Abstract
Mål
enkeltnukleotidpolymorfi (SNPs) i antatte mikroRNA bindingsseter (miRSNPs) modulere kreft mottakelighet via påvirker miRNA bindende. Her søkte vi å undersøke sammenhengen mellom miRSNPs og livmorhalskreftrisiko.
Metoder
Vi først genotypet 41 miRSNPs av 37 kreftrelaterte gener i 338 pasienter og 334 kontroller (Study 1), og kopiert de betydelige foreninger i 502 pasienter og 600 kontroller (Study 2). Vi testet effekten av miRSNPs på mikroRNA-mRNA samhandling ved luciferase reporter analysen.
Resultater
Fem SNPs vises bemerkelsesverdig samarbeid med livmorhalskreftrisiko i studie 1. Kun
IL-16
rs1131445 opprettholdt en signifikant sammenheng med livmorhalskreft (CT /CC vs TT, justert OR = 1,51,
P
= 0,001) i studie 2. Denne foreningen var mer tydelig i den kombinerte data fra to studier ( justert OR = 1,49,
P
= 0,00007). Vi fant også at Mir-135b ligner samhandlet med
IL-16
3′-UTR å redusere genekspresjon og at rs1131445 T til C substitusjon innenfor den antatte bindingssetet svekket samhandlingen mellom MIR-135b med
IL-16
3′-UTR. En ELISA indikerte at serum IL-16 av pasienter med livmorhalskreft ble forhøyet (vs kontroller,
P
= 0,001) og korrelert med rs1131445 genotype. Pasienter som bar rs1131445 C-allelet hadde høyere serum IL-16 enn ikke-bærere (
P
0,001).
Konklusjoner
Disse resultatene støtter vår hypotese om at miRSNPs utgjøre en mottakelighet faktor for livmorhalskreft. rs1131445 påvirker
IL-16
uttrykk ved å forstyrre den undertrykkende funksjon av miR135b og denne varianten er signifikant assosiert med livmorhalskreftrisiko
Citation. Mi Y, Wang L, Zong L, Pei M Lu Q, Huang P (2014) genetiske varianter i mikroRNA Target nettsteder av 37 utvalgte kreftrelatert Gener og risikoen for livmorhalskreft. PLoS ONE 9 (1): e86061. doi: 10,1371 /journal.pone.0086061
Redaktør: Qing-Yi Wei, Duke Cancer Institute, USA
mottatt: 02.11.2013; Godkjent: 09.12.2013; Publisert: 22 januar 2014
Copyright: © 2014 Mi et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av Xi’an Science and Technology Research Program (Grants XASTR1125), den Scientific Research Foundation for den returnerte Overseas Chinese Scholars (State Kunnskapsdepartementet) «. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser: Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
livmorhals~~POS=TRUNC kreft~~POS=HEADCOMP er den tredje vanligste kreftformen hos kvinner [1], er hovedsakelig forårsaket av humant papillomavirus (HPV) infeksjon [2]. Selv om HPV-infeksjoner er utbredt i seksuelt aktive kvinner, vedvarer bare et mindretall av infeksjoner og utvikle seg til livmorhals intraepitelial neoplasi grad 2/3 (CIN 2/3) eller til livmorhalskreft [3]. Flere kofaktorer påvirker overgangen fra første HPV-infeksjon til livmorhalskreft, inkludert livsstil, vertens immunrespons, og genetisk mottakelighet [4], [5]. De viktige roller genetiske faktorer i livmorhalskreft patogenesen blir bedt av funnene som livmorhalskreft utstillinger et betydelig familiær opphopning og de første gradsslektninger av pasienter har dobbelt risiko for å utvikle kreft [6]. Noen risikomodulerende varianter for livmorhalskreft har blitt identifisert av en kandidat genet forening studien. Genene som er forbundet med cervical cancer susceptibility er involvert i DNA-reparasjon, cellesyklus og apoptose, celleproliferasjon og differensiering, det humane leukocytt antigen-systemet og immunresponser [7], [8].
Nylige bevisende bevis indikerer at polymorfismer i mikroRNA (miRNA) bindingsseter kreftrelaterte gener er en viktig kilde som havner de utløsende genetiske varianter av kreft [9]. miRNA, ofte 19-25 nukleotid-lengde kodende RNA, binder seg innenfor det 3′-ikke-translaterte region (UTR) av transkripsjoner av målrettede gener for å hemme og til og med oppheve dens oversettelse til protein. Det er anslått at ca 30% av humane gener som reguleres av mirnas [10]. Gene deregulering er en av de viktigste mekanismene som cellene kan utvikle seg til kreft [11]. miRNA kan delta i kreftutvikling via post-transcriptional regulering av mange kreftrelaterte gener, inkludert onkogener og tumorsuppressorgener. Den avvikende ekspresjon av mirnas bidrar til etiologien av flere kreftformer, inkludert kreft i livmorhalsen [12]. miRNA profilanalyse av livmorhalskreft viste at Mirs-9, 21, 135b, 146a, blir 199A, 203 og 205 ofte overuttrykt i kreft vev eller cellelinjer [12]. Videre MIR-205 fungerer som et onkogen for å fremme celleproliferasjon og migrering av humane cervikale kreftceller [13]. I kontrast, MIR-214 direkte rettet mot GALNT7 genet for å undertrykke vekst og invasivitet av livmorhalskreftceller ved å fungere som en tumor suppressor en tumor suppressor [14]. Den basepar endring i miRNA-målregionen av kreft-relaterte gener som kan ødelegge eller skape et bindingssete eller endre bindingsaffinitet og post-transkripsjonen kontroll av mRNA ved miRNA og derfor kan påvirke transformasjonen fra normale celler til kreftceller [9].
Bioinformatikk analysen har identifisert mange SNPs som er plassert i de antatte miRNA bindingssteder kreft kandidat gener og som i vesentlig grad påvirker bindingsenergien av antatte miRNA :: mRNA tomannsboliger [15]. En liten fraksjon av dem er ytterligere vist seg å endre ekspresjonen av målgener ved luciferase reporter-analyse og viser en signifikant sammenheng med faren for kreft [16], [17]. Landi et al. vist ut 57 SNPs innen miRNA-bindingsseter fra 104 kandidatgener for tykktarmskreft, fant åtte SNPs av dem viser ulike Gibbs fri energi av binding mellom de to alleler av hvert SNP, og til slutt viste en SNP, rs17281995, innenfor miRNA-binding områder av CD86, som risikomodulerende variant for tykktarmskreft [16]. Ved hjelp av en lignende forskningsstrategi, SNPs innenfor miRNA bindingssteder av andre viktige kreft kandidatgener, som DNA-reparasjonsgener [17], inte gener [18] og caspase gener [19], har også blitt identifisert og videre vurdert som følsomhet varianter for blærekreft, brystkreft, tykktarmskreft, og hode- og halskreft risiko. Nylig, Shi et al. viste at rs11064 G-allelet innenfor
TNFAIP8
genet svekker bindingsaffiniteten av MIR-22 til TNFAIP8 3’UTR og er forbundet med en økt risiko for livmorhalskreft [20], noe som tyder på at miRNA- bindingssteder er også hot spots som havn livmorhalskreft mottakelighet varianter.
i denne studien har vi søkt å identifisere nye risiko varianter for livmorhalskreft blant miRNA-målse i kreftrelaterte gener. Ved gjennomgang av litteratur og bioinformatikk databaser, fant vi 37 kreftrelaterte gener med variasjoner i mulige 3′-UTR miRNA bindingssteder. Foreningen styrken av disse variantene med livmorhalskreft ble bestemt ved en to-trinns case-control studie. For den tilhørende variant, ble funksjonell innflytelse på miRNA-mediert uttrykk regulering av målgener undersøkt ved hjelp av luciferase reporter analysen.
Materialer og metoder
1 Study befolkningen
Vi rekrutterte 840 pasienter med livmorhalskreft fra pasienter som fikk døgnbehandling i tre sykehus mellom mai 2008 og april 2012. Blant dem, 338 emner fra Liaocheng Folkets sykehus (LCPH) ble brukt i første trinn studie (studie 1), som undersøkte alle av de valgte SNPs, og 502 fag fra The First Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University (TFAHXJTU) og Maternal and Child Health Hospital i Shaanxi-provinsen (MCHHSP) ble brukt i andre etappe studie (studie 2), som var å gjenskape bemerkelsesverdige funn (
P
0,05) fra Study 1. Alle pasientene ble diagnostisert ved histologisk henhold colposcope og /eller resected vev. Den kliniske stadium og histologisk type livmorhalskreft av pasientene ble samlet inn fra journaler og er vist i tabell 1. I alt 934 friske kontroller ble rekruttert fra de kvinnene som rutinemessig deltok fysisk eksamen i disse tre sykehus, 334 emner fra LCPH i Study 1 og 600 fag fra TFAHXJTU og MCHHSP i studie 2. Alle kontrollene hadde ingen historie med neoplastisk eller kreft-assosiert sykdom, og de hadde normal cervical cytologi i minst to påfølgende årlige undersøkelser. Alle fag var genetisk urelaterte, og deres alder, rase, røykestatus, sosioøkonomisk status, og sivilstand ble også undersøkt ved å lese medisinske poster eller ved intervjuer. Denne studien ble godkjent av medisinsk etikk komiteer LCPH, TFAHXJTU, og MCHHSP og alle deltakerne ga informert skriftlig samtykke.
2 Polymorphism utvalg og genotyping
Tidligere studier har systematisk skjermet de SNPs i miRNA bindingssteder av mange kreftrelaterte gener. Kort fortalt, de først vist kreftrelaterte gener ved database og litteratursøk, og da de identifiserte de antatte miRNA målwebområder i disse genene av spesialiserte algoritmer (som miRBase, Miranda, PicTar og TargetScan) og valgt SNPs som ligger på miRNA-bindende områder av dbSNP søk og BLAST, endelig identifisering av SNPs som alleler gjøre målsekvensen har betydelig forskjellsbindingsenergien til miRNA i en datamaskin prediktiv modell [16], [18]. Fordi mange kreftrelaterte gener er felles for flere kreftformer [21], valgte vi SNPs fra forrige litteratur som dekker emner om miRNA-bindingssetet /miRNA målwebområder, polymorfismer og kreft /svulst. Medline /PubMed-databasen ble søkt å finne litteratur som ble utgitt fra 2000 januar til 2013 januar. Vi til slutt valgte 41 SNPs i spådd miRNA-bindingssteder innen 37 kreftrelaterte gener med mindre allelfrekvensene større enn 0,1 i det kinesiske Han befolkningen (tabell 2). Genomisk DNA ble ekstrahert fra perifere blod leukocytter ved hjelp av blod-DNA Midi Kit (Omega Biotech, Norcross, USA), i henhold til produsentens protokoll. De valgte SNPs ble genotypet i pasienter og kontroller ved hjelp av MALDI-TOF innenfor MassARRAY system (Sequenom Inc., San Diego, CA, USA) [22].
3 HPV genotyping
Menneske HPV fra livmorhals skraping smøre og /eller resected vev ble genotypet ved hjelp av HPV GenoArray test kit (HybriBio Ltd, Guangdong, Kina). Først ble HPV DNA forsterket med L1 konsensus HPV primere MY09 /MY11 og HMB01. Deretter PCR-produktet behandlet gjennomstrømning hybridisering i form av en makromatrise-format med en nylonmembran hvorpå HPV genotype-spesifikke oligonukleotidprober ble immobilisert. Denne teknikken kan identifisere 21 HPV-genotyper, inkludert 5 lav-risikotyper (6, 11, 42, 43 og 44), 14 høyrisiko typer (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52 , 56, 58, 59, 66, og 68), og 2 middels risikotyper (CP8304 og 53).
4 Serum IL-16 nivåer
pasientenes og kontroller blod prøvene ble samlet mellom 8 og 10 er seraene ble sentrifugert ved 3000 rpm i 10 minutter og frosset ved -80 ° C. Serum IL-16-nivåer ble målt ved hjelp av kommersielt tilgjengelige enzym-bundet immunosorbent assay (ELISA) kits (PIERCE Endogen) i henhold til produsentens instruksjoner. Minimumsnivået for påvisning for IL-16 var 0,10 pg /ml. Ingen kryss-påvisning av andre cytokiner ble observert.
5 Cell kultur
Menneskelige livmorhalskreft cellelinjer, HeLa [23] og Siha [24], ble kjøpt fra Type Culture Collection på 10%, den intra-assay variasjonen var mindre. Chinese Academy of Sciences (Shanghai, Kina). Disse cellene ble dyrket i Dulbeccos modifiserte Eagle medium supplementert med 100 U /ml penicillin, 100 mg /ml streptomycin og 10% føtalt bovint serum og ble dyrket ved 37 ° C i en fuktet 5% karbondioksyd-inkubator.
6 Forbigående transfeksjoner og luciferase-analyser
3′-UTR av IL-6 mRNA, inklusive C-allele eller T allel av rs1131445, ble amplifisert ved å bruke primerne fra 5′-TGGCCTGGGCCTCCTCACAA-3 «(fremover) og 5’CTCCACCACCCTTCCCTA -3 «(bakover). De amplifiserte fragmentene ble deretter klonet inn i nedstrøms for ildflue luciferase-genet i den pGL3-basisvektor (Promega, Madison, USA). Disse rekombinasjon plasmider ble sekvensert for å bekrefte deres nøyaktighet. For de luciferase reporter analysene ble HeLa og Siha belagt i 24-brønners retter å være co-transfektert med 100 ng av pGL3-C eller pGL3-T konstruerer, 50 pmol /ul kjemisk syntetisert mirnas MIR-135b (GenePharma, Shanghai, Kina) eller negative kontroll miRNA hjelp Lipofectamine 2000 transfeksjon reagens (Invitrogen, Carlsbad, USA). I hver transfeksjon, ble 20 ng av PRL-TK plasmid (Promega, Madison, USA) som brukes til å korrigere for transfeksjonseffektivitet. Hver transfeksjon ble utført i tre eksemplarer. Celler ble samlet 48 timer etter transfeksjon, og luciferaseaktiviteten ble målt med en dual-luciferase reporter analysesystemet (Promega, Madison, USA) og normalisert mot aktiviteten av Renilla luciferasegenet.
7. Statistisk analyse
Vi beregnet statistisk styrke som tidligere beskrevet [25]. En χ
2 test ble utført for å foreta en sammenligning av de kategoriske variabler, inkludert genotypen frekvens og noen demografiske karakteristikker. Student t-test, Mann-Whitney U-test eller analyse av variansen ble utført for å sammenligne de kontinuerlige variabler, slik som alder, serum IL-16 nivå og reporter ekspresjonsnivået, når det passer. Assosiasjoner mellom
IL-16
varianter og livmorhalskreftrisiko ble estimert ved å beregne ORS og deres 95% CI’er fra multivariate logistiske regresjonsanalyser med en justering for alder, kroppsmasseindeks, røykestatus og familie historie av kreft. For å unngå en falsk krets forårsaket av flere tester, ble en falsk positiv rapport sannsynlighet (FPRP) beregnet i henhold til metoden beskrevet av Wacholder et al. [26]. Vi satt 0,2 som en FPRP terskel og tildelt en tidligere sannsynlighet på 0,01 for å påvise en OR på 1,50 (for de risiko effekter) eller 0,67 (for den beskyttende effekten) for en forening med SNPs eller klinisk-demografiske egenskaper. Hardy-Weinberg likevekt (HWE) av SNP blant kontrollene ble evaluert ved χ
2-test. Alle de statistiske analysene ble utført av SPSS (versjon 13.0, Chicago, IL, USA). En verdi på
P
. 0,05 ble ansett å være signifikant (tosidige)
Resultater
1 Befolknings egenskaper
Vi analyserte helt 840 pasienter med livmorhalskreft og 934 kontroller i studie 1 og 2. de demografiske og kliniske kjennetegn ved pasienter og kontroller er presentert i tabell 1. det var ingen signifikant forskjell i fordelingen av alder, rase, røykestatus, utdanningsnivå, og ekteskapelig status mellom kontrollene og tilfellene i studie 1, Study 2 og alle de fagene kombinert. Men sakene var mer sannsynlig å være yngre i alder ved første fødsel (
P
= 0,038) og med HPV-infeksjon (
P
0,001) enn kontrollene. HPV-infeksjon fortsatt forble signifikant assosiert med livmorhalskreft etter vurdering av FPRP som var mindre enn 0,2. Disse to variablene ble ytterligere justert for eventuelle rester confounding effekt i senere multivariate logistiske regresjonsanalyser.
2 Association of SNPs innen miRNA-bindende områder av kreftrelaterte gener med livmorhalskreftrisiko
Mer enn 99% av prøvene ble genotypet med hell for hver SNP, og den replikere eksperiment for de tilfeldig utvalgte 300 prøver ervervet fullstendig forenlig genotypen data med den opprinnelige analyse. Tabell 2 viser en liste over utvalgte SNPs innenfor miRNA-bindingsseter i 3′-UTR av 37 kreftrelaterte gener, bindingen miRNA at de potensielt påvirke, og deres genotypefrekvensene og foreninger med livmorhalskreft i studie 1. Alle de observerte genotypen fordelinger blant kontrollene av studie 1 var i tråd med HWE. Blant de 41 SNPs som var inkludert i studie 1, fem SNPs (rs465646 i
REV3L
genet, rs2239680 i
BIRC5
genet, rs1476215 i
FGF2
genet, rs3213180 i
E2F1
genet, rs1131445 i
IL-16
genet) viste en markert forskjellig genotype fordeling mellom tilfellene med livmorhalskreft og kontrollene (
P
= 0.003~0.030). For å avgjøre om sanne signifikant sammenheng eksisterte, eller om det var falske resultater, vi utførte en gjengivelse å analysere disse SNPs i en annen befolkning som bor i Shaan Xi provinsen i Nord-Kina. I studie 2, deres observerte genotypefrekvensene var også i overensstemmelse med HWE (tabell 3). Videre fant vi at bare
IL-16
rs1131445 fortsatte å vise en signifikant sammenheng med livmorhalskreft. Fagene med sin TC eller CC-allelet hadde en økt risiko for livmorhalskreft (justert OR = 1,51, 95% KI 1,18 til 1,93,
P
= 0,001) med en justering for alder, røykestatus, utdanningsnivå, alder primiparity, sivilstand, og HPV-infeksjon status. Sammenhengen mellom rs1131445 og livmorhalskreft var mer betydelig i data som kombinerte Studie 1 og 2 (justert OR = 1,49, 95% KI 1,22 til 1,81,
P
= 0,00007) med justering for de nevnte variablene. Vi deretter beregnet FPRP verdier for alle de observerte signifikant sammenheng. Når forutsetningen om før sannsynlighet var 0,01, foreningen med
IL-16
rs1131445 (TC /CC vs.TT) var fortsatt bemerkelsesverdig i begge Study 1 fag (FPRP = 0,171) og alle fag (FPRP = 0,011). Gitt en OR på 1,5 på en nominell
P
= 0,05 for genotypefrekvensene spenner 0,20 til 0,40, den statistiske styrken i vår studie for å påvise en sammenslutning av hver SNP med livmorhalskreft i studie 2 og kombinert Study 1og 2 ble anslått til 81,0 til 91,5% og 95,0 til 98,9%, respektivt. Lagdel Analysen viste ingen signifikant interaksjon av de demografiske og kliniske egenskaper og rs1131445 genotype på livmorhalskreft risiko (data ikke vist). I tillegg er det ikke var signifikante korrelasjoner mellom genotyper av rs1131445 og klinisk stadium og histologisk type livmorhalskreft (data ikke vist).
3 Serum IL-16 nivå og dens korrelasjon med
IL-16
rs1131445 genotype
Gitt den observerte bemerkelsesverdig sammenheng mellom rs1131445 og livmorhalskreftrisiko, vi videre undersøke serum IL-16 nivåer i kontroller og pasienter med livmorhalskreft samt potensialet regulatorisk virkningene av rs1131445 genotype på serum IL-16. Vi valgte 100 pasienter med livmorhalskreft og 80 kontroller fra fagene studie 2 og undersøkt deres serum IL-16 nivåer av ELISA. Serumet IL-16 av pasienter med livmorhalskreft betydelig økt sammenlignet med kontroller (
P
= 0,001, figur 1A). Videre, i pasienter med cervikal cancer, var det en markert korrelasjon mellom serum IL-16 og rs1131445 genotype (
P
= 0,001). De rs1131445 C-allel-bærende pasienter hadde en høyere serum-IL-16 enn de ikke-bærere (
P
0,05, figur 1B). Videre har vi ikke merke noen statistisk signifikant sammenheng av serum IL-16 med klinisk stadium og histologisk type livmorhalskreft (data ikke vist).
A. Serum IL-16 nivåer i kontroller og pasienter med livmorhalskreft, målt ved ELISA. B. Korrelasjoner av serum IL-16 nivåer med genotype i kontroller og pasienter. Data ble uttrykt som gjennomsnitt ± SEM. *
P
0,05 vs. kontroller gruppe. +
P
0,05 vs. pasienter med TT genotype
4 Virkningen av rs1131445 på samspillet mellom MIR-135b og
IL-16
3. «-UTR
En antatt bindingssetet i 3′-UTR av
IL-16
for MIR-135b har blitt identifisert ved hjelp miRBase, Miranda, og PicTar programvare. Det ble også spådd at substitusjon fra T til C-allelet i rs1131445 kunne redusere Gibbs bindende fri energi av miRNA-mRNA ved 3,93 kJ /mol [16], noe som tyder på at dette SNP kan påvirke
IL-16
genuttrykk ved å endre miRNA-mRNA bindende affinitet (figur 2A). For å teste denne hypotese, ble en luciferase-analyse utført i HeLa og Siha livmorhalskreft cellelinjer som er transfektert med det pGL3-C-allel eller pGL3-T-allel konstruksjonene fulgt av kjemisk syntetisert mirnas MIR-135b eller en negativ kontroll miRNA ( Figur 2A). For begge konstruksjoner, i nærvær av MIR-135b etterligner, ekspresjonen av luciferase ble signifikant redusert (figur 2B-C), noe som bekrefter den funksjonelle potensialet i miRNA-mRNA interaksjon. I motsetning til de negative kontroll miRNA uten forutsi bindingssetet i
IL-16
3′-UTR har ingen effekt på luciferaseekspresjon (figur 2B-C). Videre har vi funnet at C-allele resulterte i en beskjeden, men statistisk signifikant økning av luciferase-ekspresjon sammenlignet med T-allel (Figur 2B-C).
A. Skjema for
IL-16
3′-UTR huse en antatt MIR-135b bindingssetet, stilling rs1131445, og konstruere av pGL3-IL-16-3′-UTR-T /C. B og C. Relativ luciferase aktivitet i nærvær av MIR-135b eller den negative kontrollen miRNA er vist for
IL-16
3′-UTR med T-allel og C-allelet i HeLa (B) og Siha (C) kreftceller; data er vist som prosent i forhold til den luciferaseaktivitet i cellene transfektert med NC og T-allel; feil bar representerer s.e. fra tre uavhengige forsøk; *
P
0,05, **
P
0,05, ***
P
0,01. NC representerer den negative kontrollen.
Diskusjoner
I denne studien har vi vist ut en livmorhalskreft mottakelighet variant fra miRNA-bindingssetet SNPs innen 37 kreftrelaterte gener ved en to-trinns studien. Vi fant ut at SNP rs1131445 C-allelet i 3′-UTR av
IL-16
var forbundet med en økt risiko for livmorhalskreft. Ved hjelp av en luciferase assay, fant vi at miRNA-135b markert redusert luciferase uttrykk for pGL3-IL-16-3′-UTR konstruerer i Hela og Siha livmorhalskreftcellelinjer. Enda viktigere, ble disse hemmende virkninger av miRNA-135b svekket ved substitusjon fra T til C-allel i rs1131445. Disse resultatene støtter hypotesen om at variasjonene i de antatte miRNA målwebområder kunne utgjøre en mottakelighet faktor for livmorhalskreft.
IL-16 er syntetisert av ulike immun og parenkymceller, inkludert CD4 og CD8 T-celler, eosinofile, makrofag /dendrittiske celler, mastceller, bronkial epitel, og fibroblaster [27]. Proteinet direkte oversatt fra
IL-16 mRNA
er et forløpermolekyl og må spaltes i to fragmenter med caspase-3. Den spaltede bioaktive IL-16 blir frigjort etter stimulering av histamin eller serotonin og virker som en kjemoattraktant faktor for å regulere den inflammatoriske respons [27]. Nylig har IL-16 blitt anerkjent som en viktig fremmende faktor for svulster [28], [29], [30], [31]. Produksjonen av IL-16 korrelerer med utbruddet og progresjonen av forskjellige hematopoietiske kreftformer og faste cancere [28]. Den konstituerende IL-16 uttrykk har også blitt funnet å oppregulere i hjernesvulst [29] og prostata kreft [31]. I tillegg ble dets ekspresjon i prostata kreftvev korrelert til tumor aggressivitet og biokjemiske tilbakefall av sykdommen [31]. Serum IL-16 nivå høyde har blitt observert i flere krefttyper [32], [33]. Serum IL-16 er en prediktor for utvikling av fjernmetastaser av brystkreft [32]. Videre, i brystkreft, oppregulering av utskilt IL-16 forbedrer infiltrasjon av monocytter inn i svulstvev [30].
Rollene som IL-16 i livmorhalskreft patofysiologien fortsatt i stor grad uklart. Våre funn av serum IL-16 høyde følgende livmorhalskreftutvikling og den bemerkelsesverdige sammenslutning av
IL-16
med livmorhalskreft tyder på at IL-16 kan regulere livmorhalskreftutvikling. Denne hypotesen støttes av de kreftfremkallende effekten av vedvarende betennelse på livmorhalsen. Immuncelleinfiltrasjon i svulstene er en kritisk determinant for livmorhalskreftutvikling [30], [34]. Makrofag infiltrere i livmorhalsen øker lineært med cervical sykdomsprogresjon, fra normal cervix, lav grad til høy grad av plateepitel intraepitelial lesjoner, til invasiv kreft [35]. Tumorassosierte makrofager bidra til tumorprogresjon ved å utøve sine flere funksjoner i tumorcellevekst, tumorcelle-invasjon, og tumorangiogenese [36]. Dessmakrofager, CD4
+ regulatoriske T-celler kan bidra til kreftutvikling av begrense virkningen av T-celle-immunresponser mot kreft [37]. I cervical cancer, HPV-spesifikke CD4
+ T-celler undertrykker cytokin (IFN-γ, IL-2) produksjon for å interferere med anti-tumor immunrespons [38]. IL-16 kan uttrykkes ved epitel-celler under inflammatoriske betingelser [39] og tjener til å chemoattract monocyptes /makrofager og CD4
+ T-celler til infeksjonen området [40]. Dessuten stimulerer utsondret IL-16 monocyptes /makrofager for å produsere ulike pro-inflammatoriske cytokiner [41]. Derfor er det sannsynlig at oppregulering av IL-16 i HPV-indusert inflammasjon kan fremme carcinogenese av hyperfunksjon av makrofager, HPV-spesifikke CD4
+ T-celler, eller andre inflammatoriske celler.
Her vi gir det første bevis på at rs1131445 i MIR-135b bindingssete for
IL-16
3′-UTR, noe som kan påvirke IL-16 protein uttrykk ved å forstyrre miR135b undertrykkende funksjon, var signifikant assosiert med risiko av livmorhalskreft. En funksjonell analyse in vitro indikerte at transfeksjon av HeLa-celler og Siha bærer
IL-16
3′-UTR med MIR-135b ligne vesentlig reduserer ekspresjon av luciferase, noe som tyder på at IL-16 kan være målrettet av MIR-135b. Den rs1131445 T til C forandring hemmer interaksjon av MIR-135b med
IL-16
3′-UTR og oppregulerer dens uttrykk. I samsvar med dette spekulasjoner, in vivo-analyse viste at pasienter som bærer rs1131445 C-allelet hadde en høyere serum IL-16 enn ikke-bærere, noe som førte til en forhøyet serum IL-16 pasienter sammenlignet med friske kontroller. Den oppregulering av MIR-135b har blitt funnet i livmorhalskreft [42], som kan hemme ekspresjonen av
IL-16
ved å målrette sin 3′-UTR. Den rs1131445 C-allelet svekker bindingen av MIR-135b til målet og fører til høyere konstituerende uttrykk for
IL-16 Hotell og påfølgende utslipp til serum. Gitt den viktige regulerende rollen til IL-16 frigivelse av immunresponsen og den påfølgende nivå i den lokale inflammatoriske mikromiljøet, vil personer som bærer rs3134615 C-allelet kan forventes å ha forhøyet risiko for kreft i livmorhalsen. I konklusjonen, våre data antydet at rs1131445, som en funksjonell variant, kunne modulere den individuelle risikoen for livmorhalskreft trolig av dereguleringen etter transcriptional regulering av miRNA-135b på
IL-16
uttrykk. Selv om vår studie benyttet rime antall pasienter og kontroller og strenge statistiske metoder, kan vi ikke helt utelukke muligheten for at falske resultater fram våre case-control forening studiedesign skyldes tilfeldigheter eller befolkningen lagdeling. Derfor er videre stor skala replikering studie ved hjelp av ulike etniske populasjoner, eller familiebasert analyse, eller prospektiv kohort utforming som kreves for å produsere svært avgjørende resultater. Andre funksjonelle analyser er også nødvendig å avklare nøyaktig roller IL-16 i livmorhalskreft genesis og progresjon i fremtiden.
Takk
Vi setter stor pris på alle de pasienter og frivillige for å delta i denne studien.
