunnlaget funnene. Offentlig avsetning av datasettet ville bryte etisk samsvar, som datasettet inneholder identifiserende menneskelig informasjon. En avidentifisert datasett er tilgjengelig på forespørsel og forespørsler kan rettes til López-Vivanco på [email protected]
Finansiering:. Denne studien ble støttet av en bevilgning (proyect BIO07 /CA /012 ) fra den baskiske Broadcasting Corporation (Euskal Irrati Telebista; www.eitb.com) Kreft Marathon. Finansiering for å betale Open Access publiserings kostnader for denne artikkelen ble levert av Instituto de Salud Carlos III i det spanske departementet for økonomi og konkurranseevne (tilskudd: RD06 /0020/0067, ISCIII). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Ta statistikk fra USA som et eksempel på utviklingen av lungekreft i utviklede land, er det klart at forebygging og helbredelse av denne type kreft må bli bedre. Anslagene for 2014 er 159,260 dødsfall på grunn av lungekreft (27,2% av alle kreftdødsfall) mens denne kreft forårsaker flere dødsfall enn summen av de tre neste mest vanlige kreftformer (tykktarm, bryst og prostata) [1]. Videre til utviklingen av lungekreft fem års overlevelse, anslått å være ca 12%, 13% og 16% i periodene henholdsvis 1975-1977, 1987-89 og 2001-2007 [2], har vært klart utilfredsstillende.
Østrogener er involvert i utviklingen av flere typer kreft: bryst, livmor, eggstokkene, skjoldbruskkjertelen, og lunge [3] – [8]. I lungen, østrogener indusere celleproliferasjon gjennom aktivering av visse vekstfaktorgener så som epidermal vekstfaktor og insulin-lignende vekstfaktor, mediatorer av mitogenese i lungesvulster [9]. De utøve sin funksjon gjennom to forskjellige spesifikke østrogenreseptorer, østrogen-reseptor-a (ERα) og østrogenreseptor-β (ERβ), medlemmer av den nukleære reseptor superfamilien av transkripsjonsfaktorer [10], og gjennom to forskjellige veier, genomiske og ikke- genomisk, med de samme biologiske effekter: spredning, vekst, apoptose, differensiering og angiogenese.
ERS1 Hotell og
ERS2
gener er uttrykt i de fleste av de mer vanlige kreftformer, lunge, bryst, fordøyelsesenzymer og endokrine, men deres rolle kan variere sterkt avhengig av tumortype [10] – [ ,,,0],16].
Produksjon av de to mest tallrike og viktige østrogen (østradiol og østron) katalyseres av cytokrom P450 19A1 (aromatase), produktet av
CYP19A1
genet, som er aktiv i lungen vev. I tillegg er det en tilbakekoblingssløyfe, fordi østrogener indusere aktivering av epidermal vekstfaktor som fører til en økning i aromatase-ekspresjon og aktivitet [17], i sin tur, styrke østrogenproduksjonen. Åpenbart disse fakta indikerer at aromatase spiller en betydelig rolle i kreftutvikling, og det har vært antatt at dets forhøyet uttrykk angir en dårligere prognose [18].
Dette arbeidet prøve for å bekrefte (eller forkaster) hvis en hvilken som helst av disse genene uttrykk er nyttig som prognostisk verktøy og for å avklare uenighet mellom tidligere studier basert hovedsakelig i immunhistokjemi (IHC) metoder [6], [12], [19], og nyere de som har brukt sanntid PCR teknikk for å bestemme gen uttrykket [20], [21]. I denne forstand forskjellige uttrykk nivåer grupper vil bli etablert og knyttet til overlevelse.
Materialer og metoder
1.-Etisk erklæringen
Denne studien ble godkjent av etikkomiteen for klinisk forskning av Cruces universitetssykehus (CEIC /Hospital de Cruces) og ble utført i henhold til Helsinkideklarasjonen deklarasjonen~~POS=HEADCOMP. Skriftlig informert samtykke ble innhentet fra alle pasienter etter full forklaring av formål og karakter av alle prosedyrer som brukes.
2.-Pasienter
Blant 110 rekrutterte pasientene, bare 96 pasienter oppfylte utvalgskriteriene. For å bli inkludert pasienter bør bli diagnostisert med NSCLC og gjennomgikk reseksjon kirurgi; pasienter som fikk neoadjuvant kjemoterapi og pasienter med primærtumor var ikke plassert i lungen ble ekskludert. Deres kliniske egenskaper er beskrevet i tabell 1. For hver deltaker, tumor og prøvene ikke-tumor friskt vev ble fremstilt ved anatomopathologist. Prøvene ble innhentet gjennom makro disseksjon og ikke-svulstvev samsvarer med tilstøtende normale lungevevet.
3.-teknikker
3,1-REAL TIME RT-PCR.
Total RNA fra tumor og ikke-svulstvev ble ekstrahert med RNeasy Mini Kit Plus (Qiagen). Ett-trinns real-time RT-PCR ble utført ved hjelp av en Platinum Kvantitativ RT-PCR Thermoscript One-Step System og 7900HT Fast Real-Time PCR System (begge fra Life Technologies). Østrogenreseptorer og aromatase uttrykk analyser samt RPLPO (endogen kontroll) ble kjøpt fra Life Technologies:
ERS1 Twitter /Hs00174860_m1,
ERS2 Twitter /Hs00230957_m1,
CYP19A1 Twitter /Hs00903411_m1 og RPLPO /NM_053275.3. Hver analyse forsterker en rekke forskjellige transkripter. Detaljert informasjon om transkripsjon lengde, tilknyttet protein lengde, sonde ekson-ekson grense, amplikonet forsterkning og protein funksjonaliteten er inkludert i File S1.
Totalt RNA ble tilsatt for å oppnå en konsentrasjon på 100 ug /ul i et sluttvolum 10 ul reaksjon. En standard tid /temperaturprofilen ble brukt. En positiv kontroll ble inkludert i hver plate: RNA prøver ekstrahert fra MCF-7-celler (HTB22), innkjøpt (November 2009) fra ATCC. HTB22 ble valgt som referanse (kalibrator) prøve for komparativ kvantisering (ved Delta Cq metoden). Genuttrykk er rapportert som RQ verdier hentet fra komparativ kvantifisering, hvor RQ = Normalisert Relativ Antall = 2
-.. (ΔΔ Cq)
3,2-ELISA
Enzyme-linked immunosorbent assay sett for human aromatase (ARO) (USCN Life Science Inc.) ble brukt for aromatase protein deteksjon. Protein ble ekstrahert fra tumor- og ikke-tumorprøver, følger denne settprotokollen. For denne fremgangsmåten, vev var tilgjengelig fra 85 pasienter. Proteinkonsentrasjonen ble målt i en polarstjernen Microplate Reader (BMG Labtech) ved hjelp av bicinchoninic syre proteinmetode. Data ble analysert ved hjelp av
Fire Parameter Logistic Fit
, utviklet av MyAssays, Analysis Software Solutions.
4-Statistisk analyse
For statistisk analyse, SPSS /V.17, Graphpad -Prism /v.3 og MedCalc /12.7.5 programvarepakker ble valgt. I korte trekk, ble disse brukt til å beregne deskriptiv statistikk, og for å utføre: Kolmogorov-Smirnov tester for normalitet, ikke-parametriske tester (Mann-Whitney, Kruskal Wallis) når man sammenligner median, korrelasjon, overlevelse og Cox regresjonsanalyse. Alle testene var tosidig og signifikansnivå var 0,05. For overlevelsesanalyse, ble Kaplan-Meier-kurver konstruert og betydningen ble vurdert ved hjelp av Log Rank (Mantel-Cox) test. For å vurdere påvirkning av variablene på total overlevelse, ble Cox regresjon analyse utført. Først ble parvise sammenligninger gjort, og noen variabler med en signifikans på mindre enn 0,2 ble opprettholdt i en andre generell analyse. Deretter ble de fjernet, en etter en, hvis betydning overskred terskelen på 0,05. Analysen ble gjentatt etter fjerning av hver variabel. Den total overlevelse (OS) ble beregnet fra tidspunktet for kirurgi /reseksjon til datoen for siste oppfølging eller død, i måneder.
Resultater
1-
ERS1
Den første sammenligning mellom ikke-tumor og svulstvev
ERS1
nivåer oppnås en p 0,0001, anses som svært viktig. Statistikk over RQ sammenligningsresultater er vist i tabell 2. Som det kan ses,
ERS1
genekspresjon var signifikant lavere i tumor enn ikke-tumorvev.
For analyse av forholdet mellom overlevelse og
ERS1
genekspresjon, prøvene ble delt i to grupper, i henhold til de midlere ekspresjonsnivåer (Lave for lavere verdier enn medianen, ble høy for høyere verdier enn medianverdiene Kaplan-Meier-overlevelseskurver beregnet for både , avslører betydelige forskjeller innenfor tumorprøver;. Logg Rank = 0,050, figur 1a For tumorvev, median overlevelse var 28,0 måneder i nedre
ERS1
uttrykk gruppe, og 34,0 måneder i høyere
ERS1
uttrykk gruppen (tabell 3), en Mann-Whitney test viste at dette skal være en betydelig forskjell, p = 0,042, og peker på en sammenheng mellom høyere
ERS1
genuttrykk i svulstvev og lengre pasient overlevelse .
Den pasientprøven er delt inn i lav og høy (lavere og høyere uttrykk enn medianen). Paneler: a.)
ERS1 Hotell og
ERS2
, b)
CYP19A1 Hotell og ARO, og c)
ERS1 + ERS2 Hotell og CYP19A1 + ARO
for å bekrefte eller utelukke, på grunnlag av overlevelse resultater om genekspresjon ble endret i tumorprøver ble utført samme analyse for ikke-tumorprøver fra de samme pasientene, og ingen signifikante forskjeller i overlevelse ble funnet mellom disse undergruppene; Logg Rank = 0,524; . P = 0,815
ERS1
uttrykk i tumorprøver var den eneste variabelen, i løpet av de tre gener og proteiner, som var betydelig når du utvikler en Cox regresjonsmodell: Hele signifikansnivå var 0.031 for modellen, p = 0,027 for
ERS1
svulst mRNA nivå med en Exp (B) på 0,002. P-verdi for ikke-tumor vevsprøver var 0,529, ikke signifikant, så det var ikke inkludert i modellen. Som forholdet svulst /ikke-tumor, som gikk første runde, p = 0,105, men da synes ikke å være betydelig. Bare histologi (inkludert: kun adenokarsinomer og plateepitel-karsinom) var også betydelig med ap = 0,007 og en Exp (B) på 0,462.
2
ERS2
ERS2
genekspresjon ble sammenlignet i tumor /ikke-tumorvev og i dette tilfellet ingen signifikante forskjeller ble funnet (Mann-Whitney-test, p = 0,364). Det kan sees i tabell 2, genekspresjonen resultatene var meget lik i de to typer vev. Analysere overlevelse som en funksjon av ERS2 genuttrykk nivå som tidligere (Figur 1a), ble ingen signifikante forskjeller funnet mellom lav og høy uttrykk undergrupper av tumor (p = 0.253) eller ikke-tumor (p = 0,078) prøver. Det var en bemerkelsesverdig trend mot bedre overlevelse hos pasienter med lavere ERS2 nivåer i sine ikke-tumor vevsprøver, tyder på en mulig lavere uttrykk /lengre overlevelse forening.
Å holde disse dataene i tankene, betydningen av forskjeller i OS ble også vurdert med en Mann-Whitney test. Som man kan se i tabell 3, er mønsteret i tumorprøver var det omvendte av det i ikke-tumorprøver: median OS priser i lav /tumor gruppe var betydelig lavere enn de i høy /tumor-gruppe, om forskjellene ikke var signifikante (p = 0,11). I motsetning til dette, var median ratene var betydelig høyere i lav /ikke-tumor-gruppen enn den høy /ikke-tumor-gruppe, henholdsvis 33,1 versus 25,9 måneder, og denne forskjellen var signifikant (p = 0,024).
å kombinere svulst og ikke-tumor og lav og høy klasser, er fire kategorier opprettet. Forskjellene i OS mellom disse kategoriene var betydelig (Kruskal Wallis p = 0,017; Logg Rank = 0,021), med lavest overlevelse i kategorien lav svulst + høy non-tumor, dvs. pasienter med
ERS2 Twitter /lav uttrykk i svulstvev og
ERS2 Twitter /høy uttrykk i ikke-svulstvev (median = 16,6 måneder), og den høyeste overlevelsesraten i høy tumor + lav ikke-tumor, dvs. de med
ERS2 Twitter /høy uttrykk i svulstvev og
ERS2 Twitter /lav uttrykk i ikke-svulstvev (median = 36,9 måneder).
Ingen av
ERS2
relaterte variabler var inkludert i Cox modellen fordi deres opprinnelige Cox univariate tester stige 0,2 terskel. p = 0,278, p = 0,990 og p = 0,691 for tumorvev, ikke-tumorvev og forholdet svulst /non svulst henholdsvis
3-
CYP19A1 Twitter /aromatase
Som rapportert i tabell 2, aromatase ble målt både ved mRNA og protein nivåer (ng /ml). Det var ingen signifikante forskjeller mellom svulst og ikke-tumorprøver ved måling mRNA, p = 0,32. I motsetning til dette, som sammenligner proteinnivåer forskjell ble funnet å være meget signifikant, p 0,001. For å analysere eventuelle relasjoner mellom enkelt mRNA uttrykk nivåer og protein konsentrasjoner en sammenheng testen ble utført, men ingen signifikante resultater ble oppnådd (Spearman, p = 0,133).
For overlevelsesanalyse, igjen, den totale pasientprøve ble delt i lave og høye (lavere og høyere enn medianen) uttrykk /konsentrasjons grupper. Kaplan-Meier tester fant ingen signifikante enten forskjeller for genuttrykk, tumorprøver p = 0,154 (Figur 1b), ikke-tumorprøver log-rank p = 0,578, eller proteinkonsentrasjonen, tumorprøver p = 0,266 (Figur 1b) og non-tumor prøver log-rank p = 0,532
Selv i overlevelsesanalyse var det ingen signifikante forskjeller, Tabell 3 viser at mønsteret i genuttrykk og proteinkonsentrasjonen var ganske lik. Lave uttrykk grupper tendens til å ha en lengre overlevelse, mens høy uttrykk grupper tendens til å ha kortere overlevelse. Oppdeling av den totale prøven i tidlig stadium NSCLC (I-II) og sent stadium (III-IV) NSCLC, var det en signifikant forskjell i overlevelse i løpet av de tidlige stadium tilfeller mellom lav (median = 31,4 måneder) og høy (median = 25,0 måneder) aromatase genekspresjon grupper: Logg Rank = 0,07; Mann-Whitney p = 0,016. Det var ingen slik forskjell når ikke-tumorvev prøvene ble sammenlignet, eller vurderer aromatase proteinkonsentrasjonen.
Som skjedde med
ERS2
, ingen av
CYP19A1
eller aromatase protein relatert variabler ble inkludert i finalen Cox regresjonsmodell, selv om en av dem gikk innledende analyse (p 0,200):
CYP19A1
svulst vev p = 0,966,
CYP19A1
ikke-tumor vev p = 0,810,
CYP19A
en svulst /non svulst forholdet p = 0,727, vev aromatase svulst p = 0,240, vev aromatase ikke-tumor p = 0,692 og aromatase svulst /non-tumor forholdet p = 0,038.
4-kombinert genekspresjon-overlevelsesanalyse
Nylig er det blitt vist [22] at kombinasjoner av forskjellige genekspresjon resultatene kan definere i detalj den generelle situasjonen i NSCLC. Som tidligere en gitt variabel er delt i lave og høye grupper, og deretter, hvis to variabler forenes, fire undergrupper kan defineres; for
ERS1 Hotell og
ERS2
, undergruppene er Low
ERS1
+ Low
ERS2
, Low
ERS1
+ høy-
ERS2
, høy-
ERS1
+ Low
ERS2 Hotell og høy
ERS1
+ høy-
ERS2
. Når man sammenligner prøvene, se tabell 4, de med høyest uttrykk av de to genene var de med høyest OS. Forskjellen mellom Low
ERS1
+ Low
ERS2 Hotell og høy
ERS1
+ Høy-
ERS2
gruppene var signifikant, Mann-Whitney test p = 0,025, men en Kaplan-Meier-OS test var ikke, p = 0,057 (figur 1c). Medianer for undergruppene Low
ERS1
+ Høy-
ERS2 Hotell og High-
ERS1
+ Lav
ERS2 plakater (26.63 og 28.80 måneder respektivt) var nær til dem for Low
ERS1
+ Low
ERS2
gruppe; om sammenligninger av de fire kategoriene ikke påvise noen signifikante forskjeller, den oppnådde mønster tendens til å foreslå at høyt uttrykk av de to genene er assosiert med bedre overlevelse.
Så
CYP19A1
ekspresjon og aromatase proteinkonsentrasjon ble vurdert. Det var ingen signifikante forskjeller mellom lav
CYP19A1
+ Low-aromatase protein og høy
-CYP19A1
+ Høye aromatase protein grupper (tabell 4). I dette tilfellet, høyere ekspresjon og konsentrasjoner tendens til å være assosiert med kortere overlevelse, selv om det ikke er signifikant, p = 0,088 (figur 1c).
Endelig uttrykk nivåer av østrogen reseptor-gener ble kombinert med aromatase genekspresjon og protein konsentrasjoner, og median OS priser vurdert (tabell 5). Igjen ble fire kategorier som ble analysert. Den sterkeste foreningen ble funnet for
ERS1
kombinert med
CYP19A1
genekspresjon: de høyeste OS priser ble funnet for kategorier Høy
-ERS1
+ Lav
-CYP19A1
og High
-ERS1
+ Høy
CYP19A1 plakater (begge inneholder
ERS1-
Høy uttrykk gruppe), mens den for kategorien Low
ERS1
-high-
CYP19A1
var betydelig lavere. Disse forskjellene var signifikante (Kaplan-Meier Logg Rank = 0,0001; Kruskal-Wallis p = 0,011).
For å kvantifisere i hvilken grad overlevelse var lavere i Low
-ERS1
+ Høy
-CYP19A1
kategori, de tre andre kategoriene ble slått sammen til ett sett og en Cox regresjon ble utført. Resultatene var stor betydning: p = 0.000007; Exp (B) = 4,041. I denne Low
ER
S1 + Høy-
CYP19A
en kategori, en pasients sannsynlighet for å overleve var fire ganger lavere enn for resten av pasientene (omgruppert i ett sett). På den annen side, med tanke på aromatase proteinkonsentrasjon i stedet for genekspresjon, forskjellene var ikke lenger signifikant.
ERS2
/
CYP19A1
fire kategori sammenligning, ikke i noe signifikante forskjeller ble funnet (se tabell 5). Den laveste overlevelsessamsvarer kategorien Low
ERS2
+ Høy
-CYP19A1
langt fra de øvrige kategoriene. Faktisk, gjenta Kaplan-Meier test for lav
-ERS2
+ Høy
-CYP19A1 Hotell og andre kategorier individuelt, de tre parvise sammenligninger gjorde gi betydelige forskjeller (lav
-ERS2
+ lav
-CYP19A
vs. lav
-ERS2
+ Høy
-CYP19A1
p = 0,031; Høy
-ERS2
+ lav
-CYP19A1
vs. lav
-ERS2
+ Høy
-CYP19A1
p = 0,045, og High
-ERS2
+ Høy
-CYP19A1
vs. lav
-ERS2
+ Høy
-CYP19A1
p = 0,035). Som tilfellet var for
ERS1
, sammenligning av kategoriene lav
-ERS2
+ Lav
-CYP19A1
, High
-ERS2
+ Lav
-CYP19A1 Hotell og høy
-ERS2
+ Høy
-CYP19A1
omgruppert i bare ett sett, med kategori lav
-ERS2
+ Høy
-CYP19A1
, ved hjelp av Cox regresjon til å kvantifisere overlevelse forskjeller, ga en svært signifikant resultat: p = 0,009, Exp (B) = 2,307
Vurderer proteinkonsentrasjonen i stedet for
CYP19A1
genuttrykk. den kategorien med lavest overlevelse var igjen Low
-ERS2
+ Høy aromatase, men prisene var dramatisk høyere for High
-ERS2
+ Low-aromatase og særlig lavere for kategorier Lave
-ERS2
+ Low-aromatase og High
-ERS2
+ Høy aromatase. Forskjeller mellom de fire kategoriene var ikke signifikant med Kaplan-Meier test (p = 0,093), men de var med Kruskal-Wallis test (p = 0,049).
ERS1
+ aromatase og
ERS2
+ Aromatasehemmere kombinasjoner dele en interessant trekk: Høy-
ERS1 /2
+ Low-aromatase er underklasser med høyere overlevelse i begge tilfeller. En Cox regresjon av Høy-
ERS1
+ Low-aromatase mot de tre andre
ERS1
+ Aromatasehemmere kombinasjoner var ikke signifikant p = 0,114, Exp (B) = 1,89. Høy-
ERS2
+ Low-aromatase gir samme resultat p = 0,061 Exp (B) = 2,12.
Diskusjoner
Selv om real time RT-PCR har blitt brukt tidligere for å bestemme østrogenreseptorer ekspresjon i lungetumorprøver, har disse studier er begrenset på grunn av den lille prøvestørrelsen [23], eller fordi de var begrenset til cellekulturer [9], [24]. Videre har IHC vært metoden som oftest anvendes for å påvise tilstedeværelse av ERα og ERβ proteiner og variasjoner i deres konsentrasjon. Forskning på aromatase har fulgt et lignende mønster [11], [18], [25].
Hittil har det vært betydelige avvik i IHC resultatene rapportert (selv bruker samme antistoff, teknikk og vevstype) : deteksjon varierer fra 0 til 80% for ERα, 30 til 100% for ERβ og 60 til 100% av aromatase. Gomez-Fernandez et al. [26], Raso et al. [27] og Miki et al. [28] diskuterte problemet, etablere en kilde til disse avvikene: de ulike antistoffer som virker mot ulike epitoper. Brueckl et al. [21] og Atmaca et al. [20], publisert sin
ERS1
uttrykk resultater basert på RT-PCR-metoden og humane prøver (herunder større samling av pasientene), og legger til en ny avvik kilde, mangfoldet av spleisevarianter av ESR1 mRNA.
ERS1
genet ble uttrykt i 100% av tumor og ikke-tumorprøver. Innenfor tumorprøver var det en signifikant mønster i overlevelse: de med høyere
ERS1
genekspresjon hadde lengre overlevelse, og dette står i motsetning til tidligere studier. For eksempel, i FASCO et al. [23] ingen sammenheng ble funnet, kanskje på grunn av liten kohort av pasienter, mens Olivo-Marston et al. [29] rapporterte en invers korrelasjon mellom ER-α positivt uttrykk og overlevelse i serumprøver og i en av de to vev kullene studert. De forskjellige resultater kan forklares delvis ved tilnærming til analyse: tok de første tertile som negativ uttrykk og de to andre som positiv. Tidligere studier har tendens til å bruke IHC metoder, og resultatene har vært meget blandede, som strekker seg fra ingen proteiner som detekteres av tilstedeværelsen av ER-α forbundet med dårligere overlevelsen, alene eller i kombinasjon med den epidermale vekstfaktor-reseptor [6], [12] , [19], [22], [30], [31]. Andre grunner for disse forskjellene, i tillegg til de ovenfor nevnte antistoffet problem og alternativ spleising, er effektene av post-translasjonell regulering for deteksjon [9], [26], [28], [32].
ERS1
uttrykk resultater relatert til overlevelse er i overensstemmelse med Brueckl et al. [21] og Atmaca et al. [20]. Egentlig er de brukt en analyse tilnærming som ligner på det som har blitt brukt her, Delta Cq metode, ved hjelp av median å dele pasientene i lav og høy uttrykk undergrupper.
Når det gjelder
ERS2
genekspresjon pasienter med høy og lav
ERS
to uttrykk i svulsten og ikke-svulstvev henholdsvis en tendens til å ha høyere overlevelse; og de med motsatt uttrykk profilen (Low
ERS2
i tumor /high
ERS2
i ikke-svulstvev) har dårligst prognose. Noen forfattere fant ikke noen sammenheng mellom ER-β protein uttrykk og overlevelse [22], [23], [33] mens andre, i samråd med våre resultater, observert at tilstedeværelse av ER-β protein er relatert til bedre prognose. Når inkludert i Cox regresjon multivariatmodell
ERS2
uttrykk i tumor, ikke-tumor og dens forholdet ikke gi noen betydelige resultater. Angå
CYP19A1
uttrykk, tidlig stadium pasienter uttrykk grupper (Lav /Høy) overlevelses resultatene er i samsvar med de av Mah et al. [18], selv om resultatene var basert på IHC metoder for protein deteksjon Som med
ERS2
, ingen av
CYP19A1
eller aromatase variabler ble inkludert i Cox multivariate mocel.
Med tanke på gen /protein expression kombinasjoner, Høy-
ERS1 Twitter /Høy-
ERS2
klart spår høyere OS og kan brukes som prognostisk faktor. Tidligere rapporter som brukte denne tilnærmingen var basert på IHC metoder og de fikk betydelige sammenligninger ved å kombinere variabler som beskriver tilstedeværelsen av ER-beta og aromatase proteiner [22], [34], [35].
Den kraftigste gen kombinasjonen ble funnet å være Low
ERS1
+ Høy-
CYP19A1
uttrykk og dette var forbundet med kortere overlevelse. Etter å ha analysert de fire undergrupper involverer
ERS1 /CYP19A1
, virker det som Low
ERS1
er mer avgjørende for overlevelse enn Høy-
CYP19A1
genuttrykk, ettersom overlevelse ulempe er ikke funnet når høy
CYP19A1
genuttrykk er kombinert med høy
ERS1
uttrykk, men OS hastighet for Low
ERS1
+ /Low
CYP19A1
uttrykk peker til den konklusjon at det er den eksakte kombinasjonen som resulterer i kortere OS. Forskjellen i mønsteret mellom uttrykk for
CYP19A1 Hotell og tilstedeværelsen av den tilsvarende protein (tabell 5) leder oss til å konkludere med at noe oppveier en økning i OS i kategorien Low
ERS1
+ høy
-CYP19A1
, og en nedgang i Høy-
ERS1 Twitter /Høy-
CYP19A1 Twitter /High. Dette kan være spleising, post translasjonell modifikasjon eller en annen som ennå uidentifiserte biologisk mekanisme, men det kan også være knyttet til relativt liten utvalgsstørrelse.
For å få en sammenlignbar prediktor for OS basert på
ERS2
kombinasjonen Low
ERS2
+ Høy-
CYP19A1
trengs for å bli satt opp mot de tre andre mulige kombinasjoner (tabell 5) gruppert i ett sett. Hazard ratio fra en Cox regresjon for pasienter med Low
ERS2
+ Høy-
CYP19A1
uttrykk versus de tre andre kategoriene er 2,307, mens den samme testen for Low
ERS1
+ Høy-
CYP19A1
uttrykk ga en hasardratio på 4,041, noe som understreker den relative styrken av
ERS1
nivå som en prediktor. På den annen side, i tilfellet med
ERS2
/Aromatase-protein, de betydelige forskjeller i overlevelse var merke, et mønster som ikke ble sett med
ERS1
. Som med de
ERS1 Twitter /CYP19A1 kombinasjoner, kan det konkluderes med at Low
ERS2
er viktigere enn Høy-
CYP19A1
genekspresjon når de vurderer forskjellen i overlevelse mellom de fire delsett. Videre må eventuelle funn av noen form for regulering vurderes på grunn av variasjoner i satsene for kategoriene Low
ERS2
+ Low
CYP19A1
, Høy-
ERS2
+ Low
CYP19A1 Hotell og High-
ERS2
+ Høy-
CYP19A1 Hotell og forskjellene i atferd
ERS1 Hotell og
ERS2
profiler når det kombineres med uttrykk eller produktet av
CYP19A1
genet.
i konklusjonen
ERS1
, alene eller i kombinasjon med
ERS2
eller
CYP19A1
, er den mest avgjøre prognostisk faktor i de analyserte 3 genene som tar hensyn til sin deregulering i tumorvev, sitt forhold til overlevelse, og at hasardratio når den er kombinert med andre variabler er høyere enn for
ERS2
. Opprinnelsen til dereguleringen, som synes å være årsaken underexpression av
ERS1
RNA har ennå ikke klarlagt. Tilfellet med
ERS2
er ganske annerledes, ettersom mønsteret av pasientens overlevelse endres betraktelig når de vurderer uttrykk i ikke-tumor eller svulstvev. Igjen, tror vi at det er noen som ennå ukjent faktor å forstyrre denne prosessen. Videre forskning er nødvendig for å identifisere disse faktorene og på hvilket nivå de opptrer.
Hjelpemiddel Informasjon
Fil S1.
Detaljert informasjon om ERS1,
ERS2 Hotell og CYP19A1 gener avskrift lengde, assosiert protein lengde, sonde ekson-ekson grense, amplicon forsterkning og protein funksjonalitet. Tabell S1 A.
CYP19A1
genet transkripsjoner og protein informasjon, tilpasset fra Life Technologies hjemmeside, for analysen ID Hs00903411_m1. Tabell S1b.
CYP19A1
genet transkripsjoner og protein informasjon, tilpasset fra ENSEMB, for analysen ID Hs00903411_m1. Tabell S2A.
ERS1
genet transkripsjoner og protein informasjon, tilpasset fra Life Technologies hjemmeside, for analysen ID Hs00174860_m1. Tabell S2B.
ERS1
genet transkripsjoner og protein informasjon, tilpasset fra ENSEMB, for analysen ID Hs00174860_m1. Tabell S3a.
ERS2
genet transkripsjoner og protein informasjon, tilpasset fra Life Technologies hjemmeside, for analysen ID Hs00230957_m1. Tabell S3b. .
ERS2
genet transkripsjoner og protein informasjon, tilpasset fra ENSEMB, for analyse ID Hs00230957_m1
doi: 10,1371 /journal.pone.0109659.s001 plakater (DOC)
