Abstract
Bakgrunn
endotelet er ikke en homogen organ. Endotelcelle heterogenitet er blitt beskrevet på nivået av cellemorfologi, funksjon, genekspresjon, og antigen sammensetning. Som følge av den genetiske, transkriptomet og omkringliggende miljø mangfold, er endotelceller fra forskjellige karsenger differensiert funksjon og fenotype. Påvisning av sirkulerende endotelceller (CECs) ved flowcytometri er en tilnærming mye brukt i kreftpasienter, og deres antall, levedyktighet og kinetisk er et lovende verktøy for å stratifisere pasient som mottar antiangiogene behandling.
Metodikk /hovedfunnene
Foreløpig CECs er identifisert som positive for en kjernefysisk binding antigen (DNA +), negativt for pan leukocytter markør CD45, og positivt for CD31 og CD146. Etter en tilnærming nylig validert i vårt laboratorium, undersøkte vi uttrykket av CD109 på CECs fra perifert blod fra friske forsøkspersoner og kreftpasienter. Endotelial Innholdet i disse cellene ble bekreftet ved RT-PCR for tilstedeværelse av m-RNA-nivå på CDH5 (Ve-cadherin) og CLDN5 (Claudin5), to endotel-spesifikke transkripter. Før behandling, ble betydelig høyere nivåer av CD109 + CECs og levedyktig CD109 + CECs funnet i brystkreftpasienter og pasienter med glioblastom sammenlignet med friske kontroller, og antallet betydelig redusert etter behandling. Høyere nivåer av endoteliale bestemt vitnemål uttrykt i utviklingen av endotelceller CLEC14a, TMEM204, ARHGEF15, GPR116, ble observert i sortert CD109 + CECs sammenlignet med sorterte CD146 + CECs, noe som tyder på at disse genene kan spille en viktig rolle ikke bare under embryogenesen men også i voksen angiogenese. Interessant, mRNA nivåer av TEM8 (identifisert som Antrax Toxin Receptor1, Antrax1) ble uttrykt i CD109 + CECs + men ikke i CD146 + CECs.
Konklusjon
Til sammen våre resultater tyder på at CD109 representerer en sjelden populasjon av sirkulerende tumor endotelceller, som spiller en potensielt nyttig prognostisk rolle hos pasienter med glioblastom. Rollen CD109 uttrykk i kreftfartøyspesifikke endotelceller fortjener å bli undersøkt videre av genuttrykk studier
Citation. Mancuso P, Calleri A, Gregato G, Labanca V, Quarna J, Antoniotti P, et al . (2014) En undergruppe Sirkulasjons endotelceller Express CD109 og er beriket i blodet av kreftpasienter. PLoS ONE 9 (12): e114713. doi: 10,1371 /journal.pone.0114713
Redaktør: Lu-Gang Yu, University of Liverpool, Storbritannia
mottatt: 5 mai 2014; Godkjent: 13 november 2014; Publisert: 15.12.2014
Copyright: © 2014 Mancuso et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. Den forfatterne bekrefter at alle data som underbygger funnene er fullt tilgjengelig uten restriksjoner. Alle relevante data og støtte informasjon som kommer fra flow-Cytometry filer og molekylærbiologi studien er innenfor papir
Finansiering:. Støttet delvis av AIRC (Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro), Fondazione Umberto Veronesi, og Minis della Salute. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Angiogenese spiller en avgjørende rolle i tumorvekst og progresjon [1] – [3] og basert på teorien om at målretting av endotelceller kan være en mer effektiv strategi enn å målrette kreftceller, i løpet av det siste tiåret mange anti -angiogenic legemidler har blitt introdusert til klinisk setting [4] -. [8]
for å kunne vurdere sirkulerende biomarkører av angiogenese som kan forutsi utfallet til antiangiogenic behandling i kreftpasienter, mange tilnærminger har blitt testet i både prekliniske og kliniske studier [9] – [11] og blant disse kvantifisering av sirkulerende endotelceller (CECs) ved flowcytometri har funnet bred applikasjons [12] -. [14]
CECs er modne endotelceller utgitt fra fartøy under fysiologiske endotelial omsetning eller, hos kreftpasienter, fra tumorvaskulatur, hvor de sannsynligvis gjenspeiler endotelial skade eller dysfunksjon. Disse cellene er forhøyet hos kreftpasienter sammenlignet med friske personer, og deres endringer i antall og levedyktighet har vist prediktiv, prognostisk, dynamisk eller flykte biomarkør verdi [15] -. [18]
endotelet er ikke en homogen organ. Endotelcelle heterogenitet er blitt beskrevet på nivået av cellemorfologi, funksjon, genekspresjon, og antigen-preparatet [19]. Som følge av den genetiske, transkriptomet og omkringliggende miljø mangfold, er endotelceller fra forskjellige karsenger differensiert funksjon og fenotype [20] -. [24], [35]
For tiden endoteliale markører som brukes til å identifisere CECs er CD34, CD31 og CD146 i kombinasjon med CD45, for å utelukke leukocytter, og en nukleær farging markør (som Syto16, Hoechst eller DRAQ5) for å eliminere telling av cellulære endoteliale mikropartikler [14], [25] -. [26]
CD109-genet koder for et glykosyl-phosphatidylinositolanchored glykoprotein som er et medlem av alfa (2) -macroglobulin /C3, C4, C5 familie av tioester-inneholdende proteiner [27]. CD109 vekselvirker direkte med type I-transformerende vekstfaktor -beta (TGF-β) signal- reseptoren og negativt modulerer TGF-β signalering [28]. Den uttrykkes på en subpopulasjon av CD34 + celler [29], på aktiverte blodplater, og aktiverte T-celler [30] og i en subpopulasjon av endoteliale celler [31]. Interessant nok har det blitt rapportert at CD109 er en av 12 endoteliale markører over-uttrykt i tumor endotelceller [23], [24]. For å få en mer omfattende forståelse av CEC fenotype, undersøkte vi uttrykket av CD109 på dyrkede endotelceller og på CECs fra det perifere blod fra friske forsøkspersoner og kreftpasienter. Vi brukte en flowcytometri tilnærming validert i vårt laboratorium, og endotelial naturen av disse cellene ble validert ved RT-PCR og genuttrykk.
Materialer og metoder
Etikk erklæringen
Alle pasienter ga skriftlig informert samtykke før inkludering i den terapeutiske protokollen og for forskningsformål. All klinisk undersøkelse ble gjennomført i henhold til de prinsipper som er nedfelt i Helsinkideklarasjonen
For Brystkreftpasienter: Forsøket ble utført ved European Institute of Oncology, Milano, Italia og godkjent av «IRCCS – Istituto Europeo. di Oncologia e Centro Cardiologico Monzino «Etikk-komiteen og registrert i Institute database (# 2007-006025-27)
for pasienter med glioblastom. Forsøket ble utført ved Neurological Institute» Carlo Besta «i Milano, Italia og godkjent av «Regione Lombardia Sezione Fondazione IRCCS Istituto Neurologico Besta» Etikk-komiteen og registrert i Institute database (# 1/08).
Påvisning av CD109 på endotelceller kolonier
for å validere etter flow-cytometri ekspresjon av CD109 på endotelceller in vitro endotel-kolonier ble oppnådd fra perifert blod (PB) fra 10 friske donorer (7 kvinner, 3 menn) og 23 kreftpasienter som tidligere beskrevet [32].
Kort oppsummering, mononukleære celler (MNCs) ble isolert fra PB ved hjelp av Ficoll-Paque gradient sentrifugering, resuspendert i EGM2 medium (Lonza, Walkers, MD) og sådd ut på Collagen jeg petriskåler (35 mm, BioCoat, BD laboratorium, Bedford, MA) . Kulturer ble inkubert ved 37 ° C, 5% CO2, 95% relativ fuktighet i 3-4 uker. Mediet ble byttet hver 2. dag i 7 dager og deretter to ganger i uken inntil første passasje, og kulturen overvåkes for påvisning av endoteliale kolonier på grunnlag av morfologiske egenskaper, slik som tidligere beskrevet [32]. Etter 15-20 dager ble cellene løsnet med trypsin /EDTA (Gibco, BRL, UK) og farget med monoklonale antistoffer (MoAbs) anti-CD31-PeCy7, CD34-APC, CD45-H7, og 7-AAD (alle fra Beckman Coulter) CD146-Pe (Chemicon), VEGFR-2- PE (R . D) og CD109-Pe (Abcam) for flowcytometri studier
Sortering av CD109 + og CD146 + celler fra perifert blod
for å utføre en microarray analyse for gener uttrykt i sirkulerende endotelceller positive for CD109 (CD109 + CECs) og CEC positivt for CD146 (CD146 + CECs), en tre laser Tilstrømningen høy hastighet celle sorter (BD) ble brukt.
i korthet, i to forskjellige eksperimenter, 150 ml blod fra 8 friske forsøkspersoner ble oppsamlet og etter isolering MNCer med Ficoll- gradient ble celler utarmet på hvite blodceller ved anvendelse av anti-CD45-antistoff sammen med magnet MACS-mikroperler (Miltenyi Biotech) følge produsentens instruksjoner. Celler ble farget for Syto16, CD45, CD31 og CD109 og i det andre eksperimentet for Syto16, CD45, CD31 og CD146.
I løpet av sortering prosedyre, prøvene fortløpende avkjølt til 4 ° C og en fremre scatter pulshøyde og side scatter analyser ble utført for å utelukke cellegrupper og dubletter. En toveis celle sortering prosedyre ble utført med A140 um munnstykke med en 5,5 PSI trykk, og med en arrangementer rate på 1,000-1,500 hendelser per sekund, ved hjelp av en slags ren modus. Sorterings gate ble malt på Syto16 + CD45-CD31 + CD109 + celler og på Syto16 + CD45-CD31 + CD146 + celler. Prøvene ble oppsamlet i sterile polypropylenrør inneholdende RPMI og anvendt for molekylær analyse. Purity var alltid større enn 95% med en gjenvinning på 70-80%.
RT-PCR og genuttrykk analyse av sortert CD109 + CECs celler og CD146 + CECs
RNA isolering av sortert CD109 + CECs og CD146 + CECs, ble utført med ArcturusPicoPureRNA Isolation Kit, og cDNA ble generert fra den totale mengden av RNA ved hjelp av høykapasitets cDNA revers transkripsjon kit (Applied Biosystems). Kvantitativ real-time PCR (QRT-PCR) ble utført etter pre-forsterkning av cDNA (TaqManPreAmp Master Mix Kit) med en ABI Prism 7000 plattformen ved hjelp av TaqMan Gene Expression analyse for CDH5 (Ve-cadherin), CLDN5, (claudin 5) VWF (Von Willebrands faktor), CD34, VCAM-1, CLEC14a, TMEM204, ARHGEF15, GPR116, ARAP3, TEM8 (ANTRAX1 reseptor) [33].
Karakterisering av CD109 + CEC og CD146 + CEC fenotype
for å karakterisere CD109 + CEC og CD146 + CEC fenotype, en kombinasjon av 10 monoklonale antistoffer ble brukt (Syto 16 FITC, CD146 PE, 7-AAD, CD31 PeCy7, CD34 ECD, CD13 APC, CD90 APC-AF700, CD117 APC-AF750, CD45 Pacific Blue og CD109 Pacific Orange). CD90 og CD 117 ble kjøpt av Beckman Coulter.
uten merking CD109 (Abcam) ble konjugert med pacific oransje, ved hjelp av Zenon
R Kit merking teknologier (Life Technologies), i henhold til produsentens instruksjoner.
CD34, CD90 og CD117 uttrykk ble evaluert på DNA + (Syto16 +) CD45-CD31 + CD109 + og på DNA + (Syto16 +) CD45-CD31 + CD146 + celler.
for å bekrefte ved flowcytometri endotelial natur CD109 + CECs og CD146 + CECs, brukte vi Ulex Europeaus lectin og Ac-LDL FITC opp ta.
for Ac-LDL FITC opp ta, samlet vi 5 ml blod fra 5 forskjellige brystkreftpasienter, og etter MNCs isolasjon med Ficoll-gradient, ble celler inkubert med FITC Ac-LDL i henhold til fremstilling instruksjon (10 ug /ml i 4 timer ved 37 ° C). Etter Ac-LDL inkubasjon, farget vi celler med Syto16, CD45, CD31 og CD109 å undersøke tilstedeværelsen av AcLDL + CD109 + celler blant CD45-Syto16 + (kjerneholdige) CD31 + celler. Fem forskjellige eksperimenter ble utført.
Påvisning av CD109 + CECs og CD146 + CECs hos friske personer og kreftpasienter
Etter en flow-cytometri protokollen validert i vårt laboratorium for CEC deteksjon (Fig. 1), [ref 14], antall og levedyktigheten til CD109 + CECs og CD146 + CECs ble evaluert i perifert blod hos 50 friske forsøkspersoner og 200 kreftpasienter (66 metastatisk brystkreft og 134 pasienter med glioblastom).
Fluorescens Minus One for hver fluorescens er rapportert.
i korte trekk ble det nukleær farging Syto16 brukt til å diskriminere mellom DNA-inneholdende celler, blodplater og cellerester, og 7AAD for å bestemme levedyktigheten status av cellene. Panelet av MoAb brukte inkludert anti-CD45 (for å utelukke hematopoetiske celler), anti-CD31 (en endothelial celledifferensiering markør), anti-CD34 (som endothelial og stamceller markør) og anti-CD109 eller anti-CD146.
etter inkubering av 2,5 x 10
6 totale celler med MoAb (4 ° C i 20 minutter) og celler lyse med ammoniumklorid (NH
4Cl), minst 2 x 10
6 totale celler ble kjøpt til flow-cytometer (Facs-Canto, BD, 2007-2010 og Navios, Beckman Coulter, fra 2010 til februar 2013). Analyse ble utført på celler positive for Syto16 (DNA) negative for CD45, og positive for CD31 og CD109 eller for CD31 og CD146.
Kombinasjonen av Syto16 og 7AAD ble brukt til å evaluere CEC levedyktighet ifølge van der Pol et al. [34]. Nekrotiske celler ble identifisert som Syto16 lav /7AAD positive, apoptotiske celler som Syto16 lav /7AAD negative og levedyktige celler som Syto16 lys /7AAD negativ.
Statistical Analysis
Kontinuerlige variabler er rapportert som gjennomsnitt ± SEM. Toveis ANOVA, eller tosidige Student t test ble brukt der det er hensiktsmessig. Statistisk signifikans ble tatt på p. 0,05
Resultater
endotelceller kolonier fenotype
Tilleggs blod MNC (30 × 10
6 celler belagt) generert endotelceller kolonier fra 9 fra 10 friske forsøkspersoner og fra 14 av 23 pasienter. Alle endothelial kolonier var positive for CD31, CD146, CD34 og VEGFR-2 og negativ for CD45.
endotelceller kolonier fra alle friske og fra 10 kreftpasienter ble også evaluert for CD109 uttrykk. CD109 ble uttrykt på 1/9 endotelceller kulturer fra friske forsøkspersoner (11%) og på 5/10 (50%) endotelceller kulturer fra kreftpasienter.
RT-PCR av sortert CD109 + CECs og CD146 + CECs
Brett endringer av ned- eller opp-regulert gener uttrykkes sammenligne cDNA fra CD109 + CECs til CD146 + CECs som referanse celler (fig. 2).
Brett endringer av ned- eller opp-regulert gener er uttrykt sammenligne cDNA fra CD109 + til CD146 + celler som referanseceller. For å sikre biologisk reproduserbarhet, ble blod for cDNA samling hentet fra 8 ulike givere.
I begge CD109 + CECs og CD146 + CECs bekreftet vi uttrykket av mRNA nivå av CDH5 (Ve-cadherin) og CLDN5 (claudin V), to endotelceller spesifikke transkripter, noe som tyder på at begge celler er i slekt og art av endotel [23] – [24]. Samme resultat ble oppnådd for mRNA nivåer av vWF, VCAM1 og CD34.
Høyere nivåer av endoteliale bestemt vitnemål uttrykt i utviklingen av endotelceller [33] CLEC14a, TMEM204, ARHGEF15, GPR116, ble observert i sortert CD109 + CECs når sammenlignet sortert CD146 + CECs.
Interessant, ble mRNA nivåer av TEM8 (identifisert som Antrax Toxin Receptor1, Antrax1) uttrykkes bare i CD109 + CECs + men ikke i CD146 + CECs.
CD109 + og CD146 + CEC fenotype
Som vist i fig. 3, blant Syto16 + 7-AAD-CD31 + CD45- celler, vi har oppdaget to forskjellige befolkning på CECs, å være en positiv for CD109 + men negativt for CD146, og en positiv for CD146 men negative for CD109. Både CD146 + CECs og CD109 + CECs var negative for CD90 og CD117, for å bekrefte disse cellene er sannsynlig differensierte celler og ikke stamceller. CD34 var positiv på 30% av CD146 + CECs og på 20% av CD109 + CECs, og CD13 var positiv på 50% og 60% av CD146 + CECs og CD109 + CECs henholdsvis, noe som bekrefter disse cellene blir aktivert celler av angiogene blodkar [44].
etter ekskludering av avfall (A) og valg av CD45- (B), kjernedannet (Syto16 +) og CD31 + celler (C), CEC ble identifisert som positive for CD109 eller CD146 (E). (D): negativ kontroll. CD109 + CECs og CD146 + CECs ble evaluert av flowcytometri for uttrykket av CD34, CD117, CD90 og CD13.
Begge CD146 + CECs og CD109 + CECs var positive for Ulex Europeaus lektin (fig. 4 A-B1). For å utelukke epiteliale celler forurensning, farget vi kjernedannet (Syto16 +) CD45- celler for EpCAM, og selv om en subpopulasjon av EpCAM + celler er til stede, er disse cellene negative for CD31 ekspresjon (Fig. 4 C-C1).
EpCAM farging (4C-C1) bekreftet at Epitelceller selv hvis det finnes i DNA + CD45- cellerommet, er negative for uttrykket av CD31 bare til stede på endotelceller.
for å undersøke CD109 + CECs funksjon, utførte vi Ac-LDL up-ta. Som Ac-LDL tas opp av makrofager /monocytter, brukte vi disse cellene som «intern positiv kontroll» for å bekrefte endocytose aktivitet. Som rapportert i fig. 5, blant Ac-LDL + celler både CD45 + CD31 + CD14 + (monocytter) og CD45-CD31 + CD109 + (endotelceller) ble detektert.
Etter dublets (A) og rusk (B) eksklusjon, Ac-LDL + cellene ble detektert (C). Blant disse cellene, ble CD45 + CD31 + og CD45-CD31 + celler detektert (D). CD45 + CD31 + var også positive for CD14 (monocytter, E) og CD45-CD31 + var også positivt for CD109 + (endotelceller, F). Ac-LDL + celler ble kjernedannet (Syto16 +, F). C1, D1, E1 og F1 er de negative kontroller.
Påvisning av CD109 + CECs hos friske personer og kreftpasienter
Pasienter egenskaper er rapportert i tabell 1.
betydelig høyere nivåer av CD109 + CECs, CD146 + CECs, levedyktig CD109 + CECs og levedyktig CD146 + CECs (P = 0,0001) ble funnet ved baseline hos brystkreftpasienter og pasienter med glioblastom sammenlignet med friske kontroller (tabell 2). CD109 + CECs var 26 ± 20 /ml hos friske forsøkspersoner (n = 50), 62 ± 43 /ml hos pasienter med metastatisk brystkreft pasienter (n = 66, p 0,0001) og 101 ± 84 /ml hos pasienter med glioblastom (n = 134 , p 0,0001) før behandling. Fraksjonen av apoptotiske /nekrotiske CD109 + CECs var 71 ± 18% i sunn fag, 51 ± 18% hos brystkreftpasienter og 60 ± 21 pasienter med glioblastom.
Etter behandling CD109 + CECs og levedyktig CD109 + CECs var 52 ± 42 /ml og 15 ± 20 /ml henholdsvis brystkreft pasienter, og 64 ± 60 /ml og 35 ± 30 /ml hos pasienter med glioblastom (tabell 3).
CD146 + CECs var 43 ± 23 /ml hos friske forsøkspersoner (n = 50), 103 ± 83 /ml hos brystkreftpasienter (n = 64, p 0,0001) og 117 ± 87 pasienter med glioblastom (n = 134, p 0,0001).
brøkdel av apoptotiske /nekrotiske CD146 + CECs var 67 ± 20% i sunn fag, 62 ± 20% hos brystkreftpasienter og 66 ± 18 /ml hos pasienter med glioblastom før behandling.
Etter behandling CD146 + CECs og levedyktige CD146 + CECs var 96 ± 121 /ml og 41 ± 88 /ml henholdsvis brystkreft pasienter, og 78 ± 84 /ml og 23 ± 31 /ml hos pasienter med glioblastom (tabell 3) .
diskusjon
endotel celle heterogenitet er blitt beskrevet på nivået av cellemorfologi, funksjon, genekspresjon, og antigen sammensetning. Fordi blodårer er fordelt over hele kroppen, endotelcellene utsettes for en enorm variasjon av vev microenvironments, og det store omfanget av signalinnganger er tilstrekkelig til å gi fenotypisk heterogenitet på tvers av det vaskulære treet [19], [21], [35] .
Detektering av sirkulerende endotelceller ved flowcytometri er en tilnærming som er mye brukt i kreftpasienter, og identifisering av nummer, levedyktighet og kinetisk av endotelceller er et lovende verktøy for å stratifisere pasient som mottar anti-angiogen behandling [ ,,,0],15] – [18]
For tiden, CECs telles av en multiparametric flow-cytometri tilnærming som kombinerer CD146, CD31, CD45, en nukleær binding antigen (Syto16, Dapi eller HOECST) sammen med en levedyktighet cellulær farging (. som 7-AAD eller Annexin V).
CD109 er et glykosylfosfatidylinositol forankret celleoverflateglykoprotein, og er en av 12 endoteliale markører over-uttrykt i tumor endotelceller [23], [24].
i dette arbeidet, etter en tilnærming nylig validert i vårt laboratorium [14], vi sortert CD109 + CECs og CD146 + CECs og vi bekreftet ved RT-PCR, både i befolkningen uttrykket av mRNA nivå av CDH5 (Ve-cadherin) og CLDN5 (Claudin5) to gener selektivt uttrykt i endotelceller. Høyere nivåer av CLEC14a, TMEM204, ARHGEF15, uttrykt Gpr116 i å utvikle endotelceller [33], var til stede i CD109 + CECs når sammenlignet med CD146 + CECs, noe som tyder på at disse genene kan spille en viktig rolle, ikke bare i utviklings endotelceller, men også i voksen angiogenese.
Vi viste at CD109 + CECs og CD146 + CECs er to forskjellige undergruppe av endotelceller, blir disse to antigener ikke uttrykt på de samme cellene, mens CD34 (en markør for tiden brukes til å identifisere stamceller) var positiv på 20% av CD109 + CECs og på 30% av CD146 + CECs.
Vi har evaluert antall, levedyktighet og kinetisk av CD109 + CECs og CD146 + CECs og observerte at begge undergruppe av endotelceller er beriket i blodet av glioblastom og brystkreftpasienter, er mer levedyktig i forhold til verdien observert i friske forsøkspersoner, og antallet reduseres betydelig etter behandling.
i vår tidligere erfaring, vi rapportert at pasienter med brystkreft behandlet med metronomisk kjemoterapi, ble CD146 + CEC nivåer etter to måneders behandling assosiert med forlenget PFS [15]. I en annen klinisk studie med brystkreftpasienter behandlet med metronomisk kjemoterapi og bevacizumab, ble baseline CEC nivåer også assosiert med PFS [36], [37] som bekrefter at kvantifisering av CD146 + CECs er nyttig å identifisere pasienter som kan ha nytte av antiangiogenic behandlinger [ ,,,0],38].
i en serie av pasienter med glioblastom behandlet med AZD2171, en pan-VEGF reseptortyrosinkinasehemmer, Batchelor fant at levedyktige CEC nivåene var høyere hos pasienter som opplevde sykdomsprogresjon under AZD2171 terapi sammenlignet med pasienter uten progresjon i dag 112 [39].
Vi har nylig rapportert [40] som i glioblastom pasienter behandlet med bevacizumab og irinotecan eller med bevacizumab alene, PFS og OS ble betydelig økt hos pasienter med baseline tellinger av CD109 + CECs høyere enn 41,1 /ml, (1stquartile), mens ingen prognostisk faktor ble assosiert til CD146 + CECs.
Disse dataene tyder på at CEC heterogenitet kan reflektere vaskulære svulst kompleksitet og at CD109 + CECs kan være et potensielt nyttig prognostisk markør for glioblastom pasienter.
Det har blitt rapportert at CD109 er overuttrykt i tumorvaskulatur [24], og i denne studien vi observert at alle endoteliale kolonier fra friske individer og fra 10 kreftpasienter var positive for CD31, CD146, CD34 og VEGFR-2 og negativ for CD45, CD109 mens var positiv på 1/9 endotel-kulturer fra friske forsøkspersoner (11%) og videre 5/10 (50%) endotel-kulturer fra kreftpasienter.
m videre -RNA nivå TEM8, en celleoverflateglykoprotein identifisert som Anthrax Toxin Receptor 1, var synlig i CD109 + CECs men ikke i CD146 + CECs. Det har blitt rapportert at TEM8 blir oppregulert i tumorkarene [41], [42]. I TEM8 Knockout mus fysiologiske angiogenese og sårheling skje normalt, men i tumorbærende mus, er tumorvekst svekket, viser at TEM8 kan være nødvendig for å fremme tumor angiogenese, men ikke normal utvikling [43].
Til sammen disse resultatene indikerer at CD109 kunne representere en sjelden populasjon av sirkulerende tumor endotelceller, som spiller en potensielt nyttig prognostisk rolle hos pasienter med glioblastom. Rollen CD109 uttrykk i kreftfartøyspesifikke endotelceller fortjener å bli undersøkt videre av genuttrykkstudier.
Konklusjoner
Det er et økende behov for å identifisere sirkulerende biologisk markør for å stratifisere pasienter som kan fordelen med anti-angiogen behandling. I dette arbeidet rapporterer vi at CD109 er et potensielt nyttig prognostisk markør i glioblastom pasienter, og at dens rolle i kreft angiogenese trenger å bli undersøkt i ulike tumor setting.
Takk
Støttes delvis av AIRC, (Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro), Fondazione Umberto Veronesi, og Minis della Salute.
