CYC202, en farmakologisk hemmer av CDK2, hell hemmet reproduksjon av HAART bevis HIV og hvete -1 mutanter i til- PBMC og monocytter, celler avslører at CDK2 handling er nødvendig om HIV-1 reproduksjon. Nylig viste vi at siRNA-guidet mot CDK2 hemmer Tat-indusert HIV-1transcription og HIV-1 virusreplikasjon. Derfor vår nåværende forskning så vel som våre tidligere rapporter påpeke CDK2 som en viktig regulator av HIV-1 transcription.Until siste CDK2 /cyclin ALDER ble ansett for å være nødvendig for cellesyklusprogresjon og at CDK2 regulerer G1ANDS endring ved å fosforylere Rb-kompleks fasetter , inkludert E2F. Bay 11-7821
Nye konklusjoner spurte denne funksjonen CDK2. CDK2 bump-out mus var gjennomførbart, rådgivning at CDK2 er unnværlig for suksess og utvidelse av alle celletyper. Likeledes, hemming av CDK2 aktivitet gjennom begrepet av p27 Kip1, dominant-negativ CDK2, anti-sense oligonukleotider eller siRNA ikke har en innvirkning på utvidelse av mange kreftcellelinjer. Følgelig ikke være avgjørende for cellulær levedyktighet, kan CDK2 presentere et sannsynlig mål for anti-HIV-1 therapeutics.Previous prøver å oppdage Tattoo fosforylering in vivo var ikke effektive. Det er mulig at lavt nivå av Tat sikt eller raskt defosforylering i cellene eller i løpet av testpreparatet kan ikke tillate enkel gjenkjennelse av Tat fosforylering. For eksempel, mens i de tidligere rapportene Ben Berkhout og hans kolleger kan bare oppdage Tat uttrykk i COS-7 celler men ikke i HeLa celler. Vi fant at uttrykket av Flag-merket Tattoo autorisert større nivåer av Tattoo sikt spesielt med en Deno-virus mediert shipping.
Behandling med okadainsyre, som kontrollerer fosfataser av PPP-husholdningen inkludert PP1 og PP2A, betydelig forbedret Tat-fosforylering, hvilket indikerer at tatoveringen kan være dynamisk defosforylert ved hjelp av et cellulært PPP-skjema phosphatase.When vi begrenset PP1 med over uttrykk for nøkkel nettsiden til atom hemmer av PP1 vi ikke oppdage endringer i Tat fosforylering. Derfor PP2A i stedet for PP1 er en søker fosfatase til dephosphorylate Tattoo. Undersøkelsen avdekket at hemming av CDK2 uttrykk av siRNA betydelig blokkert Tattoo fosforylering og avverget organisering av Tattoo med CDK2. Vi kan heller ikke utelukke mulig at hemming av CDK2 reduserer aktiviteten til en annen kinase som i sin tur kan være involvert i Tat fosforylering, selv om disse funnene erklære at CDK2 kan spesifikt phosphorylateTat. CDK2-ledede siRNA noe redusert organisering av CDK2 til Tat, sannsynligvis ved å minimalisere mengden av CDK2 tilbudt å kommunisere med Tat.We funnet at Tat er fosforylert på serinrester in vivo. Vi tidligere foreslått at 16S QPK19 og K41 × L43 sekvenser av Tattoo samhandle med henholdsvis CDK2 og cyclin, som S16 er fosforylert av CDK2.
I denne vurderingen vi avdekket at like S16 og S46of Tattoo er sannsynlige fosforyleringsseter. Det er antagelig selv som vi faktisk foreslått, at det K41 L43 x rutine deltar i binding til CDK2 i stedet for å cyclin E, som S46 er ved siden av K41 L43 x rutinen til tatovering. Interessant, rekombinant CDK2PERcyclin ELECTRONIC bare fosforylert i full lengde tatovering 1-72, men ikke de 15 aminosyre-peptider av Tat, 9EPWKHPGSQPKTACN23 eller 37CFTTKGLGISYGRKK51, som kun inneholder de fosforyleringsseter, som kan antyde et krav om ekstra serie av Tat på grunn av dets interaksjon med CDK2AND cycline E.Another forklaring er at full lengde Tattoo gjør en gunstig konformasjon for fosforylering av CDK2. Vx661
CDK2 0P1K23 fosforylering mønsteret er 16SQP19 og 46SYGR49 bare delvis matches av serien. Når Pro1 er substituert med Alain en kort syntetisk peptidsubstrat, fosforylering motivene forandret med sub-optimale determinanter generelt inngår i fysikalske substrater for hver CDK2- cyclin An og CDK2 -cyclin E, selv om den katalytiske effektiviteten av CDK2-cyclin Ais plaget 2000- brette. En slik sub optimalt underlag fosforylering er forbedret med en cyclin-bindende tema som kompenserer for vanligvis dårlig katalyse.
