Abstract
Bakgrunn
Hensikten med denne studien var å vurdere den biologiske funksjonen i tumorprogresjon og metastatisk prosess carcinoembryonic antigen relaterte celleadhesjonsmolekyler (CEACAM) 1, 5 og 6 i bukspyttkjertelen adenokarsinom (PDAC).
Experimental design
CEACAM slå ned celler ble etablert og vurderes in vitro og i en subkutan og intraperitoneal mus xenograft modell. Vev og serum uttrykk for pasienter med PDAC ble vurdert ved immunhistokjemi (IHC) og av enzymbundet immunosorbentanalyser.
Resultater
Tilstedeværelse av lymfeknutemetastase ble korrelert med CEACAM 5 og 6 uttrykk (bestemt ved IHC) og tumorresidiv utelukkende med CEACAM 6. Pasienter med CEACAM 5 og 6 uttrykk viste en betydelig forkortet OS i Kaplan-Meier overlevelsesanalyser. Forhøyet CEACAM6 serumverdiene viste en sammenheng med fjernmetastaser og. Survival analyse viste en langvarig OS for pasienter med lavt serum CEACAM 1 verdier. In vitro proliferasjon og migrering kapasiteten ble øket i CEACAM knock down PDAC celler, men mus inokulert med CEACAM knock down-celler viste en forlenget total-overlevelse (OS). Antallet spontan lungemetastaser ble økt i CEACAM slå ned gruppen.
Konklusjon
Effektene mediert av CEACAM uttrykk i PDAC er komplekse, men overekspresjon er korrelert med lokoregionalt aggressiv tumorvekst . Imidlertid kan tap av CEACAM betraktes som en del av epitelial-mesenchymale overgang og er derfor ganske viktig i prosessen med fjernmetastaser
relasjon:. Gebauer F, Wicklein D, Horst J, Sundermann P, Maar H, Streichert T, et al. (2014) carcinoembryonic Antigen-Related celleadhesjonsmolekyler (CEACAM) 1, 5 og 6 som biomarkører i kreft i bukspyttkjertelen. PLoS ONE 9 (11): e113023. doi: 10,1371 /journal.pone.0113023
Redaktør: Aamir Ahmad, Wayne State University School of Medicine, USA
mottatt: 22 juli 2014; Godkjent: 20 oktober 2014; Publisert: 19.11.2014
Copyright: © 2014 Gebauer et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. Den forfatterne bekrefter at alle data som underbygger funnene er fullt tilgjengelig uten restriksjoner. Alle relevante data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering:.. Forfatterne har ingen støtte eller finansiering for å rapportere
Konkurrerende interesser:. Forfatterne hevder at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
i de siste årene, prognosen for pasienter som lider av bukspyttkjertel duktalt adenokarsinom (PDAC) har ikke bedret seg betydelig [1], [2]. De fleste pasienter til stede med avanserte kreft stadier gjør kurativ behandling umulig. Komplett kirurgisk reseksjon, etterfulgt av adjuvant kjemoterapi er i dag gull-standard i terapi av PDAC. Men selv i pasienter etter fullstendig kirurgisk reseksjon tumor, forblir dårlig med en median overlevelsestid på 20-24 måneder total overlevelse [3] – [5]. Aggressiv lokoregionalt tumorvekst i tillegg til tidlig fjernt og peritoneal metastasering og en høy grad av chemoresistance gjøre PDAC en av de mest dødelige gastrointestinale svulster [6].
I dag, verken pålitelig serum eller vev markører forutsi den kliniske løpet av pasienter etter diagnose av PDAC er tilgjengelige. Videre er de molekylære interaksjoner av svulsten med verten og de lokale faktorer som gjør at PDAC å vise en slik aggressiv progresjon dårlig forstått. Det er derfor et viktig behov for en bedre forståelse av tumorbiologi med hensyn til mekanismene for lokal tumorinvasjon og tilbakefall.
Carcioembryonic antigen-relaterte celleadhesjonsmolekyler (CEACAMs) er medlemmer av den glykosylfosfatidylinositol (GPI ) -koblet immunoglobulin (Ig) super [7]. Det er mer enn 17 gener som hører til denne familien, med sine genprodukter i hovedsak integrert i cellemembranen. Innenfor familien CEACAM de CEACAM subtypene er strukturelt lik og fysiologisk uttrykt på den apikale overflate av mange celletyper, f.eks endoteliale og hematopoetiske celler, så vel som epitelceller hos forskjellige organer. Avhengig av celletypen og CEACAM subtype, den utsendte effekt etter binding en viss partner varierer, inkludert regulering av celleadhesjon, tumor suppresjon, angiogenese, aktivering av leukocytter og andre immunreaktive celler, og regulering av cellesyklusen [8] – [11]. Den CEACAM 5 genet, har sin produkt også kjent som CD66e koder for carcioembryonic antigen (CEA) og bli en av de mest kjente medlemmer av Ig-super siden den har en betydelig rolle i den kliniske rutinen som en svulst markør for flere tumor enheter inkludert gastrointestinal og luftveis maligniteter [12]. Men på grunn av manglende sensitivitet og spesifisitet dens prediktiv verdi alene er fremdeles utilfredsstillende [13] – [16]. De CEACAM subtyper 1 og 6 er beskrevet til å være under- eller overuttrykt i flere tumortyper som lungekreft, tykktarmskreft og melanom [17] – [23]. Selv overekspresjon er allment observert noen studier selv rapporterer redusert uttrykk i visse kreft enheter på ulike kreft stadier.
Interessant, nyere studier funnet CEACAM 1 og 6 uttrykk i primær PDAC korrelert med en forkortet total pasient overlevelse [24 ], [25]. De biologiske prinsipper hvorfor CEACAM uttrykk formidler mellomtumorprogresjon er ikke fullt ut forstått. Vi analyserte derfor effekten av CEACAM 1, 5 og 6 in vitro og etablert en xenograft musemodell for å undersøke den funksjonelle rollen til CEACAM ekspresjon i PDAC. For å vurdere om CEACAM uttrykk har en innvirkning på tumorprogresjon hos pasienter, kombinert vi serum og immunhistokjemisk analyse for CEACAM molekyler 1, 5 og 6 for å analysere om det er en sammenheng av CECACM uttrykk med klinisk-pathologcial data for pasienter med PDAC.
Materiale og metode
Cell linje og CEACAM slå ned
Den menneskelige bukspyttkjertelen adenokarsinom cellelinje Paca 5061 ble etablert fra en primærtumor. Detaljerte egenskaper ved etablering og kultur av cellelinjen er blitt beskrevet tidligere [26]. Kort fortalt celler ble oppnådd fra en pasient med en PDAC som gjennomgikk kirurgisk reseksjon ved Institutt for General, visceral og Thoracic Surgery ved University Medical Center Hamburg-Eppendorf. Den endelige svulst klassifisering i henhold til UICC 7
utg. avdekket en pT3, N1, L1, V1, R0, G2 PDAC av bukspyttkjertelen hodet.
CEACAM slå ned varianter ble utført av shRNA interferens som beskrevet tidligere [27]. Oligonukleotider ble klonet inn i en pSIREN-RetroQ vektor og transfektert med Fugene transfeksjon agenter (Roche Diagnostics, Hilden) med kreftceller. Valg av slå ned kloner ble utført av uttrykk for en puromycin chemoresistance (Clontech, Saint-Germain-en-Laye, Frankrike) og flow-cytometer sortering (FACS-LSR Fortessa, BD Bioscience, San Jose, USA). Kun celler med et knock down av 90%, som bestemt ved strømningscytometri, ble brukt for in vitro og in vivo eksperimenter. -Konjugerte antistoffer mot CEACAM 1, 5 og 6 og det tilsvarende mus-IgM eller biotinylert rotte-IgM-isotype kontroll (Dako, Glostrup, Danmark) ble detektert med geit anti-mus Ig-APC (BD Biosciences). Celler ble analysert ved hjelp av en CyFlow cytometer (Partek, Münster, Tyskland) med påfølgende tillegg av AlexaFluor488 konjugert streptavidin (Invitrogen) før farging.
In vitro karakterisering av CEACAM slå ned celler
Celleproliferering ble vurdert ved kolo XTT analysen (Roche Diagnostics, Basel, Sveits) i henhold til produsentens instruksjoner. Celler ble sådd ut i 96-brønners plater ved 3000 celler /brønn. Etter 48 timer for å tillate cellene skulle vedhefte, ble celler inkubert med kolorimetriske substrater. Kolorimetriske endringer ble målt i en multi-brønn spektrofotometer (MR5000 multiplaterør Reader, Dynatech, Denkendorf, Tyskland).
Forskjeller i cellemigrasjon ble vurdert ved hjelp FluoroBlok Migration analysen (BD Biovitenskap, San Jose, USA) med 24- vel 8 micron porestørrelse innsatser. Cellene ble trypsinisert og resuspendert i serumfritt RPMI1640 (Invitrogen, Darmstadt, Tyskland) i en konsentrasjon på 300.000 celler /ml. 400 ul cellesuspensjon ble tilsatt til den apikale kammeret og 800 ul RPMI 1640 med 10% føtalt kalveserum (FCS, Invitrogen) ble tilsatt til bunnkammeret. Analysen ble inkubert i 24 timer under standard-celledyrkningsbetingelser.
Etter fjerning av chemo tiltreknings av bunnkammeret, visualisering av migrerte celler ble utført ved å tilsette 500 ul /brønn HBSS-buffer med Calcein AM (Invitrogen) 4 ug /ml i den nedre brønnen og inkubering i 1 time. Timer ble utført ved 494/517 nm (Ex /Em) på en GENIOS bunn lesing fluorescens plateleser (Tecan, Männedorf, Swizerland).
laminær eksperimenter ble utført ved hjelp av IBIDI microslides VI (IBIDI, München, Tyskland) forbundet med en sprøytepumpe (modell 100-serien, kdScientific, Holliston, MA) og celle bevegelse ble observert med et invertert mikroskop (Zeiss, Jena, Tyskland; Axiovert 200). Tumorceller ble suspendert i cellekulturmedium (20 ml, 200 000 celler /ml) og microslides ble belagt med human pulmonal Mikrovaskulær endotelceller (HPMEC) (PromoCell, Heidelberg, Tyskland). HPMEC ble suspendert i cellekulturmedium, sådd i microslides ved en konsentrasjon på 5 x 10
5 celler /ml og 20 ul medium med celler ble pipettert inn i hver strømningskanal. Celle ble konfluent over natten under standardbetingelser. Anvendt skjærhastigheter varierte fra 0,05 dyn /cm
2 til 10,0 dyn /cm
2. Cell bevegelsen ble registrert og analysert med hensyn til kvaliteten på bevegelsen (adhesjon, rullende og tilknytning) og rullende hastighet ved hjelp CapImage 8.5 programmet (Dr. Heinrich Zeintl, Heidelberg, Tyskland).
Dyreforsøk
dyreforsøk ble gjennomført i henhold til de UKCCR retningslinjer for dyrevelferd i eksperimentell neoplasi [28], lokalbefolkningen etiske komité for dyreforsøk (Behörde für Soziales, Familie, Gesundheit, Verbraucherschutz; Amt für Gesundheit und Verbraucherschutz;. Billstr 80 , D-20539 Hamburg, Tyskland, prosjekt nr G58 /09) og i tillegg den institusjonelle dyrevelferd offiser ved University Medical-Center anbefalt og godkjent studiet.
for subkutan tumormodell, millioner Paca 5061 tumorceller ble injisert i høyre skulderblad regionen i 8-12 uker gamle C57BL /6N PfP
– /- /rag2
– /- dobbel-knockout mus. Dyrene ble avlivet når primære svulster overskredet 2 cm
3 eller sårdannelse musen huden, mus var terminalt narcotized og ofret av cardiocentesis.
For vurdering av påvirkning av CEACAM uttrykk på peritoneal formidling, vi etablert en intraperiteoneal tumormodell som tidligere beskrevet [29]. Kort sagt ble en million tumorceller injisert i den nedre venstre kvadrant abdominal intraperitonealt i suspensjon volum på 200 ul. Vurdering og tidspunkter for avslutning av forsøket ble gjennomført i henhold til en tidligere etablert scoring system. Vurdering av forlenge av intraperitoneal tumorvekst ble utført med en modifisert peritoneal karsinomatose indeks (PCI) som tidligere beskrevet [30]. I korthet er det peritoneale hulrom delt i 9 Mage-bekken områder, avhengig av forlenge av tumorveksten, er score mellom 0 og 3 poeng tilordnes (0 poeng: ingen svulst er tilstede; 1 poeng: tumor mindre enn 1 mm
3 ; 2 poeng: svulst 1 og 3 mm
3, 3 poeng: tumor 3 mm
3) som fører til en PCI score fra 0 til 27.
Kvantifisering av lungemetastaser, spres tumorceller (DTC) og CTC av Alu-PCR
Den venstre lungene ble homogenisert i en prøve disruptor (TissueLyser II, Qiagen, Hilden, Tyskland) og utsatt for DNA-isolering (QIAamp DNA Mini Kit, Qiagen). Benmargs ble samlet ved å spyle venstre lårben med 1 ml NaCl 0,9%. 200 ul blod og benmarg suspensjoner ble underkastet DNA-isolering ved hjelp av QIAamp DNA Blood Mini Kit.
DNA konsentrasjoner av alle prøvene ble kvantifisert ved anvendelse av et Nanodrop spektrofotometer (Peqlab, Erlangen, Tyskland). Ettersom innholdet påvisbare Alu-sekvenser i følgende qPCR ville blitt påvirket bare ved varierende DNA-konsentrasjoner, alle lunge- og benmarg-DNA-prøver ble normalisert til 30 ng /mL bruker AE buffer (Qiagen). Konsentrasjonene av blod-DNA var ganske lik i alle prøver (ca. 10 ng /mL), og ble derfor ikke normalisert. qPCR ble utført med etablerte menneskespesifikke Alu-primere [31]. 2 ul total DNA (dvs. 60 ng lunge /benmarg-DNA, 20 ng blod-DNA) ble benyttet for hver qPCR. Numeriske data ble bestemt mot en standard kurve som beskrevet [32]. Deteksjonsgrensen for spesifikke menneskelige Alu-sekvensen signaler ble bestemt for hver vevstype ved å teste DNA fra fem friske (ikke-injisert) PfP
– /- /rag2
– /- mus av samme kjønn og alder. For hver prøve, analyser ble utført i duplikater og som uavhengige eksperimenter minst to ganger.
Pasienter og kirurgiske prosedyrer
Mellom 1992 og 2009, alle pasienter som gjennomgikk større resectional bukspyttkjertelen kirurgi ved Institutt for general, Visceral og Thoracic Surgery ved University Medical Centre Hamburg-Eppendorf ble inkludert i en prospektiv, bukspyttkjertelen database. Studien ble godkjent av etikkomiteen av Chamber of Physicians i Hamburg, Tyskland. Skriftlig samtykke for bruk av prøver for forskningsformål ble innhentet fra alle pasienter før operasjon eller blodprøvetaking.
Pasienter med PDAC av bukspyttkjertelen hodet regionen rutinemessig gjennomgikk enten delvis pancreatoduodenectomy (PD) eller pylorus bevar duodenopancreatectomy (PPDP ) og organbevar reseksjon metoder i tilfeller av kronisk pankreatitt (CP). Kun pasienter med makroskopisk fullstendig tumor reseksjon ble inkludert i den endelige analysen. I sykehus dødelighet ble definert som død når som helst i løpet av hele perioden av sykehusinnleggelse. Oppfølging informasjonen ble hentet fra vår institusjonens poliklinikk, fra de aktuelle allmennlegekontorer, eller fra regional kreftregister. Når datoen for død ikke ble registrert, ble pasientene sensurert i siste innspilte kontakt.
Tissue micro array konstruksjon og immounohistochemistry
Tissue kjerner ble innhentet fra formalinfiksert parafin-embedded (FFPE) vevsblokker fra pasienter med patologisk påvist PDAC. Representative områder av tumoren ble valgt basert på hematoksylin-eosin-farging
TMA konstruksjonen ble utført som tidligere beskrevet [33] -. [35]. Kort sagt ble 252 vev sylindere med en diameter på 0,6 mm utstanset fra «donor» vevsblokker ved hjelp av en spesiallaget halvautomatisk robotpresisjonsinstrument og er lagt inn i en parafin blokk som inneholdt de 252 individuelle prøver. Innenfor disse prøvene, var det 142 PDACs, 40 nevroendokrine pankreastumorer (netto), 33 intraductal papillær mucinous svulst (IPMN), og 37 prøver av friskt vev som en negativ kontroll. De resulterende TMA blokker ble brukt til å produsere fire-mikrometer seksjoner som ble overført til et lysbilde system lim-belagt (Instrumedics Inc., Hackensack, New Jersey, USA).
immunhistokjemiske fargingsprotokoller ble optimalisert på ulike godartet og ondartet vev i et omfattende flertrinns prosedyre som modifisert fargingen protokollen til ønsket selektiv farging ble oppnådd med den lavest mulige bakgrunnssignalet (i henhold til [36]).
Snittene ble deparaffinized og tørket over natten ved 37 ° C . Antigen gjenfinning ble utført ved mikrobølgeovnen behandling i citrat-buffer (pH 6,0) i 1 min ble snittene deretter rehydratisert i Tris-bufret saltvann (TBS; 0,05 M Tris-HCl ved pH 7,6 og 0,15 M NaCl) og blokkert med kanin AB-serum (Biotest Diagnostics, Dreirach, Tyskland) fortynnet 1:10 i TBS i 60 minutter. CEACAM farging ble utført ved anvendelse av et spesifikt CEACAM monoklonalt antistoff (klon CEACAM1 4d1 /C2 IgG2a, in-house-klon (som tidligere beskrevet av [37]) i en fortynning på 1:200, CEACAM5 klon # 2383 lgG1 i en fortynning på 1:50 (Cell Signaling, Beverly, USA); CEACAM6 klone IgG1 (9A6), ved en fortynning på 1:40 [Sigma Aldrich, Hamburg, Tyskland]) over natten ved 4 ° C. Biotinylert sekundært polyklonalt kanin-anti-muse-antistoffer (Dako, Hamburg, Tyskland) ble benyttet for binding av CEACAM primære antistoff. Epitel-mesenchymale transistion (EMT) markører var studier av immunhistokjemi også. ZEB 1 (IgG ved en fortynning på 1:100, polyklonalt kanin-anti-human, Atlas Antibodies, Stockholm, Sverige), ZEB 2 (IgG ved en fortynning på 1:100, polyklonalt kanin-anti-human, Atlas Antibodies, Stockholm, Sverige ), E-cadherin (), Pan-Cytokeratin ().
bindingsseter ble oppdaget ved hjelp av ABC-AP-Kit (Vector Laboratories Inc., Burlingame, USA). Alkalisk fosfatase aktivitet av en biotin-streptavidin-alkalisk fosfatase kompleks ble visualisert ved anvendelse naftol-AS bisfosfat som substrat og hexatozised New Fuchsin ble anvendt for samtidig kobling. Seksjonene ble kontra med Mayers hemalum (Merck, Darmstadt, Tyskland).
Den fargeintensitet (0, 1+, 2+, 3+) og brøkdel av positive tumorceller ble scoret for hvert vev flekk som nylig publisert [34]. Flekker uten flekker og med et fargeintensitet av 1+ i 70% og 2+ i 30% av tumorceller ble scoret som CEACAM lav, middels score ble gitt for et fargeintensitet av 1+ i ≥70%, 2+ i ≥30% eller 3+ i 30% av tumorceller, og høye poengsummer ble gitt for et fargeintensitet av 2+ i ≥70% eller 3+ i ≥30% av kreftceller. Immunhistokjemisk analyse av delene ble gjennomført uten kunnskap om pasientenes identitet eller klinisk status. Immunhistokjemisk analyse og scoring ble utført av to uavhengige etterforskere som ikke var klar over pasientens utfall eller andre kliniske funn. I 95% av prøvene, evalueringene av de to observatører var identiske, de resterende lysbilder ble vurdert på nytt, og konsensus beslutninger ble gjort.
farging protokollen ble også brukt til mus vokst svulster og viste lignende sensitivitet og spesifisitet i forhold til TMA-farging.
enzym-bundet immunosorbent assay (ELISA)
for kvantifisering CEACAM undertyper i perifert blod, serum fra 46 pasienter med kaukasiske PDAC og 47 kaukasiske pasienter med CP , som ble angitt for kirurgisk behandling, ble analysert med en enzymbundet immunoassay (ELISA). Alle blodprøver ble oppnådd direkte før kirurgi. Som friske kontroller, 50 kaukasiske blod-bank donorer, hentet fra instituttet for transfusjonsmedisin (University Medical Centre Hamburg-Eppendorf), ble inkludert i studien. Fremstilling av serumprøver ble utført i henhold til en standardisert protokoll [38]. Median alder var 62,4 år ved diagnosetidspunktet (spredning 36.3-90.4 år, 24 mannlige [52,2%], 21 kvinnelige [47,8%]). Serum verdier av 47 pasienter som gjennomgikk kirurgi på grunn av kronisk pankreatitt (median alder ved diagnosetidspunkt 47,0 år, varierer 31.1-76.1 år) og 50 prøver av friske blodgivere ble brukt som kontroller (25 mannlige [50%], 25 kvinnelige [ ,,,0],50%]).
for deteksjon av CEACAM 1 og CEACAM 5 i serum, 96-brønn fleksible mikrotiterplater (Costar 9019, USA) ble belagt med 50 ul pr brønn av 2 ug /ml av monoklonalt mus fangst antistoff (Klon 283 324 og 843 130, mus IgG1, R CEACAM fem sauer IgG, klone 843131Goat IgG, R P = 0,014) og villtype PACA 5061 (median overlevelse 79 d; P = 0,01) (figur 2A). Den tumorstørrelse og vekt på tidspunktet for død var ikke signifikant forskjellig mellom de to gruppene (data ikke vist).
intraperitonealt, ble ingen forskjeller i peritoneal karsinomatose indeksen (PCI) observert ved markberedning (80 dager etter injeksjon). CEACAM slå ned viste flere DNA-kopier av humant DNA i den venstre lunge (P = 0,021) (C) som er korrelert med en høyere metastatisk belastning i lungen, ble imidlertid ingen forskjell observert for sirkulerende tumorceller i blodet (D) .
Mens den subkutane xenograft modell viste en forlenget OS for mus med CEACAM knockdown, påvirkning av den CEACAM slå ned i det intraperitonealt xenograft modell var ikke til stede. Den peritoneal karsinomatose indeksen var ikke forskjellig mellom gruppene, som også var representert i manglende forskjeller i formidling som var det ingen forskjeller mellom CEACAM slå ned og kontrollgruppen i sirkulerende tumorceller i perifert blod (figur 2B og D). Men i CEACAM knock down-gruppe, har vi funnet høye nivåer av human-DNA (som betyr betydelig mer PDAC celler) i lungene sammenlignet med kontrollgruppen (figur 2C). PDAC celler viste ingen affinitet for formidling til benmargen, humane tumorcelle-DNA ble ikke påvist i noen av gruppene. Markører for EMT viste ingen signifikante forskjeller mellom villtype og CEACAM slå ned svulster som bestemmes av immunhistokjemi (Fig S1).
Immunhistokjemisk CEACAM 1, 5 og 6 uttrykk hos pasienter prøver
Av 142 kreft flekker, 5 (3,5%) prøven ble ikke evalueres på TMA grunn av manglende eller representative svulstvev. Vevsprøver av 137 pasienter var endelig evaluerbare og korrelert med klinikk-patologiske data. Pasientene var i alderen mellom 33.1-85.0 år (median 63,5 år). Det var 82 mannlige pasienter (59,9%) og 55 kvinner (40,1%).
CEACAM en uttrykk ble funnet i 62,8% av alle kreftprøver (n = 86), CEACAM 5 i 87 pasienter (63,5%) , CEACAM 6-ekspresjon ble observert hos 99 pasienter (72,3%). Majoriteten av tumorene viste en homogen farging innenfor hver prøve, skjønt i en mindre del av vevsprøver, observerte vi et inhomogent IHC fargingsmønster i tumorområdet. Uttrykket mønster av alle tre CEACAMs var membran og cytoplasmatic også (figur 3). Uttrykk for CEACAM 5 ble forbundet med tilstedeværelse av CEACAM 6 uttrykket (P 0,001). En korrelasjon mellom CEACAM en og CEACAM fem uttrykk (P = 0,113) eller CEACAM 6 ble ikke observert (P = 0,09).
En korrelasjon med klinisk-patologiske data viste ingen signifikant sammenheng med noen parameter for CEACAM 1, bortsett fra en korrelasjon med fjernmetastaser (P = 0,008). CEACAM 5 og 6 uttrykk ble korrelert med en positiv lymfeknute status (P = 0,017 og p = 0,046, henholdsvis) og fjernmetastaser (P 0,001). (Tabell 1)
Kaplan-Meier overlevelsesanalyse viste ingen korrelasjon mellom CEACAM 1-ekspresjonen og den samlede (OS) eller sykdomsfri overlevelse (DFS), respektivt. Pasienter med en positiv CEACAM 5 og /eller 6 uttrykk hadde en forkortet OS og DFS (P = 0,025 og P = 0,007 P = 0,010 og P = 0,030, henholdsvis) (figur 4A-C, tabell 2). Hos pasienter med positiv uttrykk for alle tre CEACAM proteiner ingen signifikante forskjeller i DFS eller OS sammenlignet med de pasientene som var negative for alle CEACAM undergrupper (P = 0,144 og p = 0,742, data ikke vist) ble observert.
(A-C). CEACAM 1-positive pasienter viste en median OS på 17,0 måneder (14.0-20.1 måneder), CEACAM 1 negative 23,0 måneder (9.5-36.5 måneder, p = 0,279). OS av CEACAM 5-positive pasienter var 16,0 måneder (12.8-19.2 måneder) vs. 22,0 måneder (4.1-47.9 måneder) (p = 0,025). CEACAM 6 positive pasienter viste en OS 14,0 måneder (7.9-20.0) vs. 22,0 måneder (5.6-38.4 måneder, p = 0,010). Overlevelseskurver for sammenheng mellom generell overlevelse og CEACAM serum uttrykk (D-F). CEACAM 1-positive pasienter viste et OS på 11,8 måneder (2.4-25.2) vs. 18,3 måneder (10.0-26.2 måneder, p = 0,022). Median OS for pasienter positive for CEACAM 5 var 15,7 måneder (2.4-32.3 måneder) vs. 18,6 måneder (8.7-28.6 måneder, p = 0,651), og median OS for pasienter med CEACAM 6 positivitet var 18,8 måneder (9.5-28.1 måneder ) vs. 12,8 måneder (3.3-22.3 måneder, p = 0,187). Boksplott for CEACAM en serum uttrykket (G), CEACAM 5 (H) og CEACAM 6 (I) sammenlignet med pankreatisk duktus adenokarsinom (PDAC), kronisk bukspyttkjertel (CP) og friske bloddonorer (BD). Mottaker driftskurve (ROC) for CEACAM serum uttrykk (J).
CEACAM 1, 5 og 6 i serum
CEACAM 1 verdier i PDAC var ikke forhøyet sammenlignet med pasienter med CP, men var høyere sammenlignet med BD (PDAC median 33,0 mg /l, range 3,3 til 136,7 mikrogram /l; CP median 23,1 mg /l, rekkevidde 1,8 til 110,1; BD median 16,1 mg /l, range 7,8 til 36,5 mikrogram /l; P = 0,059 og P 0,001, henholdsvis). Lignende resultater ble funnet for CEACAM 5: serum verdier var høyere i PDAC gruppen sammenlignet med BD, men ikke for CP (PDAC median 8,5 ug /l, område 0,7 til 75,2 ng /ml; CP median 4,8 ug /l, rekkevidde 0.7- 24,0; BD median 1,9 ug /l, område 0,2 til 9,2 ug /l; P = 0,122 og P = 0,002, respektivt). Pasienter med PDAC viste forhøyet CEACAM 6 serum uttrykk i forhold til begge, CP og BD (PDAC median 2,90 mg /l, range 1,34 til 5,46 mg /l; CP median 2,25 mg /l, range 0,77 til 5,15; BD median 2,34 mg /l område 1,25 til 6,99 ug /l; p = 0,06 og P = 0,029, respektivt). I ingen av de utførte analysene, en betydelig forskjell mellom CP og BD kunne påvises (figur 2G-I).
Receiver opererer karakteristiske kurver ble brukt til å etablere sensitiviteten-spesifisitet forhold for CEACAM 1, 5 og 6. de optimale cut-off verdier ble bestemt ved Youdens-Index beregningen. Området-under-the-kurven (AUC) for CEACAM 1 var 0,711 (cut-off verdi 184,1 mikrogram /l), for CEACAM 5 0,689 (cut-off verdi 1,95 ug /l) og for CEACAM 6 0,664 (cut-off verdi 3,58 ug /l) (figur 2J) følsomheten av CEACAM en påvise PDAC var 53,5% med en tilsvarende spesifisitet på 54,7%. For CEACAM 5, er følsomheten 79,1% med en spesifisitet på 44,2%. Følsomheten CEACAM 6 var 47,0% med en spesifisitet på 82,6%. AUC for en kombinasjon for alle tre CEACAMs viste ingen forbedring i forhold til fastsettelse av hver av de CEACAMs alene (AUC 0,680, data ikke vist).
For en sammenheng mellom CEACAM serumverdier med klinisk-patologiske data, serumverdiene ble delt inn i et lavt nivå ( 75
th persentil) og et høyt nivå gruppe (≥75
th persentil). Høy CEACAM 6 verdier med tilstedeværelse av fjernmetastaser (P = 0,009) og gradering (P = 0,019) (tabell 1). Videre spyling av shedded molekylet inn i blodstrømmen kan være en konsekvens av avbrudd av anatomiske barrierer liggende vertsvev og endotelceller.
