Abstract
IL-10 er assosiert med tumor malignitet via immun flukt. Vi antok at IL-10 haplotyper kategorisert etter IL-10 promoter polymorfismer på -1082A G, -819C T, og -592C En kan påvirke IL-10 uttrykk og gir opphav til ikke-småcellet lungekreft (NSCLC) pasienter med dårlige resultater og tilbakefall. Vi samlet tilstøtende normale vev fra 385 NSCLC for å bestemme IL-10-haplotyper ved direkte sekvensering og polymerasekjedereaksjon rflp (PCR-RFLP). Av de 385 svulster, 241 var tilgjengelig for å vurdere IL-10 mRNA uttrykk nivåer av real-time RT-PCR. Påvirkningen av IL-10-haplotyper på total overlevelse (OS) og tilbakefall overlevelse (RFS) ble bestemt ved Kaplan-Meier og multivariat Cox regresjonsanalyse. Resultatene viste at IL-10-mRNA-nivåene var signifikant høyere i svulster med den ikke-ATA-haplotypen enn med ATA haplotype (P = 0,004). Pasienter med ikke-ATA haplotype hadde kortere OS og RFS perioder enn gjorde pasienter med ATA haplotype. Dette kan være forbundet med den observasjon at antall tumor-infiltrerende lymfocytter ble redusert i svulstene med høyere nivåer av IL-10. Gående, T-celler fra perifert blod fra pasienter med ikke-ATA-haplotypen var mer mottagelige for apoptose og mindre cytotoksiske til tumorcellene, sammenlignet med de fra pasienter med ATA haplotype. Resultatene tyder på at IL-10 kan fremme tumor malignitet via fremmer T-celle-apoptose og tumorcelleoverlevelse, og IL-10-haplotypen evaluert ved PCR-RFLP, eller direkte sekvensering kan anvendes for å forutsi overlevelse og tilbakefall i resekterte NSCLC, bidrar klinikere å gjøre riktige beslutninger om behandling av pasientene
Citation:. Wang YC, Sung WW, Wu TC, Wang L, Chien WP, Cheng YW, et al. (2012) Interleukin-10 haplotype Kan Tippe Overlevelse og tilbakefall hos resected ikke-småcellet lungekreft. PLoS ONE syv (7): e39525. doi: 10,1371 /journal.pone.0039525
Redaktør: Pan-Chyr Yang, National Taiwan University Hospital, Taiwan
mottatt: 06.01.2012; Godkjent: 22 mai 2012; Publisert: 27.07.2012
Copyright: © Wang et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble i fellesskap støttet med tilskudd fra National Science Council (NSC-96-2628-B-040-002-My3), og Department of Health (DOH101-TD-C-111-005) av Taiwan, ROC. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
interleukin-10 (IL-10), en viktig immunoinhibitory cytokin, er en del av en balansert nettverk av cytokiner [1] – [5]. Den IL-10-cytokin produsert av en rekke celler, inkludert normale og neoplastiske B-celler, stimulerte monocytter, makrofager, og en undergruppe av T-celler [1] – [4]. Mange case-control studier har indikert en sammenslutning av IL-10 promoter polymorfismer (SNPs) med menneskelige kreftrisiko, herunder risiko for lungekreft [6] – [9]. Av IL-10 promoter SNPs, de på -1082A G, -819C T, og -592G har A vært fokus for nyere studier, og fenotyper av disse single nucleotide SNPs har blitt ytterligere bekreftet av funksjonelle analyser i cellen modeller [10], [11].
Tumor immun overvåking studier har avdekket en sammenheng mellom IL-10 og utvikling av kreft hos mennesker som store B-celle lymfom, T-celle non-Hodgkins lymfom, og tykktarm, prostata, bryst, mage, myelom, og lungekreft [4], [6] – [9], [12] – [22]. I lungekreft tilfeller har noen rapporter indikerte at tap av IL-10 i lungesvulster kan fremme tumorprogresjon og resultere i dårlige kliniske utfall hos pasienter; imidlertid har en motsatt virkning blitt rapportert i andre studier [23] – [29]. Interessant nok har fravær av IL-10-ekspresjon er assosiert med dårlig resultat i stadium I ikke-småcellet lungekreft (NSCLC) [24], [25], mens i sent stadium NSCLC, tilstedeværelse av IL-10-positive makrofager ved tumoravgrensninger kan være en indikator på dårlig prognostisk utfallet [23]. I tillegg har kortere overlevelsestider er rapportert i avanserte lungekreftpasienter som hadde høye serumkonsentrasjoner av IL-10 nivåer, sammenlignet med lignende pasienter som hadde lavt serum IL-10-nivåer [26]. En klar rolle for IL-10 i lunge tumorigenesis gjenstår derfor å bli identifisert.
I denne studien undersøkte vi normalt lungevev tilknytning til kirurgisk resected NSCLC svulster i 385 pasienter for å identifisere IL-10 promoter SNPs på -1082A G, -819C T, og -592C A ved direkte sekvensering og polymerasekjedereaksjon rflp (PCR-RFLP). Disse tre IL-10-promotor SNP’er har blitt rapportert å produsere hovedsakelig tre haplotyper: GCC, ACC, ATA [30] – [33]. I den foreliggende studien ble pasientene delt opp i to haplotyper, ATA og ikke-ATA (fig. 1), som var blitt brukt i to tidligere rapporter [34], [35]. Vi spurte: 1) om svulster fra ikke-ATA bærere har høyere IL-10 mRNA uttrykk nivåer enn svulster fra ATA bærere, 2) om pasienter med en ikke-ATA haplotype eller høyere IL-10 mRNA nivåer i lungesvulster har større svulst immun overvåking, og 3) hvorvidt IL-10 haplotype eller mRNA-ekspresjon kan bli brukt til å forutsi total overlevelse (OS) og tilbakefall overlevelse (RFS) i resekterte NSCLC.
SNP’er i posisjonene -819 og -592 i IL-10 promoter var i fullstendig koblingsulikevekt. Tre IL-10 haplotyper ble observert og forekomst av hver haplotype eller haplotype kombinasjonen er oppført i de skraverte boksene.
(A) Representant for CD3 farging av Tīlss i lungesvulster med lav tIL tetthet ( 25 CD3
+ /HPF) (venstre: 100x, høyre: 400x); (B) Tīlss presentert i lungesvulster viser høy TIL tetthet (≥25 CD3
+ /HPF) (venstre: 100x, høyre: 400x).
T-celle apoptose ble definert som Annexin V
+ /CD3
+ og tumor celle apoptose ble definert som Annexin V
+ /PKH26
+. (A) Representative flowcytometri av SSC-FSC skala for gating lymfocyttpopulasjon, og PKH26 angivelse for merking av tumorceller. (B) Representative flowcytometri av apoptose resultat av CD3
+ -T-celler og PKH26 gated tumorceller. (C) Høyere nivå av T-celle apoptose etter co-kulturen med tumorceller fra 22 friske mannlige frivillige som næret IL-10 ikke-ATA haplotype versus IL-10 ATA haplotype (T-celle apoptose priser under co-kultur med A549: 10.49 ± 3.04 vs. 8.34 ± 2.37, P = 0,011, ved samtidig dyrket med TL-1: 18,30 ± 3,82 vs. 12,97 ± 2,94, P 0,01). Vi har lagt til IL-10 rekombinant protein til co-dyrkingsmedium av PBMC husing IL-10 ATA haplotype, og T apoptose hastigheten ble økt (økt 7,63% ved samtidig kultur med A549, P 0,001; økte 2,73% ved samtidig -Kultur med TL-1, P = 0,008). Vi har også lagt IL-10 nøytralisert antistoff til ko-kulturmediet av PBMC som bærer den ikke-ATA IL-10 haplotype, og T apoptose hastigheten ble redusert (med 1,78% i løpet av ko-kultur med A549, P = 0,017; av 7,75 % i løpet av co-kulturen med TL-1, P 0,001). (D) Høyere nivå av tumorceller apoptose etter co-kultur med PBMC fra 22 friske mannlige frivillige som næret IL-10 ATA haplotype versus ikke-ATA haplotype (apoptose av A549: 16,80 ± 3,38 vs. 14,45 ± 3,78, P = 0.035, apoptose av TL-1: 12.95 ± 3.05 vs. 8.68 ± 2.57, P 0,01). Vi har lagt IL-10 rekombinant protein til den ko-kulturmediet av PBMC som bærer IL-10 ATA haplotypen, og svulsten apoptose hastigheten ble redusert (nedsatt 4,29% av A549, P 0,001; minsket 1,94% av TL-1, P- = 0,043). Vi har også lagt IL-10-antistoff nøytralisert til den ko-kulturmediet av PBMC som bærer IL-10 ikke-ATA-haplotypen, og svulsten apoptose hastigheten øket (økt 2,46% av A549, P = 0,037; økt 6,67% av TL- 1, P . 0.001)
(20 ug per 3 dager). Mus ble ofret i 14
th dager. Lungemetastaser ble funnet i mus injisert med IgG-antistoff (A) og ble ikke funnet i de med IL-10 nøytralisere antistoff (B).
I henhold til IL-10 haplotype (A), IL- 10 mRNA (B), og kombinasjonen av IL-10 haplotype og mRNA (C).
Materialer og metoder
Pasienter
Denne studien inkluderte 385 pasienter med NSCLC. Alle pasientene var ikke-relaterte etniske kinesere og beboere i sentrale Taiwan. Pasientene hadde vært diagnostisert med adenokarsinom (194; 50,4%) eller plateepitelkarsinom (191; 49,6%) og gjennomgikk kirurgisk reseksjon ved Divisjon for Thoracic Surgery, Taichung Veterans General Hospital, mellom 1993 og 2004. Prøvene ble umiddelbart frosset på kirurgi og holdt ved -80 ° C inntil behandling. Studien ble godkjent av Institutional Review Board (Institutional Review Board, Chung Shan Medical University Hospital CSMUH No:. CS11177). Kreft tilbakefall data ble innhentet av diagrammet gjennomgang og bekreftet av thorax kirurger. Kliniske parametre og OS og RFS data ble samlet inn fra chart vurderinger (32 pasienter hadde ingen tilbakefall data) og Taiwan Kreftregisteret, Institutt for helse, direktør Yuan, ROC.
Genomisk DNA-ekstraksjon, RNA ekstraksjon, og cDNA syntese
Genomisk DNA ble ekstrahert ved konvensjonelle metoder. Kirurgisk reseksjon normalt vev tilstøtende til lungen tumor ble fremstilt ved hjelp av proteinase K-fordøyelse, og DNA ble ekstrahert ved hjelp av fenol-kloroform, fulgt av etanolutfelling.
Total RNA ble ekstrahert fra 241 tilgjengelige lunge tumorvev ved hjelp av TRIzol reagens ( Invitrogen). Første-tråd cDNA-syntese i nærvær av tilfeldige primere ble utført ved bruk av en høykapasitets-cDNA revers transkripsjon kit (Applied Biosystems) i henhold til produsentens instruksjoner.
PCR-RFLP-analyse for IL-10 -592C /A genetisk SNP
genotyper av IL-10 -592C /A ble bestemt ved hjelp av PCR-RFLP som beskrevet av Rad et al. [36]. PCR forsterkning produkter fra 50 prøver ble tilfeldig valgt for direkte sekvensering for å bekrefte genotype indikert av PCR-RFLP.
Direkte sekvense for IL-10 -1082A /G og -819C /T genetiske SNPs
SNP’er av IL-10 -1082G /A og -819C /T ble bestemt ved direkte sekvensering av PCR-produkter fra amplifiserte DNA fra normale vev tilstøtende til tumorene. DNA-prøver ble fremstilt under anvendelse av proteinase K-fordøyelse og fenol-kloroform-ekstraksjon, fulgt av etanolutfelling. Primerne anvendt for DNA-amplifisering og direkte sekvensering var: 5′-CTCGCCGCAACCCAACTGGC-3 «(F) og 5′-TGGGGGAAGTGGGTAAGAGT-3» (R). PCR-syklusbetingelser bestod av en innledende denatureringstrinn ved 94 ° C i 10 minutter, etterfulgt av 35 sykluser av 30 sekunder ved 94 ° C; 45s ved 56 ° C; 45s ved 72 ° C; og en sluttforlengelse ved 72 ° C i 10 min. PCR-produktene ble sekvensert ved hjelp av et Applied Biosystems 3100 Avant Genetic Analyzer (Applied Biosystems).
Real-time RT-PCR
Real-time RT-PCR forsterkning av cDNA prøvene ble utført med en ABI 7500 real Time PCR System (Applied Biosystems) og SYBR grønt fargestoff å kvantifisere IL-10 mRNA transkripter. Real-time RT-PCR primere var som følger: for IL-10 transkripsjoner, 5′-GGCGCTGTCATCGATTTCTT-3 «(forward) og 5′-TGGAGCTTATTAAAGGCATTCTTCAC-3 «(bakover); for 18S genet transkripsjoner, 5′-TCGGAACTGAGGCCATGA-3 «(forward) og 5»-CCGGTCGGCATCGTTTA-3 «(bakover). Produktene forsterket av IL-10-primere ble sjekket ved direkte sekvensering. Mengden av IL-10 mRNA transkripter ble kvantifisert i forhold til 18S internkontroll i henhold til produsentens instruksjoner (Applied Biosystems).
perifert blod monocytter isolasjon og co-kultur eksperimenter
perifert blod monocytter (PBMC) fra friske donorer ble isolert ved hjelp av Ficoll-Paque (GE Healthcare) densitet-gradientsentrifugering som tidligere beskrevet [37]. PBMC ble anvendt for bestemmelse av kreftcelle-indusert T-celle-apoptose ved ko-kultur med lungekreftceller i et forhold på 40:1 i 36 timer med IL-10 nøytralisere antistoff (MAB2171, R BD Biosciences) ble anvendt for å bestemme cellepopulasjonsstørrelse og apoptose prosentandel . PBMC ble farget med PE-Cy
TM7 mus anti-human CD3 (BD Pharmingen) og CD3 positive celler i lymfocytt gate ble identifisert som T-celler. Annexin V-FITC (BD Pharmingen) ble brukt til å markere celle apoptose. Etter farging av cellene i henhold til den anbefalte protokoll ble prøvene analysert i løpet av en time. For T-celle apoptose, gated vi lymfocytt gate i FSC-SSC, og befolkningen med CD3
+ og Annexin V
+ ble beregnet [37].
Immunhistokjemisk farging
Immunhistokjemisk farging å evaluere CD3 uttrykk i lymfocytter ble utført på hel-mount parafinsnitt av lungekreft prøver. Anti-CD3 (1/100) polyklonalt primære antistoff (Santa Cruz Biotechnology) ble anvendt. En immunhistokjemi deteksjon kit for
in vitro
diagnostisk bruk (Invitrogen) ble brukt i henhold til standard protokoll. TIL ble talt ved tilfeldig systematisk utvalg av felter. Minst fem forskjellige HPFS ble tellet i hver prøve som avhenger av størrelsen på tumorområdet.
dyremodell
C57Bl /6-mus ble opprettholdt på standard mus anlegget (spesifikk patogen fri) ved Chung Shan Medical University. TC-en cellelinje ble vennlig levert av Dr. TC Wu (John Hopkins, Baltimore, MD) [38]. TC-1-celler ble suspendert i PBS ved en konsentrasjon på 10
5 celler per 100 ul. Hver mus ble injisert med 10
5 TC-1-celler ved å hale forgjeves injeksjon. Mus mottok intraperitoneale doser på 200 ug av anti-IL-10-antistoff (mAb417 R vekslet med intraperitoneale doser på 20 ug av anti-IL-10-antistoff (mAb417 R . 50,0 vs 37,5, P = 0,236). Imidlertid ble det observert en forskjell i TIL tall mellom ATA og ikke-ATA bærere sent stadium pasienter (P = 0,032, Tabell 2), men ikke i tidlig stadium pasienter (P = 0,988, Tabell 2). Disse resultatene tyder på at ikke-ATA pasienter som har lavere TIL tall sammenlignet med ATA-pasienter kan ha dårligere svulst immunovervåkning.
IL-10 reduserer tumorcelle apoptose via økte T-celle apoptose
For å verifisere muligheten for endringer i tumorimmunovervåkning, ble PBMC samlet inn fra 22 friske donorer med ATA haplotype og 22 friske donorer med ikke-ATA haplotypen. IL-10 mRNA nivåer i PBMC fra ikke-ATA haplotype friske donorer var høyere enn fra ATA haplotype friske donorer (gjennomsnitt ± SE, 78,54 ± 13,18 vs 46,37 ± 3,91, P = 0,028). Disse cellene ble deretter ko-dyrket med A549 og TL-1 lungekreftceller. Cytotoksisiteten av lungekreftceller ble bestemt ved en strømningscytometri med Annexin V
+ /PKH26
+ og T-celle-apoptose ble bestemt med Annexin
+ /CD3
+. Den T-celle-apoptose etter ko-kultur med A549 og TL-1-celler var lavere i PBMC fra de ATA haplotype friske blodgivere enn i PBMC fra de ikke-ATA haplotype friske donorer (8,34 ± 2,37 vs. 10.49 ± 3,04, p = 0,012 for A549; 12,97 ± 2,94 vs. 18,30 ± 3,82, P 0,001 fig. 4A). Følgelig er antallet apoptotiske tumorceller (A549 og TL-1) var betydelig høyere etter ko-kultur med PBMC fra friske donorer ATA haplotype enn fra de ikke-ATA friske donorer (16,80 ± 3,38 vs. 14.45 ± 3,78, P = 0.035 for A549, 12,95 ± 3,05 vs. 8,68 ± 2,57, P 0,001 fig. 4B). For å kontrollere om IL-10 var ansvarlig for dette apoptose av T-celler og lungekreftceller, antall apoptotiske T-celler av PBMC fra ATA haplotype friske donorer ble økt ved behandling med 100 ng /ml IL-10 (8.34 ± 2.37 vs . 15.97 ± 3.03, P 0,001 for A549, 12,97 ± 2,94 vs. 15,70 ± 3,54, P = 0,008 for TL-1, fig. 4A). Omvendt, T-celle-apoptose i PBMC fra ikke-ATA friske donorer ble markert redusert på en doseavhengig måte ved hjelp av IL-10-antistoff nøytralisert (Fig. 4A). Følgelig ble det apoptose av begge lungekreft celletyper ble redusert ved behandling med IL-10 og økes med IL-10-antistoff nøytralisert (Fig. 4B). Kollektivt, PBMC fra ikke-ATA bærere hadde lavere apoptotiske virkninger på lungekreft celler enn gjorde PBMC fra ATA bærere, og IL-10 var ansvarlig for svulst celle apoptose etter co-kultur med PBMC. Disse resultatene klart indikerte at IL-10 redusert tumorcelle apoptose via økte T-celle apoptose.
I vårt dyreforsøk, TC-1 celler som ikke uttrykker IL-10 (vennlig levert av Dr. TC Wu, John Hopkins, Baltimore, MD, USA) ble injisert inn i C57BL6 mus via halevenen. Etter 14 dager, ble tumorer dannet i hele lungen (fig. 5). Det ble imidlertid ikke tumorer observert etter at TC-1-celler behandlet mus ble behandlet med IL-10-antistoff nøytralisert. Disse resultatene ser ut til å støtte tidligere studier som indikerer at IL-10 skilles fra immunceller kan fremme lungetumorprogresjon [39].
Pasienter med non-ATA haplotype eller høye IL-10 mRNA nivåer hadde dårligere resultater sammenlignet med pasienter med ATA haplotype eller lav IL-10 mRNA nivåer
Kaplan-Meier og multivariate Cox regresjonsanalyser ble utført for å verifisere om dårligere overlevelse og større tilbakefall ville bli sett hos pasienter med ikke-ATA haplotype eller høy IL-10 mRNA nivåer i lungesvulster sammenlignet med pasienter med ATA haplotype eller lav IL-10 mRNA nivåer. Overlevelseskurver spådd av Kaplan-Meier analyse viste at pasienter med ikke-ATA haplotype hadde kortere OS og RFS perioder enn pasienter med ATA haplotype (P = 0.001 for OS, venstre panel i figur 6A,. P 0,001 for RFS, panel på fig. 6A til høyre). I samsvar med den prognostiske verdi av IL-10-haplotypen ble forhøyede IL-10 mRNA-nivåer også observert i et delsett av denne studiepopulasjonen (n = 241), som viser at tumorer med høy IL-10 mRNA-nivåer ble korrelert med dårligere OS og RFS enn hos pasienter med tumorer hadde lave IL-10 mRNA nivåer (p = 0,001 for OS, venstre panel i figur 6B,. P 0,001 for RFS, panel til høyre i figur 6B.). Som forventet, var det verste OS og RFS ses hos pasienter med en ikke-ATA-haplotypen og høy IL-10 mRNA-nivåer (fig. 6C). Disse resultatene tyder på at IL-10-haplotypen eller IL-10-mRNA-ekspresjon i lungesvulster kunne bli brukt til å forutsi pasientenes utfall.
Multivariabel Cox regresjon ble brukt for å utforske hvorvidt IL-10 haplotype eller mRNA-nivåer kan uavhengig av hverandre forutsi pasientens utfall, etter justering for ulike parametere som alder, kjønn, røykestatus tumorhistologi, og kreft stadium. Som vist i tabell 3, hadde pasienter med ikke-ATA-haplotypen hadde timer med 1,431 og 1,556 for kortere OS og RFS, sammenlignet med pasienter med ATA haplotype (95% CI, 1,104 til 1,856, p = 0,007 for OS; 1.200- 2,018, P 0,001 for RFS). Medianvarigheter for OS og RFS hos pasienter med ikke-ATA-haplotypen var 24,1 og 16,8 måneder, sammenlignet med 40,9 og 30,9 måneder, henholdsvis, til de ATA haplotype. De fem-års overlevelse for pasienter med ikke-ATA og ATA haplotyper var 28,2% vs. 43,3% for OS og 22,2% vs. 36,2% for RFS. Den uavhengige prognostisk verdi av IL-10 mRNA-nivåer ble også vist i en undergruppe av denne studiepopulasjonen. Pasienter med høye IL-10 mRNA nivåer hadde kortere median overlevelse og 5-års overlevelse for OS og RFS enn pasienter med lave IL-10 mRNA nivåer (Tabell 3, 30,2 måneder versus 52,1 måneder, 30,7% vs. 48,7%, P = 0,017 for OS, 17,2 måneder versus 35,9 måneder, 19,2% vs. 45,1%, p = 0,001 for RFS). HRS av IL-10 mRNA for OS og RFS økt i forhold til timer med IL-10 haplotype (1,553 g 1,431 for OS, 1,755 g 1,556 for RFS). Mer interessant, timer med pasienter med ikke-ATA haplotype pluss høy IL-10 mRNA nivå ble økt 1,431 til 1,892 for OS og 1,556 til 2,344 for RFS sammenlignet med pasienter med ATA haplotype pluss lav IL-10 mRNA nivå. Økningen i HRS ikke sett hos pasienter med ATA haplotype pluss høy IL-10 mRNA eller hos pasienter med ikke-ATA haplotype og lav IL-10 mRNA nivå. Disse resultatene kan tyde på at IL-10 haplotype eller IL-10 mRNA nivå uavhengig kan forutsi overlevelse og tilbakefall i resected NSCLC.
Diskusjoner
SNPs av IL-10 -1082 G A, -819 C T, og -592 C A er GCC, ACC, og ATA haplotyper henholdsvis [36], [40]. Ekspresjon av IL-10 mRNA i perifere blodceller er høyest i individer med en eller to GCC haplotyper, etterfulgt av ACC /ACC bærere, og deretter ATA /ACC og ATA /ATA bærere [36], [40], [41] . I denne studien ble det ikke-ATA og ATA haplotyper kategorisert av tre GCC, ATA, og ACC haplotyper av IL-10 promoter (fig. 1). En dårlig prognostisk verdi for OS og RFS ble funnet for GCC, ACC, og ikke-ATA bærere (Tabell S1). Men den prognostiske betydningen av de tre bærere ble bare avslørt i sene stadier av pasienter, ikke i tidlig stadium pasienter i denne studiepopulasjonen (Tabell S1). På den annen side, IL-10-mRNA-ekspresjonsnivåer var signifikant høyere i bærere med ≥1 kopiantallet av GCC enn i bærer uten GCC (IL-10 mRNA for GCC vs. ikke-GCC: 147,90 ± 56,80 31,72 ± 7,91 vs., P 0,001). Ingen forskjell i IL-10 mRNA uttrykk ble sett for ACC bærere (IL-10 mRNA for ACC vs. non-ACC: 57,69 ± 15,43 vs 31,15 ± 11,36, P = 0,166). Dette var i samsvar med en tidligere rapport som indikerer at GCC haplotype bærere hadde en høyere risiko for lungekreft enn andre bærere [6]. I tillegg har IL-10-mRNA-nivået var høyere i ikke-ATA-haplotypen enn i ATA haplotype (fig. 2). Derfor, i denne studien, ble IL-10-haplotyper målt for deres prognostisk betydning i NSCLC.
Forbindelsen mellom IL-10 og tumorprogresjon har ofte blitt forklart med forandringer i immunundertrykking og tumor immunovervåkning [ ,,,0],1] – [4], [42]. I denne studien ble konsistente funnene sett i
in vitro
eksperimenter med PBMC co-dyrket med lungekreft celler og i
in vivo
observasjoner av Tīlss i tumorvev (fig. 4). Tidligere studier med transgene mus som uttrykker IL-10 viste at disse musene utviklet større svulster enn gjorde kontroll mus. Dette resultatet tyder på at IL-10 forhindrer effektiv immunrespons mot tumorprogresjon [43]
Tidligere rapporter har vist at IL-10 har forskjellig prognostisk betydning i tidlig og sen stadium lungekreftpasienter [23]. – [25]. I denne studien befolkningen, ble observert dårligere OS og RFS i sent stadium (III) av pasientene med ikke-ATA haplotype enn hos pasienter med ATA haplotype (HR, 1,785, P 0,001 for OS, HR, 2,071, P 0,001 for RFS, Tabell S1); imidlertid ingen prognostisk verdi ble observert for tidlig-stadium (I + II) pasienter (Tabell S1). Sammenlignet med hele studiepopulasjonen, sent stadium pasienter hadde høyere HRS til OS og RFS (1,785 g 1,431 for OS, 2,071 g 1,556 for RFS, Tabell S1). Dette kan forklares med betydelig høyere IL-10 mRNA nivåer i sene stadier av pasienter med ikke-ATA haplotype enn med ATA haplotype (87,26 ± 28,83 vs 10,87 ± 4,53, P = 0,011); Men forskjellen mellom ikke-ATA og ATA haplotyper ble marginalt observert i tidlig stadium pasienter (54,13 ± 18,49 vs. 14.52 ± 7.47, P = 0,050). I tillegg ble prognostisk betydning Tīls på OS og RFS også vist i sene stadier av pasienter ikke i tidlig stadium pasienter (P = 0,012 for OS, P = 0,003 for RFS; Tabell S2). Derfor foreslår vi at den ikke-ATA haplotype, med en høyere IL-10 mRNA uttrykk nivå, kan være viktigere å fremme tumor aggressivitet i sene stadier av pasienter enn i tidlig stadium pasienter.
I sammendraget, IL-10-haplotyper kan lett bestemmes fra pasientblodprøver og kan være nyttig for å forutsi overlevelse og tilbakefall i reseserbare NSCLC. Så langt vi kjenner til, er dette den første rapporten som viser at IL-10 haplotyper kan brukes til å forutsi OS og RFS i NSCLC pasienter. Derfor foreslår vi at haplotyper av IL-10 promoter SNPs kan være potensielle biomarkører for prediksjon av overlevelse og tilbakefall i resektable NSCLC.
Hjelpemiddel Informasjon
Tabell S1.
multivariat analyse av påvirkning av IL-10 haplotyper på total overlevelse og tilbakefall overlevelse i ikke-småcellet lungekreft pasienter i henhold til scenen.
doi: 10,1371 /journal.pone.0039525.s001 plakater (DOC)
Tabell S2.
multivariat analyse av påvirkning av tumor infiltrerer lymfocytter på total overlevelse og tilbakefall overlevelse i ikke-småcellet lungekreft pasienter.
doi: 10,1371 /journal.pone.0039525.s002 plakater (DOC)
Takk
FASCS Calibur ble utført i Instrument Center of Chung Shan Medical University, som støttes av National Science Council, Kunnskapsdepartementet og Chung Shan Medical University.
