Abstract
Bakgrunn
Serum prostataspesifikt antigen (PSA ) er den mest brukte markør for diagnostisering av prostatakreft (PCA). Det mangler spesifisitet og prediktiv verdi, noe som resulterer i unøyaktige diagnoser og overbehandling av sykdommen. Hensikten med denne studien var å vurdere nytten av plasma telomerase revers transkriptase (hTERT) mRNA som et diagnostisk og prognostisk verktøy for PCa og sin tilknytning til clinicopathological parametere av svulster.
hovedfunnene
Plasma hTERT mRNA nivåer ble bestemt ved QRT-PCR i 105 påfølgende pasienter med forhøyede PSA nivåer og i 68 friske frivillige. Den diagnostiske nøyaktighet, effekten som en prognostisk faktor biokjemisk tilbakefall og foreningen med tumor clinicopathological parametre av plasma hTERT mRNA og serum PSA tester ble bestemt med univariate og multivariate analyser. Resultatene viser at plasma hTERT mRNA er en ikke-invasiv biomarkør for PCa diagnose som viser høyere følsomhet (85% vs. 83%), spesifisitet (90% vs. 47%), positiv prediktiv verdi (83% vs. 56%) og negativ prediktiv verdi (92% vs. 77%) enn serum PSA. Plasma hTERT mRNA er signifikant assosiert med dårlig prognose kreft clinicopathological parametere og er en betydelig uavhengig prediktor for PCa (p 0,0001). Univariat analyse identifisert plasma hTERT mRNA (men ikke serum PSA) som en betydelig prognostisk faktor biokjemisk tilbakefall. Plasma hTERT mRNA Kaplan-Meier-kurver bekreftet signifikante forskjeller mellom grupper og pasienter med høyere nivåer enn cut-off verdi viste redusert tilbakefall overlevelse (p = 0,004), mens ingen forskjeller ble observert med serum PSA (p = 0,38). Multivariat analyse viste at plasma hTERT mRNA (men ikke serum PSA) og scenen var signifikant assosiert med biokjemisk tilbakefall.
Konklusjoner
Totalt disse funnene tyder på at hTERT mRNA er en nyttig non-invasiv tumor markør for molekylær diagnostikk av PCA affording en større diagnostisk og prognostisk nøyaktighet enn PSA-analysen og kan få betydning i oppfølgingen av sykdommen
Citation:. mars-Villalba JA, Martínez-Jabaloyas JM , Herrero MJ, Santamaria J, Alino SF, Dasi F (2012) Cell-Free Circulating Plasma hTERT mRNA er en nyttig markør for prostatakreft Diagnose og er assosiert med dårlig prognose svulst kjennetegn. PLoS ONE 7 (8): e43470. doi: 10,1371 /journal.pone.0043470
Redaktør: Rui Medeiros, IPO, Inst Port Oncology, Portugal
mottatt: 30 april 2012; Godkjent: 20 juli 2012; Publisert: 20 august 2012
Copyright: © mars-Villalba et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Forfatterne har ingen finansiering eller støtte til rapporten
konkurrerende interesser:.. forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Prostatakreft (PCA) er, med unntak for hudkreft, den hyppigst diagnostisert kreft blant menn i utviklede samfunn og den andre årsaken til død av kreft etter lungekreft [1]. Diagnostisering av PCA har økt dramatisk det siste tiåret, mye takket være utstrakt bruk av serum prostata spesifikt antigen (PSA) tester [2]. Når serum PSA stiger over terskelen til 2,5-4,0 ng /ml, er pasienten ofte betraktet som en kandidat for en biopsi for å utelukke risikoen for kreft. Imidlertid er bruken av serum PSA for å screene for PCa omstridt og ikke enstemmig anbefalt av den internasjonale medisinske samfunnet. Dette avviket skyldes det faktum at PSA-test har begrenset spesifisitet og prediktiv verdi, noe som resulterer i et betydelig antall falske positiver, og dermed unødvendige biopsier [3].
Det er flere grunner til at det er vanskelig å tolke PSA-test og for å gjøre en nøyaktig beslutning om hvorvidt eller ikke å utføre en biopsi. Først blir opp til 15% av krefttilfeller (noen av dem høyverdig PCA) ikke diagnostisert hos menn med PSA nivåer under cut-off nivå [4]. For det andre, selv om høye serumnivåer av PSA er assosiert med PCA de kan også indikere andre mye mindre alvorlige forhold, for eksempel akutt bakteriell prostatitt, benign prostatahyperplasi (BPH), blærekatarr, utløsning, perineal trauma eller senere kirurgiske inngrep i urinveiene [2]. Data fra den europeiske randomisert studie av screening for prostatakreft (ERSPC) viste at 10-20% av mennene hadde unormale PSA nivåer og derfor oppfylt gjeldende kriterium for en biopsi, men bare rundt 24% av mennene i spørsmålet etter hvert utviklet PCa [5].
Videre er resultatene av randomiserte kliniske studier vist at PSA-screening produserer inkonsekvente resultater, og har bare en begrenset nytte med hensyn til PCa dødelighet. Den ERSPC og Gøteborg studier viste en moderat redusert PCa dødelighet [5], [6], mens Prostate, Lung, Colorectal, og eggstokkreft Screening (PLCO) studie viste ingen reduksjon i den hastighets [7]. Selv om høye PSA nivåer er ofte forbundet med en mer aggressiv progresjon av PCA har de ikke alltid korrelerer med den biologiske oppførsel av sykdommen, og dermed føre til overdiagnostikk og overbehandling, med unødvendige risikoen for urin, seksuell og tarm dysfunksjon som dette innebærer [ ,,,0],8].
i denne sammenheng, er nye biomarkører radikalt nødvendig for å oppdage klinisk relevante PCa og utføre tidlig og nøyaktig diagnose av sykdommen, og dermed redusere antall biopsier mens vellykket detektering så mange tilfeller av PCa som mulig.
for å oppnå dette, er menneskelig telomerase en av de mest lovende kreftmarkører for tiden under etterforskning. Telomeraseaktivitet har blitt funnet å være forhøyet i 85-100% av kreftpasienter, mens det er lavt eller ikke påvises i normale somatiske celler [9]. Flere forskere har rapportert deteksjon av telomerase revers transkriptase (hTERT) mRNA i plasma /serum av flere typer kreft, inkludert PCa [10] – [17]. I en tidligere studie av et lite antall pasienter, vår gruppe detektert hTERT mRNA i plasma hos pasienter med PCA og observert at dets kvantifisering utgjorde en sensitiv og spesifikk metode for å identifisere PCA pasienter. Dessuten, når den betraktes sammen med PSA, det var en effektiv markør for tidlig diagnose PCa [16].
Imidlertid har ingen av disse studier har sammenlignet nærvær av hTERT mRNA i plasma /serum fra pasienter med PCA clinicopathological karakteristikker av svulster. Derfor er målet med denne studien var å: i) studien, i en stor populasjon av pasienter, den kliniske relevansen av hTERT plasma mRNA som en markør for PCa og ii) analysere fordelingen av clinicopathological parametere med hensyn til hTERT mRNA plasma nivåer i PCA pasienter.
Materialer og Metoder
Pasient og prøvetaking
Ett hundre og fem pasienter som ble innlagt fortløpende til sykehuset Clínico Universitario Valencia (HCUV) ble inkludert i studien. Kriteriene var som følger: (1) pasienter med forhøyet serum PSA nivå (PSA cut-off point ≥4.0 ng /ml), (2) ingen tidligere diagnose av kreft i en hvilken som helst type; og (3) ingen behandling for PCa før blodprøvetaking.
Alle prøvene ble analysert prospektivt uten kunnskap om fagenes clinicopathological status. Pasientene ble klassifisert i henhold til histopatologiske kriterier og tildelt en av tre grupper: PCa (gjennomsnittsalder ± SD: 65,8 ± 7,30 år, range: 49-80), prostatitt (gjennomsnittsalder ± SD: 65.9 ± 5.69 år, range: 54- 80), og BPH (gjennomsnittsalder ± SD: 62.4 ± 8.45 år, range: 50-71) (tab 1). Pasienter med PCa ble behandlet med radikal prostatektomi (26/46; 57%), brachyterapi (3/46, 6%), strålebehandling (13/46; 28%) og androgen deprivasjon terapi (4/46, 9%). Median oppfølging varighet var 10,0 år (spredning: 09.05 til 10.04). Biokjemiske tilbakefall kriterier som angitt av European Association of Urology veiledere; etter radikal retropubic prostatektomi, to påfølgende PSA-verdier på 0,2 ng /ml eller høyere, og etter strålebehandling, et stigende PSA-nivå 2 ng /ml over nadir PSA [18]. Ifølge disse spesifikke kriterier, 7 pasienter hadde biokjemisk tilbakefall
Sixty-åtte alderstilpassede (gjennomsnittsalder ± SD: 61,0 ± 6,32 år, range: 50-76). Friske frivillige uten symptomer i de nedre urinveiene eller historie PCa eller noen annen form for kreft fungerte som kontroller.
Perifere veneblodprøver ble hentet fra pasienter (før transrectal ultralydveiledet prostata biopsi) og friske frivillige i 8-ml blod samling rør som inneholder natriumsitrat gel og en tettshetsgradient medium (Vacutainer CPT 362761; Beckton Dickinson). Mononukleære blodceller og plasma ble separert ved sentrifugering i henhold til produsentens instruksjoner.
Denne studien ble godkjent av forskningsetisk komité av HCUV, og alle deltakende fag ga skriftlig informert samtykke før inklusjon i studien.
RNA Isolation og plasma hTERT mRNA Kvantifisering
RNA ble isolert fra 250 pl av plasma med DNase i-behandling, slik som tidligere beskrevet [11], [16]. cDNA syntese og kvantitativ real-time PCR (qPCR) har blitt rapportert tidligere [16]. Kort sagt, ble renset RNA (200 ng) revers transkribert med tilfeldige heksamer bruker TaqMan Reverse Transcription reagenser kit (Applied Biosystems) i henhold til produsentens instruksjoner. Fem pl av RT-reaksjon ble blandet med 45 ul av TaqMan PCR Universal Master Mix (Applied Biosystems) inneholdende 250 nM av forover- og reversprimerne og 125 nM av TaqMan probe. Primere og TaqMan prober for hTERT og 18S rRNA og PCR betingelser er beskrevet andre steder [17]. Plasma hTERT mRNA ble normalisert mot plasma 18S rRNA mRNA. En standardkurve ble generert ved hjelp av HT-29 colon carcinoma cellelinje (ATCC HTB-38). Syklusen terskel (Ct) av hver prøve ble målt ved bruk av ABI 7700-sekvensen deteksjonssystem og transformert til ng fra HT-29 hTERT og HT-29 18S rRNA ved hjelp av standardkurver generert i samme eksperiment. Forholdet mellom ng av hTERT og ng av 18S rRNA representerer den normaliserte hTERT for hver prøve
preoperativ serum PSA-verdiene ble målt ved hjelp av standard teknikk som anvendes i HCUV. (Elecsys total PSA-analyse; Roche Diagnostics) .
Clinicopathological Parametere
Når resultatet av en PSA-test pekte mot PCA pasienten gjennomgikk en ultralydveiledet prostata biopsi. Resultatene av alle biopsier ble gjennomgått av erfarne uro-patologer og, dersom dette anses positivt, ble den aktuelle pasienten behandles i henhold til standard prosedyre følges i Urologi Unit ved HCUV i tilfeller av PCa. Tumor prognostiske faktorer som Gleason score, prosent av positive prostatabiopsier (beregnet som antall positive biopsier dividert med det totale antall biopsier utført), perinevral invasjon og lymphovascular invasjon ble bestemt. Klinisk iscenesettelse ble utført av digital endetarms eksamen (DRE), transrectal ultralyd (TRUS) og magnetic resonance imaging.
statistiske metoder
Plasma hTERT mRNA nivåer og serum PSA nivå ble sammenlignet med clinicopathological parametere ved hjelp Mann-Whitney U og Kruskal-Wallis ikke-parametriske tester, siden en Kolmogorov-Smirnov test avslørte at verken hTERT mRNA eller serum PSA normalt ble distribuert. Nøyaktigheten av serum PSA og plasma hTERT mRNA analyser for diagnostisering PCa ble bestemt ved Receiver Operating Characteristic (ROC), det tilsvarende arealet under kurven (AUC ROC) og sannsynlighetsforhold (LR). Sensitiviteten og spesifisiteten av hTERT mRNA og preoperativ serum PSA ble beregnet ved hjelp av den beste cut-off-verdien til ROC-kurven, som ble bestemt i henhold til det høyeste punktet på den vertikale aksen og den lengst til venstre på den horisontale aksen. Sammenhengen mellom plasma hTERT mRNA, serum PSA og clinicopathological parametre ble analysert ved hjelp av univariat analyse. Logistisk regresjon ble utført for å bestemme betydelige uavhengige forbehandling prediktorer for PCa diagnose. Effekten av plasma hTERT mRNA og serum PSA som predikator for biokjemisk tilbakefall ble undersøkt ved univariate og multivariate analyser. De odds ratio (ORS) beregnet ved logistisk regresjon og 95% konfidensintervall (95% KI) ble rapportert. Alle beregnede p-verdier ble tosidige, og sannsynlighets verdier på mindre enn 0,05 ble ansett for å være statistisk signifikant.
Resultater
Plasma hTERT mRNA er et nyttig Non-invasiv biomarkør for PCa Diagnose
Plasma hTERT mRNA nivåene ble målt i 105 påfølgende pasienter med forhøyede PSA nivåer (≥4.0 ng /ml) og 68 friske frivillige. Pasientens alder, preoperativ serum PSA og plasma hTERT mRNA-nivåer er vist i tabell 1. Det ble ikke observert noen forskjeller i tid mellom de ulike gruppene (ANOVA; p = 0,350).
PCa screening ved anvendelse PSA som den eneste indikator for prostatabiopsi viste at førtiseks av de 105 pasientene ble diagnostisert med PCa (43,8%), 47 hadde prostatitt (44,8%) og 12 led av BPH (11,4%) (figur 1). Fordeling av plasma hTERT mRNA-nivåer i pasienter med PCa, prostatitt eller BPH og i kontrollene er vist i figur 2A. Plasma hTERT mRNA medianverdiene var signifikant høyere (p 0,001) blant PCA pasienter (median, interkvartilt område: 1,6; 0,7 til 4,08) enn i kontrollgruppen (0,07; 0.02-0.10), prostatitt (0,13; 0,03 til 0,31) og BPH (0,03; 0.01-0.13) grupper. Preoperativ serum PSA var signifikant høyere (p 0,001) hos pasienter enn blant kontrollene, selv om ingen signifikante forskjeller ble påvist mellom PCA gruppen og prostatitt eller BPH grupper (figur 2B)
Ett hundre og fem påfølgende pasienter. med forhøyede PSA nivåer gikk prostata biopsi. Førti-seks av de 105 pasientene (44%) ble diagnostisert med PCA og femti-ni pasienter (56%) viste ingen tegn på kreft. PCA: Prostate Cancer BPH. Benign prostatahyperplasi
Data er uttrykt som median og interkvartilt område. A) Kvantifisering av plasma hTERT mRNA nivåer diskriminerer mellom PCA pasienter og friske personer (p 0,001). B) Selv om PSA-nivåene var signifikant høyere i PCA pasienter enn hos kontrollgruppen (p 0,001), kvantifisering av serum PSA var ute av stand til å skille mellom PCA BPH og prostatitt pasienter. BPH = Benign prostatahyperplasi.
Alle pasienter og kontrollprøver viste 18S rRNA forsterkning indikerer integritet isolert RNA (data ikke vist).
Plasma hTERT mRNA Viser høyere diagnostisk nøyaktighet enn Serum PSA ved PCA Diagnose
ROC kurver og den beste cut-off verdi ble benyttet for å bestemme sensitiviteten, spesifisitet, positiv prediktiv verdi (PPV) og negativ prediktiv verdi (NPV) for hver analyse. Sensitiviteten og spesifisiteten av plasmaet hTERT mRNA-analyse med hensyn til detektering av PCa var 91% og 85%, henholdsvis (best cut-off-verdi 0,45), (best cut-off-verdi 0,45, med en AUC ROC-kurve av 0,932 ± 0,027) , mens PSA prøven viste en sensitivitet på 83% og en spesifisitet på 47% (best cut-off-verdi 7,2 ng /ml, (best cut-off-verdi 7,2 ng /ml, med en AUC ROC av 0,651 ± 0,054 (figur 3 .) den parvise sammenligningen av hTERT mRNA og PSA ROC kurver bekreftet signifikante forskjeller (p .. 0.001) (figur 3) PPV og NPV var høyere for hTERT mRNA analysen enn for PSA prøven Positive og negative LR var 5,99 og 0,10, henholdsvis for hTERT test og 1,57 og 0,37, henholdsvis, for PSA-analysen (tabell 2). for ytterligere å teste den diagnostiske nøyaktigheten av begge tester i PCa diagnose, valgte vi en høy følsomhet (98%) for begge prøvene og beregnet spesifisitet og tilhørende sannsynlighet forhold. på denne følsomheten, plasma hTERT analysen viste høyere spesifisitet (78% vs. 10%) og høyere positiv sannsynlighet ratio (4,44 vs 1,10) enn PSA-test.
ROC-kurvene viser at plasma hTERT mRNA, men ikke serum PSA, skiller mellom PCA pasienter og friske individer eller pasienter med prostatitt eller BPH. Plasma hTERT mRNA viser høyere følsomhet (85% vs. 83%), spesifisitet (90% vs. 47%), PPV (83% vs. 56%), NPV (92% vs. 77%) og AUC ROC (0,932 vs 0.651) enn PSA med hensyn til PCa diagnose. Parvise sammenligningen av hTERT mRNA og PSA ROC kurver viste signifikante forskjeller (p 0,001).
Kombinasjon av plasma hTERT mRNA og serum PSA i diagnose for PCa resulterte i en sensitivitet på 98%, en spesifisitet på 42%, en PPV på 57%, en NPV på 96%, en LR + på 1,69 og en LR- 0,05 (tabell 2).
Interessant, 5 av de 47 prostatitt hos pasienter som utviklet PCa over en periode på fem år viste høyere gjennomsnitts hTERT mRNA verdier ved diagnose enn resten av prostatitt gruppen (1,08 ± 0,80 vs. 0,45 ± 1,00), selv om forskjellene ikke var statistisk signifikant (p = 0,26), sannsynligvis på grunn av lite antall av tilfellene analysert.
Plasma hTERT mRNA er assosiert med dårlig prognose tumor Clinicopathological parametere
Univariat analyse viste at plasma hTERT mRNA nivåer var signifikant assosiert med dårlig prognose tumor clinicopathological parametere som Gleason score (p = 0,01), prosent biopsi kjerne positivitet (p = 0,002), perinevral invasjon (p = 0,002), lymphovascular invasjon (p 0,001) og klinisk stadium (p = 0,004). Ingen statistisk signifikant sammenheng ble funnet mellom preoperativ serum PSA nivå og Gleason score (p = 0,10), prosent biopsi kjerne positivitet (p = 0,34), perinevral invasjon (p = 0,35) eller vaskulær /lymfatisk invasjon (p = 0,15). Likevel ble betydelig høyere PSA-verdier observert hos pasienter på et avansert klinisk stadium (p 0,01) (Tabell 3)
Tabell 4 viser resultatene fra logistisk regresjonsanalyse av forbehandling prediktor for PCa.: alder (p = 0,04) og plasma hTERT mRNA (p 0,0001) var signifikante uavhengige prediktorer for PCA mens serum PSA ved diagnose (p = 0,94), DRE (p = 0,43) og TRUS (p = 0,85) ikke var uavhengige prediktorer .
Plasma hTERT mRNA er en prognostisk faktor av biokjemiske tilbakefall
Plasma hTERT mRNA viste seg å være en betydelig faktor for biokjemisk tilbakefall. Plasma hTERT mRNA cut-off verdi for optimalisering av sensitivitet og spesifisitet i å forutsi biokjemisk tilbakefall var 3,15. På dette cut-off-verdi, sensitivitet og spesifisitet var 71,4% og 91,8%, henholdsvis, og AUC ROC-kurven var 0,932 ± 0,02 (figur 4). Figur 5A viser Kaplan-Meier-kurvene for de to gruppene som er definert av hTERT cut-off verdi (3,15). Gjentakelse overlevelse tid var signifikant høyere (p = 0,004; Chi-kvadrat test) hos pasienter med hTERT mRNA 3,15 (gjennomsnitt ± SD, 10.44 ± 0.26 år; 95% KI: 9,92 til 10,96) enn hos pasienter med verdier ≥3.15 (gjennomsnitt ± SD, 8,28 ± 0,60 år, 95% KI: 7,10 til 9,41). På den annen side er preoperative serum PSA ikke er en prediktor for biokjemisk tilbakefall. Den optimale cut-off verdi for å forutsi biokjemisk tilbakefall var 14,5. Sensitivitet og spesifisitet var 100% og 87,7%, henholdsvis, og AUC ROC-kurven var 0,658 ± 0,05 (figur 4). Kaplan-Meier-kurvene for de to gruppene som er definert av PSA cut-off-verdi er vist i figur 5B. Det ble ikke observert forskjeller i tilbakefall overlevelse (p = 0,38) blant pasienter med PSA 14,5 (gjennomsnitt ± SD, 10,00 ± 0,34 år, 95% KI: 9,34 til 10,68) og pasienter med PSA-verdier ≥14.5 (gjennomsnitt ± SD ; 9,09 ± 0,68 år, 95% KI: 7.77-10.42). Parvise sammenligningen av ROC kurver viste signifikante forskjeller (p 0,001). (Figur 4)
ROC kurver viser at plasma hTERT mRNA, men ikke serum PSA, er en signifikant prediktor for biokjemisk tilbakefall. Plasma hTERT mRNA viser høyere spesifisitet (91,8% vs 87,7%) og AUC ROC kurve (0,932 vs 0,658) enn PSA med hensyn til biokjemisk tilbakefall. Ptil analysen viser høyere følsomhet (71,4% vs 100%) enn hTERT mRNA i å forutsi biokjemisk tilbakefall. Parvise sammenligningen av hTERT mRNA og PSA ROC kurver viste signifikante forskjeller (p 0,001).
Kaplan-Meier-kurver viser at det er betydelige forskjeller i tilbakefall overlevelse mellom høye og lave hTERT grupper (A ), men ikke mellom høy og lav serum PSA grupper (B).
Prediktorer for biokjemisk tilbakefall ble analysert med COX regresjonsanalyse (tabell 5). Multivariat analyse viste at hTERT mRNA (OR: 1,55; 95% KI: 0,99 til 2,43; p = 0,04) og scene (OR: 0,13; 95% KI: 0,01 til 1,30; p = 0,08) er signifikant assosiert med biokjemisk tilbakefall, mens ingen av de andre analyserte faktorene viste signifikant sammenheng med biokjemisk tilbakefall.
Diskusjoner
Serum PSA har vært mye brukt de siste ti årene i diagnostisering og oppfølging av PCa. De store problemene som utgjøres av denne tilnærmingen er mangelen på kreft spesifisitet og lav prediktiv verdi av PSA, som resulterer i et unødvendig antall prostatabiopsier og /eller unnlatelse av å diagnostisere sykdommen hos menn med PSA nivåer under cut-off verdi. Selv om høye PSA nivåer er ofte forbundet med mer aggressive svulster, betyr PSA ikke alltid korrelerer med den biologiske oppførsel av sykdommen, noe som fører til overbehandling og dens konsekvenser (økt kostnad, bivirkninger og pasienten angst). Utfordringen for klinikerne er å skille mellom disse ulike forholdene og for å unngå å basere beslutninger utelukkende på PSA-måling. Som en konsekvens, er nye diagnostiske verktøy som kreves for å påvise PCa så tidlig og så nøyaktig som mulig for å redusere antall biopsier mens vellykket detektering av så mange tilfeller av PCa som mulig.
I denne studien ble 105 pasienter med PSA-verdier over 4,0 ng /ml gikk en prostata biopsi for å utelukke tilstedeværelse av PCa. Bare 46 av disse pasientene (44%) ble til slutt diagnostisert med PCA mens 47 (45%) og 12 (11%) ble diagnostisert med prostatitt og BPH, henholdsvis. Disse resultater viser at PCa screening basert på PSA som den eneste indikator for en prostatabiopsi mangler spesifisitet og fører til et stort antall (59/105; 56%) av unødige inngrep. Selv om ulike strategier har blitt utviklet i et forsøk på å øke spesifisiteten av PSA, inkludert måling av PSA hastighet, nivåer av fritt /total PSA-forhold, og bruk av cut-off-verdier bestemt av pasientens alder og etnisk gruppe, har ikke deres kliniske pålitelighet blitt bekreftet [2], [19]. Vår gruppe har tidligere vist, i et lite antall pasienter, som kvantifisering av plasma hTERT mRNA er en betydelig sensitiv og spesifikk metode for å identifisere PCa, og som, når de brukes i kombinasjon med serum PSA, er en effektiv metode for PCa diagnose [16 ]. Videre, i en fersk rapport har vi vist at plasma hTERT mRNA skiller mellom klinisk lokalisert og lokalavansert sykdom og er en prediktor for tilbakefall i PCA pasienter [20]. Vi har nå vurdert nøyaktigheten av plasma hTERT mRNA som et diagnostisk verktøy for PCa i et større antall pasienter og har utforsket sin tilknytning til clinicopathological karakteristikker av svulster. Vi har også undersøkt nytten av plasma hTERT mRNA som prognose faktor biokjemisk tilbakefall. Resultatene bekrefter og utvider de av en tidligere rapport, som de indikerer at plasma hTERT mRNA er en ikke-invasiv tumor markør som kan brukes til PCa diagnose, som viser høyere sensitivitet (85% vs. 83%), spesifisitet (90% vs. . 47%), PPV (83% vs. 56%), NPV (92% vs. 77%) og LR-forhold enn PSA prøven. indikerer at plasma hTERT mRNA-analysen har en høy diskriminerende effekt, og derfor stort potensial verktøyet som diagnostisk test ved PCA diagnose. Noen medisinske foreninger anbefaler å redusere PSA cut-off punkt fra 4,0 ng /ml til 2,5 ng /ml for å øke følsomheten og dermed oppdage flere kreftformer på et tidligere stadium. For ytterligere å undersøke diagnostisk nøyaktighet på PSA-, valgte vi to PSA-verdier i dag brukes i klinisk praksis (PSA ≥4.0 ng /ml og ≥2.5 ng /ml) og beregnet sin sensitivitet, spesifisitet, PPV og NPV og positive og negative LR . Vi har observert hvordan redusere PSA cut-off point øker følsomheten men reduserer spesifisitet og PPV. På disse cut-off poeng for PSA, viser plasma hTERT analysen mye høyere spesifisitet (85% mot 8% og 5%), PPV (83% vs. 47% og 46%) og positiv LR (5,99 vs. 1,09 og 1.05), men lignende sensitivitet (91% vs. 100%), NPV (92% vs. 100%) og negative LR (0,10 vs 0,00) (Tabell 3). Kombinasjon av plasma hTERT mRNA og PSA ikke blir bedre diagnostisk nøyaktighet. En begrenset økning i sensitivitet (91% for hTERT vs. 98% for hTERT /PSA-formasjon) resulterer i betydelig reduksjon i spesifisitet (85% vs. 42%), PPV (83% vs. 57%) og LR + (5.99 vs. 1,69).
multivariatanalyse identifisert alder og plasma hTERT mRNA ved diagnose som signifikante uavhengige prediktorer for PCA mens serum PSA ved diagnose, DRE og TRUS ikke var prediktorer i denne forbindelse.
samlet utgjør disse resultatene indikerer at plasma hTERT mRNA-analysen har en høy diskriminerende effekt og er derfor potensielt nyttige for diagnostisering PCa.
Interessant, fem av de 47 prostatitt pasienter som utviklet PCa over en femårs perioden viste høyere gjennomsnitts hTERT mRNA verdier enn resten av sin gruppe. Dette funnet gir ytterligere støtte til ideen om at plasma hTERT mRNA har implikasjoner for oppfølging og minimal rest påvisning av sykdommen, selv om antall pasienter i studien var for liten til å trekke bastante konklusjoner. Andre forfattere har publisert lignende resultater, rapporterer at telomerase RNA kan være nyttig for diagnostisering av avansert PCa og overvåkning av pasienter for å avdekke minimal restsykdom [15]. Det bør påpekes at hTERT RNA har blitt evaluert fra plasmaprøver, altså transkripsjon av hTERT fra ikke-tumorkilder, slik som aktiverte lymfocytter, kan ikke utelukkes. Dessuten kan tilstedeværelsen av plasma hTERT mRNA over cut-off nivå indikerer tilstedeværelse av sirkulerende tumorceller, noe som ytterligere støtter ideen om at kvantitativ analyse av frie ulerende RNA kan være nyttig for diagnostisering og overvåkning av PCA pasienter og kan ha implikasjoner i minimal residual sykdom deteksjon.
den mekanismen som celle-fritt sirkulerende RNA er sluppet ut i blodet er ukjent, som er kilden til sirkulerende RNA. En hematopoietisk opprinnelse sirkulerende RNA har blitt foreslått, selv om korrelasjonen i mutasjoner, mikro endringer, promoter metylering i paret svulsten og plasma /serumprøver antyder at sirkulerende RNA kan stamme fra svulstvev [21]. Høyere cellefrie sirkulerende RNA-nivåer har blitt funnet hos pasienter med maligne lesjoner enn hos pasienter uten svulster. Høye nivåer av sirkulerende RNA ikke er kreft-spesifikke og økte nivåer har blitt funnet i pasienter med inflammatoriske prosesser og benigne lesjoner. Nylige rapporter har korrelert nivåene av flere tumormarkører i plasma /serum med kliniske og patologiske kjennetegn ved sykdommen som tyder på at cellefrie sirkulerende RNA kan gi biomarkører for kreftdiagnose, oppfølging av pasienter etter kirurgi og oppfølging av behandlingseffekt [22 ].
en av de viktigste funnene i denne studien er sammenhengen mellom høye plasma hTERT mRNA verdier og clinicopathological parametere av svulster. Til forfatternes kunnskap, er dette den første rapporten som viser at plasma hTERT mRNA er signifikant assosiert med dårlig prognose PCA tumor egenskaper, for eksempel Gleason score (p = 0,01), tumorstadium (p = 0,004), og vaskulær (p 0,001 ) og perinevral invasjon (p. 0,001)
Selv om antallet pasienter som viser biokjemisk tilbakefall er begrenset (bare sju pasienter), våre resultater viser også at plasma hTERT mRNA er en betydelig prognostisk faktor for gjentakelse. Kaplan-Meier overlevelseskurver bekreftet signifikante forskjeller mellom gruppene, slik at pasienter med plasma hTERT mRNA nivåer over cut-off verdi viste signifikant redusert tilbakefall overlevelse enn pasienter med nivåer under cut-off verdi. På den annen side, er serum PSA ikke er en prediktor for biokjemisk tilbakefall og ble ikke observert noen signifikante forskjeller i gjentakelse-fri tid mellom pasienter over og under cut-off-verdi. Multivariat analyse bekreftet at plasma hTERT mRNA er (sammen med scene) en uavhengig prediktor for biokjemisk tilbakefall, mens ingen av de andre analyserte faktorer (inkludert PSA) viste signifikant sammenheng med biokjemisk tilbakefall.
Flere forfattere har rapportert lignende funn i andre typer kreft, noe som indikerer at plasma hTERT mRNA kan ha prognostisk betydning [12] – [13], [23] – [24]. Miura et al. målt hTERT mRNA og epidermal vekstfaktor reseptor (EGFR) mRNA i serum fra lungekreftpasienter og viste at hTERT mRNA ble uavhengig assosiert med tumorstørrelse, tumor antall, tilstedeværelse av metastaser, tilbakefall og røyking. EGFR mRNA korrelert med avanserte kliniske trinn og begge merkene betydelig redusert etter operasjonen [12]. De samme forfatterne viste at serum hTERT mRNA er nyttig for diagnostisering av gynekologiske kreftformer. Disse pasientene viser høyere serum hTERT mRNA enn pasienter med godartede sykdommer og friske individer. Serum hTERT mRNA uavhengig korrelert med klinisk stadium, CA125 og histologiske parametre i eggstokkreft [22]. Terrin et al. viste at plasma hTERT mRNA er en nyttig markør for påvisning og overvåking av tykktarmskreft [17].
I tillegg telomerase aktivitet, kan humane kreftceller også bruke en telomerase-uavhengig mekanisme som kalles alternativ forlengelse av telomerer (ALAT). Selv om ALT mekanismen er relativt vanlig i sarkomer og astrocytomas, har det aldri blitt rapportert ved PCA. Heaphy et al. har vurdert 1.176 PCA vev (inkludert både adenokarsinomer og små cellekreft) og fant ikke en eneste ALT-positiv tumor [25] indikerer at ALT mekanismen ikke brukes av PCA celler for å opprettholde sine telomerer. Derfor bør plasma hTERT mRNA-analysen oppdage alle PCA tilfeller.
Flere nye biomarkører som finnes i biologiske væsker er for tiden under evaluering for å finne ut sitt potensial i tidligere deteksjon og prognose av PCa. Altimari et al. viste at sirkulerende fritt plasma hTERT DNA er høyere hos pasienter med PCa enn hos kontrollpersonene og korrelerer med tumorstadium. Forfatterne konkluderer med at fri plasma hTERT DNA er et lovende biomarkør for tidlig diagnostikk og oppfølging av PCa [26].
