Abstract
Bakgrunn
Tykktarmskreft (CRC) er fortsatt en av de store krefttyper og kreft dødsfall på verdensbasis. Sensitive, ikke-invasive biomarkører som kan lette sykdomsdeteksjon, iscenesettelse og prediksjon av terapeutisk utfall er svært ønskelig å bedre overlevelse og bidra til å finne optimal behandling for CRC. De små ikke-kodende RNA, microRNAs (mirnas), har nylig blitt identifisert som kritiske regulatorer for ulike sykdommer, inkludert kreft og kan representere en ny klasse av kreft biomarkører. Hensikten med denne studien var å identifisere og validere sirkulerende microRNAs i humant plasma for bruk som slike biomarkører i kreft i tykktarmen.
metodikk /Principal Funn
Ved å bruke kvantitativ revers transkripsjon-polymerase chain reaction, vi fant ut at sirkulerende MIR-141 ble signifikant assosiert med stadium IV tykktarmskreft i en kohort av 102 plasmaprøver. Mottaker opererer karakteristikk (ROC) analyse ble brukt for å evaluere sensitivitet og spesifisitet kandidat plasma mikroRNA markører. Vi observerte at kombinasjonen av MIR-141 og carcinoembryonic antigen (CEA), en mye brukt markør for CRC, ytterligere forbedret nøyaktighet for påvisning. Disse funnene ble bekreftet i en uavhengig kohort av 156 plasmaprøver samlet inn i Tianjin, Kina. Videre vår analyse viste at høye nivåer av plasma MIR-141 spådd dårlig overlevelse i begge kohorter og at MIR-141 var en uavhengig prognostisk faktor for avansert tykktarmskreft.
Konklusjon /Betydning
foreslår at plasma MIR-141 kan representere en ny biomarkør som utfyller CEA i å oppdage tykktarmskreft med fjernmetastaser og at høye nivåer av MIR-141 i plasma var assosiert med dårlig prognose
Citation. Cheng H, Zhang L , Cogdell DE, Zheng H, SCHETTER AJ, Nykter M, et al. (2011) Sirkulasjons Plasma MiR-141 er en ny biomarkør for metastatisk tykktarmskreft og Spår dårlig prognose. PLoS ONE 6 (3): e17745. doi: 10,1371 /journal.pone.0017745
Redaktør: Alfons Navarro, Universitetet i Barcelona, Spania
mottatt: 15 oktober 2010; Godkjent: 11 februar 2011; Publisert: 17 mars 2011
Copyright: © 2011 Cheng et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble delvis støttet av et stipend fra National Foundation for Cancer Research (WZ og SRH) og Tianjin Cancer Institute og Hospital (KC). Hanyin Cheng ble støttet av en Pharmacoinformatic Trening Grant fellesskap fra NIH (NIH Grant No. R90 DK071505-05). Data- og prøvetaking ble støttet av M. D. Anderson Universitetet Cancer Fund, Senter for Kliniske og Translasjonsforskerne Sciences ved University of Texas Health Science Center i Houston, og NIH Cancer Center Support Grant CA16672. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
tykktarms~~POS=TRUNC kreft~~POS=HEADCOMP (CRC) er en verdensomspennende helseproblem med 655,000 dødsfall per år [1]. I USA, er CRC den tredje vanligste krefttypen og den nest vanligste årsaken til kreftrelaterte dødsfall [2], med anslagsvis 51,370 dødsfall i 2010 ifølge National Cancer Institute. I Kina, CRC fortsatt den femte vanligste krefttypen og den fjerde vanligste årsaken til kreft-dødsfall [3]. Til tross for tidlig screening og utvikling av nye kjemoterapeutiske strategier, CRC overlevelse i løpet av de siste 20 årene har ikke vesentlig forbedret. Videre er forekomsten av CRC øker raskt de siste årene i Kina [4]. Nye biomarkører som er av klinisk verdi er derfor et stort behov for å bedre etterlevelse priser. Carcinoembryonic antigen (CEA) er blitt brukt som en markør serum av CRC, selv om dens følsomhet har variert i forskjellige studier [5], [6]. Nylig, en familie av små regulatoriske RNA, microRNAs, har dukket opp som mulige plasma markører for menneskelige sykdommer, inkludert kreft på grunn av deres relative stabiliteten i sirkulasjon [7].
microRNAs er små ikke-kodende RNA (18- 22 nt i lengde) som regulerer ekspresjonen av målgener ved å forstyrre transkripsjon eller inhibering av oversettelses [8]. Studier har vist at microRNAs spille en avgjørende rolle i nesten alle cellulære biologiske prosesser, inkludert metabolisme, overlevelse, differensiering og apoptose. Deregulering av spesifikke microRNAs bidrar til en rekke sykdommer, særlig utvikling og progresjon av kreft, inkludert CRC. Nærmere bestemt, mikroRNA ekspresjonsanalyse i CRC viste at en rekke microRNAs, inkludert MIR-21, MIR-20a og miR155 ble oppregulert i tumorvev, og at høyere MIR-21 var assosiert med dårlig resultat terapeutisk [9], [10]. Potensialet av sirkulerende miRNAs i plasma som kreft biomarkører har også blitt undersøkt i noen studier. For CRC, en fersk studie rapporterte at Mir-92 nivåene var signifikant høyere i plasmaprøver fra pasienter enn hos friske kontroller, og kan være en potensiell markør for CRC deteksjon [11]. En studie av plasmaprøver fra prostatakreftpasienter rapporterte at plasma MIR-141 nivåer kan brukes til å screene for metastatisk prostatakreft med høy følsomhet [12].
I denne proof-of-prinsippet studie for å identifisere potensielle biomarkører for CRC, vi undersøkt om utvalgte kandidat microRNAs kan tjene som ikke-invasive, blodbaserte markører for CRC ved å analysere relative nivåer av tre microRNAs (MIR-21, MIR-92, og MIR-141) i en kohort av 102 plasma prøver fra friske individer og CRC pasienter hentet fra TexGen, et samarbeid med Texas Medical Center institusjoner. Vår første data indikerte at blant disse tre microRNAs, ble plasma MIR-141 nivåer betydelig forhøyet i plasma av tykktarmskreftpasienter med Stage IV sykdom og kunne lett diskriminere fjernmetastaser saker fra friske kontrollpersoner og pasienter med andre etapper. Kombinasjon av MIR-141 med CEA var utfyllende og ytterligere kan øke deteksjons nøyaktigheten av fjernmetastaser i tykktarmskreft. Disse funnene ble bekreftet i en uavhengig kohort av 156 plasmaprøver hentet fra Tianjin, Kina. Våre videre analyser gitt støtte bevis på at plasma MIR-141 var en potensiell prognostisk faktor som spådd for dårlig overlevelse i kolon kreftpasienter. Interessant, i motsetning til i plasma, MIR-141 ble ikke uttrykt forskjellig i tumorvev mellom Stage IV og Stage I-II tykktarmskreftpasienter eller mellom tumorvev og tilstøtende ikke-tumorvev i Stage IV pasienter, noe som tyder på at heving av plasma MIR-141 i Stage IV pasienter kan hentes ut fra andre systemiske responser som betennelsesreaksjoner hos disse pasientene.
Materialer og metoder
Etikk uttalelse
Både plasma og vev-baserte studier ble godkjent av Institutional Review Board (IRB) ved MD Anderson Cancer Center og av etikkomiteen ved Tianjin Medical University Cancer Institute og sykehus. Alle deltakerne ga skriftlig samtykke fra deres informasjon skal lagres på sykehuset database og brukes til forskning.
Kliniske prøver
To uavhengige sett av plasmaprøver ble brukt. Totalt 102 plasmaprøver fra alders- og kjønnstilsvarende friske individer og CRC pasienter (Stadium I-IV) ble hentet fra TexGen mellom 2002 og 2008, et samarbeid med Texas Medical Center institusjoner som gir biologiske prøver samt epidemiologisk og klinisk data (TexGen prøver, se tabell S1). En uavhengig kohort av 156 plasmaprøver fra alders- og kjønnstilpassede friske donorer og tykktarmskreftpasienter (Stage I-IV) ble oppnådd ved Tianjin Medical University Cancer Institute og sykehus, Tianjin, Kina (TCH prøver) mellom 2007 og 2009 ( se tabell S2). Patologisk klassifisering av sykdom hos alle pasienter ble utført ved å følge International Union Against Cancer (UICC) og amerikanske Joint Committee on Cancer (AJCC) TNM staging system for tykktarmskreft etablert i 2003. Blodprøver ble samlet fra alle pasienter før operasjon og behandling. CEA nivåer av både TexGen og TCH plasmaprøver ble målt ved standard enzym immunoassay som en del av rutinemessige kliniske tester og ble kjøpt fra den kliniske database ved hvert institutt. Oppfølging data av alle de rekrutterte tykktarmskreftpasienter fra både TexGen og TCH ble kjøpt og overlevelse ble beregnet fra diagnosedato til dødsdato eller siste oppfølging i juni 2010. Alle pasientene rekruttert til denne studien hadde ikke fikk cellegift eller strålebehandling før blodet trekker. Den demografisk informasjon av de to sett av prøver er oppsummert i supplerende materiale.
For vevet basert analyse tumorvev fra 21 kolon kreftpasienter med fjernt metastatisk sykdom (stadium IV) og 24 tykktarmskreftpasienter med ikke -metastatic sykdom (stadium i og II) ble samlet mellom 2007 og 2009 av Tianjin Medical University Cancer Institute og sykehus fra de samme pasientene som har plasma prøver ble brukt.
RNA isolering og kvantitativ RT-PCR
små RNA ble anriket fra alle plasmaprøver ved bruk av Mirvana PARIS RNA isolering sett (Ambion, Austin, TX). I korte trekk ble 250 ul plasma tint på is og sentrifugert ved 14000 rpm i 10 minutter for å fjerne cellerester og andre cellulære organeller. Deretter ble 150 ul av supernatanten lysert med et likt volum av 2x denaturerende oppløsning. For normalisering av prøve-to-sample variasjon i løpet av RNA isolasjonsprosedyrer, 25 fmol av syntetisk
C. elegans
miRNA cel-MIR-39 ble lagt til hver denaturert prøve. Små RNA ble deretter anriket og renset følge produsentens protokoll, med unntak av at den anrikede små RNA ble eluert i 45 ul av forvarmet nuklease-fri vann. Standard metode TRIZOL (Invitrogen) ble anvendt for å isolere total RNA fra kolon vev.
For mikroRNA basert RT-PCR-analyser, ble 2,5 mL av anrikede små RNA fra plasmaprøver reverstranskribert ved hjelp av revers TaqMan mikroRNA Transciption Kit ( Applied Biosystems, San Diego, CA) i henhold til produsentens instruksjoner i et totalt reaksjonsvolum på 7,5 mL. En 1:20 fortynning av RT-produkter ble brukt som templat for PCR-stadium. PCR-reaksjonen ble utført i tre paralleller ved å bruke TaqMan PCR 2x Universal Master Mix med betingelser som tidligere beskrevet [13]. Ingen-mal kontroller for både RT trinn og PCR skritt ble tatt med for å sikre målet spesifikk forsterkning. De 7900 Sequence Detection System 2.3 (Applied Biosystems) programvareinnstillingene ble brukt til å beregne den relative endringen i RNA uttrykk av 2
-ΔΔCt metode med 95% konfidensintervall. Analyser for de TexGen prøver ble utført ved MD Anderson og analyser for de TCH prøver ble utført ved Tianjin Medical University Cancer Institute og sykehus.
mikroRNA profilering
mikroRNA microarray profilering ble utført med RNA isolert fra Maryland kohort med Ohio State mikroRNA microarray versjon 2.0 som tidligere beskrevet [9]. Microarray data (inkludert rå og bearbeidet data) har blitt deponert i National Center for Biotechnology Information tallet (NCBI s) Gene Expression Omnibus (NCBIGEO GSE7828).
Statistisk analyse
statistisk signifikans ble bestemt ved hjelp av den Wilcoxon signed-rank tester mellom gruppene. Mottaker som opererer karakteristiske (ROC-kurver) ble samlet for å bedømme den diagnostiske nøyaktigheten av hver parameter, og følsomheten og spesifisiteten av den optimale skjæringspunktet ble definert som de verdier som maksimert arealet under ROC-kurven (AUC). De relative nivåer av mikroRNA ble kvantifisert ved hjelp av to
-ΔΔCt metode, og dataene ble analysert som loggen
10 av den relative mengden av målet mikroRNA. Den statistiske analysen ble utført med bruk av programvarepakker SPSS versjon 16.0 (WPSS Ltd., Surrey, Storbritannia) og grafer ble generert ved hjelp Graphpad Prism 5.0 (Graphpad Software Inc, California). Spearman korrelasjonsanalyse ble utført for å avdekke sammenheng mellom plasma Mir-141 uttrykk og CRC etapper. Alle statistiske tester var tosidig, og en
P
verdi på 0,05 ble betraktet som signifikant. Sammenhengen mellom total overlevelse og plasma MIR-141 ble analysert ved hjelp av Kaplan-Meier metoden og Log-rank test. Cox proporsjonal farer regresjonsanalyse ble brukt for å vurdere om plasma MIR-141 var en uavhengig prognostisk faktor for tykktarmskreft.
Resultater
Plasma MIR-141 nivåer er korrelert med kliniske stadier i tykktarmskreft
Tre microRNAs (MIR-21, MIR-92 og MIR-141) ble valgt i våre studier for å undersøke deres potensial til å fungere som biomarkører for tykktarmskreft. Disse søker mirnas ble valgt fordi 1) MIR-21 har blitt funnet å være oppregulert ved CRC tumorvev [9], [10], [14]; 2) MIR-92 er nylig blitt rapportert å være en markør for plasma tykktarmskreft [11]; og 3) MIR-141 har vist seg å være en potensiell plasma markør for metastatisk prostatakreft [12]. Kvantitativ RT-PCR baserte mikroRNA analyser på disse tre mirnas ble utført. Vi først undersøkte sammenhengen mellom disse tre mirnas og tykktarmskreft kliniske stadier. Stage I og Stage II tilfeller ble gruppert sammen i vår analyse fordi bare begrenset stadium I tilfellene var tilgjengelig. Varmekartanalyse viste at MIR-141 nivåer gruppert i henhold til forskjellige stadier (figur 1, A). Spearman korrelasjonsanalyse viste at plasma MIR-141-nivåer ble sterkt korrelert med kolonkreft trinn (r = 0,605, p = 1,17 x 10
-8). I motsetning til dette, MIR-21 og MIR-92 var mindre korrelert med kliniske stadier (figur 1, A).
(A) hver rad som svarer til en plasma miRNA og hver kolonne tilsvarer hver prøve. Expression nivåer for hver miRNA er normalisert over prøvene og skyggelagt i farger slik at rødt betyr høy uttrykk og grønt betyr lite uttrykk. Spearman korrelasjon viser at MIR-141 er sterkt korrelert med etapper (r = 0,605, P = 1,17 × 10
-8). (B-G) De relative nivåer av utvalgte plasma microRNAs ble normalisert å pigge-kontroll cel-MIR-39 og vist som log10 av den relative mengde (RQ). De Wilcoxon to-utvalg tester ble utført for å undersøke forskjellen på utvalgte plasma microRNAs mellom normale kontroller og tykktarmskreftpasienter (B-D), eller mellom normale kontroller og /eller tykktarm kreftpasienter med ulike kliniske stadier (E-G).
Vi neste analysert om disse kandidat microRNAs kan tjene som sirkulerer tykktarmskreft markører ved å sammenligne sine plasmanivåer mellom kreftpasienter og normale kontroller. Overraskende, i motsetning til den forrige rapporten at oppregulering av plasma MIR-92 var et tykktarmskreft biomarkør, den Wilcoxon to-sample test viste at blant disse tre microRNAs, ble plasma MIR-92 betydelig redusert i TexGen kohort av tykktarmskreftpasienter (
p
= 0,03) (figur 1, D). Men nedgangen i plasma MIR-92 ble kun observert i fase I-II og trinn III og nivået økes til samme nivå som for normale kontroller i Stage IV tykktarmskreft (Figur 1, G). Plasmanivåer av MIR-21 og MIR-141 viste ikke signifikant forskjell mellom kontroller og kreftpasienter (Figur 1, B C). Etter stratifisering av kreftpasienter i henhold til deres kliniske stadier, ble plasma MIR-141 signifikant oppregulert i Stage IV tykktarmskreft (figur 1, E). Til en mye mindre grad, ble plasma MIR-21 også vist å være forhøyet i trinn IV tarmkreft (figur 1, F). Basert på disse observasjonene, søkte vi å fokusere på MIR-141 for ytterligere karakterisering.
Høy plasma MIR-141 nivåer er assosiert med Stage IV tykktarmskreft og suppler med CEA i diagnose
Listen resultatene viste at blant de tre utvalgte microRNAs ble MIR-141 signifikant korrelert med tykktarmskreft stadier. Den detaljerte Wilcoxon to-sample test viste at plasma MIR-141 ble signifikant forhøyet i Stage IV tilfeller sammenlignet med Stage I-II, trinn III og Stage I-III kombinert. ROC-kurve ble plottet for å identifisere en cut-off-verdi som kunne skjelne stadium IV tykktarmskreft fra andre grupper. ROC-kurve analyse viste at ved den optimale cut-off, plasma MIR-141 hadde en 90,9% sensitivitet og 77,1% spesifisitet ved separering av trinn IV tilfeller fra trinn I-II tilfeller med en AUC på 0,861 (figur 2 B), en 77,1% sensitivitet og en 89,7% spesifisitet i å skille Stage IV og Stage III tilfeller med en AUC på 0,803 (figur 2, C), og en 77,1% sensitivitet og en 89,7% spesifisitet i skille Stage IV og kombinert Stage i-III tilfeller med en AUC på 0,836 (figur 2, D). Vår analyse viser også at i denne gruppen, ble plasma MIR-141 signifikant forhøyet i Stage III pasienter sammenlignet med tidlig stadium pasienter (
p
= 0,025) (Figur 2, A). Disse resultatene tyder på at sirkulerende MIR-141 kan være en ny biomarkør for metastatisk kreft i tykktarmen.
(A) Liten RNA ble isolert fra plasmaprøver og MIR-141 ble målt med kvantitativ RT-PCR-analyser. De to-sample test Wilcoxon ble utført for å evaluere forskjeller i MIR-141 nivåer mellom Stage III og Stage I-II grupper. ROC-analyse ble utført for å bestemme sensitivitet og spesifisitet med verdien av AUC i panelet til høyre. De Wilcoxon to-utvalg tester mellom (B) Stage IV og Stage I-II, (C) Stage IV og Sage III, og (D) Stage IV og Stage I-III grupper ble utført for å evaluere foreningen av plasma MIR-141 med Stage IV sykdomsstatus.
Fordi blodet CEA testen er mye brukt markør for CRC pasienter, forsøkte vi å sammenligne resultatene av MIR-141 med CEA som en biomarkør. Vi undersøkte hvorvidt en kombinasjon av MIR-141 og CEA var mer følsom enn enten markør når de brukes hver for seg. Vår analyse viste at de var faktisk utfyllende. Når spesifisitet ble satt til 100%, MIR-141 identifiserte sju Stage IV tykktarmskreft som ble savnet av CEA alene og CEA identifisert fire trinn IV metastatisk tykktarmskrefttilfeller som var savnet etter MIR-141 alene (figur 3).
To-parameter (uttrykk av MIR-141 og CEA i plasma) grupperingen brukes for å diskriminere fjernt metastatisk kreft i tykktarmen. Cut-off verdi for CEA er 5,0 ng /ml, og for MIR-141 er 16,77 definert fra ROC kurven. De tilsvarende grenseverdier er markert med grå linjer.
Validering av plasma MIR-141 som tykktarmskreft markør fra de ovennevnte studiene i en uavhengig befolknings
Resultatene gitt bevis for at høye nivåer av sirkulerende MIR-141 kan være en potensiell biomarkør som utfyller CEA for metastatisk kreft i tykktarmen. For ytterligere å validere den potensielle nytten av MIR-141 i den kliniske behandlingen av tykktarmskreft, utførte vi en valideringsstudie med et uavhengig sett med plasmaprøver (TCH prøver) (Se tabell S2 for demografisk informasjon om TCH tilfeller). Målingene ble gjort uavhengig følge de samme eksperimentelle prosedyrer som brukes for TexGen prøvene.
Resultatene bekreftet at plasma MIR-141 nivået var signifikant høyere i Stage IV pasienter enn hos friske kontrollpersoner, Stage I-II og Stage III pasienter (figur 4 A). Spesielt ROC kurver viste at en cut-off for plasma MIR-141 kan bestemmes med en 66,7% sensitivitet og en 80,8% spesifisitet for å skille Stage IV saker fra Stage I-II tilfeller (AUC = 0,756) (figur 4 , B), en 66,7% sensitivitet og 89,7% spesifisitet for separering fra trinn III tilfeller (AUC = 0,779) (figur 4, C), og en 66,7% sensitivitet og 84,0% spesifisitet for separering fra Trinn 1-III tilfeller ( AUC = 0,764) (figur 4, D). I motsetning til i TexGen plasmaprøver, vi imidlertid ikke klart å påvise en signifikant forskjell i MIR-141 nivåer mellom Stage III og Stage I-II tilfeller (ikke vist), noe som tyder på at høyere plasma MIR-141 er mer assosiert med fjern og mindre med lymph- metastaser i tykktarmskreft.
Små RNA isolering og MIR-141 kvantitative RT-PCR-analyser ble utført på samme måte som for trening kullet. (A) De to-sample test Wilcoxon ble utført for å sammenligne MIR-141 nivåer mellom normale kontroller og /eller tykktarm kreftpasienter med ulike kliniske stadier. (B-D) De samme analysene ble utført for å sammenligne MIR-141 nivåer mellom Stage IV saker og Stage I-II tilfeller (B), mellom Stage IV og Stage III tilfeller (C), og mellom Stage IV og Stage I-III tilfeller (D), henholdsvis. ROC-analyse ble utført for å bestemme sensitivitet og spesifisitet med verdien av AUC i panelet til høyre. (E) Kombinasjon av CEA og MIR-141 identifiserte flere metastaserende pasienter som var savnet ved enten markør alene. Se Figur 3 for definisjonen av cut-off verdier for CEA og MIR-141.
Vi vurderte også CEA data i TCH datasett. I likhet med det som ble vist i TexGen prøvene, kombinasjon av MIR-141 og CEA identifisert flere metastatisk saker som ellers var savnet ved enten markør som brukes alene (figur 4, E). Dette funnet validert at kombinasjonen av disse to biomarkører var en mer effektiv metode for å påvise Stage IV CRC pasienter.
Plasma MIR-141 er korrelert med dårlig overlevelse i tykktarmskreft
For ytterligere å vurdere om plasma MIR-141 nivåer kan forutsi prognose, neste utførte vi en overlevelsesanalyse på TexGen og TCH tilfeller. Kaplan-Meier overlevelseskurver viste at høyere uttrykk av plasma MIR-141 var signifikant korrelert med dårlig overlevelse både i TexGen (
P
= 0,004, log-rank test) og Tianjin (
P
= 0.002, log-rank test) gruppene (figur S1, A og B). Univariat Cox regresjonsanalyse viste at plasma MIR-141 var en signifikant prognostisk indikator på tykktarmskreft i TexGen (HR = 3,80, 95% CI = 1,46 til 91) og Tianjin tilfeller (HR = 4,83, 95% CI = 2,06 til 11,35) henholdsvis (tabell 1). For å unngå eventuelle skjevheter mellom TexGen kohort og Tianjin årsklasse, utførte vi den univariate og multivariate overlevelsesanalyser for alle tilfeller. Den multivariate Cox proporsjonale hazard regresjonsanalyse viste at plasma MIR-141was en uavhengig prognostisk markør i kolon kreftpasienter når vi fusjonerte prøvene fra begge sentre (HR = 2,40, 95% CI = 1,18 til 4,86) (tabell 1).
MiR-141 er ikke forskjellig uttrykt i tykktarm kreft vev
Vi har søkt å fastslå om forhøyet MIR-141 i plasma fra Stage IV CRC pasienter reflektert differensial uttrykk i tumorvev fra annen sykdom etapper. Vi først sammenlignet Mir-141 nivåer i tumorvev mellom Stage I-II og Stage IV i TCH årsklasse, som overraskende viste at MIR-141 ikke ble oppregulert i Stage IV tilfeller (
p
= 0,495) (Figur 5, A). Vi neste analysert våre tidligere beskrevet mikroRNA microarray profilering data (GEO, GSE7828). Vår analyse bekreftet også at den MIR-141-nivå ikke var signifikant høyere i tumorvev enn i tilstøtende normale vev i trinn IV pasienter, så vel som i pasienter med andre trinn (figur 5, B).
(A ) Total RNA ble isolert fra tumorvev av metastatiske eller ikke-metastaserende pasienter fra Tianjin årsklasse, og Mir-141 ble målt med kvantitativ RT-PCR bruker RNU6B som en endogen kontroll. Den Wilcoxon to-sample test ble utført for å sammenligne Mir-141 uttrykk i tumorvev mellom disse to gruppene. En
P
0,05 regnes som signifikant. (B) Mir-141 uttrykk nivåer ble målt ved hjelp av mikroRNA profilering data fra Maryland kohort av CRC prøver. De Wilcoxon matchet-par tester ble utført for å sammenligne MIR-141 nivåer mellom tumorvev og tilstøtende normalt vev i disse CRC pasienter.
Diskusjoner
I denne studien tok vi en fokusert tilnærming og undersøkt tre søker microRNAs for deres potensielle verdi som plasma biomarkører for tykktarmskreft. Resultater fra Texas studien viste at plasma MIR-141 var en sensitiv markør og suppleres CEA for å oppdage Stage IV tykktarmskreft. Dette resultatet ble uavhengig validert ved hjelp av en kohort av prøver fra tykktarm kreftpasienter i Tianjin, Kina. Dermed denne samarbeids undersøkelse utført av to uavhengige forskerteam på to forskjellige steder på forskjellige etniske pasientgrupper gir sterke bevis for at MIR-141 er en gyldig plasma markør som utfyller CEA i å bestemme stadium IV tykktarmskreft. Viktigere, våre data viste også at høyere plasma MIR-141 var assosiert med kortere overlevelse i begge kohorter og at MIR-141 var en uavhengig prognostisk indikator for tykktarmskreft.
