Abstract
Bakgrunn
metastaser er den viktigste årsaken til kreft dødsfall og målretting prosessen med metastaser har vært foreslått som en strategi for å bekjempe kreft. Derfor, for å utvikle kandidat legemidler som er rettet mot prosessen med metastase er meget viktig. I de foreløpige studier, fant vi at Schisandrin B (Sch B), en naturlig forekommende dibenzocyclooctadiene lignan med svært lav toksisitet, kan undertrykke kreft metastasering.
Metodikk
BALB /c mus ble inokulert subkutant eller injisert via halevenen med murine brystkreft 4T1 celler. Mus ble delt opp i Sch B-behandlede og kontrollgrupper. Den primære tumorvekst, lokal invasjon, lunge og benmetastase, og overlevelsestiden ble overvåket. Tumor biopsier ble undersøkt immun- og histo-patologisk. Den hemmende aktivitet av Sch B på TGF-β induserte epitel-mesenkymale overgang (EMT) av 4T1 og primære humane brystcancerceller ble analysert.
Hoveddeler
Sch B undertrykte betydelig den spontane lunge og bein metastasering av 4T1 celler inokulert sc uten signifikant effekt på primærtumorvekst og betydelig utvidet overlevelsestiden til disse musene. Sch B hemmet ikke lungemetastase av 4T1 celler som ble injisert via halevenen. Forsinket oppstart av behandling med Sch B i mus med pre-eksisterende svulster ikke redusere lungemetastaser. Disse resultatene antydet at Sch B handlet ved trinnet med lokal invasjon. Histopatologiske bevis viste at de primære svulster i Sch B-gruppen var signifikant mindre lokalt invasiv enn kontroll svulster. In vitro-analyser viste at Sch B kunne hemme TGF-β indusert EMT av 4T1 celler og primære humane brystkreftceller.
Konklusjoner
Sch B undertrykker lunge og bein metastasering av 4T1 celler betydelig via hemme EMT, tyder dens potensial søknad i målretting ferd med kreft metastase
Citation. Liu Z, Zhang B, Liu K, Ding Z, Hu X (2012) Schisandrin B demper Cancer invasjon og metastase via hemme epitel-Mesenchymale Transition. PLoS ONE syv (7): e40480. doi: 10,1371 /journal.pone.0040480
Redaktør: Jonas Fuxe, Karolinska Institutet, Sverige
mottatt: 30 januar 2012; Akseptert: 8. juni 2012; Publisert: 25.07.2012
Copyright: © 2012 Liu et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av National 863 prosjekt (2007AA02Z143), Kina naturvitenskap Foundation prosjekter (30772544, 81071802) og de grunnleggende forskning Midler til de sentrale universiteter, National Ministry of Education, Kina, til X. Hu. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
brystkreft er den ledende trussel mot kvinner, med anslagsvis 1,4 millioner nye tilfeller og 458,000 dødsfall i 2008 på verdensbasis [1]. For de siste to tiårene, integrasjoner av kirurgi, cellegift, stråling, menopausal hormonterapi, og anti-HER2 narkotika bidra vesentlig til dødelighet nedgangen [2]. Ikke desto mindre, til tross for de betydelige utvikles, fjerne metastasering av brystkreft til innvollsorganene og bein er fremdeles dårlig løst [1], [3], [4].
Cancer metastase er en flertrinnsprosess som inkluderer lokal invasjon, intravasation til lymfe og blod systemer, overlevelse i blodet, ekstravasasjon fra microvessels og koloniseringen ved en sekundærside [5], [6]. Tallrike studier har avslørt innsikt i mekanismene for hvert trinn av cancer metastase [7], [8]. Den flertrinns av kreft metastase og forståelsen av de tilhørende mekanismer som gir mange muligheter for kjemiske tiltak [9].
5 x 10
4 levedyktige 4T1-celler ble inokulert
fm
i riktig andre melkefettpute for å etablere spontant metastatisk modell. Sch B (100 mg /kg kroppsvekt) eller vehikkel (0,5% paraxamer) ble dosert intragastrisk hver dag i totalt 7 doser. Mus (n = 20 for hver gruppe) ble avlivet på dag 30. (A) Vekst kurver av primærtumor (B) Mus kroppsvekt. (C) primær tumorvekt på dag ofret. (D) Tall av synlige lungemetastatiske knuter. (E) Den lungemetastatisk indeksen. *, P 0,05, **, P 0,01
Schisandrin B (Sch B) er den mest tallrike dibenzocyclooctadiene lignan stede i tradisjonell kinesisk medisinsk urt
Schisandra chinensis product: (.
Turcz.
)
Baill
. I de siste årene har Sch B blitt avslørt for å ha flere funksjoner mot kreft. Vi og andre tidligere rapporterte at Sch B var en dobbel inhibitor av P-glykoprotein og multimedikamentresistens protein 1 (MRP1) [10], [11], [12], [13], [14], [15]. Sch B kan også forbedre doxorubicin-indusert apoptose i kreftceller, gjennom aktivering av mitokondrie apoptotisk vei, uten åpenbare forbedrede toksisitet mot normale celler [16], redusere doxorubicin-indusert akutt og kronisk kardio [17], [18], dempe cisplatin- induserte oksidativt stress, genotoksistet og nevrotoksisitet [19], og hemmer ATR proteinkinaseaktivitet i respons til DNA-skade [20]. I en pilotstudie som var ment å observere effekten av Sch B på å styrke anti-tumor effekt av doksorubicin på murine brystkreft 4T1 celler, la vi merke til at Sch B alene kan redusere den spontane lungemetastasering av 4T1. Denne foreløpige observasjon bedt oss om å gjennomføre denne studien er å undersøke den hemmende effekten av Sch B på 4T1 in vivo metastaser.
5 × 10
4 levedyktige 4T1 celler ble inokulert
sc
i andre vei til høyre melkefettpute for å etablere spontant metastatisk modell. Mus ble behandlet med Sch B (100 mg /kg kroppsvekt) eller bærer hver dag i totalt 7 doser. Primære tumorer ble resektert på dag 10. To tredjedeler av mus (n = 20 for hver gruppe) ble avlivet på dag 30 og en tredjedel av mus (n = 10 for hver gruppe) ble for overlevelse eksperimentet. (A) ANTALL synlig 4T1 lungemetastaser. (B) Lung metastatisk indeksen beregnes ved H E farging. (C) Mus overlevelsestid. (D) Mus kroppsvekt. (E) Tumor vekt resected på dag 10. *, P 0,05, **, P . 0,01
Mus (n = 8 for hver gruppe) som fikk Sch B (100, 30, 10 mg /kg kroppsvekt) eller bærer hver dag i totalt 7 doser, og primære tumorer ble resektert på dag 10. (A) mus overlevelsestid. (B) Mus kroppsvekt. (C) Tumor vekt resected på dag 10. *, P 0,05, **, P 0,01, Sch B versus kontrollgruppen
Materialer og metoder
Kjemi og antistoffer.
Sch B var fra Statens institutt for kontroll av farmasøytiske og biologiske produkter (Beijing, Kina). Rekombinant humant tumor vekstfaktor-β1 (TGF-β) ble kjøpt fra Peprotech Inc. (Rocky Hill, NJ). Epitelial-mesenchymale overgang antistoff sampler kit (# 9782, inkludert E-cadherin, Snail, Slug ZEB1 antistoffer) ble anskaffet fra Cell Signaling Technology (Beverly, MA). Vimentin (# 550513) og fibronectin (# 610078) antistoffer var produkter av BD Biosciences (Franklin Lakes, NJ). Rhodamine phalloidin (# R415) ble kjøpt fra Invitrogen Corporation (Carlsbad, CA)
Bone metastasering av 4T1 i mus vist i figur 2 ble evaluert ved å bruke H . E farging som beskrevet i Materialer og Metoder. Forekomsten av beinmetastase ble reflektert av synlig osteolyse. (A) Representant bilde av beinmetastaser. Osteolyse ble markert med pil. (B) Representant bilde av bein uten osteolyse. (C) Forekomst av beinmetastase (n = 20) sammenlignet ved hjelp av chi-kvadrat analyse. *, P . 0.05, Sch B versus kontrollgruppen
Cell Culture
4T1 celler fra Chinese Academy of Sciences Cell Bank of Type Culture Collection (Shanghai, Kina) og dyrket i monolag i RPMI-1640 supplert med 10% føtalt bovint serum (FBS), 100 pg /ml penicillin og 100 ug /ml streptomycin. MDA-MB-231-celler ble kjøpt fra American Tissue Culture Collection (nr HTB-26; ATCC, Manassas, VA) og opprettholdt i Leibovitz L-15 medium med 10% FBS, 100 pg /ml penicillin og 100 ug /ml streptomycin (alle fra Invitrogen). Begge celler ble holdt i en fuktet inkubator ved 37 ° C, 5% CO
2 atmosfære
(A) halevene-injeksjon modell:. Mus (n = 10 for hver gruppe) ble gavaged med Sch B ( daglige doser: 30 eller 100 mg /kg kroppsvekt eller kjøretøy) i 3 dager før 4T1 celle inokulering. Deretter ble hver mus inokulert med 2 x 10
5 4T1-celler via haleveneinjeksjon, fulgt av behandling med Sch B (daglige doser: gavaged med 30 eller 100 mg /kg kroppsvekt eller bærer) for de neste påfølgende 7 dager og ofret på dag 18. (B) Forsinket behandling modell. Mus (n = 10 for hver gruppe) ble inokulert med 5 × 10
4 4T1 celler
s.c
. inn i den andre høyre melkefettpute område, og de primære tumorene ble resektert på dag 10. Sch B (100 mg /kg kroppsvekt) eller vehikkel ble gitt hver dag fra dag 13-19 i totalt 7 doser, og mus som var ofret på dag 30. lungemetastase ble scoret av makroskopiske metastatisk nodule som beskrevet i materialer og metoder. *, P 0,05, Sch B versus kontrollgruppen
Primær Cell Culture
Friske brystsvulster ble innhentet fra pasienter som gjennomgår kirurgi med skriftlig informert samtykke.. Eksemplarer av infiltrerende duktal brystkarsinom uten kjemoterapi ble valgt for cellekultur som beskrevet av Speirs et al. [21]. Cellene ble dyrket i HuMEC Ready Medium (Invitrogen) supplert med 2% FBS i en fuktet inkubator ved 37 ° C, 5% CO
2 atmosfære.
Mus (n = 20 for hver gruppe) ble behandlet med Sch B (100 mg /kg kroppsvekt) eller bærer intragastrisk daglig i 7 dager. (A) Primære svulster og omkringliggende vev ble resected på dag 15 for hematoxylin-eosin flekken (øvre, × 40, lavere, × 100). (B) farging av E-cadherin og vimentin. (× 100).
Dyr
Kvinne BALB /c og BALB /c nu /nu mus (18-22 g) ble innhentet fra Shanghai SLAC Forsøksdyr Co., Ltd (Shanghai, Kina, Animal sertifikat: Nei SCXK [Hu] 2007-0005). Dyrene ble huset i en standard polypropylen bur inneholdende sterilt bedding under en kontrollert tilstand av temperatur (23 ± 2 ° C), fuktighet (50 ± 5%) og lys (10 og 14 timer med lys og mørke) i Zhejiang University Laboratory Animal senter~~POS=HEADCOMP (No. SYXK [Zhe] 2007-0029).
4T1 syngene Xenotransplantat modell
den dyremodell er basert på den forrige rapporten [22]. Hver mus ble inokulert med 5 × 10
4 levedyktige 4T1 celler
s.c
. i den andre høyre melkefettputen område. Musene ble randomisert til Sch B eller kontrollgruppen neste dag etter vaksinasjonen. Hver mus ble gavaged med enten Sch B (100, 30, eller 10 mg /kg kroppsvekt) eller vehikkel (0,5% paraxamer, Sigma) hver dag i totalt 7 doser. For å undersøke effekten av Sch B på 4T1 metastaser, brukte vi 3 protokoller. Først ble mus gavaged med Sch B (100 mg /kg kroppsvekt), og tumorene vokste uavbrutt. For det andre mus ble dosert med Sch B (100 mg /kg kroppsvekt) og deretter primære tumorer ble resektert på dag 10 som tidligere beskrevet [23]. For det tredje, mus ble administrert med tre doser av Sch B (100, 30, eller 10 mg /kg kroppsvekt) og primære tumorer ble skåret ut på dag 10. Tumorvolumet ble målt ved hjelp av vernier calipers dobbelt eller tre ganger ukentlig, og beregnes ved hjelp av en ellipse volum formel V = (L × B
2) × 0,5, hvor L er lengden og W er bredden. Lungemetastaser ble scoret ved å telle de makroskopiske metastatiske knuter basert på tidligere rapporter [24], [25], og gjennomsnittlig antall lungemetastaser per mus ble bestemt som en indikator på generelle kreft disseminations [23], [26].
Celler ble behandlet med Sch B (5 ug /ml) og TGF-β (5 ng /ml) som beskrevet i Materialer og Metoder. (A) Representative bilder av TGF-β indusert morfologisk endring av 4T1 celler med eller uten forbehandling av Sch B. (B) Fluorescens farging av mobilnettet E-cadherin, vimentin, fibronektin, og F-aktin. (C) Western blotting av E-cadherin, vimentin, sneglen, Slug, ZEB1, med β-actin som den interne kontrollen. (D) og (E), TGF-β indusert migrering og invasjon av 4T1 celler med eller uten forbehandling av Sch B. (F) Representative bilder av TGF-indusert den morfologiske endring av primær brystkreft celler med eller uten forbehandling av Sch B og western blotting av E-cadherin og vimentin av primære brystkreft celler fra tre individuelle pasienter.
Forsinket behandling Modell
primære svulster ble resected på dag 10, og Sch B (100 mg /kg kroppsvekt) eller bærer ble gavaged på dag 13-19. Alle dyr ble avlivet på dag 30 for datainnsamling.
nålevenen Injeksjon Modell
Dette in vivo-modellen er basert på den forrige rapporten [27]. Før inokulering med 4T1-celler, ble hver mus gavaged med Sch B (30, 100 mg /kg) eller bærer (0,5% paraxamer) i 3 påfølgende dager. Hver mus ble deretter inokulert med 2 × 10
5 celler intravenøst via halevenen injeksjon, etterfulgt av Sch B eller kjøretøy behandling for de neste 7 dagene. Alle mus ble avlivet på dag 18.
MDA-MB-231 in vivo dyremodell
Hver mus ble inokulert med 5 × 10
6 MDA-MB-231 celler
sc
. i den andre høyre melkefettputen område. Musene ble randomisert til Sch B eller kontrollgruppen neste dag etter vaksinasjonen. Hver mus ble gavaged med enten Sch B (100 mg /kg kroppsvekt) eller kjøretøy (0,5% paraxamer, Sigma) for de neste 7 påfølgende dager med totalt 7 doser. Musene ble avlivet på dag 30 etter vaksinasjon
Kriterium for å vurdere Mouse Moribund Status
En døende mus er definert som en som viser mer enn ett av følgende seks kliniske tegn. Manglende evne til å spise eller drikke; alvorlig slapphet (motvilje mot å bevege seg når forsiktig prodded med pinsett); alvorlig balanse eller gangforstyrrelse, ifølge NIH kriteriet [28].
Histologiske Analyser
svulstvev ble fikset, forankret, og skiver i 5 mikrometer tykke seksjoner. Parafinsnitt ble farget med hematoxylin og eosin (H E) (Sigma). For immunhistokjemi, ble farging av E-cadherin og vimentin utført ved hjelp av en standard protokoll [29]. H E seksjoner ble evaluert og fotografert med et Nikon Eclipse 50i mikroskop kontrollert av NIS-Elements (versjon 3.22). Det relative arealet av metastaser ble målt ved bruk av ImageJ 1,45s programvare (NIH) [30]. Lungemetastase ble kvantifisert ved å telle det totale vevsområdet per lunge seksjon (D1) og metastase til stede i det samme område (D2). Den metastatisk indeksen ble beregnet ved forholdet D2 /D1 [31]. For benmetastase, ble leggbena (lårben og skinneben) fiksert i 10% nøytral bufret formalin, decalcified i 1% HCl i 24 timer, og innstøpt i parafin. Seksjonene ble farget med H E og ble undersøkt mikroskopisk. Forekomsten av beinmetastase ble reflektert av synlig osteolyse [32].
Cell Giftig for Sch B på 4T1 celler
2 × 10
3 celler ble sådd per brønn i 96- brønners plater. Sch B (5, 10, 20, 40, 80, 160 ug /ml) ble tilsatt og dyrket i 60 timer, ble cellenes levedyktighet anslås ved trypan blå eksklusjon. Seks brønner ble målt for hver konsentrasjon. Halv hemmende konsentrasjon (IC
50) ble bestemt.
Effekt av Sch B på TGF-β Induced EMT
murine 4T1 celler og menneske primær brystkreft celler ble forbehandlet med Sch B (5 ug /ml) i 24 timer, deretter TGF-β (5 ng /ml) ble tilsatt og dyrket i ytterligere 36 timer. Cellelysatene ble anvendt i Western blot-analyse som tidligere beskrevet [33]. Fluorescens farging ble utført i henhold til våre tidligere rapportert metode [34].
Cell migrasjon og invasjon Analyser
For migrasjonsanalyser, 2 × 10
5 celler ble sådd ut i seks-brønns plater . Etter forbehandling av Sch B (5 ug /ml) i 24 timer ble FBS konsentrasjonen av kulturmediet endret til 2% og et sår ble snittet som tidligere beskrevet [35]. Deretter TGF-β (5 ng /ml) ble tilsatt og dyrket i ytterligere 24 timer, fotografier ble tatt av fasekontrastmikroskopi. Transwell (Corning Costar, Cambridge, MA) med et filter belagt med Matrigel (BD Biosciences) ble anvendt for invasjon analyser. 4 x 10
3-celler i serumfritt RPMI-1640 ble sådd ut i 24-brønners transwell øvre kammer, det nedre kammer er fylt med RPMI-1640 supplert med 10% FBS som en chemo-lokkemiddel. Etter 12 timers forbehandling av Sch B (5 ug /ml) i både det øvre kammer og det nedre kammer, ble TGF-β (5 ng /ml) tilsatt, og behandlet i ytterligere 12 timer. Ved slutten av analysene, ble filteret side av det øvre kammer renset med en bomullspinne og filteret var farget i en time med krystallfiolett (Sigma) i 2% etanol, og deretter skyllet i vann. Deretter ble cellene på filter tellet i minst 10 felt under riss av et fasekontrastmikroskop.
Statistical Analysis
Data ble uttrykt som gjennomsnitt ± SD. Mus overlevelse ble evaluert av Kaplan-Meier analyse og log rank test. Chi-kvadrat analyse ble brukt for benmetastase sammenligning. Student t-tester ble benyttet for sammenligning mellom to middelverdier. P-verdier mindre enn 0,05 ble ansett som statistisk signifikant.
Etikk erklæringen
Den dyrestudie ble godkjent av institusjonelle dyr etisk komité av Zhejiang University med godkjenning No. zju-2009-1-01- 028. Humane tumorer ble oppnådd med skriftlig informert samtykke fra pasientene, og etter en protokoll godkjent av etikkomiteen i Second Affiliated Hospital of Zhejiang University.
Resultater
Sch B reduserer 4T1 Lung Metastase uten hemming på primærtumor
4T1 syngene xenograft modell er en mye brukt til å studere den spontane metastasering av kreft [36]. Den store metastatisk området av denne modellen er lunge [22]. Ved hjelp av denne modellen, fant vi at Sch B betydelig redusert 4T1 lungemetastaser, men uten signifikant hemming på primære svulster (Fig. 1).
Sch B signifikant øker overlevelse av mus Via hemme 4T1 Lung Metastase
for å utelukke effekten av primærtumor på mus overlevelse, fjernet vi primærtumor ved kirurgisk fjerning på dag 10 etter 4T1 vaksinasjon. Deretter ble det utført to forsøk med ulike formål på disse musene. Eksperiment 1 var å observere lungemetastase. Musene ble avlivet på dag 30 etter inokulering og lungemetastase ble undersøkt. Resultatene viste at Sch B hemmet signifikant 4T1 lungemetastaser (fig 2 A og. B .. E, figur 3B invasjon
in vitro product: [46]. I EMT-inhiberingsanalysen, 5 ug /ml Sch B, en konsentrasjon langt under sin IC
50 mot 4T1-celler (fig. S3), ble anvendt.
4T1-celler ble spindel-formet eller mesenchymal- som etter TGF-β behandling, ledsaget av en redusert E-cadherin uttrykk og økt uttrykk for vimentin /Slug /Snail /ZEB1. Denne effekten ble betydelig svekket ved forbehandling celler med Sch B (Fig. 7A, 7B, 7C).
Jevnt i sårhelende analysen, økt TGF-β migrasjon rate av 4T1 celler ved ca to folder flere enn den for kontrollen, ble også hemmet ved forbehandling av cellene med Sch B (fig. 7D fig. S4A). Tilsvarende invasjonen evnen til 4T1-celler forsterket av TGF-β ble betydelig svekket ved Sch B (fig. 7E, fig. S4B), som alene påvirkes hverken cellemigrering eller invasjon.
Sch B inhiberes også effekten av TGF-β på den primære humane brystkreftceller (fig. 7F).
Diskusjoner
Som kreftrelatert dødelighet er i stor grad forårsaket av kreft metastasering, for å redusere metastase er en viktig strategi for å bekjempe kreft. Det er foreslått av en gruppe kjente vitenskapsmenn at «gitt det faktum at primærsvulster kan ofte kontrolleres ved hjelp av konvensjonell terapi, kunne agenter som handler spesifikt om prosessen med metastase være mer sannsynlig å øke langsiktig overlevelses «[47] . I denne studien viser vi (1) Sch B demper 4T1 metastasering for derved å forlenge overlevelsestiden for mus i betydelig grad; (2) Sch B demper 4T1 metastaser ved trinnet av lokal invasjon; og (3) Sch B hemmer EMT av 4T1-celler, så vel som primære humane brystcancerceller. Vi konkluderer med at Sch B kan dempe 4T1 celle metastase via hemme EMT.
En annen mulig mekanisme for Sch B for å hemme metastase kan være sin cytotoksiske effekt på 4T1 celler. Dette virker usannsynlig. Dyrestudier har vist at Sch B ikke i vesentlig grad påvirker veksten av primære tumorer 4T1 (fig. 1, 2, 3), noe som tyder ingen cytotoksisk effekt. Dette er generelt behagelig med tidligere rapporter om at denne forbindelsen har lav cytotoksisitet overfor kreftceller sammenlignet med klinisk anticancer legemidler [17], [48], [49]. For å støtte at cytotoksisitet ikke spille en viktig rolle i å dempe 4T1 celle metastase videre, vi følger doxorubicin (Dox), en svært cytotoksisk legemiddel, i vår eksperimentell design. Selv om cytotoksisitet av Dox mot 4T1 er tre størrelsesordener sterkere enn den til Sch B (data ikke vist), 4T1 lungemetastaser var betydelig mindre i Sch B-gruppen enn i Dox eller kontrollgruppen, men uten signifikant forskjell mellom de to sistnevnte grupper (fig. s5a). Kollektivt, Sch B hemme 4T1 metastaser er usannsynlig via sine cytotoksiske effekter.
Mens forlenge livet til kreftpasienter er første prioritet i kjemoterapi, livskvalitet for kreftpasienter er også svært viktig. Mange kliniske kreftmedisiner har alvorlige bivirkninger, som for eksempel neurotoksisitet, gastrointestinal reaksjon, benmarg hemming, hårtap, etc., som vesentlig reduserer livskvaliteten til kreftpasienter. Derfor er smertelindring stadig mer anerkjent i kreft kjemoterapi. På denne forbindelse vil utvikle medikamenter som har svært lav systematisk giftighet for menneskekroppen være mer ideelt. Sikkerheten til Sch B er godt dokumentert. De tidligere rapporter fra andre laboratorier indikerte at i deres protokoller ved hjelp av Sch B for å beskytte karbontetraklorid-indusert levertoksisitet hos mus, er dosen av Sch B 3 mmol /kg (1,2 g /kg), impliserer det godt toleranse av denne forbindelse [ ,,,0],50]. De toksikologiske data som gjennomgås av Hanke
et al.
Avdekket høy sikkerhet for denne forbindelsen [51]. I tillegg er det en tilstrekkelig mengde av bevis for at denne forbindelse er trygge for mennesker. Sch B er den mest tallrike dibenzocyclooctadiene derivat i
S. chinensis product: (Turcz.) Baill, en tradisjonell kinesisk medisinsk urt. Denne urten har blitt brukt som en medisin for de siste flere tusen år og er fortsatt aktivt praktisert i Kina, Sør-Korea og Japan, uten alvorlige bivirkninger noensinne rapportert.
Bortsett fra sin hemming av kreftcelle metastase, Sch B kombinert med andre kreft narkotika kan bringe andre potensielle fordeler. Det har blitt rapportert at enkelte legemidler mot kreft kan øke metastasering via aktivering av kreftcellenes invasivitet og metastasering. For eksempel, hemming av angiogenese redusert primær tumorvekst og microvessel tetthet, men akselerert tumorinvasjon og metastase [52], [53]; cyklofosfamid og HSP90 inhibitor 17-AAG hemmet primære svulster men fremmet svulst invasjon og metastasering [54], [55]; doxorubicin fremmet benmetastase av 4T1 brystkreftceller [32]. Vi ser for oss at kombinasjonen av Sch B med disse midlene kan bringe fordel å kontrollere både primærtumor og metastaser.
Hjelpemiddel Informasjon
Figur S1.
Effekter av Sch B på lungemetastase av 4T1 celler. Lungemetastase av 4T1 i mus vist i figur 2 ble evaluert ved å bruke H E farging ved å telle det totale vevsområdet per lunge seksjon og metastase til stede i det samme område. (A) De representative bilder av synlige overflaten lunge knuter. (B) H E farging av lungemetastaser. Under mikroskop, vi var ikke i stand til å ta et fullstendig bilde med et enkelt bilde, slik at vi tok flere bilder som deretter ble kombinert
doi:. 10,1371 /journal.pone.0040480.s001 plakater (TIF)
Figur S2.
Effekter av Sch B på MDA-MB-231 dyremodell. 5 × 10
6 levedyktige MDA-MB-231 celler ble inokulert s.c. inn i den andre høyre melkefettputen område. Mus ble gavaged med Sch B (100 mg /kg kroppsvekt) hver dag i totalt 7 doser. Mus ble avlivet på dag 30 etter inokulering. Primære svulster, bein og omkringliggende vev ble patologisk undersøkt ved hjelp av H E. (A) De representative reisende av invasiv foran, hvor tumorceller invaderte inn i den omliggende muskler i kontrollgruppen, mens invasjonen ble svekket i Sch B-behandlede gruppe. (B) Vekstkurver av primær tumor. (C) Kroppsvekt kurver. (D) Tumorvekt på dagen for offer. (E) Representative bilder av lungene som ikke har noen synlige metastatiske knuter. (F) Leg bein (lårben og skinneben) ble fiksert i 10% nøytral bufret formalin, avkalkes i 1% HCl i 24 timer og innstøpt i parafin. Seksjonene ble farget med H E, som viser ingen observerbar metastase
doi: 10,1371 /journal.pone.0040480.s002 plakater (TIF)
Figur S3..
cytotoksisitet av Sch B mot 4T1 celler. 2 x 10
3-celler ble sådd ut per brønn i 96-brønners platene. Sch B (5, 10, 20, 40, 80, 160 ug /ml) ble tilsatt, og cellene ble dyrket i 60 timer. Cellelevedyktigheten ble bedømt ved trypan blå eksklusjon assay.
