Abstract
For å finne passende kandidater for aggressiv behandling som radikal prostatektomi eller strålebehandling av prostatakreft (PCA), nye prediktive biomarkører for PCa aggressivitet er avgjørende. Core2 β-1,6-
N
-acetylglucosaminyltransferase-en (GCNT1) er en viktig enzym som danner kjernen 2-forgrenet
O
-glycans. Dets ekspresjon er assosiert med progresjonen av en rekke kreftformer. Vi har etablert en mus IgG monoklonalt antistoff (mAb) mot GCNT1 og undersøkt forholdet av GCNT1 uttrykket til clinicopathological status av PCa. Parafininnstøpte PCA prøvene ble analysert ved immunhistokjemi for GCNT1 uttrykk ved hjelp av et nyetablert mus anti-GCNT1 mAb av oss selv. GCNT1-positiv tumor viste signifikant høyere Gleason score og større tumorvolumet. Antallet GCNT1-positive tilfeller var betydelig lavere i tilfeller av organ-begrenset sykdom enn i tilfeller av extracapsular forlengelse. GCNT1-negative tumorer var assosiert med signifikant bedre prostata-spesifikt antigen (PSA) -fri overlevelse sammenlignet med GCNT1-positive svulster. Multivariat analyse viste at påvisning av GCNT1 uttrykk var en uavhengig risikofaktor for PSA tilbakefall. Vi etablerte nye metoder for GCNT1 deteksjon fra PCA prøver. Immunoblotting ble brukt til å undersøke post-digital endetarms eksamen (DRE) urin fra PCA pasienter. Over 90% av GCNT1-positive PCA pasienter med høye konsentrasjoner av PSA viste extracapsular forlengelse. I konklusjonen, GCNT1 uttrykk tett forbinder med den aggressive potensialet i PCa. Videre forskning har som mål å utvikle GCNT1 deteksjon i post-DRE urin som en markør for PCa aggressivitet
Citation. Kojima Y, Yoneyama T, Hatakeyama S, Mikami J, Sato T, Mori K, et al. (2015) Påvisning av Core2 β-1,6-
N
-Acetylglucosaminyltransferase i Post-Digital rektal undersøkelse Urin er en pålitelig indikator for Ekstrakapsulær Utvidelse av prostatakreft. PLoS ONE 10 (9): e0138520. doi: 10,1371 /journal.pone.0138520
Redaktør: Ming Tat Ling, Queensland University of Technology, AUSTRALIA
mottatt: 27 april 2015; Godkjent: 01.09.2015; Publisert: 21.09.2015
Dette er en åpen tilgang artikkel, fri for all opphavsrett, og kan bli fritt reproduseres, distribueres, overføres, endres, bygd på, eller brukes av alle for ethvert lovlig formål. Arbeidet er gjort tilgjengelig under Creative Commons CC0 public domain engasjement
Data Tilgjengelighet:. Alle relevante data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering: Japan Society for Promotion of Science (https://www.jsps.go.jp/), Grant-i-Aid for Unge Forskere (B) 24791631 og Grant-i-Aid for Scientific Research (C) 15K10569 (YT); Japan Society for Promotion of Science (https://www.jsps.go.jp/), Grant-i-Aid for Scientific Research (B) 22390301, Grant-i-Aid for Scientific Research (A) 15H02563 og innvilges i-Aid for Utfordrende Utforskende forskning 24659708 (CO); National Institutes Helse Grants UO1 CA168924 (MF); Suzuki Urologiske Research Foundation, forskningsstipend 2014 (YT). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Forkortelser : DRE, digital rektal undersøkelse; GCNT1, Core2 β-1,6-
N
-acetylglucosaminyltransferase-1; HRP, pepperrotperoksidase; mAb, monoklonalt antistoff; PCa, prostatakreft; PSA, prostata-spesifikt antigen; RLU, relative lysenheter
Innledning
I USA og Europa, prostatakreft (PCA) er den vanligste kreftformen hos menn og den nest største årsaken til kreft-relaterte dødsfall [1 , 2]. Forekomsten av PCa er angivelig lavt i asiatiske land [3]. Imidlertid er dens forekomst raskt økende i Asia-Pacific-regionen [4]. Noen av de mest kritiske spørsmål knyttet til PCa i klinisk praksis er overdiagnostikk og overbehandling [5]. Mangelen på spesifisitet av prostataspesifikt antigen (PSA) testing har resultert i en debatt om nytten av PSA-baserte PCa screening [6, 7]. Videre unødvendig behandling for lat PCa med lav malignt potensial er et stort problem, så aggressiv PCa behandling er noen ganger forbundet med bivirkninger. Et lovende alternativ modalitet for å forhindre overbehandling er aktiv overvåking [8]. Imidlertid er identifikasjon av egnede pasienter som er gode kandidater for aggressiv behandling forbundet med vanskeligheter. Til dags dato er det ingen perfekt verktøy for nøyaktig påvisning av god kandidat for aktiv overvåking [9]. Derfor identifisering og validering av biomarkører for PCa aggressivitet er viktig for å hindre PCa overbehandling.
preoperativ serum PSA nivå og biopsi Gleason score er konvensjonelle og kraftige prediktorer av biologiske resultatene etter radikal prostatektomi for PCa [10, 11] . For å bedre risikovurderingen av PCa tilbakefall etter primærbehandling hos pasienter med lokaliserte PCA har mange forskere søkt biomarkører som gjenspeiler den aggressive potensialet PCa [12]. Imidlertid har de fleste rapporterte biomarkører ikke validert for å gi informasjon som er mer nyttig enn det som tilbys av konvensjonelle clinicopathological parametere. Med en ny biomarkør representerer malignitetspotensiale av PCA kan mer nøyaktig prediksjon av PSA tilbakefall og passende behandling valg være mulig.
Cell overflatekarbohydratstrukturer endres under kreftutvikling og spiller viktige roller i kreft metastase [13, 14 ]. Tilstedeværelsen av sialyl Lewis X, som er en av de funksjonelle terminalstrukturen, på celleoverflaten av kolorektal kreft er positivt korrelert med dårlig prognose [15]. På en lignende måte, høy Gleason scorer prostatakreft prøver uttrykt sialyl Lewis X [16]. Forgreninger glykan har økt et funksjonelt terminalstruktur, og en bindingsaffinitet for spesifikke lektiner [17]. I forrige undersøkelse, mannosylaglykon (alfa-1,6 -) – glykoprotein β -1,6-
N
acetyl-glucosaminyltransferase (MGAT5) og Core 2 β -1, 6-
N
-acetylglucosaminyltransferase-en (GCNT1) dannet GlcNAc β1,6 forgrening sukker økt PCa aggressivitet [18, 19].
GCNT1 [20, 21] er et viktig enzym som syntetiserer core 2-forgrenet
O
-glycans av kata overføring av
N
-acetylglucosamine fra uridine diphosphate-
N
-acetylglucosamine med en β1, 6-kobling til a-
N Anmeldelser – acetylgalactosamine av en kjerne en
O
-glycan (fig 1A). En tidligere studie analysert
GCNT1
mRNA uttrykk i friske kolorektal kreftprøver og viste at uttrykket av kjerne 2-forgrenet
O
-glycans er nært korrelert med malignt potensial for tykktarmskreft [22]. Dette gjelder også for pulmonal adenokarsinom [23]. I immunhistokjemi ved hjelp av et polyklonalt antistoff [21], demonstrerte vi at GCNT1 uttrykket er nært beslektet med den aggressive potensialet av PCa [18], testikkelkreft [24], og blærekreft [25]. I fersk undersøkelse, en genekspresjon utvalg viste GCNT1 ble overuttrykt i prostatakreft vev [26]. Imidlertid er etablering av et monoklonalt anti-GCNT1 antistoff avgjørende for videre forskning, inkludert valideringsstudier for å belyse den kliniske nytten av GCNT1 som en biomarkør.
(A) Biosyntetiske trasé for
O
-glycans. (B) PCA prøver ble inkubert med et anti-Core 2 β-1,6-
N
-acetylglucosaminyltransferase-1 (GCNT1) monoklonalt antistoff (mAb), etterfulgt av et pepperrot-peroksidase (HRP) -konjugert sekundært antistoff . Kontra ble utført ved hjelp av hematoxylin. GCNT1-positive kreftceller er brune. (C) prostataspesifikt antigen overlevelse periodene ble sammenlignet mellom GCNT1-positive og GCNT1-negative prøver. Overlevelse ble analysert ved hjelp av Kaplan-Meier-kurver.
Her hevet vi et monoklonalt antistoff (mAb) mot GCNT1 ved immunisering av en mus med GCNT1 bestemt peptid (S1 File) for å vurdere potensialet i det siste som en indikator på PCa aggressivitet. I denne studien viste vi at anti-GCNT1 mAb viste høy spesifisitet mot humant GCNT1 og at GCNT1 uttrykk i PCA prøver fra radikal prostatektomi korrelerer med PCa aggressivitet. I tillegg påvisning av GCNT1 i post-digital endetarms eksamen (DRE) urin av anti-GCNT1 mAb spådd extracapsular forlengelse av PCa. Derfor kan påvisning av GCNT1 i post-DRE urin tjene som en minimal invasiv metode for å forutsi PCa aggressivitet.
Materialer og metoder
Material
ISOGEN II Reagens ble kjøpt fra Nippon Gene (Japan). En renset kanin anti-muse-IgG-antistoff (γ-kjede spesifikk) ble kjøpt fra Zymed. En pepperrot-peroksidase (HRP) -konjugert geite-anti-kanin IgG (H + L) antistoff og et HRP-konjugert geite-anti-muse-IgG-antistoff ble kjøpt fra Cell Signaling Technology. Et HRP-konjugert geite-anti-muse-IgG-antistoff ble anskaffet fra Millipore. Renset mus myelomprotein fra MOPC 21 (IgG, κ), ble 2-merkaptoetanol, og bovint serumalbumin (BSA) innkjøpt fra Sigma-Aldrich. Tween-20 ble anskaffet fra Wako Pure Chemicals (Japan), som var DMEM og Hams F12-medium. Penicillin G /streptomycin løsning var fra Hyclone. Precision Plus Protein standarder Dual Color var fra Bio-Rad, og skummet melk var fra Yukijirushi (Japan).
Cells
kinesisk hamsterovarie (CHO-celler) ble opprettholdt i alpha modifikasjon av Eagles minimum essensielt medium (α-MEM) supplert med 100 U /ml penicillin, 100 ug /ml streptomycin og 10% føtalt bovint serum (FBS).
Immunhistokjemisk analyse av PCa eksemplarer
Mellom 2005 og 2011 ble 250 PCA pasienter behandlet med radikal prostatektomi ved Institutt for Urologi, Hirosaki Universitetet Graduate School of Medicine, Hirosaki. Tumorstykkene ble formalin-fiksert og innstøpt i parafin. Deparaffinized prøver ble inkubert med 5 pg /ml av muse-anti-human GCNT1 mAb (klon HU127), etterfulgt av inkubasjon med HRP-konjugert geite-anti-muse-IgG-antistoff (H + L; Millipore).
Immunoblotting analyse av post-DRE urinprøver
Post-DRE urin ble fylt i 50 ml koniske rør, fryses øyeblikkelig, og lagret ved -80 ° C inntil analyse. Post-DRE urinprøver ble samlet inn fra 35 pasienter som gjennomgikk radikal prostatektomi 2010-2013 ved Institutt for Urologi, Hirosaki Universitetet Graduate School of Medicine, Hirosaki. Frosne prøver ble tint over natten ved 4 ° C og kort sentrifugert (5000 x
g
, 5 min) for å separere supernatanten og faste stoffer. Femti mikroliter av supernatanten ble oppdaget på en nitrocellulosemembran. Membranen festes med post-DRE urin-protein ble inkubert med et anti-GCNT1 mAb (HU127), etterfulgt av et HRP-konjugert sekundært antistoff. Signaler som representerer GCNT1 ble enzymatisk påvises ved å bruke Novex® ECL kjemiluminescenssubstrat Reagent Kit (Life Technologies) og visualisert i en ChemiDocXRS + System (Bio-Rad). Signalgjennomsnittsverdiene ble målt ved bilde Lab programvare (Bio-Rad). Mengde GCNT1 uttrykk ble beregnet på grunnlag av signalmiddelverdier av rekombinant humant GCNT1 (R Godkjenningsnummer: 2014-195). Studien ble utført i henhold til de etiske standardene i Helsinkideklarasjonen.
Stadier og gradering av svulster
Alle pasientene ble preoperativt vurdert ved bruk DRE, serum PSA-testing, bein skanning, bekken beregnede tomografi, og transrectal ultralyd. Ved hjelp av en 18-G kanyle ble 6-12 prostata nålebiopsi prøver oppnådd under ultralyd veiledning. Staging ble utført ved hjelp av 2002 amerikanske Joint Committee on Cancer Staging Manual [27], mens Gleason gradering systemet ble brukt for svulst gradering [28].
PSA måling og oppfølgings
serum PSA nivå ble bestemt med IMx (Abbott Laboratories, Abbott Park, IL). Postoperative PSA nivåer ble ansett for å være økt (PSA tilbakefall) hvis de var ≥ 0,2 ng /ml i løpet av to påfølgende besøk i en 1-måneders intervall. Tid null ble definert som dagen for kirurgi. Pasienter med stadig påvisbare PSA nivåer ( 0,001 ng /ml) etter operasjonen ble registrert som tilbakefall ved tid null. Oppfølgings intervaller ble beregnet fra datoen for operasjonen til den siste innspilte oppfølging (median, 48,4 måneder, utvalg, 13.2-82.9 måneder).
Statistisk analyse
chi-squared test ble brukt til å analysere sammenslutningen av GCNT1 status med kliniske og histopatologiske parametre. PSA-overlevelse ble evaluert med Kaplan-Meier-kurver og forskjeller mellom gruppene ble vurdert ved hjelp av log-rank test. Vi brukte SPSS 21.0 programvarepakken (SPSS, Chicago, IL) for alle statistiske analyser. Optimal PSA og GCNT1 uttrykk cut-off-verdier ble beregnet ved hjelp av følgende formel: cut-off = (1 – sensitivitet)
2 + (1 – spesifisitet)
2 [29, 30]
Resultater
GCNT1 uttrykk ved PCA positivt korrelerer med kreft progresjon og PSA tilbakefall
for å bekrefte antistoff spesifisitet for GCNT1, ble en mus anti-human GCNT1 antistoff renset fra hybridomsupernatant. Doseavhengig binding til mus anti-human GCNT1 mAb (klon HU127) til immobilisert rekombinant human GCNT1 (rhGCNT1) ble påvist ved anvendelse av HRP-konjugert geit-anti-mus-IgG i en enzymbundet immunosorbent analyse (ELISA) (S1A Fig). I fravær av immobilisert rhGCNT1, binding ingen antistoff ble observert (S1B fig). Ved immunblotting-analyse, den HU127 anti-humant mAb GCNT1 bundet spesifikt til rhGCNT1, men ikke for å rhGCNT3 (S1C Fig). HU127 anti-humant mAb GCNT1 også spesifikt påvises transient ekspresjon av GCNT1 i CHO-celler (S1D og S1E Fig). I tilfelle av HU127 anti-humant mAb GCNT1 forblandet med GCNT1 peptid-antigen før inkubering av immunhistokjemi og immunblotting, ble GCNT1 signalene redusert (S1F og S1G Fig). Resultatene har også antydet at HU127 anti-human GCNT1 mAb holdt høy spesifisitet mot GCNT1.
For å vurdere rollen til GCNT1 ved PCA progresjon, ble PCA prøvene analysert ved immunhistokjemi hjelp av HU127 anti-human GCNT1 mAb. Resultatene viste at GCNT1 ble svakt uttrykt i friske prostatakjertler. I motsetning til noen prosent av PCA-celler uttrykte betydelige nivåer av GCNT1 (figur 1B). Når sammenstilt med disse kriteriene, eksemplarer PCa fra 250 pasienter utstilt forskjellige kliniske parametre (S1 Table). GCNT1 uttrykk i prostatektomi prøver positivt korrelert med den postoperative Gleason score. Over 80% av vevsprøver med extracapsular forlengelse av PCa (pT3 og pT4) uttrykte GCNT1, og GCNT1-positive tumorer var betydelig større enn GCNT1-negative tumorer (S2 Table).
Som vist i figur 1C, GCNT1 -positive pasienter var på betydelig høyere risiko for PSA tilbakefall etter radikal prostatektomi. Ifølge multivariat analyse, PSA nivåer, margin status, og GCNT1 uttrykk i svulsten ble uavhengige risikofaktorer for PSA tilbakefall (tabell 1).
Påvisning av GCNT1 i post-DRE urin fra PCA pasienter kan prediksjon av extracapsular forlengelse av PCa
for å etablere en semi-kvantitativ høy gjennomstrømming skjermen for GCNT1 uttrykk, post-DRE urinprøver, som inneholder høye konsentrasjoner av PCA proteiner, ble analysert ved dot-blotting metode bruker anti-humant GCNT1 antistoff (figur 2). Prediksjon av extracapsular forlengelse av PCa er en god prediktor for PSA tilbakefall (S2 fig). Den første PSA-nivå og GCNT1 uttrykk var sterkt korrelert til extracapsular forlengelse av PCa i en logistisk regresjonsanalyse (tabell 2). De optimale cut-off verdier for PSA og GCNT1 uttrykk nivåer ble bestemt til å være 7,52 ng /ml og 79,36 pg /mg av mottakeren-operatør karakteristikk for prediksjon av extracapsular forlengelse av PCa ved hjelp av følgende formel: cut-off = (1 – følsomhet)
2 + (1 – spesifisitet)
2 [29, 30] (figur 3A-3C). Basert på disse clinicopathological parametre, etablerte vi følgende gjentakelsesrisiko lagdelinger: dobbel negativ risiko (PSA 7,52 ng /ml, GCNT1 79,36 pg /mg), én positiv risiko (PSA 7,52 ng /ml eller GCNT1 79,36 pg /mg) og dobbel positiv risiko (PSA 7,52 ng /ml og GCNT1 79,36 pg /mg). Over 90% av pasientene dobbelt positiv risiko hadde extracapsular forlengelse av PCa i denne risikovurderingen (figur 3D). Disse resultatene indikerer at en høy PSA konsentrasjon og GCNT1 uttrykk i post-DRE urin er gode prediktorer for extracapsular forlengelse av PCa.
(A) Post-digital rektal undersøkelse urinprøver ble samlet inn og (B) sentrifugeres. (C) Supernatanter ble samlet opp og prikket inn på en nitrocellulosemembran. (D) Core 2 β-1,6-
N
-acetylglucosaminyltransferase-1 (GCNT1) ble oppdaget av et anti-GCNT1 monoklonalt antistoff, etterfulgt av et pepperrot-peroksidase (HRP) -konjugert antistoff. (E) Etter behandling med en chemiluminescence reagens ble GCNT1 signal registrert av en ChemiDoc + system.
(A) Prostata-spesifikt antigen (PSA) konsentrasjon og (B) Core2 β-1,6 –
N
-acetylglucosaminyltransferase-en (GCNT1) uttrykk nivåer var signifikant høyere i prostatakreft (PCA) pasienter med extracapsular forlengelse enn hos pasienter med organ begrenset sykdom. (C) Mottaker-operator karakteristisk kurve analyse av PSA og GCNT1 avslørte at arealet under kurven av PSA var 0,7455 og GCNT1 var 0,7614. (D) Risikostratifisering ble etablert ved hjelp av PSA og GCNT1 å forutsi utfallet av lokale PCa. Double negative (DN) -risk (PSA 7,52 ng /ml, GCNT1 79,36 pg /mg), én positiv (SP) -risk (PSA 7,52 ng /ml eller GCNT1 79,36 pg /mg) og dobbel positive (DP) -risk (PSA 7,52 ng /ml og GCNT1 79,36 pg /mg) pasienter sammenlignes
Diskusjoner
Aberrant glykosylering av cellen. overflate glykoproteiner spiller en viktig rolle i kreft initiering, spredning, invasjon og metastase [31-33]. Biosyntesen av oligosakkarider på glykoproteiner er utført i konsert med flere glycosyltransferases. Den funksjonelle terminalstrukturen som sialy Lewis X (SLEX) og sialyl lewis A (Slea) er også dannet av glycosyltransferases [16, 34]. Den SLEX og slea, som ble kjent ligand av karbohydrat-bindende proteiner, er nært beslektet med metastase [35]. Ikke bare Sle antigener, men også interne strukturer, spesielt GlcNAc beta1,6 forgrening strukturer og polylactosamines, er nært knyttet til kreft [22, 31]. GCNT1 er en av de glycosyltransferases som danner kjernen 2
O
-glycans på overflaten av lymfocytter og forskjellige kreftceller [18, 24, 36, 37]. Tidligere ble det rapportert at GCNT1 ekspresjon er assosiert med metastatisk potensial av tykktarmskreft [22], lungecancer [23], testikkelkreft [24] og PCa [18]. Det har også blitt rapportert at GCNT1-uttrykkende kreftformer kan unnslippe vertens immunrespons [25, 38], spesielt fra verts naturlige dreperceller som bindes til galectin-3 på kjernen 2-forgrenings
O
-glycans [25 , 38].
Denne studien etablert en mAb mot GCNT1 og evaluert sitt potensial som en indikator på PCa aggressivitet. Immunhistokjemisk analyse av radikal prostatektomi prøvene viste at GCNT1 uttrykk på PCA celler nært knyttet til extracapsular forlengelse av PCa (fig 1). Videre pasienter med GCNT1-positive PCa utstilt verre PSA overlevelse sammenlignet med pasienter med GCNT1-negative tumorer (figur 1). Disse resultatene indikerer at GCNT1 uttrykk sterkt korrelerer med den maligne potensial av PCa.
Selv om immunhistokjemi gitt mye informasjon om protein ekspresjon i PCa, analysen var ikke kvantitativ. Ved hjelp av post-DRE urin, etablert vi en semi-kvantitativ og high-throughput screening for den maligne potensial av PCa (figurene 2 og 3). Nyere studier har rapportert at prostatakreft antigen tre og en TMPRSS2: ERG fusjon var to av de mest nyttige indikatorer på PCa. Disse markørene ble fokusert på potensielle PCa screening og tidlig oppdagelse av PCa [39]. Prostatakreft antigen 3 og TMPRSS2: ERG fusjon nesten rapportert PCR-basert studie og presentere ikke tilstrekkelig biologisk bevis for PCa aggressivitet. Vi rapporterte også at påvisning av avvikende glykosylering av PSA forbedret PCa screening, men ikke forutsi PCa aggressivitet [40]. I denne studien ble GCNT1 uttrykk i post-DRE urin korrelert med extracapsular forlengelse av PCa. Videre kan en kombinasjon av første PSA konsentrasjon og GCNT1 uttrykk forutsi ekstrakapsulær forlengelse på over 90% av PCa. Derfor GCNT1 deteksjon i post-DRE urin bedre prediksjon av PCa invasivitet.
Fordi GCNT1 er ikke en kreftspesifikke proteinet, uttrykket var uegnet for PCa screening. Derfor kan en kombinasjon av rapporterte PCA screening markører og GCNT1 forbedre utviklingen av terapeutiske strategier for PCa. Selv om mekanismen for GCNT1 drevet regulering i progresjon av kreft er dårlig forstått, vår undersøkelse viser at GCNT1 kan være en prediktor for malignitetspotensiale av PCa. Ytterligere klinisk forskning er nødvendig for å avgjøre nytten av GCNT1 som en biomarkør for PCa.
Hjelpemiddel Informasjon
S1 Fig. Fremstilling av en anti-human kjerne 2 β-1,6-
N
-acetylglucosaminyltransferase-1 monoklonalt antistoff. Product: (A) Binding av Core2 β-1,6-
N
-acetylglucosaminyltransferase-1 (GCNT1)-spesifikke antistoffer. Kultursupernatanter ble fremstilt fra HU127 hybridomceller. Binding av anti-humant GCNT1 monoklonalt antistoff (mAb, blå linje) eller IgG myeloma MOPC 21 (kontroll, orange linje) til immobilisert rekombinant human GCNT1 på en konsentrasjonsavhengig måte (abscisse) ble påvist ved anvendelse av et pepperrot-peroksidase (HRP) – konjugert anti-muse-IgG-antistoff. Feilfelt angir standardavviket tredoble målinger. Konsentrasjoner av antistoff i supernatantene ble bestemt ved anvendelse av en sandwich ELISA. Resultatene er representative for to eksperimenter. (B) Et anti-human GCNT1 mAb gjenkjente immobilisert rekombinant humant GCNT1, men ikke BSA. (C) For å bekrefte anti-humant mAb GCNT1 spesifisitet, rekombinant, humant GCNT1 og GCNT3 ble analysert ved hjelp av elektroforese (SDS-PAGE) og overført til en PVDF-membran. Den anti-human GCNT1 mAb spesifikt gjenkjent GCNT1, men ikke GCNT3. (D) Immunoblotting og (E) immunocytochemistry avslørte anti-humant mAb GCNT1 også spesifikt gjenkjent GCNT1 i GCNT1-overuttrykt CHO-celler. Peptide inhibisjonsanalyse for (F) IHC og (G) dot-blottingsmetoder avslørte GCNT1 signalene ble inhibert av GCNT1 antigen peptid forbehandlet anti-humant mAb GCNT1
doi:. 10,1371 /journal.pone.0138520.s001
(TIF)
S2 fig. Ekstrakapsulær forlengelse av prostatakreft var en av de sterk prediktor av prostataspesifikt antigen tilbakefall.
Prostataspesifikt antigen overlevelse periodene ble sammenlignet mellom organ begrenset sykdom (pT2) og extracapsular forlengelse (pT3 og pT4). Overlevelse ble analysert ved Kaplan-Meier-kurver
doi:. 10,1371 /journal.pone.0138520.s002 plakater (EPS)
S1 fil. Supplerende materialer og metoder
doi:. 10,1371 /journal.pone.0138520.s003 plakater (docx)
S1 Table. . Core2 β-1,6-
N
-acetylglucosaminyltransferase-en status og pasientdata
doi: 10,1371 /journal.pone.0138520.s004 plakater (docx)
S2 Table. . Core2 β-1,6-
N
-acetylglucosaminyltransferase-en status og patologiske parametere
doi: 10,1371 /journal.pone.0138520.s005 plakater (docx)
S3 Table. Pasientdata av post-digital rektal undersøkelse urinprøver
doi:. 10,1371 /journal.pone.0138520.s006 plakater (docx)
bekreftelser
Forfatterne takker Dr. Shigeru Tsuboi for nyttige diskusjoner.
