Abstract
Rhizoma Paridis Saponiner (RPS), en naturlig forbindelse som ble renset fra Rhizoma Paridis, er blitt funnet å hemme kreftvekst in vitro og i dyremodeller for kreft. Men dens virkning på kreftfaren forbli uutforsket. Hensikten med denne studien var å undersøke effekten av RPS på tumorvekst i en rottemodell av spiserørskreft, og den molekylære mekanisme bak de effekter. En rotte modell av spiserørskreft ble etablert ved subkutan injeksjon av
N
-nitrosomethylbenzylamine (NMBA, 1 mg /kg) i 10 uker. RPS (350 mg /kg eller 100 mg /kg) ble administrert ved oral tvangsforing en gang daglig i 24 uker med start ved den første NMBA injeksjon. RPS betydelig redusert størrelsen og antall svulster i spiserøret av rotter eksponert for NMBA og hemmet levedyktighet, migrasjon og invasjon av esophageal kreftceller EC9706 og KYSE150 på en doseavhengig måte (alle
P
0,01 ). Flowcytometri avslørte at RPS indusert apoptose og cellesyklus G2 /M arrest i esophageal kreftceller. Ekspresjonen av cyklo-oksygenaser-2 (COX-2) og Cyclin D1 i rotte esophageal vev og esophageal kreftceller ble også betydelig redusert ved RPS (all
P
0,01). Konsekvent, RPS også betydelig redusert frigjøring av prostaglandin E2, en nedstrøms molekyl av COX-2 på en doseavhengig måte (
P
0,01). Vår studie tyder på at RPS hemme kreftfaren utvikling ved å fremme apoptose og cellesyklus arrest og hemme COX-2 veien. RPS kan være et lovende terapeutisk middel for spiserørskreft
Citation. Yan S, Tian S, Kang Q, Xia Y, Li C, Chen Q, et al. (2015) rhizoma Paridis Saponins undertrykker tumorvekst i en rottemodell av
N
-Nitrosomethylbenzylamine-Induced Esophageal Cancer ved å hemme cyklo-2 Pathway. PLoS ONE 10 (7): e0131560. doi: 10,1371 /journal.pone.0131560
Redaktør: Salvatore V. Pizzo, Duke University Medical Center, UNITED STATES
mottatt: 08.01.2015; Godkjent: 27 mai 2015; Publisert: 06.07.2015
Copyright: © 2015 Yan et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering:. SY ble støttet av 2010 Tianjin Science and Technology Plan Prosjekt of China (10JCYBJC15100) ZL ble støttet av og National Natural Science Foundation of China (nr 30973383 https://www.nsfc.gov.cn/). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Esophageal kreft er den sjette største årsaken til kreftdød på verdensbasis, og den fjerde i Kina [1, 2]. I 2009 insidensraten av sykdommen i Kina var 22,14 /100 000 og nådde enda høyere enn 100/100 000 i enkelte områder, for eksempel Cixian i provinsen Hebei [2, 3]. Selv om dødeligheten av spiserørskreft har sunket i løpet av siste 30 år på grunn av forbedring av økonomien og endringer i livsstil, forblir esophageal kreft utbredt i landlig område av Kina og i kinesiske menn [2, 3]. Kirurgiske inngrep er den primære behandling for esophageal kreft. Multimodal behandling med neoadjuvant kjemoterapi eller kombinert kjemoradioterapi fulgt av kirurgi har også blitt anbefalt for lokalt avansert kreftfaren [4]. Men pasientens utfall forblir fattige og den samlede fem års overlevelse er fortsatt mindre enn 25% [1, 4]. Dermed effektiv behandling for kreftfaren er i akutt nød.
terapeutiske fordelene med tradisjonell kinesisk medisin for å behandle kreft har blitt stadig mer anerkjent nylig [5]. Rhizoma Paridis Saponiner (RPS), et naturlig produkt renset fra den brukte tradisjonell kinesisk medisinsk urt Rhizoma Paridis, har vist seg å ikke bare inhibere leverfibrose og cirrhose, men også undertrykke veksten av flere typer av cancer i dyremodeller og kreftceller, inkludert lunge, eggstokk, lever, og livmorhalskreft [6-19]. I tillegg til å hemme veksten av kreft, RPS også reduserer migrering og invasjon av lungekreftceller og B16 melanomceller [8, 11 og 19] i betydelig grad. Videre Man et al. har nylig funnet at administrering av RPS kombinasjon med cyklofosfamid, et mye brukt kjemoterapeutisk middel, kan redusere giftigheten av syklofosfamid i en musemodell av leverkreft [14]. Xiao et al. nylig rapportert at RPS hemmet angiogenese i en xenograft mus modell av eggstokkreft [11].
Den molekylære mekanismen bak RPS-mediert anti-kreft effekt har også blitt undersøkt grundig. Resultater fra studier på forskjellige typer av humane kreftceller gående at RPS induserer apoptose i kreftceller ved aktivering av både caspase-avhengig og caspase-uavhengig apoptotiske reaksjonsveier og hemmer migrering og invasjon ved å undertrykke den enzymatiske aktiviteten og protein ekspresjonen av matriks-metalloproteinaser (MMP ) slik som MMP-2 og MMP-9 [6-19]. Man et al. brukes en gasskromatografi /massespektrometri metode for å sammenligne den metabolske profilen til mus som bærer hepatokarsinom versus friske mus, og de fant at RPS administrering øket lipid og glycerat men reduserte glukosenivået i blodet hos mus med hepatokarsinom mens utøves motsatte virkninger på de metabolske substrater i friske mus, kan noe som tyder på at RPS undertrykke utviklingen av kreft ved å blokkere energitilførselen til kreftceller [15].
Selv om RPS har blitt testet i flere typer kreft, dens virkninger på spiserørskreft imidlertid ukjent. Denne studien hadde som mål å fylle dette kunnskapshullet. Her undersøkte vi effekten av RPS på kreftutvikling i en rottemodell av
N
-nitrosomethylbenzylamine-indusert esophageal kreft og videre undersøkt den molekylære mekanismen bak effekten ved hjelp av humane kreftfaren cellelinjer EC9706 og KYSE150.
Materialer og metoder
Etikk erklæringen
Alle prosedyrer vedrørende dyr vedlikehold og eksperimenter er i henhold til politikken til den Institutional Animal Care og bruk Committee (IACUC) av Nankai Hospital . The IACUC har godkjent denne studien. Alle forsøk ble gjennomført for å redusere rotte lidelse.
Kjemi
N-nitrosomethylbenzylamine (NMBA) ble syntetisert ved Tianjin Institute of Pharmaceutical Research (Tianjian, Kina). Dimetylsulfoksid (DMSO) ble kjøpt fra Sigma (St. Louis, Missouri, USA). NMBA (150 mg) ble løst i 10 ul DMSO og deretter fortynnet med sterilt saltvann (0,9% NaCl) til en konsentrasjon på 0,5 mg /ml for injeksjon. Rhizoma paridis saponiner (RPS), som også er navngitt som polyphyllin og Chonglou saponin, ble ekstrahert fra Rhizoma Paridis (protokollnummer: 1007017) og oppløst i sterilisert destillert vann ved en konsentrasjon på 20 mg /ml. I korte trekk, ble 50 g av Chonglou pulver blandet med 400 ml 75% etanol i en en-liters rundbunnet kolbe. Blandingen ble inkubert i 90 ° C vannbad i 2 timer for å utvinne RPS. Oppløsningen ble oppsamlet. Ekstraksjonen ble gjentatt 2 ganger ved å bruke frisk 75% etanol hver gang. Løsningen fra hver ekstraksjon ble basseng sammen, filtrert og konsentrert ved å fjerne etanol under anvendelse av en hastighet vakuum for fordampning. Den konsentrerte etanolfrie RPS Løsningen ble overført til en fordampning skål og tørket helt inn i strømmen ved å inkubere fordampning fatet i et 100 ° C vannbad. RPS tørr makt ble brukt i studien.
Dyr
Herre F344 rotter (5 uker gamle) ble kjøpt fra Animal Experiment Center of Military Academy of Medical Science (Beijing, Kina) . Rottene (5 per bur) ble plassert i et rent rom med ubegrenset adgang til standard gnagerfor og vann. Rottene ble holdt på en 12 timers lys /12 timers mørk syklus på 2 uker før de ble brukt i eksperimentene. Alle rottene ble veid to ganger i uken i løpet av eksperimentet.
Rat modell av NMBA-indusert esophageal kreft og RPS administrasjon
Herre F344 rotter ble tilfeldig delt inn i følgende 3 grupper (n = 10 pr gruppe): friske kontrollgruppen hvor rotter ble subkutant injisert med saltløsning som inneholdt den samme mengde av DMSO som den som anvendes for rotter eksponert for NMBA; NMBA gruppe hvor rotter ble injisert subkutant med NMBA ved 1 mg /kg; NMBA + RPS gruppe hvori rotter ble injisert subkutant med NMBA ved 1 mg /kg og oralt administrert med RPS. Det eksperimentelle oppsettet for etablering av rottemodellen og RPS administrering er illustrert i figur 1. I korte trekk, ble rottene i NMBA og NMBA + RPS grupper subkutant injisert med 1 mg /kg NMBA 5 ganger per uke i 5 uker og deretter med en redusert frekvens på 1 mg /kg NMBA en gang per uke i ytterligere 5 uker. Rottekroppsvekt ble målt to ganger per uke i 14 uker. To rotter i NMBA + RPS gruppe døde i en uke 10 og uke 15, henholdsvis, på grunn av feilaktig administrere RPS inn i luftveiene. Alle andre dyrene overlevde og ble avlivet ved slutten av 24 uker via administrering av kloralhydrat (3 ml /kg). Spiserøret ble skåret ut og undersøkt under et lysmikroskop. Svulster større enn 1 mm i diameter ble talt opp. Volumet av lesjonene ble beregnet ved hjelp av standard formel: volum = lengde × bredde × høyde × 0,52. En del av spiserøret vevene ble fiksert i 10% formalin løsning og innstøpt i parafin for H 1: 1000 fortynning i 1 x TBST), eller CyclinD1 (Cell Signaling Technology, USA; 1: 1000 fortynning i 1 x TBST) i 1 time ved romtemperatur. Membranene ble deretter vasket grundig, etterfulgt av inkubasjon med et geit-anti-kanin-IgG konjugert med pepperrotperoksidase (Cell Signaling Technology, USA) i en fortynning på 1: 5000 i 1,5 timer ved romtemperatur. Merkede proteiner ble visualisert med en forbedret kjemiluminescens-metoden (Millipore Corporation, Billerica, USA). For kvantifisering ble intensitetene av protein signaler evaluert med Mengde ett system (Bio-Rad, Hercules, USA). Forsøket ble gjentatt minst 3 ganger.
Prostaglandin E2 (PGE2) ELISA
celler ble dyrket med en tetthet på 2 x 10
5 /brønn på 6-brønners plater i serum -fri medier som inneholder RPS på 0, 5, 10 eller 20 ug /ml i 24 timer. Cellekultursupernatant ble oppsamlet og sentrifugert ved 12, 000rpm i 10 minutter og supernatanten ble oppsamlet. Nivået av PGE2 i den cellefrie supernatant ble bestemt ved ELISA-sett i henhold til protokollen gitt av produsenten (Cusabio, Wuhan, Kina). Forsøket ble gjentatt minst 3 ganger.
Statistisk analyse
Data er presentert som gjennomsnitt ± standard avvik (SD) og analysert ved hjelp av statistisk analyse programvare SPSS11.5. Sammenligning ble analysert ved en-veis ANOVA.
P
verdier var to ensidig og
P
0,01 ble ansett som statistisk signifikant.
Resultater
RPS hemmet tumorvekst av esophageal kreft hos rotter
Alle 10 rotter overlevde 10-ukers NMBA eksponering og NMBA injeksjon dramatisk indusert tumorutvikling i spiserøret av rottene. Overflaten av spiserøret hos rottene eksponert for NMBA var dekket med svulst lesjoner med forskjellige størrelser (figur 2A). RPS på 350 mg /kg redusert betydelig antall (3,5 ± 1,58 vs 1.4 ± 1.11,
P
0,01, 2A og 2B) og gjennomsnittlig størrelse av svulster (17.71 ± 9.16 mm
3 vs 6,47 ± 5.86 mm
3
P
0,01, 2A og 2C) på spiserøret. Histopatologisk undersøkelse av esophageal vev avdekket at NMBA eksponering førte til squamous epiteliale hyperplasia (2A) og antallet papillomer og karsinomer av NMBA gruppen var betydelig høyere enn de av NMBA + RPS gruppen selv om forskjellene mellom de 2 gruppene var ikke statistisk signifikant (fig 2D). Low-dose RPS (100 mg /kg) påvirket ikke tumorstørrelse (NMBA eksponering gruppe: 15,0 ± 11,9 mm
3 vs. NMBA + RPS gruppe: 17,6 ± 9,9 mm
3
P
0,05) og antall tumorer (NMBA eksponeringsgruppen: 3,5 ± 1,0 vs. NMBA + RPS gruppen: 3,3 ± 1,6,
P
0,05) i rotter eksponert for NMBA
A. Fotografier og H E farging av esophageal vev av rotter fra friske kontroll, NMBA, eller NMBA + RPS gruppen. F344 hannrotter (n = 10 per gruppe) ble subkutant injisert med saltløsning inneholdende DMSO (Healthy kontrollgruppe), NMBA ved 1 mg /kg (NMBA gruppe), eller NMBA pluss oral administrering av RPS ved 350 mg /kg (NMBA + RPS gruppe ). Spiserøret ble dissekert, fotografert, og undersøkt under et lysmikroskop. En del av spiserøret vev ble fiksert i 10% formalin løsning og farget med H E. B. RPS redusert antall svulster på spiserøret betraktelig. Tumorer større enn 1 mm i diameter ble tellet, n = 10. C. RPS betydelig redusert tumorstørrelse. Volumet av lesjonene ble beregnet ved hjelp av standard formel: volum = lengde × bredde × høyde × 0,52, n = 10. D. RPS redusert antall papilloma og karsinom. To patologer, som var blindet for behandling tildeling, undersøkte type og antall svulster. Gjennomsnittlig antall papilloma og karsinom er presentert, n = 10. * representerer betydelig forskjell mellom NMBA gruppe vs friske kontrollgruppen,
P
0,01. # Representerer betydelig forskjell mellom NMBA + RPS gruppe vs NMBA gruppe,
P
0.01.
RPS hemmet levedyktighet, migrasjon og invasjon av esophageal kreft celler
For å undersøke den molekylære mekanismen bak RPS-mediert hemming av spiserørskreft utvikling, må vi først undersøkt virkningene av RPS på oppførselen til esophageal kreftceller. Våre resultater viser at RPS behandling inhiberte signifikant levedyktighet, migrering og invasjon av esophageal kreftceller EC9706 og KYSE150 på en doseavhengig måte (figur 3,
P
0,01).
EN. RPS hemmet levedyktigheten til esophageal kreftceller. Etter inkubering over natten, ble cellene i 96-brønners plater ble behandlet med RPS på 0, 2,5, 5, 7,5, 10, 15, 20, 30, 40, eller 60 mikrogram /ml i 48 timer og deretter inkubert med 20 ul av MTT ( 5 mg /ml) i 4 timer. Absorbansen ved 550 nm ble målt på en mikroplateleser. Prosentandelen av levedyktighet i forhold til kontrollene uten RPS ble beregnet. Hver konsentrasjon ble testet med 6 rapporter i hvert eksperiment, n = 3. B. RPS redusert invasjonen av esophageal kreftceller. Celler ble dyrket i transwellkammeret (5 x 10
4 /kammer, 8 um porestørrelse og belagt med 1 mg /mL matrigel) inneholdende serumfritt media med RPS på 0, 5, 10 eller 20 ug /ml i det øvre kammer og RPMI-1640 medium + 10% FCS i de nedre kamre for 48 timer. De gjennomtrenges celler i den nedre overflate av filteret ble fiksert og tellet under et mikroskop. Totalt 5 felt av hvert kammer ble tilfeldig utvalgt og gjennomsnittlig celletall av de 5 felter ble anvendt, n = 3. * og # representerer signifikant forskjell ved 5, 10 og 20 ug /ml av RPS sammenlignet med 0 ug /ml RPS i EC9706 celle og KYSE150 celler henholdsvis
P
0,01. C. Bilder av sårtilheling av EC9706 celler, 20 x. D. Bilder av sårtilheling av KYSE150 celler, 20 x. E. RPS redusert vandring av EC9706 celler. F. RPS redusert vandring av KYSE150 celler. Totalt 5 riper ble brukt for hver konsentrasjon av RPS. Celler ble dyrket i serumfritt medium med RPS på 0, 3,25, 7,5 eller 15 pg /mL for EC9706 celler, eller på 0, 5, 10, eller 20 pg /mL for KYSE150 i 24 timer. Sår ble fotografert under et fasekontrast invertert mikroskop, og andelen gapet nedleggelsen ble beregnet som (bredde på 0h -Bredde på 24 n) /bredde på 0h * 100%, n = 3. * representerer signifikant forskjell mellom RPS ved angitt konsentrasjon mot 0 mg /ml,
P
0.01.
RPS indusert apoptose og cellesyklus arrest i esophageal kreftceller
RPS-mediert hemming av levedyktighet, migrasjon og invasjon antydet at RPS kan blande seg inn i apoptose og cellesyklus i esophageal kreftceller. Faktisk vår flowcytometri Resultatene viste at RPS ved en konsentrasjon på 10 pg /mL eller høyere signifikant øket andelen av apoptotiske celler i både EC9706 og KYSE150-celler (figur 4,
P
0,01). Konsekvent, RPS ved samme konsentrasjon markert øket andelen av celler i G2-fasen (Figur 5,
P
0,01), noe som tyder på at RPS behandling induserer G2 /M cellesyklusarrest i esophageal kreftceller. Andelen av EC9706 celler i S-fasen ble ikke vesentlig påvirket av RPS, mens RPS redusert prosentandelen av KYSE150 celler i S-fasen på en doseavhengig måte, noe som indikerer at KYSE 150 cellevekst ble inhibert med RPS (fig 5). I tillegg ble ekspresjon av Cyclin D1 i esophageal kreftceller markert redusert ved behandling RPS (figur 6A). Vi har også undersøkt Cyclin D1 uttrykk i esophageal vev av rotter. Sammenlignet med friske kontrollgruppen, NMBA eksponering dramatisk indusert Cyclin D1 uttrykk i esophageal vev; mens RPS administrasjon betydelig redusert NMBA-indusert overuttrykk av cyclin D1 (fig 6B og 6C,
P
0,01). Disse resultatene støtter videre at RPS griper inn i cellesyklus i esophageal kreftceller.
Celler ble behandlet med RPS på 0, 5, 10 eller 20 ug /ml i 24 timer. Begge de festede celler og de flytende cellene i mediet ble samlet opp ved sentrifugering ved 1000 g i 5 min. Celler ble så inkubert med 5 ul Annexin V-FITC og 10 mL PI i 15 min i mørket, fortynnet i 200 ul PBS, og analysert på BD FACS Calibur strømningscytometer. Apoptose ble analysert ved bruk FlowJo programvare, n = 3.
Celler som brukes for å analysere Apoptose ble også analysert for cellesyklus ved hjelp av FlowJo programvare, n = 3. * og # representerer vesentlig forskjell på 5, 10, og 20 ug /ml av RPS sammenlignet med 0 ug /ml av RPS i EC9706 celle og KYSE150 celler, henholdsvis,
P
0.01.
A. RPS redusert ekspresjon av COX-2 og cyclin D1 i esophageal kreftceller. EC9706 celler ble behandlet med RPS på 0, 7,5, eller 15 ug /ml i 24 timer. KYSE150 celler ble behandlet med RPS på 0, 10 eller 20 ug /ml i 24 timer. Cellene ble deretter høsting og lysert. Proteinekstrakt (30 pg) ble separert ved SDS-PAGE og overført til nitrocellulosemembraner. Membranene ble probet med kanin-anti-rotte β-aktin, COX-2, eller cyklin D1. Representative bildene ble presentert. B. RPS redusert ekspresjon av COX-2 og cyclin D1 i esophageal vev. Esophageal vev fra rotter ble homogenisert og proteinekstrakt (30 pg) ble separert ved SDS-PAGE og overført til nitrocellulosemembraner. Membranen ble probet med kanin-anti-rotte β-aktin, COX-2, eller cyklin D1. Representative bilder blir presentert. C. Densitometry analyse av western blot i B. Gjennomsnittsverdier av 5 rotter presenteres, n = 5. * representerer betydelig forskjell mellom NMBA gruppe vs friske kontrollgruppen,
P
0,01. # Representerer betydelig forskjell mellom NMBA + RPS gruppe vs NMBA gruppe,
P
0,01. D. RPS redusert utslipp av PGE2 fra esophageal kreftceller. Celler ble dyrket i serumfritt medium inneholdende 0, 5, 10, eller 20 pg /mL RPS i 24 timer. Kultursupernatantene ble samlet opp og sentrifugert ved 12, til 000 rpm i 10 min fjerne celleavfall. Nivået av PGE2 i supernatantene ble bestemt ved ELISA-sett i henhold til protokollen som leveres av produsenten, n = 3. * og # representerer signifikant forskjell ved 5, 10 og 20 ug /ml av RPS sammenlignet med 0 ug /ml RPS i EC9706 celle og KYSE150 celler henholdsvis
P
0.01.
RPS trykkes cyklo-2 uttrykk og prostaglandin E2 utgivelse i esophageal kreftceller
COX-2 pathway lidelse har vært assosiert med kreft i fordøyelsessystemet [21]. Derfor testet vi om RPS kan påvirke COX-2 pathway i spiserørskreft. Våre vestlige blot resultater viser at RPS behandling betydelig redusert COX-2 uttrykk i esophageal kreftceller EC9706 og KYSE150 (Fig 6A). NMBA eksponeringen betydelig økt COX-2 uttrykk i esophageal vev av rotte, mens RPS administrasjon betydelig redusert NMBA-mediert COX-2 over-uttrykk (fig 6B og 6C,
P
0,01). Konsekvent, frigjøring av PGE2, en nedstrøms molekyl av COX-2 ble også nedregulert ved RPS på en doseavhengig måte i esophageal kreftceller (figur 6D,
P
0,01). Alle de opprinnelige dataene er vist i S1 tabell.
Diskusjoner
I denne studien har vi funnet RPS undertrykte betydelig tumorutvikling i en rottemodell av NMBA-indusert esophageal kreft og hemmet levedyktighet, migrasjon og invasjon av menneskelige esophageal kreftceller EC9706 og KYSE150. Disse resultatene er i samsvar med funnene på andre typer kreft, ytterligere støtte for anti-kreft effekt av RPS [6-19]. Vår studie viste også at RPS indusert apoptose i esophageal kreftceller. RPS er blitt funnet å oppregulerer ekspresjonen av pro-apoptotiske proteiner, slik som aktiv caspase-3, aktiv caspase-9, og Bax i nonsmall celle lungekreftceller, hepatom xenotransplantater, eggstokk-kreft celler og HeLa-celler, noe som indikerer at RPS indusere apoptose av mitokondriell apoptotisk reaksjonsvei [7, 12, 13, 17, 18].
i tillegg til å indusere apoptose, fant vi også RPS forårsaket cellesyklus G2 /M arrest i esophageal kreftceller. Konsekvent, Xiao et al. rapportert at RPS fremmet dramatiske G2 /M fase arrest i humane ovarie kreftceller SKOV3 [13], og Jiang et al. viste at RPS indusert G2 /M arrest i nonsmall celle lungekreft celler [7]. I denne studien vi videre undersøkt ekspresjonen av Cyclin D1, et protein som spiller en viktig rolle i cellesyklusen, og vi har funnet at NMBA eksponering markert stimulert Cyclin D1 ekspresjon i rotte esophageal vev og RPS betydelig redusert over-ekspresjon av Cyclin D1 i både esophageal vev og esophageal kreftceller. Disse resultatene ytterligere bekrefter at RPS hemmer tumor utvikling ved å indusere apoptose og fremme cellesyklus G2 /M arrest i kreftceller.
Rollen av COX-2 pathway i kreftutvikling og progresjon er velkjent. Over-ekspresjon av COX-2 og prostaglandiner er assosiert med utviklingen av forskjellige typer av kreft, og deres ekspresjonsnivåer representerer aggressiviteten av kreft progresjon [21]. I human spiserørskreft, markert over-ekspresjon av COX-2 er blitt observert i esophageal skjellepitel, men ikke i normalt vev [22]. Rollen av COX-2 pathway in spiserørskreft er også støttet av epidemiologiske og prekliniske studier som viser at COX-2-hemmere reduserer risikoen for spiserørskreft [23]. I denne studien fant vi at NMBA dramatisk stimulert COX-2 uttrykk i esophageal vev av rotter og RPS betydelig redusert NMBA-mediert COX-2 over-uttrykk. RPS også betydelig redusert COX-2 uttrykk og PGE2 utgivelse fra esophageal kreftceller EC9706 og KYSE150. Således våre resultater indikerer at RPS kan være en COX-2 inhibitor.
Selv om det økende antall studier av cellelinjer og dyremodell av forskjellige typer kreft viser klart anti-kreft og andre fordelaktige effekter av RPS slike som reduserer giftigheten av kjemoterapeutiske midler, bør toksisitet og nevrofarmakologiske bivirkninger av RPS ikke kan overses. Liu et al. rapportert at en enkelt oral administrasjon av RPS utøves skadevirkninger på den generelle atferd og dødelighet hos mus med en
LD
50
verdi på 2182,4 mg /kg hos mus [24]. I tillegg er de viste også at RPS ved konsentrasjoner på 100, 250 og 500 mg /kg signifikant undertrykt gastrisk tømming, men påvirket ikke intestinal transit i mus [24].
LD
50 Verdien av RPS for rotter er fortsatt ukjent. Dosen av 350 mg /kg RPS i denne studien, som er 16% av
LD
50 verdi for mus, syntes å være trygt for rotter. Bortsett fra at 2 rotter i NMBA + RPS gruppen døde på grunn av feilaktig administrere RPS inn i luftveiene, alle de andre rottene i gruppen overlevde. Ingen åpenbare toksisitet effekter ble observert i vår studie. Vi vil teste lavere dose av RPS, for eksempel 200 mg /kg, i en rottemodell av spiserørskreft og undersøke toksisiteten av RPS på rotter i fremtidige studier.
