Abstract
tidlig deteksjon av blærekreft (BCA) er avgjørende for vellykket pasientbehandling og ledelse. Gjennom genomisk og proteomikk studier, har vi identifisert en rekke av blærekreft-forbundet biomarkører som har potensial klinisk nytte. I en case-control studie undersøkte vi annullert urinprøver fra 127 fag: 64 tumorbærende fag og 63 kontroller. Urin konsentrasjoner av de følgende proteinene ble bestemt ved enzym-bundet immunosorbent assay (ELISA); C-C kjemokin motiv 18 (CCL18), plasminogen aktivator inhibitor 1 (PAI-1) og CD44. Data ble sammenlignet med en kommersiell ELISA-baserte BCA påvisningsmetode (BTA-Trak ©) og annulleres urin cytologi. Vi brukte analyse av arealet under kurven for mottakerdriftskarakteristikkene for å sammenligne evnen til CCL18, PAI-1, CD44, og BTA å detektere BCA i annullert urinprøver. Konsentrasjon av CCL18, PAI-1, og BTA ble signifikant forhøyet hos personer med BCA. CCL18 var den mest nøyaktige biomarkør (AUC; 0,919; 95% konfidensintervall [CI], 0,8704 til 0,9674). Multivariat regresjonsanalyse uthevet CCL18 (OR; 18,31; 95% CI, 4,95 til 67,70,
p
0,0001) og BTA (OR 6,43; 95% CI, 1,86 til 22,21,
p
= 0,0033) som uavhengige prediktorer for BCA i annulleres urinprøver. Kombinasjonen av CCL18, PAI-1 og CD44 forbedret arealet under kurven to0.938. Foreløpige resultater tyder på at CCL18 var en meget nøyaktig biomarkør for BCA deteksjon i denne kohorten. Overvåking CCL18 i annulleres urinprøver har potensiale til å forbedre ikke-invasive tester for BCA diagnose. Videre bruker kombinasjonen av CCL18, PAI-1 og CD44 kan gjøre modellen mer robust overfor feil å oppdage BCA over den enkelte biomarkører eller BTA
Citation. Urquidi V, Kim J, Chang M, Dai Y, Rosser CJ, Goodison S (2012) CCL18 i en Multiplex Urin-baserte analysen for påvisning av blærekreft. PLoS ONE 7 (5): e37797. doi: 10,1371 /journal.pone.0037797
Redaktør: Konradin metze, University of Campinas, Brasil
mottatt: 26 januar 2012; Godkjent: 28 april 2012; Publisert: 21. mai, 2012 |
Copyright: © 2012 Urquidi et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av forskningsmidler fra National Cancer Institute RO1 CA116161 (SG), Florida Department of Health James og Esther kong teamet Science Award 10KT-01 (CJR), Flight Attendant Medical Research Institute (CJR). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere og utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:. Forfatterne har lest journalen politikk og har følgende konflikter: Charles J. Rosser, Steve Goodison og Virgina Urquidi er ansatte i Nonagen Bioscience Corp. forfatterne holder patenter på blærekreft signatur. Det er ingen produkter i utvikling eller markedsført produkter å erklære. Dette endrer ikke forfatternes tilslutning til alle PLoS ONE politikk på deling av data og materialer.
Innledning
tidlig deteksjon av blærekreft (BCA) forbedrer sannsynligheten for vellykket pasientbehandling betydelig og ledelse. Utviklingen av molekylære analyser som kan diagnostisere sykdommen nøyaktig, eller som kan forsterke dagens metoder for evaluering, ville være et betydelig fremskritt. En molekylær analyse som var gjeldende for ikke-invasiv innhentet kroppsvæsker, ville lette ikke bare diagnosen hos risikopasienter, men også asymptomatiske screening, overvåking av sykdommen og behandlingsrespons. Ankomsten av avansert proteomikk og genomikk teknologier, og tilhørende bioinformatikk utvikling, er å bringe disse målene i fokus.
Gullstandarden for å diagnostisere BCA innebærer cystoscopic undersøkelse av blæren sammen med biopsi og patologisk evaluering av en blære lesjon. Annullert urin cytologi (VUC) forblir som den går til ikke-invasiv medhjelper til cystoskopi i påvisning av BCA. Mens VUC har en spesifisitet på 93%, er dens følsomhet ganske sturen på 25-40%, spesielt for tumorer lav grad og lav-trinns [1], [2]. Behovet for mer nøyaktige urin biomarkører for påvisning av BCA er tydelig. Et antall molekylære tester har blitt utviklet for å påvise blæretumorer, inkludert blære tumor antigen (BTA) [3], kjernematrise protein 22 (NMP-22) [4], ImmunoCyt og Urovysion [5]. Dessverre på grunn av deres begrensede følsomhet og /eller spesifisitet, har ingen av disse analyser vist seg nøyaktig nok til å erstatte cystoskopi eller VUC. Det er derfor ingen urinbaserte BCA tester som dominerer feltet så langt. Den manglende effekt av enkelt biomarkører kan delvis forklare hvorfor påvise BCA bruker urinalysis er fortsatt en utfordring. Det må være en utvikling mot tester som overvåker flere biomarkører for å oppnå ønsket diagnostisk nøyaktighet.
Framveksten av nye høy gjennomstrømming genomisk og proteomikk teknikker driver biomarkører fremover, og vi har ansatt disse teknikkene i en serie av eksperimenter [6], [7], [8] fra det som vi har utledet både nukleinsyresekvenser og protein biomarkør paneler som letter ikke-invasiv påvisning av BCA med enestående nøyaktighet. Ytterligere utvalg og validering av 14 proteiner fra proteomikk studier, og noen proteinprodukter fra genomisk signatur, var basert på statistisk rangering av tilknytning BCA, og tilgjengeligheten av kommersielle ELISA kits. I denne studien undersøkte vi hvorvidt overvåking av noen av disse målene ved hjelp av immun-baserte deteksjons analyser kunne bekrefte den potensielle kliniske anvendelsen av en ikke-invasiv diagnostisk test. Ved hjelp av ELISA-analyser, overvåket vi tre target proteiner (CC motiv chemokin 18, CCL18; plasminogenaktivatorinhibitor 1, PAI-1, og CD44) i urinprøver fra en kohort av 127 fag, og sammenlignet diagnostisk ytelse som oppnås ved bruk av kommersielle BTA -Trak analyse og VUC.
Resultater
Demografisk er kliniske og patologiske kjennetegn ved kohort presentert i tabell 1. Kun 28% av kreft kohorten hadde en positiv VUC mens VUC spesifisitet var 98 %. Urin CCL18 og PAI-1 var umulig å oppdage i de fleste fagene uten tegn til BCA. Både BTA og CD44 ble påvist i prøver fra både tumorbærende og kontrollgrupper. Gjennomsnittlig urinnivåer (tabell 2) av CCL18 (637,39 pg /ml vs. 4,81 pg /ml,
p
0,0001), PAI-1 (6,82 ng /ml vs. 0,06 ng /ml,
p
0,0001), og BTA 1630,55 U /ml vs. 14.54 U /ml,
p
0,0001) var betydelig høyere hos personer med BCA sammenlignet med personer med ingen bevis for BCA. Gjennomsnittlig urin CD44 ble forhøyet hos personer uten BCA sammenlignet med personer med BCA (117,22 ng /ml vs 53,09 ng /ml,
p
0,0001). ELISA-data er presentert i et boksplott figur (figur 1).
Evnen test biomarkører å forutsi tilstedeværelsen av BCA ble analysert ved hjelp nonparametric ROC analyser, ifølge National Cancer Institute retningslinjer [9]. Basert på området under ROC-kurven (AUROC), bestemt vi Youden Indeks cutoff-verdier for å maksimere summen av sensitivitet og spesifisitet. Urin CCL18 var den mest nøyaktige biomarkør med et areal under kurven på 0,919 (95% CI: 0,8704 til 0,9674). Bruke cutoff verdi Youden Index (figur 2), urin CCL18 gitt en sensitivitet på 88%, spesifisitet 86%, positiv prediktiv verdi på 86% og negativ prediktiv verdi på 87%. PAI-1 var en mindre nøyaktig biomarkør for BCA deteksjon (arealet under kurven: 0,686; 95% CI: 0,6119 til 0,7601). Ved hjelp grenseverdi den Youden Index (figur 2), urin PAI-1-analyser viste en sensitivitet på 42%, spesifisitet på 100%, positiv prediktiv verdi på 100% og negativ prediktiv verdi på 63%. Forhøyede nivåer av urin CD44 var ikke tegn på BCA (arealet under kurven: 0,488; 95% CI: 0,383 til 0,5937). BTA fungert som vår positiv referanse analysen og ble notert til å ha en AUROC av 0,818 (95% KI: 0,74 til 0,90, figur 2). Bruke cutoff verdi Youden Index, urin BTA gitt en sensitivitet på 80%, spesifisitet 84%, positiv prediktiv verdi på 84% og negativ prediktiv verdi på 80%.
Data er normalisert til urin kreatinin. Mediannivåer er vist med horisontale linjer. Betydning (
p
0,05). Ble vurdert av Wilcoxon rank sum test
Basert på arealet under ROC-kurven (AUROC), Youden Indeks cutoff verdier som maksimert summen av sensitivitet og spesifisitet ble bestemt for hver biomarkør (diamant). Tabellen gir ytelsesverdier for hver biomarkør
I multivariat logistisk regresjonsanalyse som justert for effekten av alder og rase, forhøyet CCL18 (OR. 18.31; 95% CI: 4,95 til 67,70;
p
0,0001), forhøyet BTA (OR: 6,43; 95% KI: 1,86 til 22,21;
p
= 0,0033) og redusert urin nivåer av CD44 (OR: 0,039; 95% CI: 0.004 -0,35;
p
= 0,0036) var assosiert med BCA i annulleres urinprøver (tabell 3)
Som nevnt tidligere, enkelt biomarkører bommer ved ikke å ta hensyn til kompleksiteten i heterogene svulster. således en multiplex analyse for å påvise et panel av biomarkører kan vise seg å være fordelaktig. Utnytte Youden Indeks cutoff verdier for CCL18, PAI-1 og CD44, ble disse biomarkører kombinert og analysert (figur 3). Kombinasjonen av CCL18, PAI-1 og CD44 (areal under kurven: 0,938). Oppnådd en følsomhet på 86%, spesifisitet på 89%, positiv prediktiv verdi på 89% og negativ prediktiv verdi på 86%
diskusjon
Ved hjelp av nye metoder [6] – [8], vi har identifisert en foreløpig diagnose signatur av 14 biomarkører knyttet til BCA. I denne studien rapporterer vi våre funn av tre av disse 14 biomarkører.
Basert på arealet under ROC-kurven (AUROC), Youden Indeks cutoff verdier som maksimert summen av sensitivitet og spesifisitet ble bestemt . Data i figuren gi ytelsesverdier. PPV, positiv prediktiv verdi. NPV, negativ prediktiv verdi.
Økt urinnivåer CCL18, PAI-1, og BTA, var signifikant assosiert med tilstedeværelse av BCA. I univariate analyser, CCL18 viste seg å være markør mest forbundet med BCA (AUC; 0,919; 95% CI, 0,8704 til 0,9674), med en samlet positiv prediktiv verdi på 86%, og en negativ prediktiv verdi på 87%. Multivariat regresjonsanalyse uthevet CCL18 (OR; 18,31; 95% CI, 4,95 til 67,70,
p
0,0001), BTA-Trak © (OR 6,43; 95% CI, 1,86 til 22,21,
p
= 0,0033) og CD44 (OR; 0,039; 95% CI, 0,004 til 0,35, p = 0,0036) som uavhengige variabler i påvisning av BCA i annulleres urinprøver. Med en samlet nøyaktighet på 92%, CCL18 klart bedre resultat enn de andre biomarkører, inkludert BTA, som et mål protein for BCA påvisning av urinanalyse. Inkludering av flere markører (f.eks PAI-1 og CD44) til en multiplex panel kan ikke øke den prediktive effekten betydelig (AUC 0,919 vs. 0,938), men deres tillegg kan gjøre modellen mer robust for feil og dermed illustrerer nytten av en multiplex assay for å diagnostisere BCA.
CCL18 er et medlem av cytokinet familie av utskilte proteiner som er involvert i immunregulerende og inflammatoriske prosesser. CCL18 er antatt å fremme invasivitet av kreftceller ved å utløse integrin sammensetning og styrke deres tilslutning til den ekstracellulære matriks, og en reseptor (PITPNM3) for dette cytokinet er nylig blitt identifisert [10]. En rekke cytokiner og deres reseptorer er kjent for å være avvikende uttrykt i tumorceller, og slik at det kan tenkes at CCL18 kan opptre på en parakrin måte i løpet av startfasen /etablering. Som en biomarkør for ondartet sykdom, CCL18 blitt rapportert å være en indikasjon på ovarial [11], [12] og livmorhalskreft [13]. En proteomikk tilnærming identifisert forhøyet serum CCL18 som korrelert med eggstokkreft, og dette funnet ble validert ved hjelp av ELISA i 535 prøver. I kombinasjon med CXCL1, CCL18 overvåking utkonkurrerte CA125 som en sirkulerende eggstokkreft biomarkør [12]. En studie analysere differensial genuttrykk i 33 solide vevsprøver identifisert CCL18 som en av tjue transkripsjoner betydelig over uttrykt i invasiv livmorhalskreft [13].
PAI-1 er et medlem av serin proteinase inhibitor super familie og er den viktigste inhibitor av vevsplasminogenaktivator (tPA) og urokinase (uPA), slik at det regulerer fibrinolyse [14]. PAI-1 er ansett for å være et multifunksjonelt protein, som også kan modulere tumorcellevekst og migrasjon, angiogenese og celleadhesjon [15], [16]. Resultater fra forskjellige humane kreftformer har vist at nivåene av tPA eller uPA er vesentlig høyere i kreftvev i forhold til tilsvarende normalt vev [17] – [19]. Hudson
et
al.
Rapportert at både ikke-invasive og invasive menneskelige BCA cellelinjer produsere PAI-1 [20], og forhøyet PAI-1 genet og protein uttrykk i vev og plasma har blitt observert i BCA pasienter med dårlig prognose [21]. I en studie overvåkings PAI-1 i vev, serum og urin, betydelig høyere nivåer i vev og serum korrelerte med dårlig prognose, men dette var ikke tilfelle for urin PAI-1 [21]. I vår studie, var vi ute for tilstedeværelse av BCA, og ikke vurdere prognose. Vi var i stand til å vise at urin PAI-1 ble signifikant forhøyet hos personer med BCA (6,82 vs 0,06,
p
0,0001), men i multivariat analyse, PAI-1 var ikke en uavhengig prediktor for BCA. PAI-1 kan ikke være en kraftig frittstående biomarkør for BCA deteksjon, men videre undersøkelser er nødvendig for å fastslå om det tilfører verdi til flere biomarkør paneler.
Mange studier har undersøkt CD44 som en biomarkør for kreft, inkludert BCA. CD44 er et allestedsnærværende uttrykt transmembran-glykoprotein som kan samvirke med et utvalg av ligander, f.eks hyaluronsyre synthases, og er involvert i celle-celleinteraksjoner, celle adhesjon og migrering [22]. Transkripsjoner for dette genet gjennomgå komplekse alternativ spleising resulterer i et mylder av mRNA og protein isoformene med funksjonelle mangfold, og dette gjør det vanskelig å oppnå enighet om hvilke CD44 målene er gyldige biomarkører. Klatte
et
al.
Vist at fraværende CD44v6 uttrykk i utskåret vev er en uavhengig negativ prediktor for BCA tilbakefall og total overlevelse [23], og over-uttrykk for CD44V8-10 i ekspandert urothelial -celler er blitt rapportert å være en uavhengig prognostisk prediktor hos pasienter med BCA [24]. Vi har tidligere utviklet en sandwich-ELISA assay som målte CD44v6 protein isoform protein i uroteliale cellelysatene. I en studie av 65 tilfeller, oppnådde sandwich-ELISA-analysen 81% sensitivitet og 100% spesifisitet for BCA diagnose [25]. I tråd med disse funnene, en studie var i stand til å knytte løselig CD44v6 mRNA i kreftpasient urin med BCA [26]. Vår urothelial celle profilering og valideringsstudie [7] bekrefte at overvåking CD44 utskrifter kan ha verdi i klinisk evaluering, men løselig urin CD44 protein ser ikke ut til å være en lovende diagnostisk biomarkør.
Vi erkjenner at vår studie har flere begrensninger. Først som en tertiær omsorg anlegget, har vi en tendens til å se mer av høy kvalitet, høy-stadium sykdommen, noe som gjenspeiles i vår studie kohort. For å bekrefte robustheten CCL18 må senere studier vurdere større kohorter som inkluderer pasienter med lavgradig, lav-stadium sykdommen. For det andre ble behandlet, banked urin analysert. Urin ble sentrifugert og separert i cellulære pelleten og supernatanten før lagring ved -80 ° C. Det er mulig at frisk latt urin prøvene kan gi forskjellige resultater, og det er frisk urin som ville være det materialet som brukes for point-of-care assays. Vi undersøker resultatene av utvalgte biomarkører i urin behandlet via en rekke ulike protokoller, inkludert fersk annullert urin. Deretter følsomheten av HVO i vår kohort av overveiende høy grad (grad 3) sykdom (28%) var lavere enn det som ville være forventet. Dette setter spørsmålstegn ved kjente inter-observatør variasjon tolke VUC. I senere studier, vil vi bruke to cytopathologists å tolke disse resultatene. Videre er det usikkert hvor proteinsammensetningen i urinen supernatant kan endre seg i løpet av fryselagring. Antall fryse-tine-sykluser ble holdt på 1-2 ved å dividere urinen supernatanten i flere små porsjoner. Endelig vår utvalgsstørrelse på 127 er liten og de to gruppene som utgjorde de 127 pasientene var relativt homogene, dvs. enten aktiv kreft, eller kontroll tilfeller uten aktiv kreft, ingen historie av kreft, ingen urinveisinfeksjon, ingen urolithiasis, og ingen brutto hematuri. Dermed var vi ikke i stand til å vurdere sensitivitet /spesifisitet av våre biomarkører blant ulike stadier /karakterer. Spesifisiteten av lovende biomarkører som CCL18 må testes i kohorter som er kjent for å være problematisk med andre urinbaserte analyser (for eksempel hematuri, urinveisinfeksjon, steiner og annullere dysfunksjon). Som vi forbedrer våre diagnostiske molekylære signaturer og velge spesifikke mål for nukleinsyre-baserte eller immun-baserte analysen utvikling, vil våre funn bekreftes i stor prospektiv og multisamarbeids fase 2 og 3 studier som består av fagene ikke bare med BCA, men med urinveisinfeksjon, urolithiasis, brutto hematuri og annullere symptomer.
utviklingen av urinbaserte blærekreft biomarkører ville være en stor fordel for både pasienter og helsevesen. Vi har vist i en innledende studie som forhøyet urinkonsentrasjon på CCL18-proteinet er sterkt assosiert med tilstedeværelse av BCA. Videre, kombinasjonen av CCL18, PAI-1 og CD44 kan ikke øke den prediktive kraften av CCL18 betraktelig, men kan gjøre modellen mer robust overfor feil. Større, er prospektive studier er nødvendig for å avgjøre den potensielle rolle CCL18 i evalueringen av pasienter som står i fare for BCA.
Materialer og metoder
Pasienter og prøven behandlingen
Under MD Anderson Cancer Center Orlando Institutional Review Board godkjenning og informert skriftlig samtykke, annullert urinprøver, og tilhørende klinisk informasjon ble prospektivt samlet inn. Studien kohort besto av 63 personer med ingen tidligere historie med urothelia karsinom, brutto hematuri, aktiv urinveisinfeksjon eller urolithiasis, og 64 personer med nylig diagnostisert urothelial karsinom. Pasienter med kjent nyresykdom eller dokumentert nyresvikt ble ikke registrert. Ifølge International Consensus Panel on blære tumor markører [27], dette kohort fungert som en fase II (valideringsstudie). Data rapporteres ved hjelp av Stard kriterier [28]. I vår kreft gruppe, ble aksial avbildning av magen og bekkenet og cystoskopi utført, og urothelial cellekreft ble bekreftet ved histologisk undersøkelse av utskåret vev. Relevant informasjon på klinisk presentasjon, iscenesettelse, histologisk gradering [29], [30] og utfallet ble registrert (tabell 1).
Før noen form for terapeutisk intervensjon, 50-100 ml annullert urin ble hentet fra hvert fag. Femti milliliter urin ble anvendt for kliniske laboratorieanalyser pr standardprosedyrer. De resterende urin prøve ble tildelt et unikt identifikasjonsnummer før umiddelbar laboratorium behandling. Hver urinprøve ble sentrifugert ved 600 x g 4 ° C i 5 minutter. Supernatanten ble dekantert og alikvotert, mens urin pellet ble hurtigfrosset. Både supernatanten og pelleten ble lagret ved -80 ° C før analyse. Alikvoter av urin supernatanter ble tint og analysert for proteininnhold ved bruk av en Pierce-660 nm Protein Assay Kit (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA). Protein konsentrasjoner ble målt ved hjelp av Nanodrop spektrofotometer (ND-1000, ThermoScientific, Wilmington, DE, USA).
Urin Basert Enzyme-Linked immunosorbent assay (ELISA)
Levels of human CC motiv chemokine 18 (CCL18), også kjent som CCL18 (Cat # ab100620 Abcam, Cambridge, MA, USA), human plasminogenaktivatorinhibitor 1 (PAI-1, Cat # EA-0207 Signosis Inc., Sunnyvale, CA, USA), og CD44 (Cat # ab 45912 Abcam, Cambridge, MA, USA) ble fulgt i urinprøver ved hjelp av enzymbundet immunosorbent analysen. Kommersielt tilgjengelige ELISA-analyser ble også brukt til å måle nivået av urin hemoglobin (Cat # E88-135 Bethyl Laboratories Inc., Montgomery, TX, USA), og BTA (BTA-Trak © Ca # 662150 Polymedco Inc. Cortlandt Manor, NY, USA ). Lesere av disse analysene ble blindet med hensyn til sykdomsstatus. Alle analyser ble utført i henhold til produsentens instruksjoner. Kalibreringskurver ble fremstilt under anvendelse av rensede standarder for hvert protein vurdert. Kurvetilpasning ble oppnådd ved enten lineær eller fire-parameter logistisk å følge produsentens instruksjoner.
Kreatinin analysen
Kreatin omdannes ikke-enzymatisk til metabolitten kreatinin, som diffunderer inn i blodet og utskilles i urinen via nyrene ved en konstant hastighet. Følgelig er urin kreatinin et nyttig verktøy for å normalisere nivåene av andre molekyler som finnes i urin [31], [32]. Våre foreløpige resultater (ikke vist) viste at på grunn av hematuria (mikroskopisk eller grov blod i urinen), som inneholder forhøyede nivåer av proteiner, ville protein ikke være en god markør for normalisering. Dermed ble konsentrasjonene av alle overvåkede proteiner (CCL18, PAI-1, CD44 og BTA) normalisert til urin kreatinin og disse konsentrasjonene ble rapportert som et forhold i forhold til urin kreatinin verdier. Den kreatinin-analysen ble utført i henhold til produsentens instruksjoner (Cat # KGE005 R D Systems Inc., Minneapolis, Minnesota, USA). Kort sagt ble urin supernatantene tint, fortynnet med destillert vann og behandlet med alkalisk pikrat oppløsning. Behandlede prøvene ble målt på en mikroplateleser (Bio-tek, Synergy
TM HT, VT) ved en bølgelengde på 490 nm. En standardkurve ved bruk av rene standarder ble generert ved regresjonsanalyse ved hjelp av fire-parameter logiskurvetilpasning, og signal intensiteter ble konvertert til konsentrasjoner.
Statistical Analysis
Sammenhengen mellom hver biomarkør og BCA var testet ved bruk av Wilcoxon rank sum test. Nonparametric mottaker drifts karakteristisk (ROC) kurver hvor verdien for følsomhet er plottet mot falskt positive (1-spesifisitet) ble generert. Vi definerte en diagnostisk test som positiv eller negativ for BCA deteksjon ved hjelp av en grenseverdi. Den optimale cutoff (Youden indeks) ble valgt for å maksimalisere summen av sensitivitet og spesifisitet [33]. Nøyaktigheten av en biomarkør for å forutsi nærvær av BCA ble definert som gjennomsnittet av følsomheten og spesifisiteten. For å vurdere uavhengig sammenslutning mellom biomarkører og BCA, ble logistisk regresjonsanalyse utført med BCA status (ja vs. nei) som responsvariabelen, og CCL18, PAI-1, CD44, BTA konsentrasjoner som forklaringsvariablene. Statistisk signifikans i denne studien ble satt til
p
0,05 og alle rapporterte
p
verdiene var to-sidig. Alle analyser ble utført med SAS programvareversjon 9.1.3.
Takk
Forfatterne er takknemlige for de 127 personene som deltok i denne kliniske studien.
