Abstract
Formål
caspase 8 (CASP8) spiller en avgjørende rolle i den apoptotiske sti og avvikende regulering av denne veien fører til mange sykdommer, inkludert kreft. Genetiske varianter rs3834129 (CTTACT /-) og rs3769821 (T /C) i promoter-regionen i
CASP8
genet ble dokumentert å være assosiert med flere solide kreft og non-Hodgkins lymfom (NHL), henholdsvis, til tross for av noen kontroverser. Vi forsøkte å skjelne potensielle forening av disse to variantene og rs113686495 (CTGTCATT /-)., Samt
CASP8
mRNA og protein uttrykk nivåer med kolorektal kreft (CRC) i Han-kinesere
Metoder
Vi genotypede
CASP8
genetiske varianter i 305 CRC pasienter og 342 friske personer fra Kunming, Southwest Kina. Expression nivåer av
CASP8
mRNA og protein ble kvantifisert i parvise kreft og paracancerous normalt vev ved hjelp av sanntids kvantitativ PCR og Western blot, henholdsvis. Vi sammenlignet frekvensen av alleler, genotyper og haplotyper mellom sakene og kontroller. Korrelasjon av
CASP8
mRNA og protein uttrykk nivåer i sammenkoblede kreft og paracancerous normalt vev fra pasienter med ulike genotyper og klinisk uttrykk ble også vurdert.
Resultater
Det var ingen sammenheng av
CASP8
genetiske varianter med CRC i vår case-control studie.
CASP8
gen mRNA uttrykk nivåer i kreft og paracancerous normalt vev var lik, og det var ingen signifikant forskjell mellom pasienter med ulike genotyper og kliniske egenskaper. Men vi fant ut at CASP8 proteinnivået var betydelig lavere i kreftvevet enn i sammenkoblede paracancerous normalt vev.
Konklusjoner
Våre resultater tyder på at de tre
CASP8
genetiske varianter kan ikke bli assosiert med CRC risiko i Han-kinesere fra sørvest Kina. Avvikende CASP8 protein uttrykk kan spille en rolle i patogenesen av CRC
Citation. Xiao M-S, Chang L, Li W-L: Du Y-S, Pan Y, Zhang D-F, et al. (2013) genetisk polymorfisme av
CASP8
Gene Arrangøren kan ikke bli assosiert med tykktarmskreft i Han-kinesere fra Southwest Kina. PLoS ONE 8 (7): e67577. doi: 10,1371 /journal.pone.0067577
Redaktør: Jirong Long, Vanderbilt University, USA
mottatt: 27 mars 2013; Godkjent: 20 mai 2013; Publisert: 02.07.2013
Copyright: © 2013 Xiao et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne studien ble støttet av den beste talentene Program i Yunnan-provinsen (2009CI119), National Natural Science Foundation of China (30925021) og Chinese Academy of Sciences. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
tykktarms~~POS=TRUNC kreft~~POS=HEADCOMP (CRC) er en av de mest utbredte kreftformer rundt om i verden, med en 5-års overlevelse på 30-65% [1]. Selv om de fleste CRC (nesten 80%) er sporadisk [2], [3], ca 35% av CRC pasienter kan tilskrives genetisk bakgrunn ifølge studien av eneggede tvillinger [3], noe som tyder på at både genetiske og miljømessige faktorer har sentrale roller i patogenesen av CRC. Mange mennesker ble utsatt for miljømessige risikofaktorer, som røyking [4], drikke [4], usunn diett og livsstil [5], [6], men bare noen av dem led av CRC, noe som tyder på at genetiske variasjoner delvis bestemme mottakelighet til CRC.
apoptose, også kalt programmert celledød, er involvert i å opprettholde homeostase vev, utvikling og eliminerer uønskede celler i flercellede organismer [7]. Dysfunksjon av denne prosess vil resultere i tumordannelse [8]. Apoptotisk celledød blir mediert av en serie med svært konserverte caspaser (cystein-avhengige aspartat-spesifikke proteaser), som kan deles inn i «initiator» caspaser og «effektor» caspaser [9]. Det er i hovedsak to apoptotiske baner i menneske:. Extrinsic eller reseptor-mediert sti og den iboende eller mitokondrie vei, både ansette caspases kaskade [10], [11], [12]
caspase 8, kodet av
CASP8
-genet (som befinner seg på kromosom 2q33-Q34 og har 14 eksoner), fungerer som en initiator caspase i den apoptotiske reaksjonsvei og en avgjørende defensiv barriere mot ondartet proliferasjon og tumorigenesis [7], [8] , [11], [13]. Den Indel polymorfisme, rs3834129 (CTTACT /- skrevet som 6 bp /del i teksten), i promoter-regionen i
CASP8
genet ble rapportert å være assosiert med mottakelighet for et bredt spekter av kreftformer inkludert CRC i kinesiske populasjoner [14]. Selv om denne varianten ble senere rapportert å være assosiert med risiko for kullarbeidere og blærekreft i kinesiske populasjoner [15], [16], den positive sammenhengen ble ikke kopiert i påfølgende storskala case-kontrollstudier i europeiske og amerikanske befolkninger [17 ], [18]. Genotyper TC og CC annen enkeltnukleotidpolymorfi (SNP), rs3769821 (T /C), som også ligger i promoter-regionen i
CASP8
genet, ble funnet å påvirke genetisk mottakelighet for non-Hodgkins lymfom (NHL) i en samlet analyse av tre populasjoner fra USA og Australia [19]. Men denne positive resultatet ble ikke bekreftet i vår siste genetisk analyse for Han-kinesere med NHL og luciferase assay [20].
For å avgjøre om rs3834129 og rs3769821 bidra til genetisk mottakelighet for CRC i Han-kinesere fra sørvest Kina, vi genotypet disse to varianter, sammen med rs113686495 (CTGTCATT /- skrevet som 8 bp /del i den følgende tekst, som ligger ved 50 bp nedstrøms for rs3769821). Vi målbart mRNA uttrykk nivået av
CASP8
genet i både kreft og paracancerous normalt vev av CRC pasienter med ulike genotyper for å identifisere potensielle effekten av ulike alleler på genuttrykk. I tillegg har vi sammenlignet mRNA nivåer i CRC pasienter med ulike kliniske kjennetegn. Den CASP8 proteinnivå ble målt i sammenkoblede kreft og paracancerous normalt vev fra totalt 39 pasienter, for å sammenligne med mønsteret av mRNA uttrykk. Våre resultater viste at
CASP8
genetiske varianter og mRNA uttrykk nivå var usannsynlig å bli assosiert med CRC i Han-kinesere. Men vi fant at kreftvevet hadde et betydelig lavere nivå av CASP8 protein enn paracancerous normalt vev, noe som tyder på at potensialet post-transcriptional regulering av dette genet spiller en aktiv rolle i utviklingen av CRC.
Materialer og metoder
Etikk erklæringen
Denne studien ble godkjent av Institutional Review board av Kunming Institute of Zoology. Skriftlig informert samtykke i samsvar med prinsippene i Helsinkideklarasjonen ble innhentet fra hver deltaker før studien.
Studiepopulasjon og vevsprøver
Kreft vev ble samlet inn fra 305 Han-kinesere med CRC. Disse pasientene ble operert ved First Affiliated Hospital of Kunming Medical University fra 2010 til 2011. Alle pasientene ble histopathogically bekreftet å være CRC og fikk ingen medisinsk behandling (med unntak av 12 pasienter) før operasjonen for å fjerne svulsten. Stadium av kreft ble klassifisert i henhold til syvende utgaven av AJCC Cancer Staging Handbook [21]. Blodprøver ble erholdt fra 342 friske individer (inkludert 133 rapportert i vårt tidligere studium [20]). Demografisk informasjon og histopatologiske kjennetegn ved CRC pasienter og friske kontroller ble vist i tabell 1. Vi har også samlet paracancerous normalt vev for noen pasienter; dette normalt vev ble plassert i en region fem centimeter unna formen grensen av kreftvev, og patologisk undersøkelse av dette vevet viste ingen tegn til ondartede celler.
genotyping arrangøren genetiske varianter av CASP8 Gene
Genomisk DNA ble ekstrahert fra cancervev av CRC-pasienter og blodprøver av friske kontroller ved anvendelse av standard fenol /kloroform fremgangsmåten. Vi fulgte den samme tilnærmingen og tilstanden beskrevet i vår forrige undersøkelse for å genotype de tre genetiske varianter i
CASP8
promoter region [20]. I korte trekk, var 6 bp /del og 8 bp /del polymorfismer ble bestemt ved polymerase kjedereaksjon (PCR) og polyakrylamid gelelektroforese (PAGE). SNP rs3769821 ble genotypet ved PCR-RFLP-analyse.
Kvantitativ RT-PCR for CASP8 mRNA uttrykk
Total RNA ble isolert fra sammenkoblede kreft og paracancerous normalt vev av 99 CRC pasienter som ikke fikk strålebehandling og /eller cellegiftbehandling før operasjonen ved hjelp TRIZOL (Invitrogen, Carlsbad, California) i henhold til produsentens instruksjoner. Ett mikrogram av total RNA ble benyttet for å syntetisere enkelt-kjede cDNA ved å bruke en oligo (dT) 18-mer som primer og MMLV revers transkriptase (Promega, Madison, WI) i et sluttreaksjonsvolum på 25 ul. Primere CASP8-F (5′-GCAGAGGGAACCTGGTACAT-3 «) og CASP8-R (5′-TCATCCTTGTTGCTTACTTCATAG-3») ble brukt til å detektere
CASP8
mRNA transkripsjoner A (GenBank tiltredelse antall NM_001228.4), B (NM_033355.3), C (NM_033356.3), F (NM_001080124.1) og G (NM_001080125.1). Real-time PCR ble utført på IQ2 Real-Time PCR system (Bio-Rad, Hercules, CA) med SYBR
Premiks Ex Taq
II (tli RNaseH Plus, Takara, Otsu, Shiga) og følgende forsterkning betingelse: en innledende denaturering ved 94 ° C i 3 minutter, etterfulgt av 35 sykluser ved 94 ° C i 15 s, 50 ° C i 15 s, og 72 ° C i 20 s, og en endelig forlengelse syklus ved 72 ° C i 5 min.
GAPDH plakater (glyseraldehyd 3-fosfat dehydrogenase) genet ble forsterket for normalisering. Vi brukte primerparet 5’CAACTACATGGTTTACATGTTC -3 «/5′-GCCAGTGGACTCCACGAC-3» og samme termiske Syklusparametrene (bortsett fra en endring av glødetemperatur til 55 ° C) som den til
CASP8
gen til forsterke
GAPDH
genet. Hver prøve ble utført i to duplikater.
Western blot-analyse for CASP8 Protein
Vevene ble vasket med kald ACK-buffer for å fjerne røde blodlegemer og ble most i lyseringsbuffer forsynes med protease inhibitorer ved å bruke pelleten Knall (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Proteinkonsentrasjoner ble bestemt ved BCA-analyse i henhold til produsentens instruksjoner (Beyotime, Haimen, Jiangsu) med bovin serum albumin som standard. Tjuefem mikrogram av totalt protein ble separert på 15% SDS-PAGE og overført til en PVDF-membran (Roche diagnose, Indianapolis, IN). Etter blokkering med 5% fettfri melk i 2 timer ved romtemperatur, ble membran blottet med mus anti-kaspase-8 antistoff (1:4000, Cell Signaling Technology, Danvers, MA) ved 4 ° C over natten. Membranen ble vasket med TBST tre ganger i 10 minutter hver, fulgt av inkubering med geite-anti-mus IgG sekundært antistoff (1:10000, KPL, Gaithersburg, MD) i 1 time ved romtemperatur. Membranen ble vasket med TBST som beskrevet ovenfor, og utviklet ved bruk av Immobilon vestlige Chemiluminescent HRP-substrat (Millipore, Billerica, Massachusetts). Den β-aktin ble kvantifisert i hver prøve følgende samme prosedyre ved hjelp av mus anti-β-actin antistoff (1:100000, Zhongshan Goden Bridge Bioteknologi Co, Ltd, Beijing) for normalisering. Tettheten av hvert protein Bandet ble beregnet ved hjelp av Image J programvare (NIH, Bethesda, MD).
Statistical Analysis
Statistisk analyse ble utført ved hjelp av R-programmet (versjon 2.11.1, Wien , Østerrike) og en
P
verdi mindre enn 0,05 ble ansett som statistisk signifikant. Strøm beregninger ble utført ved hjelp av Quanto programvare [22]. Avvik fra Hardy-Weinberg likevekt (HWE) ble vurdert for hver variant ved hjelp av
χ
2-test (df = 1). Allelfrekvenser av de tre variantene mellom saker og kontroller ble også sammenlignet ved å bruke
χ
2-test. Den parvise D «verdi over varianter rs3834129, rs3769821 og rs113686495 i saker og kontroller ble bestemt ved Haploview v4.2 [23]. Haplotyper og deres frekvenser ble estimert basert på Bayesiansk metoden ved å bruke Phase 2.1 [24]. Ubetinget logistisk regresjonsanalyse ble benyttet til å beregne odds ratio (OR) og 95% konfidensintervall (KI), for å anslå potensialet sammenslutning av ulike genotyper av rs3834129, rs3769821, og rs113686495 med CRC. Genotypene 6 bp /6 bp av rs3834129, TT av rs3769821, og del /del av rs113686495 og hoved haplotype ble brukt som referanse justert for alder (≤50 og 50 år) og kjønn. Sammenkoblet
t
-test ble benyttet for å bestemme forskjellen på
CASP8
genuttrykk nivåer mellom to grupper. ANOVA ble brukt til å sammenligne gjennomsnittsnivået til
CASP8
genuttrykk blant grupper flere enn to.
Resultater
Mangel på foreningen mellom tre genetiske varianter av CASP8 arrangøren og CRC
Vår utvalgsstørrelse (305 pasienter versus 342 kontroller) under matchet case-control design med en log-additiv arv modus hadde tilstrekkelig statistisk styrke for foreningen studien. Blant de tre varianter er analysert i kontrollpopulasjon, minor allel frekvens (MAF) varierte fra 21,1% til 26,7%. Vurderer MAF av 0,211, statistisk styrke til å påvise en odds ratio (OR) verdi på 1,5 for risiko allel var ventet å være 85%, mens kraften for MAF av 0,267 var ventet å være 90%.
allelfrekvenser av rs3834129, rs3769821, og rs113686495 av
CASP8
genet promoter i saken og kontrollgruppene ble oppført i tabell 2. Genotype distribusjon av alle disse variantene ble ikke fravikes HWE. Ingen statistisk signifikant forskjell ble observert mellom sakene og kontroller for hvert allel av rs3834129, rs3769821, og rs113686495. Legg merke til at det var noen små forskjeller mellom de allelfrekvenser av rs3834129 i våre prøver og CRC prøver fra Sun et al. [14] (tabell 2), noe som kan gjenspeile regional forskjell. Det var ingen sammenheng av visse genotype av de tre variantene med CRC (tabell 3).
Siden varianter rs3769821 og rs113686495 var i sterk koblingsulikevekt i begge case og kontroll populasjoner (figur 1) , utledes vi haplotyper basert på varianter rs3834129 og rs3769821 bare og vurdert potensialet sammenheng mellom haplotype og CRC risiko. Tilsvarende observerte vi ingen sammenheng med haplotype med CRC (tabell 4). Til sammen våre resultater antydet at genetiske varianter i
CASP8
genet promoter-regionen ikke egnet til å gi stor risiko for CRC i Han-kinesere fra sørvest Kina.
Tallene innenfor rutene som vises for D «og r
2 score (x100) for parvise koblingsulikevekt (LD) med en rød til hvit gradient reflekterer høyere til lavere LD score.
CASP8 mRNA uttrykk nivåer i CRC Vev og de tilsvarende normale vev er likhet
for å undersøke om
CASP8
uttrykk nivåer variere mellom pasienter og innen matchet normal og tumorprøver og deretter å ta opp om det er noen sammenheng med genotype analyserte vi
CASP8
mRNA uttrykk nivå i sammenkoblede kreft og paracancerous normalt vev fra 99 pasienter som ikke fikk behandling før operasjonen. I likhet med genotyping resultat, var det ingen statistisk signifikant forskjell i
CASP8
mRNA nivå i enten kreft eller paracancerous normalt vev hos pasienter med ulike genotyper (figur 2). Merk at mRNA uttrykk i vev med genotyper del /del av rs3834129, CC av rs3769821, og 8 bp /8 bp av rs113686495 viste en relativt lavere verdi enn for de andre genotyper (figur 2), og dette kan tilskrives mindre antall av pasienter med disse genotyper hvis ikke ble forårsaket av cis-regulering siden disse SNPs er i promoter-regionen i
CASP8
genet.
Blant 99 ubehandlede pasienter målt til
CASP8
mRNA uttrykk, en pasient ikke klarte å bli genotypet og ble ekskludert.
for å oppdage potensielle effekten av
CASP8
genet på patogenesen og kliniske kjennetegn ved CRC, sammenlignet vi
CASP8
mRNA uttrykk nivåer i kreft vev og paracancerous normalt vev hos alle pasienter, men observerte ingen signifikant forskjell (
P
= 0,102; figur 3a). Tilsvarende
CASP8
mRNA-ekspresjon i cancervev fra pasienter med forskjellige kliniske karakteristika viste ingen signifikant forskjell (figurene 3b, c, d, e, f). Kreft og paracancerous normalt vev fra pasienter på ulike stadier av kreftutvikling og progresjon hadde et tilsvarende nivå av
CASP8
mRNA uttrykk (figur 4), selv om kreft vev fra pasienter ved T4 scenen hadde en marginalt signifikant høyere mRNA uttrykk enn sammenkoblede paracancerous normalt vev (
P
= 0,045; figur 4c). Angivelig,
CASP8
gen mRNA uttrykk nivå ble ikke tett forbundet med CRC i våre pasienter.
TNM staging ble klassifisert i henhold til den syvende utgaven av AJCC Cancer Staging Handbook [21], og plassering og differensiering av cancerøse vev ble bestemt ved kirurgisk og histopatologiske undersøkelser, hhv. Det var ingen signifikant forskjell på
CASP8
mRNA uttrykk i kreft og paracancerous normalt vev fra alle 99 pasienter (a).
CASP8
mRNA-ekspresjon i cancervev fra pasienter med forskjellige kliniske karakteristika viste ingen signifikant forskjell (b-f). A-kolon, T-colon, D-tykktarm og endetarm stå for stigende tykktarm, tverrgående kolon, synkende tykktarm og endetarm, henholdsvis.
TNM staging ble klassifisert i henhold til den syvende utgaven av AJCC Cancer Staging Handbook [21].
CASP8 Protein nivå ble betydelig redusert i cancervev Sammenligning med tilkoblede Paracancerous normalt vev
Mange gener ble regulert via en post-transcriptional mekanisme, f.eks oppregulering av placental vekstfaktor av vaskulær endotelial vekstfaktor i endotelceller [25]. For å undersøke om
CASP8
genet har en rolle i CRC utvikling gjennom en post-transcriptional regulering, valgte vi sammen kreft og paracancerous normalt vev fra 39 pasienter med forskjellig
CASP8
promoter genotyper, mRNA uttrykk og kvantifisert protein uttrykk nivå (tabell S1). Vi observerte en betydelig lavere nivå av CASP8 protein i kreftvevet enn paracancerous vev (
P
= 0,005), selv om
CASP8
mRNA nivåer i disse prøvene var lik (
P
= 0,464, figur 5).
genotype og klinisk informasjon for disse pasientene ble oppført i tabell S1.
Diskusjoner
caspase 8 (
CASP8
) er en velkjent procurer døds signal i apoptotiske sti som var involvert i døds reseptor stimulering, permeabilisation av den ytre mitokondriemembranen og frigjøring av pro-apoptotiske proteiner i cytosol fra mitokondrier [26]. Det fungerer som en viktig defensiv barriere mot ondartet spredning og tumorigenesis [7], [10], [27]. Tidligere studier har presentert motstridende resultater når det gjelder potensielle rolle genetiske varianter i
CASP8
genet promoter-regionen i tumorigenesis [14], [15], [16], [17], [18], [20] , [28], [29], [30]. I en pioner studie, genetisk variant (rs3834129) i
CASP8
promoter regionen ble forbundet med et bredt spekter av solide kreftformer, inkludert lungekreft, spiserørs, mage, tykktarms, cervical og brystkreft i kinesiske populasjoner ved å påvirke sP1 Transkripsjonsfaktor faktor~~POS=HEADCOMP bindingssete og
CASP8
genuttrykk [14]. Denne første funnet ble bekreftet i senere case-control assosiasjonsstudier i uavhengige kinesiske prøver med blærekreft [16] og kullarbeider pneumoconiosis [15]. Men flere andre rapporter ikke klarte å gjenskape sammenhengen mellom dette 6 bp /del polymorfisme og flere kreftformer i ulike populasjoner [18], [30], [31], [32]. Disse inkonsistente resultatene kan forklares med ulike genetiske bakgrunn av befolkningen i ulike studier [33], som hyppigheten av 6-bp del allel var signifikant forskjellig mellom asiatiske og kaukasiske populasjoner (22,4% vs 49,1%) [32], [34 ]. I en fersk undersøkelse, Lan og kollegaer [19] gitt bevis for at en annen SNP rs3769821 i
CASP8
promoter-regionen var signifikant assosiert med genetisk risiko for NHL. Men vi klarte å gjenskape dette resultatet i Han-kinesere med NHL og cellulær luciferase assay viste ingen forskjell på promotorområdet som inneholder forskjellige alleler [20]. Hittil om
CASP8
genuttrykk kan påvirke patogenesen av CRC er fortsatt kontroversiell [35], [36], [37]. Det er en nødvendighet for å reappraise den potensielle effekten av promoter varianter og uttrykk for
CASP8
genet på CRC.
I denne studien, ved å analysere CRC pasienter fra Kunming, Yunnan-provinsen, vi skal svare på om
CASP8
genet var aktivt involvert i utviklingen av CRC. Vi først screenet tre genetiske varianter i
CASP8
genet promoter-regionen, der to har blitt rapportert å være assosiert med solide tumorer (rs3834129 [14]) og NHL (rs3769821 [19]). Vi deretter kvantifisert
CASP8
mRNA nivå i sammenkoblede kreft og paracancerous normalt vev til videre skjelne potensiell sammenheng mellom
CASP8
genotyper og mRNA uttrykk. Vi fant ingen sammenheng av
CASP8
arrangøren varianter med CRC i saken og kontrollprøver (tabell 2 og 3). Videre fant vi ikke noen statistisk signifikant forskjell på
CASP8
mRNA nivå hos pasienter med ulike genotyper (figur 2). Disse negative resultater var i samsvar med vår forrige luciferase assay [20], hvor vi observerte ingen forskjell for vektorer med ulike alleler i
CASP8
promoter.
Tilgjengelige kliniske data for pasienter tilbød oss en mulighet til å vurdere sammenhengen mellom
CASP8
genekspresjon og utvikling av CRC. Ved å gruppere pasienter i henhold tumor stadium, metastase, og differensiering status, fant vi ingen signifikant forskjell i
CASP8
mRNA uttrykk nivåer mellom kreft og paracancerous normalt vev og mellom pasienter med ulike kliniske funksjoner (figur 3 og 4), noe som tyder på at
CASP8
mRNA uttrykk ikke kan spille en avgjørende rolle i CRC. I likhet med våre funn, Pan et al. [36] også avdekket noen vesentlig forskjell på
CASP8
mRNA nivåer i normal slimhinne, polypper, og CRC. Imidlertid, i motsetning til to tidligere rapporterte studier at
CASP8
ekspresjon ble oppregulert i løpet av kolorektal kreft [35], [37], vi viste at CASP8 proteinnivå i cancervev var signifikant lavere enn for paret paracancerous normale vev (figur 5). Den usammenhengende mønster av
CASP8
mRNA og protein uttrykk nivåer i denne studien antydet at en post-transcriptional regulering, slik som overdreven ubiquitin av CASP8 protein i tumorvevet og /eller miRNA regulering, kan spille en avgjørende rolle i utvikling av CRC. Ytterligere karakterisering bør utføres i fremtiden for å stivne dette spekulasjoner.
Vår studie hadde flere begrensninger. Først utvalgsstørrelsen (305 tilfeller og 342 kontroller) for foreningen analyse var relativt liten og bare tre varianter i promotorområdet av
CASP8
genet ble genotypet, som kanskje ikke har nok strøm til å oppdage virkningene forutsatt at en forholdsvis lav odds-ratio. Videre studier med større antall prøver og flere genetiske varianter vil være avgjørende for å bekrefte vår konklusjon. For det andre, vi bare analysert
CASP8
mRNA og protein uttrykk i en undergruppe av CRC pasienter. Som nevnt ovenfor, observerte vi en redusert uttrykk innenfor visse genotyper (figur 2). Flere pasienter skal analyseres for å definitivt utelukke potensiell skjevhet forårsaket av et lite antall pasienter i disse gruppene. Tredje, vi gjorde ikke plukke opp alle
CASP8
transkripsjoner /forløpere i denne studien. Vår måling for
CASP8
mRNA transkripsjoner A, B, C, G og G i en analyse kan ikke skille mellom hvilken transkripsjon spiller en viktig rolle i vevet av interesse. Til slutt gjorde vi ikke skjermen mutasjon i kodingen regionen i
CASP8
genet. Det er fortsatt ukjent om spesifikke CASP8 mutant vil påvirke CRC utvikling. Kim og medarbeidere [38] rapporterte at nærværet av mutasjoner i
CASP8
genet kodende region kan føre til feilfunksjoner av apoptotiske reaksjonsvei, som til slutt kan bidra til utvikling av CRC.
Samlet vi spekulert i at
CASP8
gen kan igang CRC utvikling og progresjon, eventuelt via regulering av protein-nivå og /eller kodende region funksjonell mutasjon (er), i stedet for mRNA-ekspresjon.
Konklusjoner
Vi fant at genetiske varianter rs3834129, rs3769821 og rs113686495 i
CASP8
promoter-regionen var ikke forbundet med genetisk mottakelighet for CRC i Han-kinesere fra Southwest China. Ytterligere analyser av
CASP8
genuttrykk i kreft og paracancerous vev viste ingen korrelasjon på mRNA uttrykk nivå med forskjellige genotyper og fremdriften av CRC. Men vi fant ut at CASP8 protein var betydelig lavere i kreftvevet enn i sammenkoblede paracancerous normalt vev, om enn begge prøvene hadde omtrent samme nivå av mRNA uttrykk. Disse resultatene antydet at avvikende uttrykk og /eller feil på CASP8 protein vil spille en aktiv rolle i CRC utvikling og progresjon. Uavhengig befolkning med større utvalg og funksjonelle analyser er nødvendig for å ytterligere bekrefte våre funn.
Hjelpemiddel Informasjon
Tabell S1.
Genotype og patologisk informasjon for 39 pasienter som ble analysert for CASP8 protein uttrykk
doi:. 10,1371 /journal.pone.0067577.s001 plakater (DOC)
Takk
Vi takker pasienter for å donere vev. Vi takker også de to anonyme referees for deres konstruktive kommentarer.
