Abstract
microRNAs (mirnas) er ikke-protein-kodende sekvenser som kan fungere som onkogener eller tumorsuppressorgener. Denne studien dokumenterer tumor suppressor rollen MIR-1280 i blærekreft. Kvantitativ real-time PCR og
in situ hybridisering
analyser viste at MIR-1280 er betraktelig nedregulert i blærecancercellelinjer og tumorer sammenlignet med en ikke-ondartet cellelinje eller sampler normalt vev. For å dechiffrere den funksjonelle betydningen av MIR-1280 i blærekreft, vi ectopically over-uttrykt MIR-1280 i blære kreft cellelinjer. Over-uttrykk for MIR-1280 hadde antiproliferative effekter og svekket koloni dannelsen av blærekreftcellelinjer. FACS (fluorescens aktivert cellesortering) analyse viste at gjen uttrykk for MIR-1280 i blæren kreft celler indusert G2-M cellesyklus og apoptose. Våre resultater viser at Mir-1280 hemmet migrasjon og invasjon av blærekreftcellelinjer. MIR-1280 også svekket ROCK1 og RhoC protein uttrykk. Luciferaserapportørplasmid analyser viste at onkogen ROCK1 er et direkte mål på MIR-1280 i blærekreft. Denne studien indikerer også at Mir-1280 kan være av diagnostisk og prognostisk betydning i blærekreft. For eksempel, ROC-analyse viste at Mir-1280 uttrykk kan skille mellom ondartede og normale blærekreft tilfeller og Kaplan-Meier analyse viste at pasienter med MIR-1280 høy uttrykket hadde høyere total overlevelse sammenlignet med de med lav MIR-1280 uttrykk. Som konklusjon, er dette den første studien for å dokumentere at MIR-1280 fungerer som en tumor suppressor ved å målrette onkogen ROCK1 til invasjon /migrasjon og metastasering. Forskjellige forbindelser blir nå brukt som ROCK1 hemmere; derfor restaurering av tumor suppressor MIR-1280 kan være terapeutisk nyttig enten alene eller i kombinasjon med disse stoffene i behandling av blærekreft
Citation. Majid S, Dar AA, Saini S, Shahryari V, Arora S, Zaman MS, et al. (2012) mikroRNA-1280 Hemmer Invasion og metastasering av målretting ROCK1 i blærekreft. PLoS ONE 7 (10): e46743. doi: 10,1371 /journal.pone.0046743
Redaktør: Natasha Kyprianou, University of Kentucky College of Medicine, USA
mottatt: 24 juli 2012; Godkjent: 30 august 2012; Publisert: 04.10.2012
Copyright: © Majid et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne forskningen ble støttet av Nasjonalt Senter for Forskningsressurser av National Institutes of Health gjennom Grant Antall RO1CA138642, RO1CA130860, RO1CA160079 og VA Merit omtale og VA Program Project. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:. Rajvir Dahiya er en PLoS ONE Editorial styremedlem. Dette endrer ikke forfatternes tilslutning til alle PLoS ONE politikk på deling av data og materialer
Innledning
microRNAs (mirnas) er ikke-protein-kodende sekvenser tenkt å regulere . 90 % av menneskets gener [1]. Deregulering av miRNA ekspresjon har blitt identifisert i en rekke kreftformer [2], [3], og oppsamling av bevis indikerer at noen mirnas kan fungere som onkogener eller tumorsuppressorgener. mirnas uttrykkes i et vev-spesifikk måte, og kan spille en viktig rolle i celle-proliferasjon, apoptose, differensiering og [4], [5]. Inaktivering av onkogene mirnas [6], [7] eller restaurering av tumor-suppressor mirnas [8], [9], [10] kan ha et stort potensial for behandling av kreft.
A) Kvantitativ RT-PCR-analyse av MIR-1280 i cellelinjer. B)
Fluorescens In-situ
hybridisering (FISH) i cellelinjer. C) Kvantitativ real time PCR-analyse av mir-23b uttrykk i matchet Laser-Captured microdissected vevsprøver. (T /N-tumor /normal).
Endringer i cellulære funksjoner som celleproliferasjon, heft og bevegelighet er basert på morfologiske endringer som følge av aktin cytoskjelettet omorganisering. Rho familie proteiner som interagere med aktin cytoskjelettet regulere dannelsen av stress fibre og fokal adhesjon i cellene. Rho-assosiert serin-treonin proteinkinase, ROCK [11], [12], en av de best karakteriserte nedstrøms effektorer av Rho, blir aktivert når det selektivt bindes til den aktive GTP-bundet form av Rho. Aktivert ROCK samvirker med aktin cytoskjelettet for å fremme spenning-fiberdannelse og montering av fokale kontakter [13]. Rearrangementer av aktin cytoskjelettet er involvert i kreftcellemigrering som er sentralt i prosessen med metastasering. Tang et al [14] undersøkte effekten av ROCK1 hemming av aktiviteten av oppstrøms RhoA og Rac1. ROCK1 reduserer indirekte aktiviteten til oppstrøms RhoA ved å stimulere Tiam1-indusert Rac1 aktivitet. ROCK1 gir en feedback mekanisme, formidling oppstrøms Rac1 og RhoA aktivitet, og dermed gjenspeiler de ulike effektene av ROCK1 på funksjonell balanse av små GTPases [14]. Rearrangering av aktin cytoskeletal proteiner som respons på Rho er viktig for muligheten for tumorceller til å metastasere [15]. Rho /ROCK pathway spiller rolle i kreft progresjon ved å regulere aktin cytoskjelettet omorganisering og en bestemt ROCK inhibitor ble funnet å undertrykke tumorvekst og metastasering [16], [17]. I prostata carcinoma PC-3-celler, er RhoA en kritisk endogene promoter av celleinvasjon og migrasjon [18]. Inhibering av RhoA eller sin store nedstrøms effektor, ROCK1, reduserer bevegeligheten av prostata carcinoma celler [18]. I blærekreft ble Rho /ROCK vei rapportert å være involvert i forekomst og progresjon av blærekreft [19]. Disse observasjonene tyder på at Rho /ROCK veien kan være en molekylære mål for forebygging av kreft invasjon og metastasering. Her for første gang vi rapportere om tumor suppressor aktivitet av mikroRNA-1280 (MIR-1280) i blærekreft, og viser at det blærekreft migrasjon og invasjon av direkte rettet mot ROCK1.
A) Clinicopathological karakteristikk av pasient kohort. B) ROC kurven analyse som viser resultatene av MIR-1280 uttrykk for å diskriminere mellom maligne og ikke-maligne vevsprøver. C) Kaplan-Meier analyse for total overlevelse basert på MIR-1280 uttrykk.
Materialer og metoder
Cellelinjer og cellekultur
SV-HUC-en ble T24 og J82 celler kjøpt fra American Type Culture Collection (ATCC) og dyrket i henhold til ATCC protokoller. SV-HH-1-celler ble dyrket i F-12K Medium (ATCC) med 10% FBS. T24-celler ble dyrket i McCoys 5A medium supplert med 10% FBS og J82-celler ble dyrket i minimalt essensielt medium (MEM) supplert med 10% FBS.
A) Transient transfeksjon av MIR-1280 forløper betydelig økt ekspresjon av MIR-1280 i blæren kreftceller. B) Spredning av J82 og T24 celler etter MIR-1280 transfeksjon ble betydelig redusert i forhold til forts-MIR. C) MIR-1280 over-uttrykk signifikant hemmer kolonidannende evne blæren kreftceller.
Plasmider, Forløpere og Transfeksjon
TaqMan prober og forløpere for HSA-MIR-1280 og negative kontroll pre-Mir ble kjøpt fra Applied Biosystems (Foster City, CA). pmir-GLO Dual-Luciferase miRNA Target Ekspresionsvektor ble kjøpt fra Promega. Lipofectamine 2000 (Invitrogen) ble brukt for alle transfeksjoner.
RNA ekstraksjon
miRNA og total RNA ble ekstrahert fra cellelinjer ved hjelp av en miRNeasy Mini Kit og en RNeasy Mini Kit (Qiagen). mirnas fra kliniske prøver ble hentet ved hjelp av laser capture mikrodisseksjon teknikker med en miRNeasy FFPE kit (Qiagen).
AB) FACS analyse viser MIR-1280 overuttrykk induserer G2-M cellesyklus arrest i J82 og T24 celler med en tilsvarende reduksjon i S-faseceller. Verdiene er vist fra tredoble eksperimenter ± SD.
A-B) MIR-1280 overuttrykk induserer apoptose i J82 og T24 celler med en samtidig reduksjon i levedyktige antall celler. Verdier som vises er fra tredoble eksperimenter ± SD.
Menneskelige kliniske prøver
Kliniske prøver ble innhentet fra San Francisco Veterans Affairs (VA) Medical Center. Skriftlig informert samtykke ble innhentet fra alle pasienter og studien ble godkjent av UCSF komité for menneskeforskning (Godkjenningsnummer: H9058-35751-01).
Kvantitativ Real-time PCR
Moden mirnas ble analysert ved hjelp av TaqMan mikroRNA analyser i henhold til produsentens instruksjoner (Applied Biosystems). Alle RT reaksjoner, inkludert ingen-mal kontroller og RT minus kontroller, ble kjørt i en 7500 Fast Real Time PCR System (Applied Biosystems). RNA-konsentrasjoner ble bestemt med en Nanodrop (Thermo Scientific, Rockford, IL). Prøvene ble normalisert til RNU48 (Applied Biosystems). Genuttrykk nivåer ble kvantifisert ved hjelp av 7500 Fast Real Time Sequence detection system programvare (Applied Biosystems). Sammen real-time PCR ble utført i tre eksemplarer, inkludert ingen-mal kontroller. Relativ uttrykk ble beregnet ved hjelp av komparative Ct.
In Situ
Hybridisering
In situ
hybridisering ble utført som beskrevet tidligere [20]. I korthet cellelinjer ble farget ved hjelp av DIG-merket låst nukleinsyre (LNA) -baserte sonder spesifikke for mir-1280 følger produsentens protokoll (Exiqon, Inc Woburn, MA) og oppdaget ved hjelp av anti-DIG-Fluorescein, Fab-fragmenter (Roche Applied Science , Indianapolis, IN).
A) Migrasjons analyser av J82 og T24 celler transfektert med MIR-1280. B) Representative bilder av migrasjon analysen.
A) Invasion analysen viser en betydelig nedgang i antall invaderende J82 og T24 celler transfektert med MIR-1280. B) Representative bilder av invasjonen analysen.
Cell Livskraftig og Clonability analysen
Celleviabilitet ble bestemt ved 24, 48 og 72 timer ved hjelp av CellTiter 96 vandige løsning Cell Proliferation Assay kit (Promega, Madison, WI) i henhold til produsentens protokoll. Absorbansen ble målt ved 490 nm ved hjelp Spectramax 190 (Molecular Devices). Data er presentert som middelverdi for triplikate eksperimenter sammenlignet med den negative kontroll. For kolonidannelse analysen ble cellene sådd ut ved lav tetthet (1000 celler /skål) og fikk vokse inntill synlige kolonier til syne. Deretter ble cellene farget med Giemsa og kolonier ble talt opp.
Migrasjon og Invasion Analyser
Cytoselect 24-brønn celle migrasjon og invasjon analysesett (Cell Biolabs, Inc) ble brukt for migrasjon og invasjon analyser i henhold til produsentens protokoll. Kort sagt ble T24 og J82-celler transfektert med Pre-MIR miRNA forløper eller negativ kontroll høstet 72 timer etter transfeksjon og resuspendert i serumfritt Opti-MEM. -Celler (10 x 10
4 pr 300 ul medium uten serum) ble tilsatt til det øvre kammer og det nedre kammer ble fylt med 500 ul medium inneholdende 10% FBS. Celler ble inkubert i 16 timer ved 37 ° C i en 5% CO2 vevskultur-inkubator. Etter 16 timer ble ikke-overførte /ikke-invaderende celler fjernet fra oversiden av transwel membranfilterinnsatser med en bomullspinne. Migrerte /invaderte celler på nedsiden var farget og absorbansen ble avlest ved 560 nm i henhold til produsentens protokoll.
A) gratis MIR-1280 bindende sekvenser i ROCK1 3’UTR. B) Western blot analyse viser at Mir-1280 undertrykker oversettelse av onkogener ROCK1 og RhoC. C) luciferase analyser som viser redusert reporter aktivitet etter co-transfeksjon av enten villtype eller mutant Src-3’UTR med MIR-1280 i J82 og T24 celler. Mut- mutert 3’UTRROCK1 sekvens. D) Skjematisk fremstilling av rollen MIR-1280 i blærekreft.
Immunoblotting
Protein ble isolert 70-80% konfluente plater av dyrkede celler ved hjelp av M-PER pattedyr Protein Ekstraksjonsreagens (Pierce Biotechnology, Rockfield, IL) etter produsentens anvisninger. Proteinkonsentrasjoner ble bestemt ved Bradford-metoden. Like mengder protein ble løst på 4-20% natrium-dodecyl-sulfat (SDS) polyakrylamidgeler og overført til en nitrocellulosemembran ved spenningsgradienten overføring. De resulterende Blottene ble blokkert med 5% ikke-fet tørrmelk og probet med spesifikke antistoffer. Blottene ble deretter inkubert med passende konjugert sekundære antistoffer og visualisert ved hjelp av forbedret chemiluminescence (Pierce Biotechnology, Rockford, IL).
luciferaserapportørplasmid analysen
En pmirGLO Dual-Luciferase miRNA mål ekspresjonsvektor ble brukes til 3′-UTR luciferasepreparater analyser (Promega, Madison, WI). Målet onkogen av miRNA-1280 ble valgt på grunnlag av online mikroRNA Måldatabasen https://www.microrna.org/microrna/home.do. Primersekvensene for villtypen 3’UTR var: Spiss 5 «CGCGGCCGCTAGTCTGTGGAATCGTGTGGGAT 3» og bakover 5 «ctagatcccacacgattccacagactagcggccgcgagct 3». For mutant 3’UTR, primersekvensene var: Spiss 5 «CGCGGCCGCTAGTCTGTGGAATCGTTCATACT 3» og reversere 5 «ctagagtatgaacgattccacagactagcggccgcgagct 3». For lucifease analysen, ble T24 og J82 celler transfektert med HSA-MIR-1280 og pmirGLO Dual-Luciferase miRNA mål ekspresjonsvektorer med villtype eller mutant målsekvens hjelp Lipofectamine 2000. Firefly luciferase aktiviteter ble målt ved hjelp av Dual Luciferase Assay (Promega, Madison, WI) 18 timer etter transfeksjon, og resultatene ble normalisert med Renilla luciferase. Hver reporter plasmid ble transfektert minst tre ganger (på forskjellige dager), og hver prøve ble analysert i triplikat.
Statistical Analysis
Statistiske analyser ble utført med GraphPad Prism 5 og MedCalc versjon 10.3.2 . Alle kvantifiserte data representerer et gjennomsnitt på minst triplikate prøver eller som angitt. Feilstolpene representerer standardavviket av gjennomsnittet. Alle testene ble utført to tailed og
p-
verdier 0,05 ble ansett som statistisk signifikant. Receiver Operating kurver (ROC) ble beregnet til å avgjøre potensialet i MIR-1280 til å diskriminere mellom maligne og ikke-maligne prøver. For sykdomsprogresjon, Kaplan-Meier (log-rank test) analyse ble utført.
Resultater
Uttrykk av MIR-1280 i blæren svulster og kreftcelle linjer
Uttrykk for MIR-1280 ble undersøkt ved real-time PCR i blærekreftcellelinjer J82, T24 og sammenlignet med ikke-ondartet cellelinje SV-HUC1. Resultatene indikerte at MIR-1280 ble nedregulert i kreftcellelinjer (figur 1A).
In-situ-hybridisering
også bekreftet tilstedeværelsen av MIR-1280 uttrykket (grønt signal) i SV-HUC1 celler i forhold til cancercellelinjer (figur 1B). For å undersøke den biologiske betydningen av MIR-1280, var dens uttrykk analysert i laser fanget microdissected (LCM) human blære svulstvev og i forhold til normal matchet kontrollgruppe vev. Ekspresjonen av MIR-1280 ble funnet å være signifikant nedregulert i alle tumorprøver, sammenlignet med deres matchede normale prøver (figur 1C). Disse resultatene indikerer en antatt tumor suppressor rolle for MIR-1280 i blærekreft.
diagnose- og prognose Betydningen av MIR-1280 i blærekreft
Kliniske demografi av pasienten kohorten er oppsummert i figur 2A . Mottaker driftskurve (ROC) analyser som ble utført for å vurdere muligheten av MIR-1280 uttrykk for å skille mellom normale og kreft tilfeller ved hjelp av vevsprøver. Et område under ROC-kurven (AUC) på 0,886 (P 0,0001; 95% CI = 0,775 til 0,998) (figur 2B) ble oppnådd som tyder på at MIR-1280 ekspresjon kan diskriminere mellom maligne og ikke-maligne prøver og følgelig kan brukes som en diagnostisk markør for blærekreft om ytterligere prøver kan styrke disse resultatene. For å avgjøre om MIR-1280 har noen prognostisk betydning, vi delt tilfeller i lav MIR-1280 (uttrykk T /N 0,8 ganger) og høy MIR-1280 (uttrykk T /N 0,8 ganger) grupper og utført Kaplan-Meier overlevelsesanalyse . I Kaplan-Meier analyse, høy MIR-1280 gruppen hadde signifikant høyere total overlevelse sannsynlighet i forhold til den lave MIR-1280-gruppen (Logrank Test p 0,02) (figur 2C). Disse funnene tyder på at Mir-1280 har potensial til å bli en diagnostisk og prognostisk markør for blærekreft.
mikroRNA-1280 Overuttrykte undertrykker blærekreft celleproliferasjon og Colony Forming
For å bestemt funksjonell betydning av MIR-1280 overekspresjon i blærekreft, transfektert vi blærekreftcellelinjer J82 og T24 med MIR-1280 forløpere. MIR-1280 ble betydelig overuttrykt i J82 og T24 cellelinjer etter transient transfeksjon med MIR-1280 forløper i forhold til forts-MIR forløper (figur 3A). Ektopisk ekspresjon av MIR-1280 signifikant redusert celleproliferasjon sammenlignet med celler som uttrykker forts-MIR (figur 3B). MIR-1280 transfekterte celler hadde også lav kolonidannelse egenskaper som antall foki i MIR-1280 uttrykkende celler ble redusert når sammenlignet med cont-MIR transfekterte celler (figur 3C). Disse resultatene indikerer anti-proliferativ effekt av MIR-1280 i blærekreft.
MIR-1280 Triggere cellesyklus arrest og induserer apoptose i blærekreft Cells
FACS (fluorescens aktivert celle sortering) analyse avslørt at re-ekspresjon av MIR-1280 fører til en betydelig økning i antall celler i G2-M-fasen av cellesyklusen (17% til 35%), mens S-fasen populasjonen ble redusert fra 15% til 8% i J82 -celler (figur 4A). Lignende resultater ble observert i T24-celler med en økning i G2-M populasjon av celler (6% til 19%) og en reduksjon i S-fase populasjonen (12% til 6%), noe som tyder på at MIR-1280 utløser et G2-M arrest i MIR-1280 transfektert celler i forhold til forts-MIR. FACS-analyse for apoptose ble utført ved anvendelse av Annexin-V-FITC-7-AAD fargestoff. Prosentandel av apoptotiske celler (tidlig apoptotiske + apoptotisk) betydelig høyere (4% til 12%) som reaksjon på MIR-1280 overekspresjon i forhold til forts-MIR med et tilsvarende 10% reduksjon i levedyktige cellepopulasjonen i J82-celler (figur 5A). I T24-celler, ble en økning (2% til 12%) i apoptotiske celler observert med MIR-1280 overekspresjon i forhold til forts-MIR (figur 5B). Disse resultatene indikerer en tumor suppressor rolle for MIR-1280 i blærekreft.
Anti-migrasjon /Invasion Effekter av MIR-1280 i blærekreft
Overuttrykte MIR-1280 hadde anti-trekkfugl og anti-invasive effekter på blærekreftcellelinjer. Mindre absorbans ble observert ved 560 nm med MIR-1280 transfekterte celler sammenlignet forts-Mir i migrasjon analysen (figur 6) og Mir-1280 overekspresjon også betydelig redusert invasivitet av blære kreft celler (figur 7).
MIR-1280 Direkte Targets Oncogene ROCK1
ROCK1 har blitt rapportert å være en viktig molekyl som driver blærekreft migrasjon og invasjon. Ved hjelp av en online mikroRNA Måldatabasen vi fant onkogen ROCK1 som den antatte målet for MIR-1280 med utfyllende 3’UTR nettsteder for frøet sekvens av MIR-1280 (figur 8A). Vi utførte Western analyse for ROCK1 uttrykk i MIR-1280 transfekterte celler og funnet ut at Mir-1280 svekket protein uttrykk for ROCK1 forhold til forts-MIR (figur 8B). Vi har også funnet en reduksjon i proteinnivåer RohC, en annen onkogent protein som er oppstrøms for ROCK1. For å sjekke om en direkte interaksjon er involvert mellom MIR-1280 og målet onkogen ROCK1, utførte vi luciferaserapportørplasmid analyser. Vi har funnet at ko-transfeksjon av MIR-1280 sammen med villtype 3’UTR av onkogen ROCK1 forårsaket en signifikant nedgang i luciferase-enheter i forhold til kontroller (figur 8C). Disse resultatene tyder på at Mir-1280 mål onkogen ROCK1 direkte.
Diskusjoner
Selv om lite er kjent om mikroRNA-1280, en studie har vist at Mir-1280 er uttrykt i tykktarm og bukspyttkjertel kreft basert på uttrykk analyse av 19 tykk- og 17 bukspyttkjertel humane kreftprøver [21]. Her har vi for første gang rapporterer at Mir-1280 spiller en tumor suppressor og har diagnostisk og prognostisk potensial i blærekreft. Vi utførte også funksjonelle analyser for å bekrefte anti-tumor effekter av MIR-1280 og viser at Mir-1280 er rettet mot onkogen ROCK1, et viktig molekyl i blærekreft celle migrasjon og invasjon direkte.
Vi har også observert at speil 1280 er betydelig nedregulert i blærecancercellelinjer og tumorvev sammenlignet med ikke-ondartet cellelinje eller normale vev som indikerer at MIR-1280 kan være en tumor suppressor i blærekreft. Tidligere studier har vist at microRNAs er svært spesifikke vev, og de kan fungere som tumor suppressor eller onkogener [5], [6]. MicroRNAs har flere funksjoner som gjør dem attraktive kandidater som nye prognostiske biomarkører og kraftige verktøy for tidlig diagnose av kreft [22]. I denne studien fant vi at Mir-1280 var prediktiv av total overlevelse slik at pasienter med høyere MIR-1280 uttrykk hatt lengre total overlevelse sammenlignet med pasienter med lav MIR-1280 uttrykk. MikroRNA-1280 uttrykk også preget ondartet fra normalt vev som indikerer den diagnostiske betydning av MIR-1280 i blærekreft selv om dette må bekreftes i en større kohort av vevsprøver. Våre funksjonelle analyser viste at Mir-1280 har anti-proliferative effekter, induserer cellesyklus og apoptose i blærekreft. Den viste også anti-trekkfugl og anti-invasiv effekt på blæren kreftceller.
Siden ROCK1 er et viktig molekyl som er involvert i blærekreft migrasjon og invasjon [19], vi undersøkt om ROCK1 er et mål på MIR -1280 i blærekreft. Overekspresjon av ROCK1 er blitt rapportert å forekomme i ulike kreft [14], [19] og det Rho /ROCK reaksjonsvei er blitt funnet å være forbundet med progresjon av blærekreft [19]. ROCK formidler svarene i veien initiert av Rho, og regulerer omorganisering av cytosleletal proteiner som dannelse av stress fiber og fokale sammenvoksninger [23]. Rearrangere cytoskeletal proteiner er viktig for muligheten for tumorceller til å metastasere [15] og vår undersøkelse viste at MIR-1280 svekket ekspresjon av onkogenet ROCK1. Luciferasepreparater analyser avslørte også direkte interaksjon av MIR-1280 og ROCK1. Derfor tyder disse resultatene på at Mir-1280 hemmer migrasjon /invasjon og dermed metastasering av blærekreft som er formidlet gjennom nedregulering av onkogen ROCK1 (figur 8D). Vi fant også redusert uttrykk av onkogen RhoC som er oppstrøms ROCK1. En tidligere studie har rapportert at ROCK1 reduserer aktiviteten til oppstrøms RhoA familiemedlemmer indirekte [14]. Av samme oppdragsgiver, kan hemming av ROCK1 av MIR-1280 har en indirekte hemmende virkning på RhoC onkogen.
I konklusjonen, er vår studie den første rapporten til å dokumentere tumor suppressor rollen MIR-1280 i blæren kreft. MIR-1280 er rettet direkte onkogen ROCK1, hemmer migrasjon /invasjonen som er sentrale i prosessen med metastasering. Forskjellige forbindelser slik som Y-27632, er blitt funnet å hemme ROCK1. Våre funn tyder på at restaureringen av tumor suppressor MIR-1280 kan være nyttig terapeutisk enten alene eller i kombinasjon med disse stoffene i behandling av blærekreft.
Takk
Vi takker Dr. Roger Erickson for hans støtte og hjelp i forbindelse med utarbeidelsen av manuskriptet.
