Abstract
Samler bevis tyder på behovet for ytterligere stratifisering av pasienter i samme tumorstadium i henhold til molekylære faktorer. Vi vurdere kombinasjonen av kreft stadium og DNA-metylering status som en indikator for risiko for tilbakefall og dødelighet hos pasienter med kolorektal kreft (CRC). En kohortstudie av 215 pasienter med CRC (gjennomsnittsalder 64,32 år, 50,5% av menn) fra Tri-service General Hospital i Taiwan undersøkt sammenhengen mellom kreft stadium og risiko for CRC tilbakefall og dødelighet. En Cox proporsjonal risikomodell ble brukt til å analysere pasient metylering status og klinisk informasjon ved studiestart, og deres foreninger med CRC tilbakefall og dødelighet under oppfølging. Avansert stadium pasienter med
p16
,
hMLH1
, og
MGMT
metylering var assosiert med høyere risiko for CRC tilbakefall sammenlignet med den lokale scenen pasienter med unmethylation status i tumorvev , med justerte hazard ratio (HRS) (95% konfidensintervall [CI]) på 9,64 (2,92 til 31,81), 8,29 (3.40-20.22), og 11,83 (3,49 til 40,12), henholdsvis. Når du analyserer normalt vev, observerte vi tilsvarende risiko for CRC tilbakefall med justerte timer (95% KI) av 10,85 (4,06 til 28,96), 9,04 (3,79 til 21,54), og 12,61 (4,90 til 32,44), henholdsvis. For kombinerte analyser, er risikoen for tilbakefall hos pasienter i avansert stadium med DNA metylering i både normale og tumorvev, sammenlignet med lokale scenen med unmethylation, ble økt med justert HR (95% KI) av 9,37 (3,36 til 26,09). I avansert stadium pasientene ble metylering status og vev subtype assosiert med økt risiko for 5-års kumulativ CRC tilbakefall (
p
0,001). Denne studien viser at klynge DNA metylering status i henhold til kreft stadium og vev subtype er avgjørende for vurderingen av risikoen for tilbakefall hos CRC pasienter og også indikert et underliggende mekanisme
Citation. Kuan JC, Wu CC, Sun CA Chu CM, Lin FG, Hsu CH, et al. (2015) DNA metylering Kombinasjoner i tilknytning Normal Colon Tissue Tippe kreft tilbakefall: Bevis fra en klinisk Cohort Study. PLoS ONE 10 (3): e0123396. doi: 10,1371 /journal.pone.0123396
Academic Redaktør: Hiromu Suzuki, Sapporo Medical University, JAPAN
mottatt: 07.10.2014; Godkjent: 18 februar 2015; Publisert: 27 mars 2015
Copyright: © 2015 Kuan et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Datatilgjengelighet: Data har vært avsatt til Dryad: doi:. 10,5061 /dryad.pg126
Finansiering: Denne studien ble støttet av forskningsmidler fra National Science Council, republikken Kina (NSC 98-2314-B016-001, NSC 99-2314 -B016-020, NSC 100-2314-B016-025, og NSC 101-2314-B-016-029). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
tykktarms~~POS=TRUNC kreft~~POS=HEADCOMP (CRC) er en av de vanligste kreftformene, med over 140 000 nye tilfeller og 50,830 dødsfall anslått å ha skjedd i USA i 2013 [1]. Selv om forekomst og dødelighet av CRC har sunket betraktelig de siste årene på grunn av betydelige forbedringer i screening og behandlingsstrategier, prognosen for CRC pasienter etter kirurgisk reseksjon forblir fattige [2].
De gjeldende retningslinjer for vurdering av prognosen for CRC pasienter understreke klassifisering av individuelle tumor-node-metastase elementer [3]. Imidlertid har akkumulerende bevis antydet behovet for ytterligere lagdeling av pasientene i den samme tumorstadium i henhold til molekyl faktorer [4]. Videre kan de molekylære faktorer, som inkluderer biomarkører for flere krefttyper, har potensial klinisk verdi i å forutsi kreftutvikling og progresjon, og forutsi prognosen for kreftpasienter [5,6].
CRC er anerkjent som en konsekvens av akkumulering av genetiske (genmutasjoner) og epigenetisk modifikasjoner (metylering avvikende DNA) som forvandler colonic epitelceller inn i tykktarm adenokarsinomceller [7]. Epigenetisk modifikasjon, som omfatter DNA og histonmodifikasjonene, spiller en kritisk rolle i karsinogenisitetsstudier baner i flere krefttyper. Tidligere studier har vist at den mest hyppig avvikende epigenetisk modifikasjon i cancer, DNA-metylering, reduserer effektiviteten av RNA-transkripsjon av tumorsuppressorgener [8,9]. Fersk undersøkelse har konkludert med at flere genet promoter metyleringer resultere i transkripsjonen stanse, og kan utnyttes som biomarkører for tidlig deteksjon av CRC [10]. Tumorprogresjon i CRC er forårsaket av tap av funksjons i cellesyklusregulering og DNA-feilaktige reparasjons (MMR), som er relatert til DNA-metylering av transkripsjonsstartsetet [11]. Tidligere studier har identifisert DNA-metylering relaterte gener assosiert med karsinogenisitetsstudier trasé ved hjelp av genet Slå [12,13]. Men disse studiene ikke analysere DNA metylering status og klinisk stadium for oppfølging av pasienter med CRC.
Hensikten med denne studien var å vurdere kombinasjonen av kreft stadium og DNA metylering status som en indikator på risikoen for tilbakefall og død blant pasienter med CRC. Vi har også undersøkt sammenhengen mellom risikofaktorer for og prognose av CRC, etter stratifisering i henhold til kolon vev undergrupper.
Materialer og Metoder
Pasient egenskaper
Ifølge den skrift driftsrutiner, Good Clinical Practice (GCP), og gjeldende myndighetskrav, denne søknaden godkjent av Tri-service General Hospital Institutional Review Board (IRB) (TSGHIRB godkjenningsnummer: 098-05-292). Styret ble organisert under, og driver per International Conference on Harmonisering (ICH) /WHO GCP og gjeldende lover og forskrifter. Alle pasienter signert informert samtykke brev og ble klinisk diagnostisert med CRC måtte være i stand til å tåle kirurgisk reseksjon. Pasient egenskaper (kjønn, alder ved kirurgi, scene, gjentakelse, og dødelighet) ble innhentet fra sine medisinske historien. Par av prøvene ble samlet inn fra 215 CRC pasienter (430 prøver) som oppfylte inklusjonskriteriene. Prøvetaking ble utført ved kirurgiske klinikker, hvor svulsten og normalt vev ble resected samtidig. Den tilstøtende normale vevsprøver ble samlet inn fra et snitt 10 cm unna de karsinom nettsteder. Alle prøvene ble umiddelbart lagret i flytende nitrogen. Reseksjonen prosedyren ble anmeldt av Institutt for kolorektal inngrep, Tri-service General Hospital.
DNA og natriumbisulfitt behandling
Genomisk DNA ble ekstrahert fra vevsprøver ved hjelp av en MagCore Automated Nucleic Acid Extractor (RBC Bioscience, Taipei, Taiwan) og en Genomisk DNA Tissue Kit i henhold til produsentens protokoll. Det resulterende DNA ble natriumbisulfitt-modifisert ved anvendelse av en DNA-EZ Metylering Kit (Zymo Research, Orange, USA). En metylert DNA-kontroll for metylering spesifikke polymerase kjedereaksjon (MS-PCR) analyser ble generert ved hjelp SSSI metylase (Zymo Research, Orange, USA).
Metylering spesifikk PCR assay
Valgt 3 tumorsuppressorgener (
p16
,
hMLH1
, og
MGMT
) er knyttet til risiko for CRC som er involvert i de samme veiene forbundet med kreft stadier og prognose, inkludert MMR og cellecyklusen [14]. Betingelser for DAN sulfitt-behandling og metylering spesifikke PCR assay ble gitt i S1 Metoder og kvalitetskontroll av analysen ble gir i S1 Fig.
Statistisk analyse
Pasient baseline inkludert sex , alder kirurgi (kontinuerlig), scene (i, II, III og IV), gjentakelse, dødelighet status, og genet promoter-regionen metylering status i kandidatgener (
p16
,
hMLH1
og
MGMT
), ble sammenlignet. For å vurdere mulige interaksjoner mellom DNA metylering og klinisk stadium, og risiko for CRC tilbakefall og dødelighet, ble pasienter med ulike kreft stadier vurderes separat og også delt inn i 2 undergrupper (lokale og avansert). Tumorvev ble sammenlignet med tilstøtende normale vev. Flere faktorer kan ha bidratt til forskjellene mellom våre resultater og de av andre studier. Medvirkende årsaker justering er beskrevet i S1 metoder. Alle statistiske analyser ble utført ved hjelp av SPSS programvare (IBM SPSS statistikk 21; Asia Analytics Taiwan Ltd, Taipei, Taiwan). Alle statistiske tester ble to-sidig med en α nivå på 0,05.
Resultater
Gjennomsnittlig alder (± SD) av pasienter var 64,32 (± 14,48) år, og menn utgjorde 50,5 % av studien prøven. Samlet er gjennomsnittlig varighet (± SD) for oppfølging var 24,94 (± 17.90) måneder. I løpet av de 5,363 person-måneders oppfølging, vi identifisert 85 tilfeller av CRC tilbakefall og 43 dødsfall, med en forekomst tetthet på 15,85 og 8,02 per 1000 personår måneder, henholdsvis. Sammenhengen mellom klinisk stadium og risiko for CRC tilbakefall og dødelighet er gir i S1 resultater.
Tabell 1 viser baseline karakteristikker for pasientene i henhold til deres DNA metylering status. Ved analyse normale vev, ble det observert at pasienter med høyere metylering status av tumorsuppressorgener var signifikant assosiert med en høyere andel av CRC tilbakefall enn pasienter med lavere metylering status var (55,3% vs. 37,7%,
p
= 0,012). Denne foreningen var border betydelig i tumorvev (84,7% vs. 73,1%,
p
= 0,065). Vi videre undersøkte sammenhengen mellom kreft stadium og risiko for CRC tilbakefall, stratifisering av target gen metylering status i vevet undergrupper etter justert for kjønn, alder ved kirurgi, og adjuvant kjemoterapi (tabell 2). Når du analyserer tumorvev, observerte vi at avansert stadium pasienter med
p16
,
hMLH1
, og
MGMT
metylering var assosiert med høyere risiko for CRC tilbakefall sammenlignet med den lokale stadium pasienter med unmethylation status, med justerte timer (95% KI) av 9,64 (2,92 til 31,81), 8,29 (3,40 til 20,22), og 11,83 (3,49 til 40,12), henholdsvis. Når du analyserer normalt vev, observerte vi tilsvarende risiko for CRC tilbakefall i avansert stadium pasienter med
p16
,
hMLH1
, og
MGMT
metylering sammenlignet med den lokale scenen pasienter med unmethylation status, med justerte timer (95% KI) av 10,85 (4,06 til 28,96), 9,04 (3,79 til 21,54), og 12,61 (4,90 til 32,44), henholdsvis. Videre, en Kaplan-Meier analyse med log-rank test viste betydningen av sammenhengen mellom kreft stadium og DNA metylering status i tilstøtende normalt vev, og 5-års kumulativ tilbakefall av CRC (
p
0,001 ; Figur 1); en Cox regresjonsmodell bekreftet konsekvent risiko etter justert potensielle konfunderende faktorer, som kjønn, alder, tumor beliggenhet, adjuvant kjemoterapi, og klinisk stadium (
p
0,001)
Den kumulative. tilbakefall var signifikant forskjellig i de 4 undergrupper i løpet av 5-års oppfølging etter justert for kjønn, alder ved kirurgi, tumor beliggenhet, adjuvant kjemoterapi, og klinisk stadium.
Som vist i tabell 3, vi senere analysert DNA metylering status og CRC tilbakefall i studien pasienter, stratifisering i henhold til kreft stadium (lokal og avansert) og vev subtype (normal og svulst). Vi observerte at risikoen for CRC tilbakefall var signifikant assosiert med metylering status hos pasientene i de ulike kreft etapper, og i de 2 vev undergrupper, etter justering for kjønn og alder ved kirurgi (
p
0,001) . De lokale scenen pasienter ble-signifikant assosiert med økt risiko for CRC tilbakefall, uavhengig av metylering status og vev subtype. I avansert stadium pasientene ble metylering status og vev subtype assosiert med økt risiko for CRC tilbakefall.
Diskusjoner
Våre resultater indikerer at DNA metylering av visse gener og klinisk stadium var assosiert med risiko for CRC tilbakefall i våre studie pasienter. Vi observerte at DNA metylering status i de 3 målgener og kreft stadium var signifikant assosiert med CRC tilbakefall i tumor og normalt vev. Når vi gruppert gense metylering statuser i henhold til kreft stadium og vev subtype, observerte vi en ytterligere økning i risikoen for CRC tilbakefall. Disse resultatene antydet at klinisk kreft stadium og DNA metylering status potensielt kan bli vurdert som predikator for risiko for CRC tilbakefall.
Tidligere studier tilsvar observert en sammenheng mellom kort tilbakefall overlevelse og DNA metylering i CRC pasienter [15 -17]. Zitt et al sammenlignet ulike screeningtester for CRC, og rapporterte at DNA metylering gir et klinisk nyttig indikator for tidlig påvisning av sykdomsprogresjon hos pasienter med CRC, noe som potensielt kan forbedre pasientens overlevelse og livskvalitet [15]. Kim et al rapporterte at DNA-metylering av flere aktivatorer kan gi en biomarkør for tidlig deteksjon av CRC, og at DNA-metylering mønstre kan også anvendes som prediktor for metastatisk eller aggressiv CRC [16]. Dataene fra en klinisk oppfølgingsstudie viste at metylering av spesifikke gener er assosiert med dårlig overlevelse i avanserte CRC pasienter [17]. En stor oppfølgingsstudie på 61 494 asiatiske og kaukasiske pasienter med CRC indikerte at satsene for overlevelse signifikant høyere i pasienter med filippinsk og kinesisk etnisitet enn hos andre pasienter [18]. Likevel, våre resultater fra en kinesisk befolkning var i samsvar med de av de beskrevne studiene og studien hatt lignende resultater med Kreft Genome Atlas [19].
Avvik i metylering av makromolekyler, særlig DNA, samt brudd i DNA-syntese og reparasjon, anses å spille viktige roller i karsinogenese [20]. DNA-metylering er de mest omfattende undersøkte epigenetisk endring [21], og kan tilveiebringe en ny generasjon av kreft. Epigenetiske modifikasjoner, spesielt DNA metylering i utvalgte gener arrangører, er vanlige molekylære nivå endringer i humane tumorer [16]. I denne studien ble det observert at metylering av visse gener var assosiert med signifikant økt risiko for CRC tilbakefall. Brock et al identifisert metylering av
p16 Hotell og
CDH13
i tumorous og mediastinale lymfeknuter, estimere odds ratio (ORS) for CRC tilbakefall som 8,00 (95% KI, 2,50 til 25,51) og 4,32 (95% KI, 1,61 til 185,02), henholdsvis. Når de vurderes samlet metylering i tumorous og mediastinale lymfeknuter, OR for CRC tilbakefall var 15,5 (1,61 til 185,02) [22]. Våre resultater på samme måte vist økt risiko for CRC tilbakefall når stratifying DNA metylering status i henhold til klinisk kreft stadium og vev subtype.
Genene vurdert i denne studien,
p16
,
hMLH1
og
MGMT
, er involvert i cellesyklus regulering og DNA MMR. Avvikende promotor metylering av tumorsuppressorgener kan føre til downregulated transkripsjonen ekspresjon og protein ekspresjon i epitelceller [23]. MMR og cellesykluskontroll både spille avgjørende roller i sletting av mononukleotid gjentar, og tap av reparasjonssystem er en av de viktigste mekanismene som er involvert i akkumulering av funksjonell-change onkogene effekter, inkludert CRC utvikling [24]. DNA metylering endringer redegjøre for histologisk heterogenitet og clinicopathological mangfold av kreft hos mennesker. Overekspresjon av DNA-metyltransferase-1 er ikke en sekundær følge av øket celle-proliferativ aktivitet, men er betydelig korrelert med akkumulert DNA hypermethylation i CpG øyene i tumor-relaterte gener [25]. Sammenhengen mellom DNA-metylering og kreft stadium kan være avhengig av interleukin 6, en kronisk betennelse markør som forbedrer hypermethylation av tumor suppressor gene
p53
familier, men reduserer metylering av den epidermale vekstfaktor-reseptor [26]. Kronisk inflammasjon er ansett å være forårsaket av betennelse-mediert cytosin skade, og produktene av slike skader kan gi en mekanisk forbindelse mellom betennelse og kreft [27], og fremme avvikende metylering i humane kreftformer. Inflammatoriske respons mediatorer, slik som cytokiner, frie radikaler, og vekstfaktorer, fremkalle epigenetiske endringer i tumorsuppressorgener. Observasjoner av slike endringer er ytterligere forsterket sammenheng mellom betennelse og kreft [28].
Derfor er risikoen for dårlig prognose økninger i de avanserte kliniske stadier av kreft når pasienter diagnostisert første, selv etter kirurgisk reseksjon. Våre resultater var i samsvar med de relaterte studier knytte lymfatisk og fjernmetastaser med dårlig prognose [29,30]. De avanserte stadier av CRC er forbundet med høyere risiko for dårlig prognose i forhold til lokale scenen CRC. I tillegg er en klinisk vurdering av lungekreft indikerte at når strategier er på plass for å påskynde behandlingen av personer mistenkt for å ha cancer, sykdommen vanligvis skifter mot et tidligere stadium og reseksjon prisene øker [31]. Tidligere studier har identifisert at avvikende arrangøren hypermethylation av kreftrelaterte gener kan være potensielt nyttig som epigenetiske markører for å forutsi utfallet av kreftbehandling [32,33]. I den andre studien fra 22 ikke-småcellet lungekreft (NSCLC) pasienter ved Esteller et al., 68% av pasientene som viser hypermethylation i tumor-DNA også påvist i serum DNA tvers stadier, som skjedde med all etappen fra jeg til IIIA [ ,,,0],33]. To studier viste at avvikende DNA-metylering er assosiert med kreft prognose, til og med i forskjellige kliniske stadier. En annen studie viste genet promoter metylering er assosiert med tidlig tilbakefall av stadium I NSCLC [22]. I tillegg er andelene av metylering var for det meste lavere enn i normalt vev i tumorvev, i tabell 1, men risikoen for tilbakefall var lik i disse to typer av vev. Resultatene tyder på at når DNA-metylering ble påvist i avanserte pasienter, vil risikoen for tilbakefall økes kraftig. Tidligere studie har vist mekanismen for denne økte risikoen fra endringer av molekylært nivå. Sato et al. har rapportert DNA-metylering av ikke-cancerøse vev oppnådd fra pasienter med lunge adenokarsinomer ble ved forstadier stadier med avvikende DNA-metylering i løpet av flere gener [34]. DNA metylering endringer på forstadier stadier blir styrket i normalt vev under progresjon til utviklet lunge adenokarsinom. Som besto med våre funn at de molekylære endringene ikke skal bli funnet av patologisk undersøkelse, men DNA-metylering endringer har skjedd i tilstøtende normalt vev fra lesjoner. Derfor er de DNA-metylering endringer i normale vev fører til en dårlig prognose enn i kreftvev. Gene metylering status i en uavhengig validering kohort ble gjennomført med betydelig høyere odds ratio for tilbakefall blant hvis pasienter, vanligvis økt med ulike områder av denaturert registrering, for eksempel svulst, regionale noder, mediastinum noder, og tumor og mediastinum noder. Videre undersøkelser av pasientens kliniske opplysninger, for eksempel blod biokjemiske data eller medisiner historie, med stratifisering for å identifisere høyrisikogrupper CRC tilbakefall, må fylles ut.
De styrker og begrensninger i vår studie garanterer diskusjon. I denne studien har vi evaluert oppfølgingsdata på DNA metylering og kreft stadium som indikatorer på risiko for CRC tilbakefall etter vev subtype. Evalueringene gjennomførte vi ved hjelp av molekylære biomarkører og kliniske opplysninger. Våre resultater kan gi leger med en klinisk referanse for prognosen for CRC pasienter etter kirurgi. Imidlertid kan det tenkes at lengre tid av oppfølging kan ha større forskjeller i denne studien. Likevel, tidligere studier viste kort median oppfølging etter kirurgisk behandling blant CRC pasienter under 2 år med oppfølging perioder, noe som er rapportert signifikante forskjeller i forekomst av tilbakefall [35,36]. Dernest vi ikke vurdere betennelsesreaksjoner eller inflammasjonsrelaterte biomarkører i CRC pasienter. Kanai et al. identifisert at kronisk betennelse kan påvirke prognosen av CRC pasienter [25]. Vi klarte ikke å evaluere denne foreningen. Selv om semikvantitativ MSP ble anvendt i denne studien, kvantitative MPS eksempel, pyro-sekvensering skal utføres for videre studier. Dessuten var genekspresjon ikke stilling i denne studien på grunn av de frosne vev som er lagret i tumorbanken, vil den totale RNA-nivået i prøven var utilstrekkelig for eksperiment av genekspresjon. Replication ble ikke utført i denne studien.
I konklusjonen, denne studien viser at clustering DNA metylering status i henhold til kreft stadium og vev subtype er avgjørende for vurderingen av risikoen for tilbakefall hos CRC pasienter. Resultatene fra studien viste også en underliggende mekanisme for økt risiko for tilbakefall hos CRC pasienter, spesielt i nontumorous vev.
Hjelpemiddel Informasjon
S1 metoder. Metylering-spesifikk PCR-tilstand.
Bisulfite-behandlede DNA ble underkastet en MS-PCR ved anvendelse av primerpar konstruert for spesifikt å amplifisere mål-gener. Reaksjonsoppløsningen (15 ul) inneholdt varmstart Taq Premiks (7,5 ul) (RBC Bioscience, Taipei, Taiwan), bisulfitt-behandlet DNA (0,6 ul), og 0,6-ul alikvoter av forover og revers primere. Primersekvensene for
p16
,
hMLH1
, og
MGMT
har blitt beskrevet tidligere. [14] Den polymerase kjedereaksjon (PCR) sykkelforholdene for metylert og unmethylated primere som er involvert denaturering ved 95 ° C i 10 minutter, etterfulgt av 35 sykluser ved 95 ° C i 30 sekunder, annealing ved 62 ° C, 60 ° C, og 53 ° C i 35 sekunder og 72 ° C i 30 sekunder, og en endelig forlengelse ved 72 ° C i 4 minutter. PCR-produktene ble blandet med en DNA-fargestoff (bioman, Taipei, Taiwan), underkastet horisontal gelelektroforese på en 2% agarose-gel i 25 minutter og farget med etidiumbromid i 10 minutter. Resultatene ble analysert under ultrafiolett (UV) gjennomlysnings som ble vist i S1 fig. Statistiske metoder. I denne studien ble pasientene klassifisert i henhold til metylering av 3 målgener. De primære effektmål var CRC tilbakefall og dødelighet. Person-års oppfølging ble brukt til å beregne CRC tilbakefall og dødelighet, og starter på datoen for kirurgisk reseksjon og fortsetter frem til dato for diagnostisering av CRC tilbakefall, dødsdato, eller 31. desember 2012. En Kaplan- Meier analyse og en Cox proporsjonal risikomodell ble brukt til å analysere pasient metylering status og klinisk informasjon ved studiestart, og deres foreninger med CRC tilbakefall eller dødelighet under oppfølging, etter justering for potensielle forvekslings kovariatene. De justerte hazard ratio (timer) og 95% konfidensintervall (CIS) ble beregnet til å vurdere metylering status som en prediktor for risiko for CRC tilbakefall. De potensielle konfunderende variabler i modellen var kjønn, alder kirurgi (behandlet som en kontinuerlig variabel), tumor beliggenhet, og adjuvant kjemoterapi. De justerte HRS ble deretter beregnet for hver kategori. Assosiasjonene mellom DNA metylering status og risiko for CRC tilbakefall og dødelighet ble videre evaluert med analyser stratifisert i henhold til grunnlinjen klinisk kreft stadium (I-IV). For å teste en lineær trend over den kliniske kreft stadier og metylering statuser i subtyper av vev, ble forekomsten av CRC tilbakefall i hver kategori som brukes som en kontinuerlig variabel i en multivariabel modell
doi:. 10,1371 /journal.pone.0123396 .s001 product: (docx)
S1 fig. Agarosegel ble representert
p16
genet promoter metylert eller unmethylated status for CRC pasienter
T:. Svulstvev; N: normalt vev; MR: markør for referanse av PCR produkt størrelse; U: unmethylation; M: metylering. For kvaliteten av metylering-spesifikk PCR, ble forsøkskontroll presentert av WBC fra friske mennesker, og to humane kolorektal adenokarsinom-cellelinjer (HT29 og DLD1). Vann var for negativ kontroll for dette eksperimentet
doi:. 10,1371 /journal.pone.0123396.s002 plakater (TIF)
S1 resultater. Våre resultater av assosiasjoner mellom de ulike kreft stadier og CRC tilbakefall og dødelighet ble observert en signifikant trinnvis økning i CRC tilbakefall og dødelighet blant stadium I-IV pasienter (
p
0,001).
stadium III og IV pasienter ble assosiert med betydelig høyere risiko for CRC tilbakefall sammenlignet med scenen i pasienter med justerte timer (95% KI) av 19,37 (2,59 til 145,05) og 56,36 (7,42 til 428,09), henholdsvis. Scenen IV pasienter ble assosiert med betydelig høyere risiko for dødelighet sammenlignet med scenen I pasienter, med en justert HR (95% KI) av 5,76 (1,99 til 16,61). Vi inkluderte scenen I og II pasienter i den lokale scenen undergruppe, og scenen III og IV pasienter i avansert stadium gruppen. Pasientene i avansert stadium gruppen var assosiert med høyere risiko for CRC tilbakefall og dødelighet sammenlignet med pasientene i den lokale scenen undergruppe, med justert timer (95% KI) av 6,73 (3,56 til 12,71) og 1,75 (0,94 til 3,28), henholdsvis
doi:. 10,1371 /journal.pone.0123396.s003 plakater (docx)
