Abstract
Bakgrunn
kreft-assosiert fibroblaster (CAF) er aktivert fibroblaster i kreft stroma og spiller en viktig rolle i kreft progresjon. Enkelte rapporter har antydet sammenhengen mellom uttrykket av CAF markører og negativ prognose på flere kreftformer. Imidlertid har ingen rapporter studert CAF fenotype og klinisk relevans i esophageal plateepitelkarsinom (ESCC).
Metoder
Vi undersøkte CAF fenotype av ESCC basert på histologi og immunhistokjemiske uttrykk for fem CAF markører for eksempel fibroblast-aktiveringsprotein (FAP), glatt muskulatur aktin (SMA), fibroblast-spesifikt protein-1 (FSP1), blodplate-avledet vekstfaktor-reseptor (PDGFRα), og PDGFRp i 116 ESCC vevsprøver. Dessuten har vi også undersøkt sammenhengen av CAF fenotype med klinisk relevans samt andre kreft-mikro relaterte faktorer
Resultater
Histologisk umoden CAF fenotype ble korrelert med dårlig prognose (p. 0,001 ) og forbundet med økt microvessel tetthet, økt tumorassosierte makrofager og epiteliale til mesenchymale overgang. CAF markører ble karakteristisk uttrykt i stromal fibroblast nær tumorceller og uttrykk mønster av 5 CAF markører var svært heterogen i alle enkeltsaker. Av fem CAF markører, SMA, FSP1, og PDGFRα var ugunstige prognostiske indikatorer for ESCC. Antallet positive CAF markører var større i ESCC med umodne kafeer enn i de med modne seg.
Konklusjoner
Våre resultater viser at histologisk klassifisering av CAF fenotype er en pålitelig og betydelig prognostisk prediktor i ESCC. CAF markører har potensial til å være diagnostiske og terapeutiske mål i ESCC
Citation. Ha SY, Yeo S-Y, Xuan Y-h, Kim S-H (2014) den prognostiske betydningen av Cancer-Associated Fibroblaster i Esophageal Plateepitelkarsinom. PLoS ONE 9 (6): e99955. doi: 10,1371 /journal.pone.0099955
Redaktør: Jörg D. Hoheisel, Deutsches Krebsforschungszentrum, Tyskland
mottatt: 07.02.2014; Godkjent: 20 mai 2014; Publisert: 19 juni 2014
Copyright: © 2014 Ha et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne forskningen ble støttet av en bevilgning av Korea Health Technology R D Prosjekt gjennom Korea Health Industry Development Institute (KHIDI), finansiert av Helsedepartementet Velferd, Republikken Korea (tilskudd nummer: HI11C17620000), og Samsung Biomedical Research Institute stipend SS1B30131. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
kreft-assosiert fibroblaster (kafeer) er aktivert fibroblaster i kreft stroma og er ved den fremre kant av mange faste tumorer, inkludert bryst, tykktarm, og melanom [1] – [5]. kafeer er de mest fremtredende celletype i svulsten stroma av mange kreftformer og en viktig aktør i kreft-mikromiljøet som består av en dynamisk blanding av fibroblaster, monocytter /makrofager, endotelceller, lymfocytter og granulocytter. [2], [6] kafeer kjøre svulst progresjon ved direkte stimulering av tumorcelleformering ved sekresjon av forskjellige vekstfaktorer og cytokiner som hepatocytt-vekstfaktor, transformerende vekstfaktor-β, stromal celle-avledet faktor 1, og interleukin-6, så vel som ved ombygging av kreft mikromiljøet gjennom avsetning av ekstracellulære matrise og rekruttering av andre aktører som ulike betennelsesceller og endotelceller [1] – [3]. Videre aktivert kafeer bidra til kreft progresjon ved å indusere angiogenese [1] – [3]. i løpet av kreft progresjon, kafeer bidra til invasiv veksten av kreft ved å skille flere proteaser som matriks-metalloproteinase eller katepsin og indusere den epiteliale til mesenchymal overgang (EMT) [1] – [3].
Selv om fibroblaster er vidt utbredt og lett gjenkjennelig på grunn av deres fusiforme eller spindel-lignende form, forblir fibroblaster dårlig definert i molekylær det gjelder, og det er ingen kjente spesifikke og pålitelige molekylær fibroblast markører. [4] Derfor identiteten til CAF er også dårlig forstått og CAF markør med absolutt spesifisitet har ikke blitt identifisert. Det finnes flere veletablerte indikatorer på CAF slik som glattmuskel-aktin (SMA), fibroblast stimulerende protein-1 (FSP-1), blodplateavledet vekstfaktor α (PDGFRα), og PDGFRp. [4] Imidlertid har ingen av dem er begge eksklusiv for kafeer og tilstede i alle kafeer. [4] i stedet hver av disse CAF-markørene er beregnet til å representere en bestemt og forskjellig fenotype av kafeer. I tillegg fibroblaster er svært heterogen og fibroblaster fra ulike anatomiske områder har vesentlig forskjellig uttrykk profil [7].
Generelt kafeer har vært kjent for å ha tydelig morfologi karakteriseres som store og lubben cellene skilles fra normale fibroblaster som er tynne, bølget, og små spindelceller. [4], [6], [8] imidlertid, vi har foreløpig funnet at noen ESCC hadde stromale fibroblaster med histologi av forholdsvis normal fibroblast, mens noen hadde distinkte morfologi av CAF.
klassifiseringen av histologiske morfologi av individuelle CAF og den kliniske relevansen er ikke undersøkt, selv om enkelte tidligere rapporter viste at histologisk kategorisering av stromal fibrose ble korrelert med kliniske resultatet av tykktarmskreft [9], brystkreft [10], og lungekreft [11].
Esophageal plateepitelkarsinom (ESCC) er en av de mest aggressive kreftsvulster, med en 5-års overlevelse på bare 10%. [12] CAF har sjelden vært diskutert i ESCC til tross for sin betydning i kreft progresjon. Bare svært få studier har undersøkt den biologiske rolle av tumoren stroma inkludert angiogenese i ESCC [13] -. [18] Fordi fibroblaster i forskjellige deler av kroppen er vesensforskjellig, resultatet av CAF studium i kreft i forskjellige organer kan ikke være direkte påføres ESCC.
Derfor studerte vi kliniske relevansen av CAF i ESCC ved histologisk klassifisering i henhold til individuell celle morfologi og immunhistokjemiske studier av fem CAF markører som FAP, SMA, FSP-1, PDGFRα, PDGFRp. I tillegg vurderte vi sammenhengen mellom CAF og andre kreft-mikro relaterte faktorer som microvessel tetthet (MVD) og tumorassosiert makrofag (TAM) infiltrasjon eller EMT fenotype.
Materialer og Metoder
vevsprøver
i alt 116 formalinfiksert og parafininnstøpte tumorprøver fra pasienter som gjennomgikk kurativ kirurgisk reseksjon for primær ESCC på Samsung Medical Center, Seoul, Korea 1995-2008, ble inkludert. Denne retrospektive studien ble godkjent av Institutional Review Board på Samsung Medical Center, og gjennomføres i samsvar med 1996 Helsinkideklarasjonen. Alle pasienter gitt skriftlig informert samtykke i henhold til institusjonelle retningslinjer. Ingen pasienter fikk preoperativ kjemoterapi eller strålebehandling. Postoperativ adjuvant behandling ble utført i 86,2% (100/116) av pasientene: kjemoterapi og strålebehandling i 31 pasienter, kjemoterapi kun 51 pasienter, og strålebehandling kun hos 18 pasienter. Kliniske og patologisk rapporter ble gjennomgått for alder, kjønn, tumor størrelse, histologisk grad, invasjon dybde (PT), lymfeknutestatus (pN), og fjernmetastaser (PM). Median oppfølgingstid var 30 måneder (variasjon 0-108 måneder). Den pTNM Klassifiseringen ble brukt i henhold til retningslinjer fra 2010 amerikanske Joint Committee on Cancer staging anvisningen (AJCC 7
th edition).
Tissue microarray (TMA) Rekonstruksjon
Hematoxylin og eosin ( HE) -stained vev ble anmeldt for å bekrefte histologisk diagnose og for å velge representative områder for farging. En eller to sylindriske kjerne (2 mm i diameter) ble fjernet fra formalin-fiksert og blokkerer parafininnstøpte vev svarende til HE glir å konstruere vev microarray. Hver kjerne ble valgt til å inneholde både tumor (20-50%) og stromal (50-80%) komponent. For å minimere utvalgsbias, ble hvert vev kjerne nøye valgt for å inneholde i det minste en eller flere CAF er «hot spot» overfylt med kafeer og stromale celler. Seksjonering av microarray blokker produsert 4 mm tykke seksjoner etter ferdigstillelse av vevet array.
Klassifisering av kafeer med histologi på Hematoxylin og eosin (HE) Lysbilder
kafeer ble delt inn i to grupper etter deres morfologi på HE glir, av to erfarne patologer (YHX og SHK) med ingen forkunnskaper i clinicopathological resultater, som følger: 1. moden når fibroblaster viste tynne, bølgete, og liten spindel celle morfologi som normale fibroblaster; 2. Umodne når fibroblaster viste stor, lubben spindel-formet celle med fremtredende nucleoli (figur 1). Når andelen av umodne fibroblaster var mer enn 50%, ble tilfelle regnes å ha umoden CAF fenotype. I noen få tilfeller med uenighet, ble endelig tolkning bestemt ved konsensus hjelp av multi-head mikroskop.
A. Eldre type når fibroblaster viser tynne, bølgete, og liten spindel celle morfologi; normale fibroblaster; B. Umodne type når fibroblaster viser stor, lubben spindel-formet morfologi; C-D. Overlevelseskurver ved hjelp av Kaplan-Meier metoden ved log-rank test for histologisk subtype av kreft assosiert fibroblast.
immunhistokjemisk farging Prosedyre
Avsnitt om microslides ble deparaffinized med xylen, hydrert ved hjelp av en utvannet alkohol serien, og nedsenket i 0,3% H
2o
2 i metanol for å slukke endogen peroksidase aktivitet. Snittene ble behandlet med TE-buffer (10 mM Tris og 1 mM EDTA, pH 9,3) ved 98 ° C i 30 minutter. For å redusere ikke-spesifikk farging, ble hver seksjon blokkert med 4% bovint serumalbumin i PBS med 0,1% Tween 20 i 30 minutter. Seksjonene ble deretter inkubert med anti-SMA (1:100, Millipore, Billerica, MA, USA), anti-FAP (1:100, Abcam), anti-FSP1 (1:100, Millipore), anti-PDGFRα (1 :100, Cell Signaling Technology), anti-PDGFRp (1:100, Abcam), anti-CD34 (1:100, Dako, Glostrup, Danmark) og anti-CD68 (1:1000, Dako) i PBST inneholder 3 mg /ml geite-globulin (Sigma, St. Louis, MO, USA) i 60 minutter ved romtemperatur, fulgt av tre suksessive vaskinger med buffer. Seksjonene ble deretter inkubert med et anti-mus /kanin-antistoff (Envision pluss, Dako) i 30 minutter ved romtemperatur. Den kromogen brukte var 3,3′-diaminobenzidin (Dako). Seksjoner ble kontra med Meyers hematoxylin. Utelate det primære antistoffet gitt negative kontroller for farging.
Evaluering av Immunhistokjemisk analyse
To patologer (YHX og SHK) evaluert immunhistokjemiske resultatene med noen tidligere kjennskap til clinicopathological resultater, og diskutert eventuelle avvik i score til en enighet ble nådd. Ifølge fargeintensitet og andelen positive stromale celler, ble immunhistokjemiske score for SMA, FAP, FSP1, PDGFRα, og PDGFRp målt ved to patologer (YHX og SHK) med noen tidligere kjennskap til clinicopathological resultater, som følger: 1, svak farging i 50% eller moderat farging i 20% av stromaceller; 2, svak flekker i ≥50%, moderat farging i 20-50% eller sterk farging i 20%; 3, moderat farging i ≥50% eller sterk farging i ≥20% (oppsummert i figur 2). Saker med resultatet 2 og 3 ble ansett som positivitet for hvert protein uttrykk. MVD ble evaluert av metode for Weidner et al. [19] I korthet alle CD34 positive individuelle microvessel tellinger ble gjort på en 200 × banen etter å ha det høyeste området ble identifisert ved å skanne ved lav forstørrelse (40-100 ×). MVD ble klassifisert i tre grupper: lav når MVD var mindre enn 40; mellom når MVD var 40-60; og høy når MVD var 60. TAM ble identifisert ved positivitet av CD68 og graden av infiltrasjon TAM ble bestemt ved prosentandel av CD68-positive celler blant alle stromaceller: lav når prosentandelen var mindre enn 20%; høy når ≥20% [20]
A:. Analyse av immunhistokjemisk farging utføres på grunnlag av både intensitet og fargeområde. B:. Demonstrasjon av immunhistokjemisk farging av glatt muskel aktin (SMA), fibroblast-spesifikt protein-1 (FSP-1), fibroblast aktiveringsprotein (FAP), blodplateavledet vekstfaktorreseptor (PDGFR) α, og PDGFRp
Statistical Analysis
Korrelasjoner ble undersøkt ved hjelp av Pearsons khikvadrattest eller Fishers eksakte test som passer. Total overlevelse (OS) og sykdomsfri overlevelse (DFS) ble bestemt ved hjelp av Kaplan-Meier metoden og ble sammenlignet med log-rank test. Overlevelse ble målt fra tidspunktet for kirurgi. Den Cox modellen ble brukt for multivariat analyse. Cinicopathologic faktorer, som var statistisk signifikant i univariated analyse, ble inkludert som covariables i multivariat analyse. Hazard ratio (HR) og 95% konfidensintervall (KI) ble vurdert for hver faktor. Alle testene var tosidig, og
P
≤0.05 ble betraktet som signifikant. Den statistiske analysen ble utført ved hjelp av SPSS statistisk programvare (SPSS Inc, Chicago, IL, USA).
Resultater
Histologisk klassifikasjon av CAF er korrelert med Prognose i ESCC
Femti to tilfeller (44,8%) ble klassifisert som modne CAF fenotype og 64 de (55,2%) som umoden fenotype (figur 1A-B). Korrelasjonene mellom disse kategoriene og clinicopathologic egenskaper er oppsummert i tabell 1. De umodne CAF fenotyper var signifikant assosiert med øket MVD (p 0,001) og forbedret infiltrering av TS (p = 0,003) sammenlignet med modne stromal fenotype. Både økt MVD og infiltrasjon av TAM er korrelert med dårlig prognose av ESCC (figur S1). Denne kategoriseringen histologisk var også assosiert med den EMT fenotypen til ESCC (p = 0,002), som ble definert i vår tidligere studie av immunohistokjemisk ekspresjon av mesenchymale markør og E-cadherin. [21] Den komplette EMT fenotype, karakterisert ved tap av E- cadherin uttrykk med tilegnelsen av mesenchymale markør uttrykk, var signifikant hyppigere i de umodne CAF fenotyper enn i andre fenotyper. Den umodne CAF fenotype var sterkt korrelert med redusert OS og DFS (p 0,001) (figur 1C-D), og var en sterk uavhengig prognostisk faktor for OS (HR: 5,23 (95% KI: 2,57 til 10,65), p 0,001 ) og DFS (HR: 3,05 (95% KI: 1,66 til 5,59)., p 0,001) (tabell 2)
uttrykk for CAF Markører som SMA, FSP1, FAP, PDGFRα, og PDGFRp i stromal Fibroblaster er hyppig i ESCC og SMA FSP1 er sterkt forbundet med uønskede kliniske resultatet
Vi validert antistoff mot FSP1, FAP, PDGFRα, og PDGFRp, bortsett fra SMA, mye brukt i daglig praksis (Figur S2 og tekst S1) og utføres påfølgende IHC prosedyre. Foreningen for uttrykk av fem CAF markører med clinicopathological funksjonene er oppsummert i tabell S1. SMA, FSP1, FAP, PDGFRα, og PDGFRp ble uttrykt på 82,8%, 72,4%, 61,2%, 88,8% og 54,3% av stromale fibroblaster i pasienter med ESCC, henholdsvis (figur 2). SMA uttrykk i kreft stromal fibroblast ble observert hyppigere hos svulster hvis størrelse er mer enn 4 cm (p 0,001), avansert T stadium (p 0,001) og N scenen (p 0,001), men sjeldnere i de med godt differensiert svulster (p 0,001). Det ble også forbundet med EMT fenotype (p = 0,005). FSP1 uttrykk ble oftere funnet hos eldre pasienter (≥ 65 år) (p = 0,037). PDGFRp uttrykk var assosiert med dårlig differensierte svulster (p = 0,010). Men det er ingen signifikante sammenhenger mellom FAP, PDGFRα og clinicopathologic parametere.
Kaplan Meier overlevelseskurver i henhold til uttrykk mønster av 5 CAF markører er gitt i figur 3. uttrykk for SMA og FSP1 var signifikant korrelert med kortere OS og DFS priser av pasienter. Spesielt er 5-års OS og DFS hastigheten av stromal SMA-positive gruppe (41% og 34% henholdsvis) var betydelig lavere enn de av SMA-negative gruppe (88% og 75%) (OS: p = 0,005 ; DFS: p = 0,004). Den 5-årige OS og DFS priser i stromal FSP1-positive gruppen (39% og 35% henholdsvis) var også betydelig lavere enn i for FSP1-negative gruppen (79% og 58%) (OS: p = 0,002; DFS: p = 0,044). I tillegg er det fem-års OS raten i stromal PDGFRα-positive gruppen (43%) var betydelig lavere enn det i den PDGFRα-negative gruppe (100%) (p = 0,003). Pasienter med FAP uttrykk viste kortere fem-års total overlevelse (41% vs 63%) uten statistisk signifikans (p = 0,070). Og ingen signifikant sammenheng ble observert mellom PDGFRp uttrykk og OS eller DFS priser. På multivariat analyse, FSP1 uttrykk var en uavhengig prognostisk faktor for OS (HR: 4,86 (95% KI: 1,90 til 12,40), p = 0,001) og DFS (HR: 2,77 (95% KI: 1,37 til 5,51), p = 0,004 ).
Korrelasjonen av CAF Marker Expression med histologisk klassifikasjon
Fem CAF markører som SMA, FSP1, FAP, PDGFRα, og PDGFRp ble heterogent uttrykt i stromale celler av 116 ESCCs (figur 4). Men av disse fem CAF markører, antall markører som viser positivitet i CAF var større i ESCC med umodne kafeer enn dem med modne de (gjennomsnittlig 3,89 ± 1,09 vs 3,21 ± 1,23, p = 0,002). Spesielt FSP1, PDGFRα eller PDGFRp uttrykk ble oftere funnet i ESCCs med umodne kafeer enn dem med modne de (Tabell S2).
Diskusjoner
I denne studien, vi først undersøkte uttrykket mønster og kliniske betydningen av CAF markører samt histologiske kategorier og andre kreft-microenvironments i ESCC. Histologisk umoden CAF, definert som en stor, lubben spindel-formet morfologi, var assosiert med økt MVD, merket TAM og fullstendig EMT fenotype. Det var også en sterk uavhengig prognostisk faktor. Fem CAF markører ble heterogent uttrykk i enkelte tilfelle, men det totale antallet høyt uttrykt CAF markører var større i umodne CAF type enn i moden.
Fibroblaster synes å være den mest allsidige av bindevev celler, viser en bemerkelsesverdig evne til å differensiere til andre medlemmer av familien så som fettceller, bruskceller, og benceller. «Eldre» fibroblaster med mindre kapasitet for transformasjon kan for eksempel eksistere side om side med «umodne» fibroblaster (ofte kalt mesenchymale celler) som kan utvikle seg til en rekke modne celletyper. Vanligvis er umodne fibroblaster kjent for å vise en typisk stor fyldig og euchromatic kjernen med ett eller to nucleoli og grove endoplasmatiske retikulum og Golgi-apparatet på fremtredende ultra funn. I denne studien, klassifisert vi CAF av ESCC som en modne og umodne typen på basis av histologiske egenskaper. Som et resultat ble umodne typen observert hos 55,2% av ESCC og var forbundet med uønskede kliniske resultater. Også det var forbundet med økt MVD og den fullstendige EMT-fenotype, som er kjent for å være mekanismen for kreft progresjon [1] -. [6], [22] I tillegg har vi bemerket TAM som antydet ved CD68-ekspresjon ble betydelig mer hyppig i ESCC med umodne typen CAF. Vanligvis TAM regnes som M2 fenotype av makrofager som fremmer angiogenese, vekst, invasjon, migrasjon, og metastase [23] -. [25] Infiltrerende TAMs er korrelert med dårlig prognose ved brystkreft [23] Etter avtale med denne rapporten. forbedret infiltrasjon av TAM i ESCC ble også korrelert med uønskede kliniske utfall. Imidlertid er videre studier er nødvendig for å fastslå mer spesifikk forholdet mellom CAF fenotype og M2 fenotype av TAM i ESCC. Disse resultatene tyder på at vår histologisk klassifisering av stromal fibroblast er pålitelig og klinisk relevant tross for mangelen på detaljert forståelse av den molekylære mekanismen.
Vi valgte SMA, FSP-1, FAP, PDGFRα, og PDGFRp som CAF markører basert på tidligere studier. [1], [2], [4] Dette er den første studien å undersøke uttrykk og betydningen av SMA, FSP-1, FAP, PDGFRα, og PDGFRp i ESCC så vidt vi vet. Bortsett fra SMA, som er mye brukt i daglig praksis, de resterende fire antistoffene er relativt nye og har blitt brukt mest til forskningsformål. Derfor prøvde vi å validere disse fire antistoffene og funnet ut at alle fire antistoffene var spesifikke både Western blotting og immunhistokjemi i formalinfiksert og parafininnebygd vev (figur S2).
Våre resultater viste at SMA uttrykk i ESCC stromale fibroblaster var forbundet med større størrelse, avansert stadium T, lymfeknutemetastase og dårlig prognose. Til tross for forskjellen i organer og krefttyper, er dette resultatet høyt samsvar med tidligere studier der pasienter med rikelig stromal myofibroblasts uttrykker SMA viste en dårligere prognose i muntlig, colorectal og brystkreft [26] -. [29] Resultatene viste også at pasienter uttrykker FSP1 var eldre og hadde kortere overlevelse, som også var i samsvar med tidligere studier utført på brystkreft. [30] PDGFRp uttrykk var assosiert med dårlig differensierte svulster (p = 0,010), men var ikke forbundet med prognose. PDGFRα uttrykk i CAF er en viktig faktor i utviklingen av lungekreft [31] og dette resultatet var delvis i tråd med vår resultatet. Pasientene med FAP uttrykk viste noe redusert OS (p = 0,070) og FAP uttrykk var assosiert med hyppigere død (p = 0,030). Disse resultatene er delvis i tråd med tidligere studier utført i bukspyttkjertelen og kolorektal kreft. [32], [33] Angående den prognostiske verdien av PDGFRp, det er noen uenighet mellom våre resultat og de tidligere to studier som bemerket foreningen av stromal PDGFRp uttrykk og dårlig prognose i prostata og bukspyttkjertelkreft, henholdsvis. [34], [35] Dette avviket kan skyldes ulike krefttyper eller organer. Våre resultater viser at noen av enkelt CAF markører var signifikante prognostiske prediktor for ESCC. Men uttrykket mønster av CAF markører var svært heterogen i hvert enkelt tilfelle, gjenspeiler mangfoldet i CAF befolkningen. Med tanke på mangfoldet av cellulær opprinnelse CAF og enorme heterogenitet av CAF fenotyper, er flere CAF markører med en god spesifisitet nødvendig [2].
På grunn av heterogenitet av CAF fenotype, evaluering av CAF markører av vev microarray ( TMA) kan ha en potensiell begrensning i forhold til evaluering av hele blokken baserte farging. Men vi fant ut at kafeer ble jevnt fordelt uavhengig av heterogenitet av CAF fenotype i mer enn halvparten av ESCC tilfeller (Figur S3A-B) i forstudien undersøker uttrykk for FSP1, en representant CAF markør, i hele blokker med 10 ESCC tilfeller. I de resterende tilfellene, CAF distribusjon viste regional konsentrasjon rundt mangfoldig sted, for eksempel invaderende foran, overflate nekrose eller muskel lag (Figur S3C-E), uten en bestemt sammenheng med anatomisk sted eller dybden av invasjonen. Og CAF er «hot spot» intenst overfylt med kafeer og stromale celler ble lett gjenkjent på H E delen. For å minimere bias i utvalget, brukte vi store størrelse vev kjerne (2,0 mm i diameter) for TMA konstruksjon og hvert vev kjerne ble valgt til å inneholde minst én eller flere CAF er «hot spot».
I ESCCs, nylig flere rapporter har vist den kliniske betydningen og rollen tumor stroma inkludert CAF i kreft progresjon. Wang et al. rapporterte at tumor-stroma-forholdet bestemt ved mikroskopisk evaluering ble en uavhengig prediktor for overlevelse i ESCC. [13] Liu et al. viste at tettheten av myofibroblasts, lymfocytter, makrofager og microvessels ble øket karakteristisk i tumoren stroma av ESCC og var vanligvis forbundet med spredning til lymfeknuter. [14] Zhang et al. sammenlignet genekspresjon profilering av tumor fibroblaster fra ESCC til den normale fibroblaster, og fant at gener assosiert med celleproliferasjon, ekstracellulær matrise, og immunresponsen blir uttrykt forskjellig. [16] Disse resultatene er generelt på linje med våre resultater i at tilstedeværelsen av aktiverte kafeer var forbundet med en ugunstig utfall av ESCC. Men dette er den første studien som har evaluert den eksakte clinicopathological relevansen av hver CAF markører ved hjelp av en stor kohort av pasienter med ESCC. I tillegg er dette den første studien å analysere stromale fibroblaster i ESCC basert på histologi og vise sin prognostisk effekt i en stor kohort av pasienter med ESCC.
I konklusjonen, våre resultater viser at histologisk klassifisering av CAF er en kraftig prognostisk prediktor for ESCC og er assosiert med økt MVD og TAM samt komplette EMT fenotype. Våre resultater tyder også på at CAF markører har potensial til å være diagnostiske og terapeutiske mål i ESCC.
Hjelpemiddel Informasjon
Figur S1.
Overlevelseskurver ved hjelp av Kaplan-Meier metoden ved log-rank test for kreft-mikro relaterte faktorer. . (A-B) microvessel tetthet (C-D) tumorassosiert makrofager
doi: 10,1371 /journal.pone.0099955.s001 plakater (TIF)
Figur S2.
Validering av fibroblast aktiveringsprotein (FAP), fibroblast-spesifikt protein-1 (FSP-1), blodplateavledet vekstfaktorreseptor (PDGFR) α og PDGFRp antistoffer. A, B: Resultatene av Western blotting og mRNA nivå ved revers transkripsjon polymerasekjedereaksjon. Alle antistoffer gjenkjente proteiner med ventede molekylvekter (A) og disse resultatene var meget konsistent med mRNA-nivåer av disse proteiner (B). C: Resultatene av immunhistokjemisk farging av celleblokkene fra 293T, NIH3T3, og HeLa celler. Antistoffer mot FSP1, PDGFRα, og PDGFRp farget i NIH3T3 celler (positiv kontroll), men ikke i 293T og Hela-celler (negativ kontroll). Antistoff mot FAP også farget i Hela-celler (positiv kontroll), men ikke i 293T eller NIH3T3 celler (negativ kontroll)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0099955.s002 plakater (TIF)
Figur S3.
Resultatet av forprosjektet å undersøke uttrykk for FSP1, en representant kreft assosiert fibroblast (CAF) markør, i hele blokker med 10 esophageal plateepitelkarsinom (ESCC) tilfeller. (A-B) kafeer er jevnt fordelt uavhengig av heterogenitet av CAF fenotype i mer enn halvparten av ESCC tilfeller. (C-E) De resterende tilfellene viser CAF fordeling med regional konsentrasjon rundt mangfoldig sted, for eksempel invaderende foran (C), overflate nekrose (D) eller muskel lag (E)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0099955 .s003 product: (TIF)
Tabell S1. Host Sammenligning av clinicopathologic egenskaper i henhold til uttrykk mønster av SMA, FSP1, FAP, PDGFRA og PDGRB
doi:. 10,1371 /journal.pone.0099955.s004 plakater (docx)
Tabell S2. .
Korrelasjon av histologisk subtype og uttrykk av fem kreft assosiert fibroblast markører
doi: 10,1371 /journal.pone.0099955.s005 plakater (docx)
Tekst S1.
Validering av FAP, FSP1, PDGFRα, og PDGFRp antistoffer
doi:. 10,1371 /journal.pone.0099955.s006 plakater (docx)
