Abstract
epithelial mesenchymale overgang (EMT) regnes for å være korrelert med malignitet av kreftceller og ansvarlig for kreft invasjon og metastasering. Vi har tidligere rapportert at fjernmetastaser var assosiert med hypoksi i magekreft. Vi undersøkte derfor effekten av hypoksisk tilstand på EMT av magekreftceller. Gastriske kreftceller ble dyrket i normoxia (21% O
2) eller hypoksi (1% O
2) i 24 timer. EMT ble evaluert som prosentandelen av spindel-formede celler i totale celler. Effekt av transformerende vekstfaktor-β1 (TGFβ1) eller tyrosinkinaseinhibitorer på EMT ble evaluert. Uttrykket nivået av
TGFβ1 Hotell og
TGFβR
ble evaluert av real time RT-PCR. Den TGFβ1 produksjon fra kreftceller ble målt ved hjelp av ELISA. Hypoksi stimulert EMT av OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler, men ikke som OCUM-2M celler. Ekspresjonsnivået av
TGFβ1
mRNA under hypoxi var signifikant høyere enn at under normoxia i alle tre cellelinjer. Ekspresjonsnivået av
TGFβR
mRNA var signifikant økt ved hypoksi i OCUM-2MD3 celler, men ikke i OCUM-2M-celler. TGFβR inhibitor, SB431542 eller Ki26894, undertrykte betydelig EMT av OCUM-2MD3 og OCUM-12. TGFβ1 produksjon fra OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler ble betydelig økt etter hypoksi sammenlignet med at under normoxia. Disse funnene kan tyde på at hypoksi stimulerer EMT av mage kreftceller via autokrint TGFB /TGFβR signale
Citation. Matsuoka J, Yashiro M, Doi Y, Fuyuhiro Y, Kato Y, Shinto O et al. (2013) Hypoksi Stimulerer EMT av magekreft celler gjennom Autocrine TGFB signalering. PLoS ONE 8 (5): e62310. doi: 10,1371 /journal.pone.0062310
Redaktør: Claudio M. Costa-Neto, Universitetet i São Paulo, Brasil
mottatt: 19 oktober 2012; Godkjent: 19 mars 2013; Publisert: 17 mai 2013
Copyright: © 2013 Matsuoka et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne studien ble støttet delvis av National Cancer Center Research and Development Fund (23-A-9), og ved Grants-in Aid for Scientific Research (KAKENHI, nr. 20591573, 22390262, og 23390329) fra departementet for utdanning, vitenskap, sport, kultur og teknologi i Japan. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:. Forfatterne har følgende interesser. KS, TS, og AM er ansatte i Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Ki26894, som ble brukt i denne studien, er et produkt av Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Det er ingen ytterligere patenter, produkter under utvikling eller markedsført produkter å erklære . Dette endrer ikke forfatternes tilslutning til alle PLoS ONE politikk på deling av data og materialer, som beskrevet på nettet i veiledningen for forfatterne.
Innledning
epithelial mesenchymale overgang (EMT) er karakterisert ved forandringer i cellemorfologi i løpet av hvilken epitelceller skaffe mesenchymale egenskaper samtidig miste celle-celle interaksjoner og apicobasal polaritet [1], [2]. I epiteliale kreftformer, er EMT anerkjent som en av de mekanismene som er ansvarlig for å initiere invasiv og metastatiske atferd [3] – [5]
Det finnes et hypoksisk miljø i enkelte regioner i solide kreftformer som viser rask vekst fordi angiogenese. i karsinomer er heterogen [6]. Hypoksi er ansett for å være assosiert med aggressive tumor fenotyper av gastriske karsinomer [7], [8], inkludert metastatisk evne av kreftceller [6], [9]. Kliniske og eksperimentelle data gir også holdepunkter for en sammenheng mellom hypoksisk miljø og dårlig prognose [10], [11]. Det er derfor viktig for den fremtidige utviklingen av kreft behandlinger for å avklare mekanismen av metastase indusert av hypoksi.
Det har blitt rapportert at ulike løselige faktorer, inkludert transvekstfaktor-β1 (TGFβ1) [12], [ ,,,0],13], epidermal vekstfaktor (EGF) [14], insulin-lignende vekstfaktor-1 (IGF1) [15], fibroblast vekstfaktor (FGF) [16], hepatocytt-vekstfaktor (HGF) [17] ble korrelert med EMT . TGFp signaler har en viktig rolle i forskjellige aspekter ved metastatisk spredning av kreftceller, slik som migrasjon, invasjon, og EMT [12], [13]. De TGFp-ligander bindes til TGFp-reseptor type II (TGFβRII), som deretter danner et kompleks med enten TGFβR type I eller II. TGFβR type I (TGFβRI) overfører signaler i cellen via andre messenger-Smad proteiner [13], [18]. Nedstrøms signaloverføring gjennom TGFβRI, som fosforylerer reseptor-regulert Smad proteiner [19], [20]
Flere studier har rapportert at en hypoksisk tilstand kan indusere EMT av kreftceller [21] -. [24], men den molekylære mekanismen ansvarlig for EMT under en hypoksisk tilstand er fortsatt uklart. Vi undersøkte derfor effekten av hypoksi på morfologiske egenskapene til mage kreftceller til å avklare mekanismene som er ansvarlig for hypoksi-indusert EMT.
Materialer og Metoder
cellekultur og cellelinjer
Syv magecancercellelinjer ble anvendt. OCUM-2MD3 [25], OCUM-12 [26], OCUM-2M [27], ble KATO-III [28], og MKN-45 [29] er avledet fra diffus-type gastrisk karsinom. MKN-74 [29] og MKN-7 [29] var avledet fra intestinal-type. OCUM-2M, OCUM-2MD3 og OCUM-12 ble etablert i vårt laboratorium, som tidligere rapportert [25] – [27]. Kort, OCUM-12was avledet fra ascites forbundet med diffuse-type magekreft, og OCUM-2MD3 celler, en datter cellelinje med høyt potensial for peritoneal metastaser, ble etablert fra OCUM-2M celler ved hjelp orthotopic tumormodell, en foreldrecellelinje ascites assosiert med diffuse-type magekreft. De andre cellelinjer ble oppnådd fra JCRB cellebank (Osaka, Japan) eller American Type Culture Collection (Rockville, MD). Celler ble dyrket ved 37 ° C i 21% O
2 (normoxia) eller 1% O
2 (hypoksi). Hypoksiske betingelser ble opprettholdt ved hjelp av et modulbasert inkubator kammer (Hirasawa, Tokyo, Japan) med 5% CO
2 og 1% O
2 balansert med N
2 gass. Dyrkningsmediet besto av Dulbeccos modifiserte Eagle-medium (DMEM;. Nikken Bio, Osaka, Japan) med 10% føtalt bovint serum (. Nichirei Bio), 100 IU /ml penicillin (ICN Biomedicals, Costa Mesa, CA), 100 ug /ml streptomycin (ICN Biomedicals), og 0,5 mM natriumpyruvat (Cambrex, Walkersville, MD).
morfologiske endringer
Kreftceller celler~~POS=HEADCOMP ble dyrket under normoksiske og hypoksiske betingelser i 24 timer, og cellemorfologi ble observert mikroskopisk. EMT ble bestemt når det mangekantede eller spindel form ble funnet i kreftceller ved fasekontrastmikroskop. Frekvensen av EMT ble bedømt ved graden av polygonale eller spindelformede celler i alle kreftceller; EMT rate = antall polygonale eller spindel form celler /totalt antall celler x 100 (%).
Effekter av ulike løselige faktorer på morfologiske endringer
Vi undersøkte effekten av ulike løselige faktorer , inkludert EGF (Pepro Tec, Rocky Hill, New Jersey), IGF1 (Pepro Tec), vaskulær endotelial cellevekstfaktor (VEGF, R Pepro Tech), HGF (Pepro Tech), TGFβ1 (King Brewing, Kakogawa, Japan), på morfologi av kreftceller. Celler ble dyrket i DMEM inneholdende en av ovennevnte faktorer ved ønsket konsentrasjon ved 37 ° C i normoxia. Cellemorfologi ble undersøkt etter 24 timer. Forsøk ble utført for hver faktor i duplikat.
Effekter av nøytraliserende antistoffer på morfologiske endringer
Vi brukte nøytraliserende antistoffer, slik som anti-HGF antistoff (Genzyme techne, MPLS, MN, USA), anti-TGFB antistoff (R . Pfizer, San Diego, CA, USA) ble brukt
Kvantitativ sanntid revers transkriptase-polymerase kjedereaksjon (RT-PCR)
Kvantitativ RT-PCR ble utført for å undersøke
TGFβ1
,
TGFβRI, TGFβRII, Kjøpe og
vimentin
mRNA uttrykk. Kreftceller ble inkubert i henhold til normoksisk betingelser og under hypoksiske betingelser i 24 timer. Etter inkubasjonen ble det totale cellulære RNA ekstrahert ved anvendelse Trizol reagens (Invitrogen, Carlsbad, CA) ifølge produsentens instruksjoner. Etter fjerning av genomisk DNA ved hjelp av DNase, ble cDNA fremstilt fra 2 pg RNA med Maloney museleukemivirus revers transkriptase (Invitrogen) ved anvendelse av vilkårlige primere (Invitrogen). For å bestemme fold endringer i hvert gen, ble real-time RT-PCR utføres på ABI Prism 7000 (Applied Biosystems, Foster City, CA), ved bruk av kommersielt tilgjengelige genekspresjon analyser for
TGFβ1 plakater (Hs00998130,),
TGFβRI plakater (Hs00610319),
TGFβRII plakater (Hs00559661),
vimentin plakater (Hs00958116),
Twist plakater (Hs01675818),
Zeb1
(Hs 00232783),
Snail1 plakater (Hs00195591),
VEGFA plakater (Hs00900055). PCR ble utført ved 95 ° C i 15 s og 60 ° C i 60 sek for 40 sykluser. Glyseraldehyd-3-fosfat dehydrogenase (GAPDH) ble anvendt som en intern standard for å normalisere mRNA-nivåer for forskjeller i prøvekonsentrasjon og lasting. Brett endringer i ekspresjon av hvert mål-mRNA i forhold til GAPDH ble beregnet på grunnlag av terskelen syklus (Ct) som 2
-Δ (ΔCt), hvor ΔCt = Ct Ct target- GAPDH og Δ (ΔCt) = ΔCt
hypoksi-ΔCt
normoxia. Kvantitativ PCR-reaksjoner ble utført in triplo.
Western blot-analyse
For å undersøke virkningen av hypoksi på Smad2 fosforylering, kreftceller ble inkubert i henhold til normoksisk eller hypoksiske betingelser i 24 timer, henholdsvis. Cellene ble lysert i en lyseringsbuffer, og alikvoter inneholdende 50 ug totalt protein, ble underkastet natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgel-elektroforese; proteinbåndene ble overført til en polyvinylidendifluorid-membran (Millipore, Billerica, Massachusetts). Membranen ble inkubert i TBS-T (10 mM TBS, og 0,05% Tween 20) supplert med 5% fettfri melk eller 5% bovint serumalbumin (Sigma) ved romtemperatur i 1 time. Deretter ble membranen plassert i en TBS-T-oppløsning inneholdende det primære antistoff p-Smad2 (Ser
465/467, 1: 1000, Cell Signaling Technology) eller Smad2 /3 (1: 1000; Cell Signaling Technology), vimentin (1: 1000; Cell Signaling Technology), anti-βactin (1: 1000; Sigma) og tillatt å reagere ved 4 ° C over natten. Deretter ble hvert antistoff vasket tre ganger med TBS-T i 10 minutter, og et peroksidase-merket sekundært antistoff (GE Healthcare, Buckinghamsire, UK) reagerer med det primære antistoff ble tilsatt. Båndene ble oppdaget ved hjelp av en forbedret chemiluminescence system (Wako, Osaka, Japan).
Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)
TGFβ1 produksjon fra kreftceller ble målt ved en kvantitativ smørbrød enzym immunologisk måleteknikk ved anvendelse av en Quantikine human TGFβ1 ELISA-sett, i henhold til produsenten `instruksjon (R 0,05
Resultater
Effekter av hypoksi på kreftcellen morfologi
En hypoksisk tilstand betydelig økt antall av polygonale eller spindelformede celler som gjennomgår EMT blant OCUM-2MD3 eller OCUM-12-celler, men ikke blant OCUM-2M, MKN-7, MKN-45, MKN-74, eller KATO-III celler (fig. 1A og fig. S1). Cellen morfologi OCUM-2MD3 og OCUM-12 begynte å endre etter 4 timer i hypoksisk kultur. Etter 12 timer med kultur, ble en økt forekomst av EMT sett i begge cellelinjene. EMT frekvensen av OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler var høyest ved 24 timer hypoksisk kultur (Fig. 1B). Siden morfologiske endringene var tydelig på 24 timer med kultur under hypoxi, ble de molekylære mekanismene for EMT analysert etter 24 timer med kultur i henhold hypoksiske forhold ved hjelp OCUM-2MD3, OCUM-12, og OCUM-2M celler.
(A) En økning av polygonale eller spindel-formede celler ble anerkjent i OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler etter hypoksi, men ikke i OCUM-2M celler. (B) Den morfologi OCUM-2MD3 og OCUM-12 cellene begynte å endre seg etter fire timer i hypoksisk kultur. EMT av OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler var mest tydelig på 24 timer med kultur under hypoxi. EMT ble bestemt når det mangekantede eller spindel form ble funnet i kreftceller ved fasekontrastmikroskop.
Effekter av ulike vekstfaktorer på kreftcelle morfologi
Løselige faktorer ble brukt ved konsentrasjoner på 10 eller 100 ng /ml. OCUM-2MD3 og OCUM-12-celler ble spindel-formet etter tilsetning av TGFβ1 eller HGF, men ikke etter tilsetning av EGF, FGF2, FGF7, IGF1, VEGF eller PDGF-BB etter 24 timer under normoxia (tabell 1). I motsetning til dette, OCUM-2M-celler viste ingen morfologisk endring etter tilsetning av noen faktorer (fig. 2).
morfologisk forandring ble funnet i nærvær av TGFp og HGF ved 24 timer av kulturen i OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler, men ikke FGF2.
Effekter av nøytraliserende antistoffer på kreftcelle morfologi etter hypoksi
EMT indusert av hypoksi ble delvis hemmet av anti-TGF-β1 antistoff på 100 mikrogram /ml, men ikke av anti-HGF antistoff (tabell 2).
Effekter av hypoksi på
TGFβ1
,
TGFβRI
, og
TGFβRII
mRNA uttrykk av magekreftceller
uttrykket nivået av
TGFB
var signifikant (p 0,001) økte under en hypoksisk tilstand i alle OCUM-2MD3, OCUM- 12, og OCUM-2M-celler, sammenlignet med nivået i henhold normoxia (fig. 3A). Uttrykket nivåer av
TGFβRI Hotell og
TGFβRII
ble betydelig økt under en hypoksisk tilstand OCUM-2MD3 celler. I motsetning til nivåene av
TGFβR1 Hotell og
TGFβR2
uttrykk ble betydelig redusert under en hypoksisk tilstand OCUM-2M celler (fig. 3B).
(A)
TGFB
mRNA uttrykk var signifikant (p 0,001) økte under en hypoksisk tilstand OCUM-2M, OCUM2MD3 og OCUM-12 celler. (B) uttrykk nivåer av
TGFβRI Hotell og
TGFβRII
var signifikant (p 0,001) økte under en hypoksisk tilstand OCUM-2MD3, men ikke i OCUM-2M celler. (C) TGFβ1 produksjon i OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler var signifikant (p = 0,001 og p 0,001) høyere etter hypoksi (232 pg /ml, 80 pg /m, henholdsvis) enn etter normoxia (109 pg /ml, 34 pg /ml, henholdsvis). TGFβ1 produksjon i OCUM-2M celler var ikke forskjellig mellom normoxia og hypoksi.
Effekt av hypoksi på TGFβ1 produksjon løslatt fra mage kreftceller
TGFβ1 produksjon fra OCUM-2MD3 og OCUM- 12 celler var signifikant (p 0,001) øker under hypoksi sammenlignet med normoxia, men ikke at fra OCUM-2M celler (figur 3C.)
Effekter av hypoksi på Smad2 fosforylering av magekreft cellelinjer
.
i OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler, Smad2 fosforylering ble økt under en hypoksisk tilstand, i forhold til at under en normoksiske tilstand. I motsetning til dette ble Smad2 fosforylering ikke øket under en hypoksisk tilstand OCUM-2M-celler (fig. 4).
hypoksisk tilstand i 24 timer øket Smad2 fosforylering av OCUM-2MD3 og OCUM-12-celler (pilhoder), men ikke som OCUM-2M-celler. Smad2 /3 ble brukt som en internasjonal kontroll for p-Smad2.
Effekter av fosforylering kinase hemmere på EMT og vimentin uttrykk i hypoksi
Hver av TGFβR fosforylering hemmere, Ki26894 og SB431542, hemmet de morfologiske endringer OCUM-2MD3 og OCUM-12 cellene under et hypoksisk tilstand, men tre andre hemmere, Lapatinib, Sunitinib og PHA665752, ikke (figur 5A, 5B). På den annen side, er ingen av inhibitorene hadde noen effekt på morfologien til OCUM-2MD3 og OCUM-12-celler i henhold til normoxia (data ikke vist). Ekspresjonsnivået av
vimentin
, som ble anvendt som en EMT markør, ble signifikant øket ved hypoksi, og ble redusert ved hver av de TGFβR inhibitorer Ki26894 og SB431542 (figur 5C). Vimentin proteinnivået var også økt etter hypoksi, og ble redusert med en av de TGFβR hemmere Ki26894 og SB431542 (figur 5D)
(A, B) Hypoksi-induserte EMT var signifikant (p 0,01). Hemmet av TGFβR hemmere (Ki26894 og SB431542). Andre hemmere (Lapatinib, Sunitinib og PHA665752) hadde ingen effekt på EMT etter hypoksi. (C)
vimentin
mRNA ekspresjon ble betydelig økt under en hypoksisk tilstand OCUM-2M og OCUM-12 celler, og redusert med TGFβR hemmere (Ki26894 og SB431542). (D) vimentin protein ble økt etter hypoksi i OCUM-12 og OCUM-2MD3, og redusert med TGFβR hemmere (Ki26894 og SB431542).
Effekter av hypoksisk tilstand på faktorer assosiert med EMT.
hypoksisk tilstand betydelig økt
VEGF-A
mRNA nivå i OCUM-2M, OCUM-2MD3, og OCUM-12 celler. Uttrykket nivået av
Twist
eller
Zeb1
var signifikant økt med hypoksi i OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler, men ble redusert i OCUM-2M celler. Den økte uttrykk for
Twist
eller
Zeb1
ble redusert med en av de TGFβR hemmere Ki26894 og SB431542 i OCUM-12 celler. Hypoksisk tilstand ikke påvirket på uttrykket nivået av
Snail1 plakater (figur 6).
(A) En hypoksi-target molekyl,
VEGF-A
mRNA nivå i OCUM -2M, OCUM-2MD3, og OCUM-12 ble økt etter hypoksi. (B, C) hypoksisk tilstand betydelig økt uttrykk nivå av
Twist Hotell og
Zeb1
i OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler, men ikke som i OCUM-2M celler. (D) Uttrykket nivået av Snail1 ble ikke påvirket av hypoksisk tilstand.
Diskusjoner
Nylig har flere studier har rapportert at en hypoksisk mikromiljøet rundt solide tumorceller kan bidra til kreft progresjon [30] – [34]. Men de molekylære mekanismene som er ansvarlig for kreft progresjon i hypoksi fortsatt uklare. Det har blitt rapportert at hypoksi er en av utløserne for EMT [35]. I denne studien, en hypoksisk tilstand indusert EMT i diffuse-type mage kreft cellelinjer OCUM-2MD3 og OCUM-12, men ikke i intestinal-type celler. Diffuse-type magekreft er preget av høyere malignitet enn intestinal-type magekreft [36]. EMT potensialet av kreftceller under hypoxi kan være en av årsakene til den høye malignitetspotensiale av diffust-type magekreft.
Mange studier har rapportert at flere molekyler kan påvirke EMT av kreftceller, inkludert TGFp [23 ], [37], EGF [38], og PDGF [39]. I denne studien, TGFfi stimulert EMT av OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler, men EGF og PDGF ikke. I tillegg ble EMT induksjon under en hypoksisk tilstand vesentlig redusert med anti-TGFB nøytraliserende antistoff eller TGFβR fosforylering hemmere både OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler. Tatt sammen indikerer disse resultatene at produksjonsnivået av TGFp i kreftceller var signifikant økt etter hypoksi, og uttrykket nivåer av TGFβR og Smad2 fosforylering ble økt med hypoksi. Vimentin er en karakteristisk bestanddel av mesenchymale celler og er ikke vanligvis uttrykt i epitelceller. Fordi uttrykk for
vimentin
i epitelceller spiller en avgjørende rolle i EMT gjennom interaksjon med aktin og andre mellomfilamenter [40], vimentin ble brukt som en EMT markør i denne studien. Uttrykket nivået av
vimentin
ble betydelig økt ved hypoksi, og ble redusert med de TGFβR fosforylering hemmere Ki26894 og SB431542. Disse resultatene antydet at EMT under en hypoksisk tilstand er forbundet med den autokrine TGFp /TGFβR signalering i diffust-type magekreft. Flere studier rapporterte sammenhengene mellom EMT og TGFB signal i hypoksi. [2], [21], [23], [32], [37] I magekreft, har det blitt rapportert at EMT er korrelert med malignitet av kreftceller og er ansvarlig for kreftinvasjon og metastase. Men de mekanismene som er ansvarlig for EMT av magekreftceller forblir uklart. Dette papiret avklart at EMT av magekreftceller ble indusert via TGFB signaliserer etter hypoksi. TGFβR inhibitorer kan således være lovende midler for behandling av mage cancer metastase.
Hypoksi stimulert EMT av OCUM-2MD3 celler, men ikke den av OCUM-2M-celler. EMT har vært innblandet i å fremme kreft invasjon og metastasering. Mens OCUM-2MD3 er en «datter» cellelinje av OCUM-2M [25], [34], OCUM-2MD3 celler har større potensial for spredning til bukhinnen i hårløse mus enn OCUM-2M celler [25], [34] . Kreftceller frie til å migrere inn i bukhulen blir utsatt for hypoksi på grunn av mangel på en proksimal matebeholder [41]. Ekspresjonsnivået av
TGFβ1
mRNA under hypoxi var signifikant høyere enn at under normoxia i alle tre cellelinjene. I motsetning til uttrykket nivået av
TGFβRI Hotell og
TGFβRII
mRNA ble betydelig økt med hypoksi i OCUM-2MD3 celler, men ikke i OCUM-2M celler. De ulike svarene av
TGFβR
uttrykk mellom normoxia og hypoksi kan være en av de viktigste årsakene til hypoksi-indusert EMT. Vi har tidligere rapportert at magekreftceller under hypoxi viste EMT og høye trekkende og invasive aktiviteter i forhold til kreftceller i normoxia [34]. Den oppregulering av EMT av hypoksiske kreftceller kan være en av årsakene til den høyere potensial for metastaser til peritoneum i OCUM-2MD3 celler i forhold til OCUM-2M celler.
hypoksisk tilstand betydelig økt uttrykk nivå av
Twist Hotell og
Zeb1
i OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler, men ikke som i OCUM-2M celler. Den hypoksi økende aktivitet av
Twist Hotell og
Zeb1
uttrykk ble redusert med TGFβR hemmere (Ki26894 og SB431542) i OCUM-12 celler. EMT i hypoksi kan bli delvis regulert av transkripsjonsfaktorer,
Twist Hotell og
Zeb1.
Selv HGF påvirket kreftcelle morfologi i OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler, hypoksi-indusert EMT ble ikke hemmet av anti-HGF nøytraliserende antistoff eller c-Met inhibitor i enten OCUM-2MD3 eller OCUM-12 celler. HGF produksjon ble ikke påvist i OCUM-2MD3 eller OCUM-12 celler under enten hypoksi og normoxia (data ikke vist). De fleste av HGF er avledet fra stromale celler i magekreft [42]. Mens HGF ikke kan spille en viktig rolle for hypoksi-indusert EMT, kan HGF stimulere EMT av kreftceller via kreft-stromal interaksjon.
hypoksi-indusert EMT av OCUM-2MD3 celler ble delvis hemmet av TGFβR hemmere , men forskjellige andre inhibitorer, deriblant c-Met-inhibitor, PDGF-inhibitoren, EGFR-inhibitor, og VEGFR-inhibitor, hadde ingen effekt på den hypoksi-indusert EMT i denne studien. Disse funnene tyder på at andre faktoren (e) kan være assosiert med hypoksi-indusert EMT i enkelte kreftceller. I fremtidige studier, vil det være nødvendig å undersøke andre nye faktorer som kan endre kreft morfologi.
I konklusjonen, autokrint TGFfi /TGFβR signaliserer etter hypoksi kan være en av faktorene knyttet til aggressiv fenotype av EMT i gastric carcinoma celler. TGFB /TGFβR signal hemmere synes å være terapeutisk lovende i magekreft.
Hjelpemiddel Informasjon
Figur S1.
morfologiske endringer av mage cellene under et hypoksisk tilstand. I MKN-7, MKN-45, MKN-74, og KATO-III, ble morfologiske endringene ikke finnes under hypoksi
doi:. 10,1371 /journal.pone.0062310.s001 plakater (TIF)
