Abstract
Myosin IC er et enkelt ledet medlem av myosin super. Vi har nylig identifisert en roman isoform og viste at
MYOIC
gen i pattedyrceller koder tre isoformer (isoformene A, B og C). Videre viste vi at myosin IC isoform A, men ikke isoform B viser en vev bestemt uttrykk mønster. I denne studien utvidet vi vår analyse av myosin IC-isoformen uttrykk mønstre ved å analysere protein og mRNA-ekspresjon i forskjellige pattedyrcellelinjer og i forskjellige prostata legemer og tumorvev fra den transgene mus prostata (TRAMP) modellen ved immunoblotting, QRT-PCR, og ved indirekte immunhistokjemisk farging av parafin innebygd prostata prøven. Analyse av et panel av pattedyrcellelinjer viste en økning i mRNA og protein ekspresjon av spesifikt myosin IC isoform A i et panel av humane og mus prostatacancercellelinjer, men ikke i ikke-kreft prostata eller andre (ikke-prostate-) cancercellelinjer . Videre viser vi at myosin IC isoform Et uttrykk er betydelig økt i TRAMP muse prostata prøver med prostata intraepitelial neoplasi (PIN) lesjoner og i fjerne språk metastaser i lunge og lever i forhold til matchet normalt vev. Våre observasjoner viser konkrete endringer i uttrykket av myosin IC isoform En som er sammenfallende med forekomst av prostatakreft i TRAMP mus prostatakreft modell som etterligner klinisk prostatakreft. Disse dataene antyder at forhøyede nivåer av myosin IC isoform A kan være en potensiell markør for påvisning av prostatakreft
Citation. Ihnatovych jeg, Sielski NL, Hofmann WA (2014) Selektiv Uttrykk for Myosin IC isoform A i mus og humane cellelinjer og mus prostatakreft vev. PLoS ONE ni (9): e108609. doi: 10,1371 /journal.pone.0108609
Redaktør: Craig N. Robson, Nord Institute for Cancer Research, Storbritannia
mottatt: 11 juli 2014; Godkjent: 01.09.2014; Publisert: 26.09.2014
Copyright: © 2014 Ihnatovych et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. Den forfatterne bekrefter at alle data som underbygger funnene er fullt tilgjengelig uten restriksjoner. Alle relevante data er innenfor papir
Finansiering:. Denne studien ble finansiert av det amerikanske forsvarsdepartementet, congressionally Directed medisinsk forskning programmer (https://cdmrp.army.mil/default.shtml) (tilskudd # W81XWH -12-1-0234) til Arbeide og av en University at Buffalo oppstart tilskudd til WAH. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Prostatakreft er den vanligste kreftformen diagnostisert hos menn over hele verden og den nest vanligste årsaken til kreftdød i USA [1], [2]. Prostatakreft kan være vanlige lat, men det kan også være meget aggressiv og dødelig hos noen pasienter. Foreløpig er det ingen pålitelig markør tilgjengelig for tidlig deteksjon, diagnostisk bekreftelse, eller sykdom prognose tilgjengelig [3]. Således identifisering av nye biomarkører som har evne til nøyaktig å identifisere og diskriminere prostata kreft er av betydning for nøyaktig styring av sykdommen.
Myosin IC er et medlem av superfamilien myosin [4] som lokaliserer til den cytoplasma og kjernen og er implisert i en rekke prosesser i begge kamrene. I cytoplasma, blir myosin IC involvert i dannelsen av lipid flåter [5], transport av vesikler inneholdende membranproteiner [6], og i ionekanal regulering i hårcellene i det indre øret [7] – [9]. I kjernen, er myosin IC involvert i forskjellige aspekter av transkripsjon [10] – [13], i kromatin remodeling [14], [15], og i dynamisk organisering av kromosomale strukturer [16]. Vi har nylig identifisert en tidligere ukjent isoform av myosin IC og viste at
MYOIC
gen i pattedyrceller koder tre isoformer som kalles myosin IC isoformene A, B og C [17].
vår tidligere analyse av myosin IC isoform uttrykk i murine vev avdekket en vev-spesifikke uttrykk mønster av spesielt myosin IC isoform en med høye uttrykk nivåer i nyre, binyre, bukspyttkjertel, og i epididymal og retroperitoneale adipose depoter [18]. I kontrast, viser myosin IC isoform B en allestedsnærværende uttrykk mønster i alle analyserte vev og cellelinjer [17] – [19]
Dette vevet spesifikke uttrykk for myosin IC isoform A førte oss til å utforske uttrykk profiler av. myosin IC isoformene videre. Vi rapporterer her evalueringen av myosin IC isoformer A og B-ekspresjon i en rekke pattedyr vevskultur-cellelinjer. Vi viser at ekspresjon av myosin IC isoform A er betydelig økt i prostatacancercellelinjer i forhold til andre (ikke-kreft) prostata cellelinjer, eller til en ikke-prostatakreft-cellelinje. Etterfølgende analyse av prostatakreft tumorvev fra den murine TRAMP-modellen som tett speiler patogenesen av human prostatakreft [20] – [23] viser en betydelig økning i isoform Et uttrykk når sammenlignet med normale vev. Til sammen våre data implisere konkrete endringer i myosin IC isoform Et uttrykk som er sammenfallende med utseendet av prostatakreft.
Materialer og Metoder
Antistoffer
Antistoffer som gjenkjenner spesifikke isoformer av myosin IC: 1. anti-NMI-antistoff er et polyklonalt kaninantistoff som ble dannet mot den 16 aminosyre lang N-terminale peptid av NMI, her kalt isoformen B [5], [24] (Sigma-Aldrich, St Louis, MO); 2. myosin IC-isoform A-antistoff er et monoklonalt antistoff fra mus som ble dannet mot den myosin IC isoformen Et spesifikt N-terminalt peptid og gjenkjenner utelukkende myosin IC isoform A [17] (figur 1A). Monoklonale antistoffer mot p-aktin og SV40 stort T-antigen (SV40-TAG) ble oppnådd fra Sigma (Sigma-Aldrich, St Louis, MO) og EMD Millipore (EMD Millipore Corporation, Billerica, Massachusetts), henholdsvis. Peroksidase-konjugert sekundært anti-mus eller anti-kanin-antistoffer ble oppnådd fra Jackson Immunoresearch Laboratories (West Grove, PA).
Påvisning av myosin IC isoformer A og B protein i forskjellige pattedyrcellelinjer ved immunoblotanalyse anvendelse av antistoffer spesifikk for myosin IC isoformene A, isoform B, SV40 stort T-antigen (TAG) og aktin (kontroll). A) Skjematisk av myosin IC isoform spesifikke sekvenser og anerkjennelse område av antistoffer. Avbildet er den 5 «regionen av pattedyr
MYOIC
gen med eksoner som koder for isoform spesifikke N-terminale peptider. Oversettelsen startsider for isoformene er angitt som er de N-terminale aminosyresekvenser. Understreket er peptidsekvensene som anvendes som immunogen for å skape isoform-spesifikke antistoffer. B) Representative immunoblot av celle-ekstrakter som ble analysert ved hjelp av de angitte antistoffer. Relevante molekylære markører vises på venstre i kD. C) Histogram presentere gjennomsnittlig densitometrisk intensiteten av myosin IC isoformen Et uttrykk normalisert til aktin. D) Histogram presentere gjennomsnittlig densitometrisk intensiteten av isoform B uttrykk normalisert til aktin. Myosin IC isoform A-proteinet er sterkt uttrykt i COS-7-celler og den humane og mus prostatacancer-cellelinjer PC-3 og TRAMP-C2. I motsetning til dette er myosin IC isoform B-proteinet uttrykt ved sammenlignbare nivåer i alle analyserte cellelinjer. Resultatene er presentert som gjennomsnitt ± standardavvik; n = 3 uavhengige eksperimenter.
Cellelinjer og vev kultur
COS-7, A-431, MCF-7, TRAMP-C1, DU 145, 22Rv1, RWPE-en og PC-3-celler ble oppnådd fra American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA). OVCAR-3 celler, opprinnelig hentet fra ATCC, ble sjenerøst gitt av Dr. Arthur M. Edelman (Institutt for farmakologi og toksikologi, Universitetet i Buffalo, Buffalo, NY, USA). As4.1 celler [25] var en slags gave fra Dr. Kenneth W. Gross [Dept. Molekylær og cellebiologi, Roswell Park Cancer Institute (RPCI), Buffalo, NY, USA]. TRAMP-C2 celler [26] var en slags fra Dr. Barbara Foster (Institutt for farmakologi og Therapeutics, RPCI, Buffalo, NY, USA). COS-7, A431, og As4.1. Cellene ble dyrket i Dulbeccos modifiserte Eagles medium (DMEM) supplementert med 10% føtalt bovint serum (FBS). MCF-7 og DU-145-celler ble dyrket i DMEM supplert med 10% FBS og 0,01 mg /ml insulin (Sigma-Aldrich, St Louis, MO). PC-3 og 22Rv1 celler ble dyrket i RPMI-medium supplert med 10% FBS. OVCAR-3-celler ble dyrket i RPMI-medium supplert med 20% FBS og 0,01 mg /ml insulin. TRAMP-C1 og TRAMP-C2-celler ble dyrket i DMEM høy glukose supplert med 5% FBS, 5% Nu Serum IV (BD Biosciences, San Jose, CA, USA) 5 mg /ml insulin og 10 nmol /L dihydrotestosteron (Sigma- Aldrich, St. Louis, MO, USA). RWPE-1-celler ble dyrket i keratinocytt Serum Free Medium (Invitrogen Carlsbad, CA, USA; Kit Catalog # 17005-042) supplert med 0,05 mg /ml bovint hypofyseekstrakt (BPE) og 5 ng /ml human rekombinant epidermal vekstfaktor (EGF ). I tillegg ble alle celler supplert med 1% penicillin /streptomycin og dyrket ved 37 ° C med 5% CO
2.
vevsprøver
Frosne vevsprøver fra 22 ukers alder Tramp mus samt matchende villtype mus ble kjøpt fra Mouse Tumor Model Resource på RPCI (Buffalo, NY, USA). Vev ble samlet inn i henhold til anbefalingene i Guide for omsorg og bruk av forsøksdyr av National Institutes of Health i henhold RPCI sin 890m Tumor bank protokoll for Mouse tumormodeller ressurs. Protokollen ble godkjent av Roswell Park Cancer Institute IACUC (Institutional Animal Care og bruk Committee). Dyr ble avlivet ved anestesi overdose etterfulgt av cervikal dislokasjon. Alle prostata og tumorvev var blitt microdissected ved obduksjon, flash-frosset i flytende nitrogen, og lagret ved -80 ° C inntil bruk. Fem-mikron tykke parafin innebygde matchet vevssnitt ble kjøpt fra samme kilde.
Immunohistrochemistry
Parafin vevssnitt ble de-paraffinized med xylen, rehydrert med alkohol, og plassert i dH
2o før under standard antigen gjenfinning (citratbuffer, pH 6). Endogen peroksidase-aktivitet er blokkert ved anvendelse av 3% H
2o
2 før inkubering med enten myosin IC isoformen A eller SV40-TAG antistoffer for immunhistokjemi i henhold til standardmetoder. Bilder ble oppnådd med en Zeiss Axio Imager Z1 (Carl Zeiss Inc, Thornwood, NY, USA) og behandlet ved hjelp av Adobe Photoshop-programvare.
immunoblotanalyse
For utarbeidelse av råolje celleekstrakt, en lik antallet celler ble lysert i SDS-prøvebuffer. For hver cellelinje basert analyse, ble tre uavhengige eksperimenter utført. Vevsekstrakt ble fremstilt som tidligere beskrevet [18]. For hvert vev basert analyse, ble vev fra tre til seks mus analysert. Like volumer av rå celleekstrakt eller like mengder av vev proteinekstrakter (40 pg) ble separert ved 10% SDS-PAGE (natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgel-elektroforese) og overført på nitrocellulosemembran. Etter overføringen ble membranen skåret i passende størrelse og inkubert med spesifikke antistoffer. Immunoreaktive bånd ble påvist ved forsterket kjemiluminescens. Densitometrisk analyse ble utført på de utvalgte band basert på deres relative intensiteter hjelp ImageJ programvare.
Kvantitativ Real-Time PCR (QRT-PCR)
Total RNA ble isolert fra celler eller vevsprøver ved hjelp Trizol reagens (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) etter produsentens anvisninger. 1 ug total RNA fra hver cellelinje ble anvendt til å reversere transkribere inn i cDNA ved anvendelse av Superscript III revers transkriptase og oligo dT-primer i henhold til produsentens instruksjoner (Invitrogen, Carlsbad, CA). QRT-PCR ble utført ved hjelp av iCycler iQ Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) og primer som gjenkjenner spesifikt mus og menneske myosin IC isoform A (
homo sapiens:
NM_033375. 4;
mus musculus
: XM_006532429.1) og mus og menneske myosin IC isoform B (
homo sapiens:
NM_001080950.1;
mus musculus:
NM_001080775). For kvantifisering, ble triplicates normalisert til gjennomsnittet av GAPDH husholdningsgenet. Primeren brukes for QRT-PCR er beskrevet i [18].
Statistisk analyse
Alle data er gitt som betyr ± standardavvik. Normaliteten av dataene ble testet med Kolmogorov-Smirnov-test. Forskjellen mellom datasettene ble testet med t-test. Avvikene ble betraktet som signifikant på nivå med
p
0.01.
Resultater
Vi har tidligere analysert uttrykk mønstre av myosin IC isoformer i 33 mus organer og vev, og funnet ut at myosin IC isoform A, men ikke isoform B er uttrykt i en vev bestemt måte [ ,,,0],18]. Vi utvidet nå vår analyse av protein og mRNA-ekspresjon av myosin IC isoformer til et panel av pattedyrcellelinjer. For å analysere proteinekspresjon, utførte vi immunoblotanalyse av det totale celleekstrakter ved hjelp av myosin IC isoform-spesifikke antistoffer (figur 1A). Som vist i figur 1B og C, bortsett fra i den afrikanske grønne ape nyrecellelinjen COS-7 (der det opprinnelig ble oppdaget og karakterisert [18]) myosin IC isoform A-proteinet er sterkt uttrykt i den humane og mus prostatacancer-cellelinjer TRAMP -C1, TRAMP-C2, DU 145, 22Rv1, og PC-3, men ikke i den ikke-prostatakreft-cellelinje RWPE-1. Videre viser myosin IC isoform A bare lave nivåer i andre kreftcellelinjer, inkludert human hud (A-431), bryst (MCF-7), og ovarie (OVCAR-3) cancercellelinjer. På grunn av at COS-7-cellelinjen ble avledet ved transformasjon med et origo defekt mutant av SV40 som fortsatt koder for SV40 stort T-antigen (SV40-TAG) [27], vi også testet As4.1 cellelinje som ble etablert fra celler av en transgen mus med en intraparenchymal nyre svulst som ble indusert ved målrettet tumorigenesis med et SV40-TAG fusjonskonstruksjon og også uttrykker SV40-TAG [25]. Som vist i figur 1A, begge cellelinjer, COS-7 og As4.1, hurtig SV40-koden, men bare COS-7-celler viser et høyt ekspresjonsnivå av myosin IC isoform A. I motsetning til denne cellelinje-spesifikk ekspresjon av myosin IC isoform A, er myosin IC isoform B overalt uttrykkes på sammenlignbare nivåer i alle analyserte cellelinjer (figur 1A B).
for å finne ut om protein uttrykk korrelerer med mRNA uttrykk, vi neste analyserte mRNA uttrykk av isoformene ved hjelp av kvantitativ real time PCR (QRT-PCR) med isoform spesifikk primer (figur 2A). Som vist i figur 2, har vi funnet at mRNA-ekspresjon profiler av myosin IC isoformer A og B kan korreleres til de protein ekspresjonsprofiler. Sammenlignes med protein data, er mRNA-ekspresjon av myosin IC isoform En høy i COS-7, TRAMP-C1, TRAMP-C2, DU 145, 22Rv1, og PC-3-celler mens myosin IC isoform B mRNA ubikvitært uttrykt i alt analyserte cellelinjer.
Påvisning av myosin IC isoformer A og B mRNA nivåer i forskjellige pattedyrcellelinjer ved QRT-PCR bruker isoform spesifikk primer. A) Skjematisk skildrer 5 «regionen i
MYOIC
genet og den resulterende isoform A og B mRNA. Målsekvensen Plasseringen av primeren anvendt for QRT-PCR for å påvise myosin IC-isoformene er angitt med piler. B) kvantitativ real-time PCR analyse av mRNA uttrykk nivåer av myosin IC isoform Et normalisert til GAPDH. C) kvantitativ real-time PCR analyse av mRNA uttrykk nivåer av myosin IC isoform B normalisert til GAPDH. Myosin IC isoform A mRNA-ekspresjon er høy i COS-7-celler og den humane og mus prostatacancer-cellelinjer PC-3 og TRAMP-C2. I kontrast er myosin IC isoform B mRNA uttrykkes på sammenlignbare nivåer i alle analyserte ell linjer. Resultatene er presentert som middel
±
standardavvik; n = 3 uavhengige eksperimenter.
Et slående observasjon av vår analyse av myosin IC isoform uttrykk i disse cellelinjene er de høye uttrykk nivåer av myosin IC isoform A i mus og menneskelige prostata kreft cellelinjer når sammenlignet med den normale (ikke-kreft) prostatacellelinje RWPE-1 og til andre (ikke-kreft) prostata cellelinjer som vist i tabell 1. Dette er spesielt interessant fordi vår tidligere analyse av muse-vev og organer viste en meget lav uttrykk av myosin IC isoform A i normal mus prostata [18]. I kombinasjon med den lave nivåer av isoformen A i normalt humant prostata cellelinje RWPE-1, tyder disse data på at endringer i myosin IC isoform et uttrykk kan være forbundet med utvikling av prostatacancer.
For å utforske denne muligheten, analyserte vi myosin IC isoform Et uttrykk i ulike vev fra TRAMP musen. TRAMP er en transgen linje av C57BL /6-mus som uttrykker en konstruksjon inneholdende den minimale -426 /+ 28 regulerende element av rotte probasin promoter for å målrette ekspresjon av SV40 stort T-antigen til prostata epitelet [21]. Landstrykeren modellen er en mye brukt prostatakreft modell som etterligner tett menneskelig prostatakreft. Spontan tumorprogresjon i TRAMP prostata begynner på 8 til 12 ukers alder, og 100% av mus utvikler prostatakreft i en alder av 20 uker. Deretter kan metastase skje ved fjerntliggende områder som tumorene fremgang [20], [28], [29].
Figur 3 viser immunohistokjemisk analyse av representative villtype og TRAMP mus prostata fra mus av 22 ukers alder. Landstrykeren vev utviser typiske morfologiske egenskaper som er forbundet med PIN-lesjoner og beis positivt for atom SV40-TAG [23] (figur 3A B). Vår analyse av myosin IC isoform uttrykk i disse vev avdekket en betydelig økt forekomst av myosin IC isoform A i celler assosiert med karakteristiske PIN-lesjoner av Tramp mus sammenlignet med celler av villtype prostatavevet der myosin IC isoform A er knapt synlig (figur 3C F) uttrykk i prostata kjertler av 22 ukers alder villtype (venstre kolonne) og TRAMP (høyre kolonne) mus. Skinnene ble kontra med hematoksylin. Bilder ble tatt ved 20x forstørrelse. De histologiske endringer av TRAMP mus prostata som er forbundet med PIN-lesjoner er åpenbare (venstre kolonne, B, D, F). Som forventet, er SV40-TAG immunofarging negativ i vill-type prostata (A) og sterkt atom i TRAMP prostata (B). Myosin IC isoform A viser svært svak farging i villtype prostata vev (C), men sterk, hovedsakelig cytoplasma flekker i TRAMP prostata med PIN-lesjoner (D). Myosin IC isoform B viser sterk farging i begge, villtype og TRAMP, prostatavevet (E F).
For å bekrefte tilstedeværelse av myosin IC isoform A i vev forbundet med prostatakreft, vi analysert ulike TRAMP prostata tumorvev som ble omfattet enten av lateral og ventral (LV) eller av dorsal, senere, og ventral prostata (DLV). Som vist i figur 4, myosin IC isoformen et protein nivåene var signifikant høyere i prostata tumorvev fra TRAMP-mus sammenlignet med villtype prostata vev som viser bare knapt synlig myosin IC isoform A-ekspresjonsnivåer (figur 4A B [18] ). I tillegg analyserte vi tumorvev fra fjern nettstedet metastaser, dvs. lunge og leversvulster. I likhet med prostata vev, lever og lungetumorer viste en signifikant økning i myosin IC isoform Et protein ekspresjon i forhold til uttrykket nivåer i villtype normalt lunge- og levervevet [Figur 4A B [18]]. Videre undersøkelse av myosin IC isoformen Et uttrykk ved QRT-PCR bekreftet at økt proteinuttrykk i TRAMP prostata og fjerne språk metastaser korrelerer til en betydelig økning av myosin IC isoformen A mRNA uttrykk i disse vev (Figur 4C).
prostatavevet ekstrakter som består av rygg, lateral, og ventral (DLV) eller lateral og ventral (LV) prostata fra 22 ukers alder TRAMP eller alder matchet villtype mus ble analysert for protein og mRNA uttrykk som var vev utdrag fra lungene og leveren metastaser av TRAMP og matchet vev av villtype mus. A) Representative immunoblot av mus vevsekstrakter som ble analysert ved hjelp av de angitte antistoffer. Relevante molekylære markører vises på venstre i kD. B) Histogram presentere gjennomsnittlig densitometrisk intensiteten av isoform Et uttrykk normalisert til aktin. C) kvantitativ real-time PCR analyse av mRNA uttrykk nivåer av myosin IC isoform Et normalisert til GAPDH. Resultatene er presentert som gjennomsnitt ± standardavvik; n = 3-6 (antall vev som ble testet hver fra et annet dyr). * P. 0,01 i forhold til normalt vev
Diskusjoner
En analyse av myosin IC isoformen Et uttrykk i prostata vev og fjerne språk metastaser i tramp mus eller alder matchet villtype mus viste at myosin IC isoform A er signifikant høyere uttrykt i prostata tumorer i forhold til normale murine prostata, lunge eller levervevet. Dette er, så vidt vi vet, den første rapporten dokumenterer en endring av en myosin IC isoform uttrykk i forbindelse med kreft. De mulige biologiske og fysiologiske konsekvensene av overekspresjon av myosin IC isoform A i tumorvev er for tiden under etterforskning i vårt laboratorium.
I tillegg til å etablere en kobling mellom myosin IC isoform Et uttrykk og kreft, våre data tyder på at avvikende myosin IC isoform A uttrykk endringer kan være spesielt knyttet til transcriptional endringer knyttet til forekomsten av prostatakreft. Denne hypotese støttes av flere observasjoner. Vår tidligere analyse av myosin IC isoformen Et uttrykk i mus vevsprøver [18] viste at dette spesifikk isoform viser høy uttrykk bare i nyrene, binyrene, bukspyttkjertelen, og en undergruppe av fettvev. Vi viser nå en betydelig økt uttrykk i prostata, lunge og lever prostatakreft tumorvev fra TRAMP mus sammenlignet med vill-type vev.
TRAMP prostatakreft modellen er basert på prostata-spesifikt uttrykk for SV40-TAg oncoprotein [21]. Den store T-antigen av SV40 virker gjennom flere veier inkludert inaktivering av tumor-suppressor-proteiner p53 og Rb samt transkripsjonelle aktivering av et antall proteiner som er involvert i onkogenesen [22]. Fordi SV40-koden er en universell snarere enn en prostata kreft-spesifikke onkogen som har blitt brukt mye som en modell for mange andre krefttyper [30], kunne det ha vært mulig at endringer i myosin IC isoform Et uttrykk ble indusert gjennom handlingene av SV40-TAG uavhengig av krefttype. Men vår analyse viste at isoform Et uttrykk ble ikke endret i As4.1 cellelinjen som ble etablert fra ascitesvæske av en seks måneder gammel transgene mus med en intraparenchymal nyre svulst som ble indusert av transgenet målrettet tumorigenesis gjennom SV40-TAG smeltet til renin arrangøren [25]. Videre fant vi myosin IC isoform Et uttrykk endres i TRAMP-C1 og TRAMP-C2 cellelinjer som, selv stammer fra Tramp mus, ikke uttrykker SV40-TAG [26]. Videre har vi også funnet øket isoform Et uttrykk i SV40-TAg uavhengige humane prostata cancer-cellelinjer PC-3, DU 145, og 22Rv1 men ikke i den ikke-kreft humane prostatacellelinje RWPE-en eller i hvilken som helst av de andre ikke- -prostate kreft cellelinjer. Samlet utgjør disse dataene sterkt at myosin IC isoform A uttrykk endringene er sammenfallende med prostatakreft spesifikke endringen i cellulære uttrykk profiler i stedet for SV40-TAG-spesifikke uttrykk endringer.
Mens uttrykk mønster av myosin IA isoform A i mennesker og mus prostatakreft må analyseres videre, våre resultater her, som viser en overekspresjon i menneskelige og mus prostatakreft cellelinjer og i prostata kreft assosiert murine vev, sterkt at spesielt myosin IC isoform A kan være et mulig diagnostisk markør for påvisning av prostatakreft.
Takk
Vi erkjenner takknemlig Ms. Ellen Karasik for henne utmerket teknisk assistanse med immunhistokjemisk analyse. Vi ønsker å takke dr Wade Sigurdson og Dr. Joan Baizer for å få hjelp med mikroskopisk bildebehandling.
