Abstract
Bakgrunn
Sammenhengen mellom cytotoksiske T-lymfocytter antigen 4 (
CTLA-4
) genet -1722T /C polymorfisme (rs733618) og kreft har vært allment vurderes, og en definitiv konklusjon fortsatt ukjent. Vi urfremført et sykehus basert case-control studie for å måle dette sammenslutning av spiserørskreft med
CTLA-4
-1722T /C polymorfisme i Han-kinesiske befolkningen, og deretter gjennomført en meta-analyse for å oppnå en omfattende evaluering for dette problemet.
metodikk /hovedfunnene
dette case-control studien involverte 629 saker og 686 alders- og kjønns godt matchet kreftfrie kontroller esophageal plateepitelkreft (ESCC). PCR-LDR (polymerase chain reaction-ligase påvisningsreaksjoner) metoden ble brukt til å identifisere genotyper. Meta-analyse ble utført av Stata (v12.0) programvare. Dette case-control studie viste ingen signifikant forskjell i genotype og allel distribusjoner av
CTLA-4
-1722T /C polymorfisme mellom esophageal krefttilfeller og kontrollpersoner, i tråd med funnene i den videre meta-analyse i alle genetiske modeller. Bevis for stor heterogenitet ble observert blant alle kvalifiserte studier i recessive modell. Videre subgruppeanalyser av etnisitet, krefttype og system, oppdaget null assosiasjoner i denne meta-analysen.
Konklusjon
Dette case-kontrollstudie og den videre meta-analyse, ikke klarte å identifisere foreningen mellom
CTLA-4
-1722T /C polymorfisme og kreftrisiko
Citation. Tang W, Qiu H, Jiang H, Sun B, Wang L, Yin J et al. (2014) Mangel på foreningen mellom cytotoksiske T-lymfocytter antigen 4 (
CTLA-4
) -1722T /C (rs733618) Polymorfisme og kreftrisiko: Fra en case-control studie til en meta-analyse. PLoS ONE 9 (4): e94039. doi: 10,1371 /journal.pone.0094039
Redaktør: Junwen Wang, The University of Hong Kong, Hong Kong
mottatt: 8 november 2013; Godkjent: 11 mars 2014; Publisert: 07.04.2014
Copyright: © 2014 Tang et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne studien ble støttet av Jiangsu-universitetet klinisk medisin vitenskap og teknologiutvikling fondet (JLY20120004), National Natural Science Foundation of China (81370001, 81101889, 81000028), Jiangsu-provinsen Natural Science Foundation (BK2010333, BK2011481), Stiftelsen Sosial utvikling av Zhenjiang (SH2010017), Chang Unge Talenter og teknologi Science-Foundation of Health Bureau (QN201102) og Affiliated Folkets sykehus i Jiangsu-universitetet fond (Y200913). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Det er anslått at om lag 12,7 millioner flere krefttilfeller og 7,6 millioner kreftdødsfall har skjedd i 2008 over hele verden, med mer enn halvparten av tilfellene, og om lag to tredeler av dødsfallene i utviklingslandene [1]. Bevisene er montering at kreft er en kompleks sykdom resultater fra samhandling mellom flere genetiske bakgrunn og miljøfaktorer [2], [3]. I det siste har en rekke studier viser at genetiske varianter av gener som regulerer aktivering og proliferasjon av T-lymfocytter og natur killer (NK) celler som kan påvirke kreftrisiko [4], [5]. I det siste tiåret, har enkeltnukleotidpolymorfi (SNPs) blitt grundig undersøkt, og mange studier har undersøkt hypotesen om at genetiske varianter av immungener kan være relevant for risikoen for en rekke kreftformer [6], [7].
cytotoksiske T-lymfocytter antigen 4 (CTLA-4), også kalt CD152, er medlem av immunglobulin super. CTLA-4 uttrykkes i hovedsak på aktiverte T-celler, fungerer som en viktig begrensende regulator av T-celle proliferasjon og aktivering, og induserer Fas-uavhengig apoptose av aktiverte T-celler for ytterligere å inhibere immunfunksjon av T-celle-[6], [8 ]. Blokkering av CTLA-4-funksjon og forbedrer T-celleaktivering, ble flere forskjellige typer av maligne neoplasmer i tumor-transplanterte mus inhiberes eller herdet, og som eies langvarig antitumorimmunitet [9]. Det tyder på at CTLA-4 spiller en viktig rolle i kreftutvikling.
CTLA-4
-genet er lokalisert på kromosom 2q33, og er sammensatt av fire exoner som koder for flere funksjonelle domener av CTLA-4-protein og har flere viktige SNP’er, slik som + 49A /G (rs231775), -318C /T (rs5742909), CT60G /A (rs3087243), -1661A /G (rs4553808), og -1722T /C (rs733618) SNPs, etc [6], [10].
En meta -analysemetoder viste at
CTLA-4
+ 49A /G polymorfi kan være en risikofaktor for kreft, mens -318C /T og + 6230G /A (CT60) polymorfismer var mangel på sammenheng med kreft [4]. For sent, Geng og kolleger rapporterte en meta-analyse med et negativt resultat på sammenhengen mellom
CTLA-4
-1722T /C polymorfisme og kreftrisiko [11]. Koblingsulikevekt (LD) tomt på
CTLA-4 plakater (involverer rs733618, rs4553808, rs5742909, rs231775 og rs3087243) ble generert ved hjelp Haploview 4,2 program, og resultatene tyder på at -1661A /G (rs4553808) og -318C /T (rs5742909) er i høy LD; de andre er i dårlig LD [11].
CTLA-4
-1722T /C polymorfi er ikke undersøkt i spiserørskreft. For ytterligere å undersøke dette potensialet forholdet, bestemte vi oss for å vurdere sammenslutning av
CTLA-4
-1722T /C polymorfisme med esophageal kreftrisiko på et sykehus basert case-control studie, og deretter gjennomført en omfattende meta-analyse for å utlede et mer nøyaktig resultat.
Materialer og metoder
fag
Dette sykehusbasert case-control studie inkluderte 629 sporadisk esophageal plateepitelkarsinom (ESCC) tilfeller og 686 kreft -fri fag fortløpende med å rekruttere fra de tilknyttede Folkets sykehus i Jiangsu-universitetet og Affiliated Hospital of Jiangsu University (Zhenjiang City, Jiangsu-provinsen, Kina), mellom oktober 2008 og desember 2010. alle rekruttert fag var lokale innbyggere av Han kinesiske befolkningen, og alle ESCC fagene ble diagnostisert ved kirurgisk fjerning og patologisk undersøkelse. De ESCC fagene som hadde en historie med personlig ondartet svulst eller autoimmun lidelse, eller hadde gjennomgått strålebehandling eller cellegift ble ekskludert. Etnisitet, kjønn og gjennomsnittlig alder (± 5 år) av kontrollene var godt tilpasset esophageal krefttilfeller. Kontroll individer ble utvalgt fra de to sykehus for herding av brudd. Ved rekruttering, ble dette sykehuset basert case-control studie godkjent av etikkomiteen i Jiangsu University (Zhenjiang, Kina). Informasjon fra alle fag ble samlet inn fra en strukturert spørreskjema som ble administrert av to erfarne forsknings leger. Informasjonen fra demografiske data (for eksempel alder, kjønn) og relaterte risikofaktorer (for eksempel, bruk av tobakk og alkohol) er oppført i tabell 1. Hver gjenstand signert skriftlig informert samtykke og donerte 2-ml prøve av perifert blod.
DNA-ekstraksjon, SNP utvalg, og genotyping
Blodprøver prøver~~POS=HEADCOMP ble tatt med etylen tetra-eddiksyre (EDTA) antikoagulant vakuumrør (BD Franklin Lakes NJ, USA). Genomisk DNA ble ekstrahert fra lymfocytter ved å bruke QIAamp DNA Blood Mini Kit (Qiagen, Berlin, Tyskland) og DNA-prøver ble frosset ved -80 ° C. Genotyping av
CTLA-4
-1722T /C polymorfisme ble utført ved hjelp av polymerase chain reaction-ligase påvisningsreaksjoner (PCR-LDR) metoden [12]. Shanghai Biowing Applied Biotechnology Selskapet tilbyr teknisk støtte for genotyping. Ett hundre og seksti prøver ble tilfeldig valgt og gjensidig testet med direkte sekvensering for kvalitetskontroll, og reproduserbarhet var 100%. Primerne for direkte sekvensering anvendes for
CTLA-4
-1722T /C genotyping var som følger: F: 5 «GCAATAACAACCTAATGGGCAC 3»; R:. 5 «ACTTCCACAGGCTGAACCACT 3» (figur S1)
Statistisk analyse
Chi-kvadrat test (
χ
2) ble gjennomført for å måle forskjellene i fordelingen av genotyper, demografiske kjennetegn og utvalgte variabler mellom esophageal krefttilfeller og kontroller. Genotypefrekvensene av
CTLA-4
-1722T /C polymorfisme blant kontrollene ble testet for Hardy-Weinberg likevekt (HWE) ved hjelp av en Internett-basert kalkulator (https://ihg.gsf.de/cgi-bin /hw/hwa1.pl). Assosiasjonene mellom
CTLA-4
-1722T /C locus og risikoen for ESCC ble analysert ved ubetinget logistisk regresjon for råolje ORS og justert ORS når det var hensiktsmessig. Statistiske analyser ble gjennomført i SAS 9.1.3 programvare (SAS Institute, Cary, NC). En
P
. 0,05 (tosidig) ble definert som kriterium for statistisk signifikans
Meta analyse
Den meta-analysen er rapportert på grunnlag av Anbefalte Reporting Varer til Metaanalyser analyser~~POS=HEADCOMP (PRISMA) retningslinje (Sjekkliste S1) [13].
Embase, PubMed, og CBM (kinesisk biomedisinsk Disc), samt CNKI (China National Knowledge Infrastructure) database ble søkt opp til 1 august 2013 for publikasjoner som undersøker sammenslutning av
CTLA-4
-1722T /C polymorfisme med kreftrisiko. Kombinasjonen vilkårene var «kreft» eller «svulst» eller «carcinoma «eller» svulst «og» cytotoksiske T-lymfocytter antigen 4″ eller «
CTLA-4
«eller» CD152 «, annekterte med» mutasjon « eller «variant» eller «SNP» eller «polymorfisme». I tillegg ble publikasjonen språket begrenset til engelsk og kinesisk, og alle studier utført på mennesker ble identifisert. Søkeresultatene ble supplert ved å sjekke alle referanser som er oppført i disse studiene og publiserte vurderinger. Inkluderte studiene var kvalifisert hvis de møtte de store inkluderte kriterier: (1) utformet som en retrospektiv eller nestet case-control studie (2) evaluerte
CTLA-4
-1722T /C polymorfisme og kreftrisiko, ( 3) gi genotype tellinger av
CTLA-4
-1722T /C polymorfisme mellom krefttilfellene og kontroller, og (4) kontroll genotype distribusjoner konsistente med HWE. De store ekskluderte kriterier var: (1) ikke case-kontrollstudier, (2) gjennomgang publikasjoner og (3) overlappende data. Informasjon ble nøye og uavhengig hentet av tre korrekturlesere (W. Tang, H. Qiu, og H. Jiang). I tilfelle av motstridende vurderinger, ble forskjeller løses ved videre diskusjon blant alle forfattere. Følgende data ble hentet. Første forfatter, utgivelsesår, krefttype, land, etnisitet, antall saker og kontroller, genotype metode, allel og genotype frekvens, og HWE kontroller
I denne meta-analyse , den rå odds ratio (OR) med tilhørende 95% konfidensintervall (95% KI) ble brukt for å vurdere styrken på sammenhengen mellom
CTLA-4
-1722T /C polymorfisme og kreftrisiko. Z-test og
P
-verdi (tosidige) ble brukt til å måle betydningen av den samlede OR, og statistisk signifikans ble definert som
P
0,05 (to-tailed ). Heterogenitet blant studier ble evaluert av en Chi-kvadrat-basert I
2 test, jeg
2 25% indikerte lav heterogenitet, 25% ≤I
2≤50% indikerte moderat heterogenitet, og jeg
2 50% indikerte stor heterogenitet [14]. Hvis jeg
2 50% eller
P
0,10, de samlede ORS ble beregnet ved tilfeldig effekt-modellen (DerSimonian-Laird metode), ellers fast effekt-modell ble implementert (den mantel-Haenszel metoden). Subgruppeanalyser ble gjennomført for å måle etnisitet spesifikke, kreft typespesifikk og systemspesifikke effekter i henhold til etnisitet, kreft type (hvis noen krefttype evaluert av mindre enn tre individuelle undersøkelser, ble det slått sammen til «andre kreftformer») og system. Trakten tomt og Egger test ble utført for å måle publikasjon skjevhet, som ble bedømt ved visuell inspeksjon av et asymmetrisk plot. For heterogenitet, trakt tomt og Egger test, ble statistisk signifikans vurdert på
P
0,1. I denne meta-analysen ble alle statistiske analyser utført av Stata (versjon 12.0).
Resultater
Baseline karakteristika
De demografi og risikofaktorer for alle fag presenteres i tabell 1. resultatene indikerte at saker og kontroller ble fullt matchet etter alder og kjønn. Men det var signifikant forskjell på drikking status og røyking mellom pasienter og kontroller (
P
0,001). Den primære informasjon fra
CTLA-4
-1722T /C polymorfisme ble vist i Tabell 2. For dette SNP, den genotyping suksessraten var 96,43% i alle prøvene. Minor allel frekvens (MAF) av kontroller i vår studie, var lik den database av kinesisk for SNP (tabell 2). De genotypiske frekvenser for
CTLA-4
-1722T /C polymorphism blant kontroller ble brukt til å evaluert avvik fra HWE, og resultatet var i HWE (
P
= 0,284) (tabell 2) .
enkelt~~POS=TRUNC locus analyse
i singel locus analyser, genotypefrekvensene av
CTLA-4
-1722T /C var 16,53% (CC), 49,10% (TC) og 34,37% (TT) i pasienter, og 17,50% (CC), 47,79% (TC) og 34,70% (TT) i kontrollene, og forskjellen var ikke statistisk signifikant (
P
= 0,862) (tabell 3). I dette case-control studie, logistisk regresjon viste at
CTLA-4
-1722T /C SNP ble ikke forbundet med risiko for ESCC. Tobakksbruk og alkoholbruk er to sterke miljøfaktorer, undersøkte vi foreningen i en lagdelt analyse av disse to faktorene, og resultatene var null forening (tabell 4).
Kvalifiserte artikler for meta -analysemetoder
Den første søket ga totalt 345 potensielt relevante publikasjoner. Etter påføring flere filtre, 12 case-control studier i 11 publikasjoner og vår studie var kvalifisert for inkludering. Den detaljerte prosessen med å velge og uten artiklene er presentert i Figur 1.
Studie egenskaper
Det var to grupper i en artikkel utført av Hadinia et al. [15], behandlet vi dem separat. Totalt 12 separate studier i tillegg til vår case-control studie som involverte totalt 3420 krefttilfeller og 3675 kontroller ble inkludert i denne meta-analysen. Blant de 13 case-control studier, tre undersøkte brystkreft [16] – [18], tre undersøkte magekreft [15], [19], [20], og de andre studier undersøkt livmorhalskreft, lungekreft, spiserørskreft, tykktarmskreft, og kreft i munnhulen [6], [15], [21] – [24]. Som for fag i disse studiene, åtte var asiater [6], [17] – [21], [24] og 5 var kaukasiere [15], [16] [22], [23]. Kjennetegn på hver inkluderte studien er presentert i tabell 5. Den detaljerte fordelingen av
CTLA-4
-1722T /C polymorfisme og allelet blant sakene og kontroller er presentert i tabell 6.
meta-analyse resultater
etter å kombinere alle kvalifiserte studier, ble totalt 3420 krefttilfeller og 3675 kontroller fra 13 kvalifiserte case-control studier inkludert for meta-analyse av sammenhengen mellom CTLA-4 -1722T /C polymorfisme og kreftrisiko. Det var null sammenslutning av
CTLA-4
-1722T /C polymorfisme med samlet kreftrisiko i alle genetiske modeller (tabell 7, Tabell 8, Tabell 9, Figur 2 og figur 3). I en stratifisert analyse av etnisitet, ble lignende resultater observert i både asiatere og kaukasiere (Tabell 7). I en stratifisert analyse av krefttype, var det en redusert risiko for magekreft i to genetiske modeller: CC vs TC + TT (OR 0,36; 95% CI, 0,19 til 0,66;
P
= 0,001) og CC vs TT (OR 0,45; 95% CI, 0,23 til 0,86;
P
= 0,016) (Tabell 8). I en stratifisert analyse av systemet, ble null foreningen også observert (Tabell 9).
Tester for publikasjonsskjevhet, følsomhetsanalyser, og heterogenitet
i denne meta-analysen, potensielle publikasjonsskjevhet ble oppdaget av Begg trakt tomten og Egger test (figur 4), og formen av trakten var symmetri i all genetisk modell. Det foreslås at det var ingen publikasjonsskjevhet for generell kreft i denne meta-analyse (C vs. T: Begg test
P
= 0,855, Egger test
P
= 0,675; CC vs TT : Begg test
P
= 0.350, Egger test
P
= 0,709; TC vs TT: Begg test
P
= 0,583, Egger test
P
= 0,702; CC + TC vs TT: Begg test
P
= 0,161, Egger test
P
= 0,576; CC vs TT + TC: Begg test
P
= 0,533, Egger test
P
= 0,845).
Sensitivitetsanalyser analyser~~POS=HEADCOMP ble utført for å påvise påvirkning av enkelte datasett på den sammenslåtte OR, med hver studie datasett sett droppet på en gang. Resultatene ble ikke endret når noen enkelte studien ble utelatt, noe som tyder på stabilitet i resultatene våre (figur 5) (data ikke vist).
Store hetrogeniteter blant studiene ble identifisert i recessive modell og homozygot modell. Siden svulst opprinnelse, etnisitet og systemet kan påvirke resultatene fra metaanalyser, vi utført subgruppeanalyser og resultatene ble presentert i Tabell 7, Tabell 8 og Tabell 9. Resultatene indikerte at brystkreft, fordøyelsessystemet kreft og asiatiske befolkningen undergruppe kan bidra til større heterogenitet. Som vist i tabell 7, var betydelig heterogenitet i de recessive modell. Videre analyser ble utført av Galbraith radial tomt i recessive modellen (figur 6), og resultatet viste en avvikende kan bidra til de viktigste kildene til heterogenitet. Fra skogen plott i recessive modellen (figur 2), kan man identifisere at en case-control studie utført av Erfani et al. [16] bidrar hoved heterogenitet.
Diskusjoner
i det siste har flere studier undersøkt sammenhengen mellom
CTLA-4
-1722T /C polymorfisme og flere kreftformer, er et avgjørende svar mangler. I denne studien en case-control studie i Han-kinesiske befolkningen, sammen med en meta-analyse på overordnet kreft, forsøkte å utlede en omfattende evaluering, og resultatene var ikke-betydning. Så langt vi kjenner til, er dette den første case-control studie som undersøkte sammenhengen mellom
CTLA-4
-1722T /C polymorfisme og esophageal kreftrisiko.
Kreft og autoimmune sykdommer er begge multifaktorielle lidelser som resulterer fra komplekse samspillet mellom genetiske bakgrunn og miljøfaktorer.
CTLA-4
-1722T /C polymorfisme (T → C) vil redusere en transkripsjonsfaktor bindingssete for nukleær faktor 1 og svekke uttrykk for celleoverflaten CTLA-4 [11], [25], som kan spille en viktig rolle i kreft og autoimmun sykdom mottakelighet. Flere meta-analyser viste at
CTLA-4
-1722T /C polymorfisme kan være en risikofaktor for systemisk lupus erythematosus mottakelighet [26] – [29]. Men sammenhengen mellom denne locus og kreftrisiko var mangelfulle. Med en økende interesse for sammenslutninger av genetisk polymorfisme og kreft, har flere studier undersøkt hypotesen om at
CTLA-4
-1722T /C polymorfisme er relevant for risikoen for en rekke kreftformer; men resultatene forblir unnvikende. Tatt i betraktning det faktum at de fleste vanlige SNPs gjør vanligvis lav pene kreft mottakelighet, denne studien inkluderer 13 case-control studier med relativt store utvalgsstørrelser for å få en presis evaluering mellom
CTLA-4
-1722T /C genetisk variasjon og kreft fare. En individuell studie har rapportert positivt signal fra
CTLA-4
-1722T /C polymorfisme med kreft [18]; den andre individuelle studier har rapportert negativt signal [20]; men som vist i vår totale genetiske modellresultater blant 7098 individer, var det ikke betydning, selv i ulike befolknings undergrupper og annet system. I en stratifisert analyse av krefttype, den beskyttende effekten gitt av den recessive modell og homozygot modellen var merkbart opplagt i magekreft undergruppe. Vurderer bare tre case-kontrollstudier ble gjennomført i magekreft undergruppe og disse studiene var små utvalgsstørrelser, noe som kan begrense makten til å bekrefte en reell innflytelse eller generere en svingt vurdering. Alle resultater må tolkes med svært forsiktighet. Det er også mulig at potensialet funksjon av denne polymorfismen fortynnes eller dekkes av andre genetiske bakgrunn eller faktorer, og disse viktige faktorene bør ikke bli ignorert. Vurderer bare 13 kasus-kontrollstudier ble rekruttert i denne meta-analysen og de fleste av disse studiene var små utvalgsstørrelser, i fremtiden, videre undersøkelser med store utvalgsstørrelsene bør utføres for å bekrefte eller avkrefte disse resultatene.
Noen fortjeneste av studien bør være tilstrekkelig hensyn. Først, dette er til dags dato den første case-control studie påvise sammenslutning av
CTLA-4
genet -1722T /C polymorfisme med spiserørskreft. For det andre, resultatene av våre case-control studie i overensstemmelse med den i den etterfølgende meta-analyse. Tredje, i vårt case-control studie, kontroll genotype distribusjoner var i samsvar med HWE viste våre resultater var mindre utsatt for seleksjonsskjevhet, i form av trakten tomten indikerte at det var ingen publikasjonsskjevhet i dagens meta-analyse. Fjerde, ble observert relativt lav heterogenitet mellom publikasjoner for
CTLA-4
-1722T /C polymorfisme.
I tillegg bør noen begrensninger i studien bekreftes når man tolker resultatene. Først i denne case-control studie, alle saker og kontroller ble rekruttert fra to sykehus, og kanskje ikke fullt ut representerer de generelle kinesiske befolkning. For det andre, alle inkluderte kasus-kontrollstudier for meta-analyse var fra asiatere og kaukasiere; således kan våre funn bare være egnet for disse to populasjonene. Tredje, bare publiserte studier ble rekruttert i denne meta-analysen, kan publikasjonsskjevhet er uunngåelig oppstått. Fjerde, på grunn av mangel av ensartede bakgrunnsdata for rekruttert studier, data ble ikke videre stratifisert av andre faktorer (for eksempel alder, kjønn, røyking, alkoholforbruk, og andre livsstilsfaktorer). Femte, i denne studien, har vi fokusert på bare -1722T /C polymorfisme i
CTLA-4
, og ikke vurdere andre mottakelighet gener eller polymorfismer. For lav penetrans kreft mottakelighet genet effekter fra SNP, bør disse viktige genetiske og miljømessige faktorer bli tilstrekkelig belyst.
I sammendraget, denne case-control studie sammen med en meta-analyse, klarte ikke å bekrefte sammenhengen mellom
CTLA-4
-1722T /C polymorfisme og kreftrisiko, også på tvers av ulike etniske undergrupper og ulike systemer. I fremtiden videre undersøkelser med store utvalgsstørrelser og detaljerte gen-miljø data, bør utføres for å bekrefte eller avkrefte disse resultatene.
Hjelpemiddel Informasjon
Figur S1.
Direkte sekvense analyser for genotyper av CTLA-4 -1722T /C SNP (De tre listene representerer tre genotyper)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0094039.s001 plakater (TIF)
Sjekkliste S1.
PRISMA sjekkliste, sjekkliste over elementer som skal inkluderes når rapportere en systematisk gjennomgang eller meta-analyse (diagnostisk vurdering som består av kohortstudier)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0094039.s002 plakater (docx)
