Abstract
GADD45A (
vekst arrest og DNA-skader 45 A) er den første stress- induserbar genet identifisert til å være et mål av
p53
. Imidlertid har ingen studier hittil vurdert varianter av
GADD45
genet og deres potensial forhold til tumor mottakelighet. Vi undersøkte sammenhengen av
GADD45A plakater (1506T C) polymorfisme med eggstokkreft utvikling i 258 eggstokkreft pasienter og 332 alderstilpassede friske kvinner som kontroller ved hjelp av sekvensanalyse. Vi fant en statistisk signifikant forskjell i
GADD45A plakater (1506T C) genotype fordelinger mellom case og kontrollgrupper (TT vs. TC vs CC, P = 0,0021) og fant at variant 1506T C var signifikant assosiert med økt risiko for eggstokkreft (P 0,001, OR = 1,71, 95% CI [01.28 til 02.29]). Vi har observert en statistisk signifikant effekt mellom tumorhistologi (P = 0,032) og CA125 status (P = 0,021). Bæring av C-allelet (TC + CC) var forbundet med en økt risiko for positive CA125 (OR = 3,20, 95% CI [1,15 til 8,71). Bæring av T-allelet (TT + TC) viste en signifikant sammenheng med både høyere
GADD45A
mRNA uttrykk og lengre eggstokkreft RFS (tilbakefall overlevelse) og OS (total overlevelse). Vi er den første gruppen til å demonstrere at
GADD45A plakater (1506T C) polymorfisme er assosiert med eggstokkreft mottakelighet og prognose. Disse dataene tyder på at
GADD45A plakater (1506T C) er en ny svulst mottakelighet genet og kan være et nyttig molekylær markør for å vurdere eggstokkreft risiko og for å forutsi eggstokkreft pasient prognose
Citation:. yuan C, Liu X, Liu X, Yang N, Liu Z, Yan S, et al. (2015)
GADD45A plakater (1506T C) Polymorfisme er assosiert med eggstokkreft Følsomhet og prognose. PLoS ONE 10 (9): e0138692. doi: 10,1371 /journal.pone.0138692
Redaktør: Da-Tian Bau, Kina Medical University, TAIWAN
mottatt: 12 januar 2015; Godkjent: 02.09.2015; Publisert: 30.09.2015
Copyright: © 2015 Yuan et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er innenfor papir
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av National High Technology Research and Development Program ( «863» Program) Kina (2014AA020605, 2012AA02A507), National Natural Science Foundation of China (81272857), Kina Postdoktor Science Foundation (2014M551918), Science and Technology Development Project i Shandong-provinsen (2014GSF118071, 2013GNC11306, 2013GSF12202), Foundation Natural Science i Shandong-provinsen (ZR2014JL019) og Foundation of Shandong Public Health Department (2014WS0123). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
introduksjon til
Eggstokkreft er den dødeligste kreft i kvinnelige reproduktive system, med over 21 980 nye tilfeller og over 14 270 dødsfall i USA i 2014 [1]. I likhet med andre kreftformer, forekommer eggstokkreft som et resultat av interaksjoner mellom miljøet og genetiske faktorer
En opphopning av genetiske varianter i mange gener kan være involvert i prosessen med eggstokkreft karsinogenese [2].; for eksempel
BRCA1
,
BRCA2
,
RAD51C
,
RAD51D
,
MLH1
,
MSH2
RB1
,
CASP8
,
LIN28B
,
SMAD6
,
ERCC4 Hotell og PRG har vært innblandet i denne prosessen [3 -12]. Nylig har genome-wide assosiasjonsstudier (GWAS) funnet flere felles resistens alleler i fire loci med sterke assosiasjoner [13-15]. Braem et al. anmeldt 147 kandidat gener og tre GWAS publisert fra 1990 til oktober 2010, herunder ca 1100 genetiske varianter i mer enn 200 kandidat gener og 20 intergeniske regioner [8]. Men bare noen få genetiske varianter utstilt sterke bevis for en sammenheng med eggstokkreft, og identifisering av gener assosiert med en predisposisjon for eggstokkreft krever videre undersøkelser [8].
Veksten arrest og DNA-skader 45 (
GADD45
) familie består av tre medlemmer,
GADD45A
, –
B
, og-
G
. Den menneskelige
GADD45A
genet er lokalisert på kromosom 1 (1p31.2-31.1), inneholder 4 eksoner og introner 3, koder for et 165 aminosyre surt protein (18,4 kDa), og er sterkt konservert i alle arter [ ,,,0],16]. Som en bekreftet mål av p53 [17, 18],
GADD45A
kan reguleres av både p53-avhengig (ioniserende stråling) og p53-uavhengige (ikke-ioniserende stråling) trasé [19] og spiller viktige roller i G2 /M sjekkpunkt og i genomet stabilitet [18]. Flere transkripsjonsfaktorer, som for eksempel
BRCA1
,
WT1
,
Oct-en
,
NF-YA
,
ATF4
,
AP-1
,
c-myc
,
ZBRK1
, og
juni D
kan regulere
GADD45A
uttrykk ved å binde til intronic eller promoter-regionen på transkripsjonsnivået [16, 18, 20, 21].
Tidligere studier har vist at nedregulering av
GADD45A Hotell og
GADD45G
gjør svulst celler å unnslippe programmert celledød i flere tumortyper [22].
GADD45
uttrykk er ofte redusert i ikke-småcellet lungekreft [23], leverkreft [22], og glioblastom [24]. Den nedregulering av
GADD45
uttrykk overfører dårlig svulst prognose og er korrelert med differensiering status. Unormal metylering av
GADD45A
genet promoter-regionen har blitt funnet i flere brystkreftcellelinjer og brystkreftprøver, men ikke i lymfeknuter eller normal melkekjertelepitelet [25].
GADD45A
overekspresjon er forbundet med en gunstig prognose, noe som tyder på at den unormale metylering av
GADD45
kan bidra til risikoen for brystkreft [25]. Imidlertid har ingen
GADD45A
polymorfisme forbundet med svulst mottakelighet er rapportert. En variant
GADD45A plakater (1506T C) ligger på intronic regioner ble funnet i vår studie. Dermed hypotese vi at denne varianten kan forstyrre transkripsjonsfaktor bindingsseter, og dermed endre
GADD45A
uttrykk og påvirker tumor genesis. Derfor undersøkte vi
GADD45A plakater (1506T C). Polymorfisme,
GADD45A
uttrykk, og eggstokkreft risiko og prognose
Materialer og Metoder
pasienter og Prøver
Denne studien inkluderte 258 pasienter diagnostisert med kreft i eggstokkene (gjennomsnittsalder på 52,1 ± 13,9 år, fra 21 til 81 år) i Qilu Hospital (Shandong) mellom september 2008 og september 2012. klinisk egenskaper, herunder alder ved diagnose, differensieringsgrad: Figo stadium, histologisk typen, lymfeknutemetastase, CA125 status, og tumorstørrelsen ble oppnådd fra pasientens journal. I tillegg 332 alderstilpassede friske kvinner (gjennomsnittsalder på 50,2 ± 13,4 år, fra 21 til 82 år) ble rekruttert som kontroller fra blant pasienter som gjennomgår en fysisk eksamen i våre sykehus. Vi beregnet på
GADD45A
genotype med hensyn til tilbakefall overlevelse (RFS) og total overlevelse (OS) i 151 eggstokkene pasienter basert på vår evne til å ta kontakt med pasientene.
De fleste av fagene var av Han-kinesere bakgrunn og bodde i Shandong-provinsen i Kina. Alle deltakerne gitt skriftlig informert samtykke til å delta i denne studien. Etisk komité Shandong University godkjent denne forskningen (IRB Nummer: Kyll-2013-019). Alle deltakere (pasienter og kontroller) donert 2 ml perifert blod, som ble lagret ved -80 ° C i vårt laboratorium.
DNA ble ekstrahert ved anvendelse av en TIANamp Genomisk DNA Kit (Tiangen, Beijing, Kina) ifølge produsentens protokoll. DNA-konsentrasjon og renhet ble målt ved anvendelse av et ultrafiolett spektrofotometer (GE Healthcare, USA). DNA-prøvene ble rutinemessig lagret ved -80 ° C
Genotyping Analyse av GADD45A (1506T C).
Genotyping av
GADD45A plakater (1506T C) polymorfisme var utføres ved hjelp av PCR og sekvensering. Sekvensen av
GADD45A
genet ble hentet fra NCBI (Gene ID: 1647, GenBank sekvens, AY135686.1, GI: 22122007). -Primere ble utformet ved hjelp av Primer Premier 5 i henhold til sekvensen av
GADD45A
som følger: forover primer 5′-AGTTTGCACAGGGCAACTCC-3 «og reversprimeren 5′-CCTGCTAAAGGAATTAGTCACG-3». PCR produktstørrelse var 1255 bp. PCR-amplifikasjon ble utført i et endelig volum på 50 ul, inneholdende 1 pl av genomisk DNA (100 ng /ul), 4 pl 2,5 mM dNTP, 5 ul av buffer, 2 pl av hver primer og en U av high fidelity Taq Polymerase (TransStart FastPfu Fly DNA Polymerase, Transgen, Beijing, Kina). PCR-forsterkningsBetingelsene var som følger: 94 ° C i 5 minutter, etterfulgt av 35 sykluser ved 94 ° C i 30 sekunder, 61 ° C i 30 sekunder og 72 ° C i 2 minutter, og en avsluttende forlengelsestrinn på 72 ° C i 10 minutter. All sekvensering ble utført ved BioSune Bioteknologi Co, Ltd (Shanghai, Kina), og sekvensdataene ble analysert ved hjelp Chromas 2.31 og MegAlign 7.0.
RNA Isolation, Reverse Transcription PCR og kvantitativ real-time PCR (QRT-PCR)
Total RNA ble ekstrahert fra kreftvev ved hjelp av TRIzol reagens (Invitrogen), basert på den foreslåtte protokoll. Revers transkripsjon PCR ble utført ved hjelp av en PrimeScript RT-PCR kit (Takara, Dalian, Kina). QRT-PCR ble utført ved hjelp av Applied Biosystems 7900HT Real-time PCR System. MRNA sekvens av
GADD45A
genet ble hentet fra NCBI (NM_001924.3 GI: 315075321). De følgende primere ble anvendt for å amplifisere
GADD45A
genet: 5′-GAAAGGGATGGATAAGGTGGG-3 «og revers primer 5′-CCTGGATCAGGGTGAAGTGGA-3». GAPDH (forover primer 5′-GGGCTGCTTTTAACTCTGGTAAAG-3 «og revers primer 5′-CCATGGGTGGAATCATATTGG-3») ble anvendt som intern kontroll. Forsøkene ble gjentatt tre ganger for å bekrefte funnene.
Statistical Analysis
Statistiske analyser ble utført som tidligere beskrevet [26]. Hardy-Weinberg likevekt ble testet for alle de SNPs ved hjelp av en offentlig webbasert statistisk verktøyet (https://www.oege.org/software/hwe-mr-calc.shtml), og terskelen for disequilibrium var P 0,05. Allelet og genotype distribusjoner i eggstokkreft gruppen og kontrollgruppen ble sammenliknet med chi-kvadrat tester, og Fishers eksakte test ble brukt da en celletall var mindre enn fem. Risikoen for kreft i eggstokkene utvikling ble estimert som en odds ratio (OR) med 95% konfidensintervall (KI) med ubetinget logistisk regresjonsanalyse. Pasienten overlevelse ble beregnet ved hjelp av Kaplan-Meier metoden. Multivariat analyse av prognostiske faktorer ble utført ved hjelp av Cox regresjonsanalyse. Alle p-verdier ble beregnet som tosidig, og terskelen for signifikans var P 0,05. Dataene ble analysert ved hjelp av SPSS (Statistical Package for Social Sciences) 17,0 (SPSS, Chicago, Illinois, USA)
Resultater
Forholdet mellom GADD45A (1506T C). Polymorphism og Ovarian Kreftrisiko
SNP
GADD45A plakater (1506T C) er en roman, tidligere uidentifisert variant. Sekvense kromatogrammene fra tilfeldig utvalgte saker ble brukt til å illustrere varianter av
GADD45A plakater (figur 1).
A-C, den omvendte supplement sekvense kromatogram resultatene av genotypene TT, TC og CC, henholdsvis. Prøvene ble tilfeldig valgt
Deltakerne i eggstokkreft og kontrollgruppene var alle fra Fastlands-Kina.; Det var ingen signifikante kliniske forskjeller (dvs. median alder, kroppsmasseindeks [BMI], menstruasjonshistorie eller andre relaterte parametre) mellom de 2 gruppene. Hardy-Weinberg likevekt ble testet. Chi-kvadrat verdier av saken gruppe og en kontrollgruppe var 0,51 og 0,47 kroner. Som vist i tabell 1,
GADD45A plakater (1506T C) genotyper og allel distribusjoner viste en statistisk signifikant forskjell mellom de konkrete og kontrollgrupper. Sterke assosiasjoner med kreftrisiko eggstokkreft ble funnet for SNP 1506T C i log-additiv genetisk modell (TT vs. TC vs CC, P = 0,0021), dominant genetisk modell (TT + TC vs. CC, P = 0,0017, OR = 1,95, 95% CI [1,28 til 2,95]), og recessive genetiske modell (TT vs. TC + CC, P = 0,0093, OR = 2,05, 95% CI [1,19 til 3,53]). Vi observerte en større forekomst av C alleler (P 0,001, OR = 1,71, 95% CI [01.28 til 02.29]) i eggstokkreft pasienter sammenlignet med kontrollene
I sammendraget, variant 1506T C er korrelert med en økning i kreftrisiko eggstokkreft
Forholdet mellom GADD45A (1506T C). Polymorphism og Clinicopathological variabler
Som vist i tabell 2, er en sammenslutning av TT og TC + CC genotyper med clinicopathological egenskaper, herunder alder ved diagnose, grad av tumor differensiering, klinisk stadium, lymfeknutemetastase, CA125 uttrykk, tumorstørrelse og tumorhistologi. Vi observerte en statistisk signifikans effekt mellom tumorhistologi (P = 0.032) og CA125 status (P = 0,021). Bæring av C-allelet (TC + CC) var forbundet med en økt risiko for positive CA125 (OR = 3,20, 95% CI [1,15 til 8,71)
Forholdet mellom GADD45A. (1506T C) polymorfisme og GADD45A uttrykk nivåer
Vi testet den potensielle forholdet mellom
GADD45A
videre (1506T C) polymorfisme og
GADD45A
mRNA uttrykk nivåer i vivo. Som vist i figur 2A, nivåene av
GADD45A
mRNA i 22 eggstokkreft vev var betydelig lavere enn det som ble observert i 15 normalt vev (P 0,001). Som vist i figur 2B,
GADD45A
mRNA uttrykk var høyere hos pasienter med TT eller TC genotyper sammenlignet med pasienter med CC genotypen (P 0,001). Som vist i figur 2C,
GADD45A
mRNA uttrykk var høyere i kontroller med TT eller TC genotyper enn med CC genotype, (P 0,001). Disse funnene tyder på at SNP 1506T . C kan påvirke uttrykk for
GADD45A
genet
A, relative nivåer av GADD45A mRNA uttrykk i eggstokkreft vev sammenlignet med normale eggstokkene vev. B, relative nivåer av GADD45A mRNA uttrykk i eggstokkreft vev av pasienter med ulike 1506T C genotyper. C, relative nivåer av GADD45A mRNA uttrykk i de normale kontroll vev av personer med forskjellig 1506T C genotyper. Én flekk representerer gjennomsnittet av tre uavhengige målinger som oppnås fra et emne. Utdeling av de tre genotypene var tilfeldig mellom gruppene. N representerer antall prøver i hver respektive gruppe. Barer representerer standardavvik. Elevens
t
-test ble brukt for å vurdere forskjellene i uttrykket nivåer av ulike konstruksjoner
Forholdet mellom GADD45A (1506T C). Polymorphism og eggstokkreft prognose
for å teste prognostisk effekt av
GADD45A
polymorfisme i eggstokkreft, beregnet vi
GADD45A
genotype med hensyn til eggstokkreft tilbakefall overlevelse (RFS) og total overlevelse (OS). Som vist i figur 3, TT + TC genotype viste signifikant korrelasjon med både lengre eggstokkreft RFS og OS i 151 pasienter (P = 0,018, p = 0,0093, henholdsvis).
A, Genotype TT + TC av
GADD45A
hatt lenger tilbakefall overlevelse (p = 0,018). B, Genotype TT + TC av
GADD45A
hatt lengre total overlevelse (p = 0,0093).
Diskusjoner
Et stort antall genetiske varianter i kandidatgener som er involvert i prosessen med eggstokkreft karsinogenese er blitt rapportert [8]. Tre GWAS med overlappende sett med deltagerne for eggstokkreft har blitt utført [13-15]. I alt 18 SNPs i 5 regioner ble funnet å være assosiert med eggstokkreft i 3 GWAS studier. Men det var ingen overlapping mellom genetiske varianter som er identifisert gjennom GWAS studier og variantene som er identifisert ved hjelp av en kandidat genet søk [8]. Vi tror at en sammenheng med eggstokkreft er utilstrekkelige og at det er nødvendig å undersøke ytterligere kandidat gener assosiert med eggstokkreft.
GADD45
uttrykk er ofte redusert i enkelte kreft [22 -24]. Unormal
GADD45
uttrykk har vært forbundet med svulst prognose [25], og unormal
GADD45
metylering kan bidra til kreftrisiko [25]. En studie viste at 1,25-dihydroksyvitamin D3 forårsaker cellesyklus arrest i G2 /M overgang gjennom p53-uavhengig induksjon av GADD45 i eggstokkreft celler [27]. Induksjonen av ekspresjonen GADD45A kan spille en rolle i mediering av den apoptotiske respons av eggstokkreft celler til det syntetiske retinoid CD437 [28]. Foreningen av
GADD45A
polymorfismer med svulst mottakelighet og prognose har aldri blitt rapportert
I denne studien,
GADD45A plakater (1506T C). Polymorfisme ble funnet å være assosiert med eggstokkreft risiko, clinicopathological egenskaper,
GADD45A
uttrykk nivåer og eggstokkreft prognose. Så langt vi kjenner til,
GADD45A
er en roman eggstokkreft mottakelighet genet og denne studien er den første til å rapportere en sammenheng mellom germline mutasjoner i
GADD45A Hotell og svulst risiko og prognose. Vi forventer
GADD45A
å være en nyttig molekylær markør for å vurdere eggstokkreft risiko og prognose
SNP 1506T . C ligger i introner og kan derfor ikke endre rekkefølge eller struktur av proteinet. Vi har imidlertid forståelse at varianten 1506T C ble forbundet med og økt risiko for ovariekreft og redusert overlevelse av pasienten. Videre
GADD45A
funksjoner nedstrøms
BRCA1 Hotell og
p53
i DNA-skader veien.
GADD45A
uttrykk er regulert av flere transkripsjonsfaktorer, som for eksempel
p53
,
BRCA1
,
WT1
,
Oct-en
NF-YA
,
ATF4
,
AP-1
,
c-myc
, og
ZBRK1
, som typisk bindes til promoteren eller intronic regioner i
GADD45A product: [16, 20, 21, 29]. Dermed hypotese vi at denne varianten kan forstyrre transkripsjonsfaktor bindingsseter, og dermed endre
GADD45A
uttrykk og påvirker tumor genesis. I samsvar med funn oppnådd i andre kreftstudier [22-24],
GADD45A
mRNA uttrykk var lavere i eggstokkene pasienter enn kontroller. Videre
GADD45A
mRNA uttrykk var lavere hos pasienter med CC genotypen sammenlignet med pasienter som bærer T-allelet (TT + TC), og overlevelse av pasienter med CC genotypen var dårligere. Dermed bærer C-allelet (TC + CC) var forbundet med en økt risiko for positiv CA125. Disse resultatene var konsistente med funksjonen til
GADD45A
.
GADD45A
er innblandet i aktiv DNA demetylering, bortsett fra opprettholdelse av genomisk stabilitet, DNA-reparasjon og undertrykkelse av cellevekst [29,30].
Som tidligere angitt, deltakerne er involvert i vår studien var hovedsakelig bosatt i Shandong-provinsen i Kina. Fordi den kinesiske befolkningen er generelt mer genetisk homogene enn andre etniske befolkningsgrupper, spår vi at disse funnene vil være konsekvent i større utvalgsstørrelser over hele Kina, men å bestemme anvendeligheten av våre funn til andre etniske populasjoner (både innenfor og utenfor Asia) krever videre undersøkelser i ulike pasientpopulasjoner, og større utvalgsstørrelser er nødvendig før disse data kan overføres til andre etniske grupper [30].
i konklusjonen, vi fant, for første gang, at
GADD45A
(1506T C) polymorfisme kan være korrelert med eggstokkreft mottakelighet, clinicopathological egenskaper,
GADD45A
uttrykk nivåer og eggstokkreft prognose. Fordi
GADD45A
har vist seg å være en viktig regulator i et komplekst nettverk av onkogene trasé, vil ytterligere undersøkelser for å klargjøre den funksjonelle rollen til dette genet og sin tilknytning til eggstokkreft kreftutvikling og utvikling. Variantene av
GADD45A
kan vise seg å være nyttige markører for identifikasjon av eggstokkreft-mottakelige pasienter eller prognostiske indikatorer på sykdomsutvikling, og de kan også tjene som potensielle mål for fremtidige behandlinger.
i denne studien, for første gang, viser vi at
GADD45A plakater (1506T C) polymorfisme er assosiert med eggstokkreft mottakelighet og prognose. Et forhold ble observert mellom
GADD45A plakater (1506T C) polymorfisme og
GADD45A
uttrykk nivåer. Disse dataene tyder på at
GADD45A plakater (1506T C) er en ny svulst mottakelighet genet og kan være et nyttig molekylær markør for å vurdere eggstokkreft risiko og for å forutsi eggstokkreft pasient prognose
.
