Abstract
Urokinase plasminogen aktivator reseptoren (uPAR) er foreslått som en mulig prognostisk faktor for tykktarmskreft (CRC) pasient overlevelse. Men fortsatt CRC uPAR uttrykk kontroversiell, spesielt når det gjelder celletyper hvor uPAR er overuttrykt (f.eks epitel (uPAR
E) eller stroma-assosiert celler (uPAR
e)) og tilhørende prognostisk betydning. I denne studien ble to epitop-spesifikke anti-uPAR monoklonale antistoffer (MAbs) diskriminere ekspresjon av uPAR
E fra uPAR
S, og ble anvendt for å undersøke denne sammenheng med overlevelse av trinn B og C endetarmskreft (RC) pasienter. Ved hjelp av immunhistokjemi, ble MAbs # 3937 og R4 brukes til å diskriminere uPAR
E fra uPAR
S henholdsvis i de sentrale og invasive frontale regioner av 170 B scenen og 179 stadium C RC prøver. Kaplan-Meier og Cox regresjonsanalyser ble benyttet for å bestemme tilknytning til overlevelse. uPAR ekspresjon forekom i begge epiteliale og stromale lommer med differensial ekspresjon observert i mange tilfeller, noe som indikerer uPAR
E og uPAR
S har forskjellige cellulære roller. I de sentrale og invasive frontområder, ble uPAR
E negativt forbundet med total stadium B overlevelse (HR = 1,9; p = 0,014 og HR = 1,5; p = 0,031, henholdsvis) gjengir resultater fra tidligere studier. uPAR
S på invasiv foran var assosiert med lengre stadium C overlevelse (HR = 0,6; p = 0,007), noe som reflekterer studier som viser at makrofagen peritumoural akkumulering er assosiert med lengre overlevelse. Denne studien viser at forskjellige uPAR epitoper bør betraktes som å være uttrykt på forskjellige celletyper i løpet av tumorprogresjon og på forskjellige stadier i RK. Forstå hvordan uPAR
E og uPAR
S uttrykk påvirker overlevelse er forventet å være et nyttig klinisk prognostisk markør for trinn B og C RC
Citation. Ahn SB, Chan C, Dent OF, Mohamedali A, Kwun SY, Clarke C, et al. (2015) epithelial og stromal Cell Urokinase plasminogenaktivator Receptor Expression forskjellig korrelerer med overlevelse i rektal kreft stadier B og C-pasienter. PLoS ONE 10 (2): e0117786. doi: 10,1371 /journal.pone.0117786
Academic Redaktør: Anthony W.I. Lo, Queen Mary Hospital, HONG KONG
mottatt: 15 september 2014; Godkjent: 31 desember 2014; Publisert: 18 februar 2015
Copyright: © 2015 Ahn et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er innenfor papir
finansiering: Denne studien ble støttet med forskningsprosjektet tilskudd midler fra NHMRC (# 1010303), Cancer Council NSW (RG10-04 RG08-16), og en Macquarie University MQSN stipend. ; og støttes gjennom den australske School of Advanced Medicine (ASAM), Macquarie University, Concord Hjemsendelse General Hospital diagnostisk patologi, MQ BIOFOCUS, og biomolekylære Frontiers Forskningssentre. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser. Denne studien mottok støtte fra Kreft Council NSW. Dette endrer ikke forfatternes tilslutning til PLoS ONE politikk på deling av data og materialer.
Innledning
Nyere data fra Verdens helseorganisasjon viser tykktarmskreft (CRC) er den tredje vanligste kreftformen (~ 1,36 millioner tilfeller på verdensbasis i 2012) med en dødelighet på over 50% [1]. Den viktigste årsaken til kreft dødsfall er metastasering. Klinisk-patologisk iscenesettelse av CRC viser et dramatisk fall i overlevelse mellom trinnene B og C, tilsvarende fravær kontra nærvær av lymfeknutemetastase [2]. Til tross for sin klinisk relevans, de molekylære mekanismene som ligger til grunn metastaser er fortsatt ikke fullstendig karakterisert og utvikling av nye og mer målrettede strategier for å motvirke metastase forbli unnvikende.
plasminogenaktivering proteolytisk kaskade er en av en rekke sentrale biologiske prosesser involvert i kreft celle invasjon og metastasering. Disse inkluderer ekstracellulære matriks (ECM) nedbrytning tillater løsgjøring av tumorceller fra det opprinnelige området og gjennomtrengning av grunnmembranen, vekstfaktor aktivering og intracellulær signalisering [3]. En glykosylfosfatidylinositol-forankret membran protein kalt urokinase plasminogen aktivator reseptoren (uPAR) er sentral i dette kaskade. uPAR er en tri-domene-protein (dvs. D1, 2 og 3) som danner en tykk-fingret hanske-like receptor å tilveiebringe en sentral lomme for binding av dens ligand beslektet protease, urokinase-plasminogen-aktivator (uPA) [4]. Innledende studier fokusert på reguleringen av proteolyse (dvs. plasminogen og MMP aktivering) skjønt uPAR. Mer nylig er det blitt vist at opp til 42 proteiner (9 ekstracellulære og 33 laterale samvirkende partnere) tilsynelatende samvirke med uPAR [5]. Formen på uPAR innebærer en stor kontralateral ytre overflate som er foreslått for å lette interaksjon /s med mange av disse hjelpeutstyr proteinene [4]. Denne stort repertoar av interaksjoner antyder at uPAR har utviklet et kompleks reguleringsmekanisme for å kontrollere proteolyse, cellemigrering, proliferasjon, cellesignalisering og andre aspekter av celleadferd. Faktisk er det siste tiåret, har omfattende bevis vist uPAR innblandet i celle adhesjon, spredning, migrasjon, vev ombygging og i reguleringen av signalveier (f.eks MAP kinase, Ras pathways) [3]. Dette er viktige egenskaper ikke bare av allestedsnærværende utviklingsveier, men også kreft metastase
uPAR uttrykk i ulike kreftformer har blitt grundig studert i løpet av de siste to tiårene, noe som reflekteres av . 800 uPAR onkologi-relaterte publikasjoner [6 ]. Det gjenstår imidlertid uPAR ekspresjon i kreft mikromiljøet kontroversielt, særlig med hensyn til celletype /s på hvilken uPAR er overuttrykt (f.eks uPAR-ekspresjon i epitel (uPAR
E) eller stroma-assosiert-celler (uPAR
S)) [6,7]. Sammenhengen mellom uPAR og kreft ble først anerkjent i 1991 [8]. Siden da har en rekke studier evaluert nivåene av uPAR
E og uPAR
S i ulike kreft ved hjelp av et omfattende utvalg av antistoffer [6,7]. Men det har vært motstridende resultater. Spesielt i CRC, Pyke
et al
., Fant at uPAR ble sterkt uttrykt i tumor infiltrere makrofager, nøytrofile granulocytter og eosinofiler (ved hjelp av immunhistokjemi (IHC)), men bare svakt til moderat uttrykt i neoplastiske tumorceller (ved hjelp av monoklonalt antistoffer (MAb) mot menneske uPAR kloner R2 og R4) [9]. Senere, en annen studie rapporterte at uPAR ekspresjon oppsto hovedsakelig i tumor epithelia stedet for stroma (ved bruk av anti-uPAR MAb # 3937) [10]. Til tross for denne tilsynelatende motsetningen, begge studiene ble enige om uPAR ble sterkt uttrykt i svulsten mikromiljøet og ble konsentrert i svulsten invasiv front. Videre studier på uPAR
E og uPAR
S i CRC [6,7,11-17] generelt enige om at høy uPAR
E er uavhengig og negativt relatert til pasientens overlevelse [11,12,15]. Seetoo
et al
. [12] foreslått at uPAR (uttrykt hovedsakelig i epitel) er en uavhengig prediktor for levermetastaser og generell pasientoverlevelse post CRC reseksjon. I avtalen, viste en nyere studie signifikant forhøyet uPAR i CRC svulster ved å infiltrere tumoravgrensninger som ble assosiert med dårligere overlevelse [15]. Men data om uPAR
S i CRC er motstridende med tanke på overlevelse foreningen. Det har blitt foreslått at makrofager, som er en hovedkilde for uPAR i stroma, spiller en rolle i å forebygge metastase hematogen [16]. I tillegg ble det observert en invers sammenheng mellom CRC levermetastaser og uPAR primærtumor stromal uttrykk [18]. Mens ikke direkte korrelere uPAR
S med pasient overlevelse, er det velkjent at CRC pasienter med levermetastaser har vesentlig kortere overlevelse enn de uten. I motsetning til en nylig rapport antydet at både uPAR
E og uPAR
S er negativt forbundet med total CRC pasientoverlevelse, så vel som med sykdomsfri overlevelse (DFS) [17]. Men bare uPAR
S ble uavhengig assosiert med DFS i multivariat analyse. Kollektivt, foreslår at disse motstridende observasjonene er på grunn av bruken av spesielle MAb med forskjellig uPAR-epitop-spesifisitet når uPAR er involvert i celle-spesifikke protein interaksjoner. Faktisk ble mest uPAR
E eller uPAR
S studier utført med et enkelt MAb og dermed vil bare oppdage bestemt uPAR domene /s. Tidligere studier har vist at uPAR kan være til stede i enten full lengde, oppløselige og /eller spaltes domene former, og disse kan være differensielt uttrykte epitoper som er identifisert av spesifikke MAbs [19]. I tillegg kan enkelte epitoper maskeres når uPAR samhandler med tilhørende proteiner. Derfor, for å nettopp undersøke den prognostiske betydningen av uPAR i kreft, bør MAbs oppdage ulike nøkkel epitoper uttrykt på bestemte celletyper brukes på samme patologiske vevsprøver.
I denne studien, som tar hensyn til spørsmål om uPAR uttrykk på forskjellige celletyper, vi spesifikt målt uPAR
E og uPAR
S over en kohort (n = 349) av ikke-metastatisk (trinn B) og nodal-metastatisk (stadium C) endetarmskreft (RC) prøver. To kommersielt tilgjengelig epitop-spesifikke anti-uPAR MAbs # 3937 (for uPAR
E) og R4 (for uPAR
S) ble brukt for å undersøke seriesnitt av RC microarray (TMA). Innenfor hver prøve, ble uPAR
E og uPAR
S målt i den sentrale regionen, den invasive svulster fremre og tilstøtende ikke-neoplastisk mucosa. Målet var å vurdere sammenhengen mellom uPAR målinger og patologiske kjennetegn ved svulst og pasientenes total overlevelse.
Materialer og metoder
Pasient kohort og tumor karakterisering
Data ble trukket fra en prospektiv register påfølgende kolorektal kreft resections som ble igangsatt i 1971 i Concord Hospital, en offentlig tertiær henvisning sykehus i Sydney, Australia og inneholder detaljert klinisk, operative, patologi, adjuvant behandling og oppfølging informasjon [20,21]. Alle reseksjoner ble utført av spesialist kolorektal kirurger ved hjelp av en standardisert teknikk [22]. Reseksjoner for endetarmskreft mellom 1988 og 2001 inkluderende ble valgt for analyse og alle ikke-avdøde pasienter ble fulgt i minst fem år. Bare adenokarsinomer ble inkludert i registeret. Hvor multiple tumorer var tilstede, ble bare de mest avanserte-trinns lesjon inkludert. Pasienter ble ekskludert hvis de hadde tidligere tykktarmskreft, inflammatorisk tarmsykdom eller familiær adenomatøs polypose coli. Endetarmen ble definert som blant annet rektosigmoid krysset, men unntatt endetarmen. Over 90% av prøvene ble undersøkt i henhold til en standard protokoll [2] av en enkelt patolog (R.C. Newland) som også anmeldt resten. Tumorstørrelsen ble målt som den største overflatedimensjon og blokkene ble tatt for å demonstrere maksimum direkte tumor gjennomtrengning av tarmveggen. Ytterligere blokker ble tatt for å vise forholdet mellom tumoren og eventuelle vedhengende struktur eller vev, så vel som linjer av reseksjon og den frie serosale overflate. Venøs invasjon, vurdert av hematoxylin og eosin farging, ble registrert som involvering av tykke eller tynne vegger årer, enten innenfor eller utenfor tarmveggen. Når tvil eksistert med hensyn til om en struktur involvert var en vene, ble et negativt funn registrert. En apikal lymfeknute ble definert som den mest proksimale node innenfor 1 cm av fartøyet ligering på toppen av en vaskulær pedicle. Svulster ble histologisk klassifisert som lav, gjennomsnitt-, eller høygradig malignitet. Grade ble bedømt å ta hensyn til graden av differensiering og anaplasia, arten av tumor margin (dytte eller den infiltrerende) og tilstedeværelsen og innflytelse av vaskulær invasjon. I avansert stadium tumorer andelen involverte lymfeknuter ble beregnet som en prosentandel av det totale antallet noder høstet. Før 2002 over 90% av prøvene ble rapportert på eller gjennomgått av en enkelt patolog (R.C. Newland). Alle patologi funksjoner analysert ble så etter i hver prøve og deres tilstedeværelse eller fravær registrert eksplisitt. Det var ingen mangler data på en variabel. Svulster ble iscenesatt etter den australske klinisk-patologisk Staging (ACPS) system for CRC [2]. De fire hovedtrinn av dette system (A, B, C, D) er direkte sammenlignbart med de hovedtrinn (I, II, III, IV) av pTNM system [23], men enda viktigere, ACPS forskjellig ved at alle lesjoner med makro- eller mikroskopisk svulst i noen reseksjon margin er kodet som scene D. CRC registret på Concord Hospital er gjennomført med godkjenning av South Western Sydney Helse området etiske komité (CH62 /6 /2011-136) med skriftlig samtykke i samsvar med kravene i NSW menneskelig vev Act 1983 og NHMRC National erklæring om etisk atferd i human Forskning 2007. studien ble også godkjent av Macquarie University Menneskelig etiske komité (# 5201100858).
TMA konstruksjon
Formalin fiksert parafin-embedded TMA ble konstruert ved hjelp av en avansert Tissue Arrayer ATA-100 (Chemicon, Temecula, CA, USA). Fra opprinnelige rektale kreftvevet parafinblokker, ble kjernene (1,5 mm) som er hentet fra utvalgte morfologisk representative områder i midtområdet av tumor (for å unngå luminale flater), invasiv fronten av tumoren og histologisk normale slimhinner (1-2cm fra tumor margin ) og kledd inn i rykende mottakerparafinblokker.
IHC
TMA-delene ble fremstilt og behandlet samtidig med de samme grupper av antistoffer og reagenser, og farging ble utført i en enkelt klinisk laboratorium patologi videre en enkelt kjøring av alle prøver. To epitop-spesifikke mus-anti-humant uPAR MAb, # 3937 (American Diagnostica Inc (ADI), Greenwich, CT, USA) og R4 (Dako, Glostrup, Danmark), ble benyttet for IHC. Farging ble utført med et polymerbasert IHC deteksjonssystem på en Bond-Max Autostainer (Leica Biosystems, Melbourne, Australia), som beskrevet [24] med noen modifikasjoner. For # 3937 MAb farging, ble det ikke antigen gjenfinning utføres og 3.33μg /ml # 3937 ble brukt til TMA seksjoner. For R4 MAb farging, ble proteinase K (Leica Micro) som benyttes for gjenfinning antigen, er konsentrasjonen av R4 er 10 ug /ml. Negative slides ble inkubert med isotype IgG1 (R 206 for trinn B og 251 for scene C svulst. Reseksjon prøver for 77 (31 fra scenen B og 46 fra scenen C) ikke gir tilstrekkelig eller hensiktsmessig arkivmateriale for TMA konstruksjon. De resterende 175 trinn B og 205 stadium C prøvene ga informativ IHC resultater som varieres ved scenen, nettstedet og for uPAR
E, uPAR
S og uPAR
PT (peritumoural uPAR) uttrykk. Etter unntatt de med ingen informativ IHC, der forble 170 pasienter med stadium B og 179 med stadium C svulst, hvor data var tilgjengelige på minst ett av sentrale eller frontal uPAR
E, uPAR
S eller uPAR
PT. Kliniske og patologiske funksjoner av disse pasientene er vist i tabell 1. For trinn B og C hver for seg, og for de uPAR vurderingene separat vi sammenlignet med pasienter som hadde et TMA /IHC resultat med de som mangler et resultat i forhold til de variable i tabell 1 og ble funnet bare tre statistisk signifikante forskjeller (data ikke vist), der vi konkluderte med at pasienter med TMA /IHC resultat som vi analysert for denne studien ikke avvike vesentlig fra de ekskluderte pasienter som ikke hadde noen TMA /IHC resultat. I etterfølgende tabeller antall pasienter analysert variere i forhold til hvor mange som måtte bli ekskludert på grunn av manglende IHC resultater.
Deteksjon og sammenligning av uPAR
E og uPAR
S i RC
hoved~~POS=TRUNC med denne studien var å korrelere uPAR
E og uPAR
S med pasientens overlevelse i etapper B og C RC. For å oppnå dette, har vi i utgangspunktet bestemt plasseringen og uttrykk nivåer av uPAR
E og uPAR
S i RC vev ved hjelp av to epitop-spesifikke anti-uPAR MAbs # 3937 og R4. Disse MAb ble valgt siden # 3937 og # 3936 (begge fra ADI) var de mest vanlige kommersielt tilgjengelige MAbs brukes for uPAR
E deteksjon, og R4 R2 (fra Dako og /eller samarbeidspartnere ved Finsen Laboratory) ble mest brukt til å skille uPAR
S [6,7,9,10]. MAb # 3936 ble også testet for å oppdage uPAR
E i vår studie: men vi var ikke i stand til å optimalisere en pålitelig antigen hentemetode for konsistent deteksjon av uPAR
E ved hjelp av denne MAb. Spesifikt MAb # 3936 ga høy bakgrunnsfarging eller ingen farging, avhengig av de antigen gjenfinning metoder som brukes, og enda viktigere, en isotype kontroll (IgG2a) også svakt farget RC TMA (data ikke vist). Isotype kontroll MAb til # 3937 og R4 (dvs. IgG1) ble også testet med relevante antigen gjenfinningsmetoder og ingen ikke-spesifikk binding ble observert (data ikke vist). R2 ble ikke brukt i denne studien.
IHC vist at MAb # 3937 hovedsakelig farget RC epitel og farget noen stroma-forbundet celler svakt. Omvendt, R4 var hovedsakelig begrenset til RC stroma-assosierte celler med meget svak epithelial farging (fig. 1). Viktigere, i mange tilfeller differensial fargemønstre av # 3937 og R4 ble observert ved anvendelse av seriesnitt fra samme TMA, noe som indikerer at uPAR
E og uPAR
S ble uttrykt forskjellig. For eksempel, i noen tilfeller, ble uPAR overuttrykt i både epitel og stroma (figur 1a 1f). Å sammenligne fordelingen mellom uPAR
E og uPAR
S, ble uttrykket nivåer vurderes ut fra fargeintensitet (fig 2a . 2b) for både den sentrale og invasiv tumor foran. I den sentrale svulst, 33% (89/268) vev kjernene hadde tilnærmet lik ekspresjon av uPAR
E og uPAR
S, 48% (128/268) hadde høyere ekspresjon av uPAR
E og 19% (51/268) hadde høyere uttrykk av uPAR
S. Sammenlignbare forhold ble observert i invasiv tumor foran der 31% (106/338) hadde lignende uPAR
E og uPAR
S uttrykk, 41% (137/338) hadde høyere uPAR
E og 28% ( 95/338) hadde høyere uPAR
S
Bilder i rekker (dvs. (a) . (b) eller (c) og amp, (d) eller (e) (B) representerer sterkt uttrykk av både uPAR
E og uPAR
S. (C) (D) eksemplifisere delvis uttrykk for uPAR
E og sterk uPAR
S, henholdsvis. Omvendt, (e) og amp; (F) viser sterk uPAR
E og delvis uPAR
S, henholdsvis
Peritumoral betoning av uPAR (dvs. uPAR
PT;. UPAR uttrykk i stroma-assosiert celler og konsentrert rundt tumoren epitelet) representert i (c), farget med R4.
uPAR i RC vev var sterkt uttrykt i det invasive svulster fronten i forhold til midtpartiet for både epiteliale og stromale steder, konsistent med andre krefttyper [6,7]. En Wilcoxon matchet par signerte rekkene test viste at fargeintensitet både uPAR
E og uPAR
S var signifikant høyere ved invasiv foran i forhold til den sentrale svulst plassering (uPAR
E, n = 255, p 0,001; uPAR
S, n = 257, p. 0,001)
pasientoppfølging
Ved utgangen av studien (desember 2011), av de 363 pasientene som hadde en informativ TMA /IHC resultat på uPAR
E eller uPAR
S, 243 var døde, 111 hadde blitt fulgt i mellom 103 og 246 måneder (median 171 måneder) og 9 hadde vært tapt for oppfølging etter en median på 56 måneder. Av de avdøde pasienter, 117 døde av CRC, 117 av andre årsaker og 9 fra ukjente årsaker.
uPAR
E og overlevelse i scene B svulster
Sentral-regionen. For etapper B og C kombinert, ble sterkere uPAR
E farging assosiert med dårligere overlevelse (p = 0,004). Men når stratifisert på scenen, denne foreningen vedvarte sterkt for trinn B (p = 0,002), men forsvant for stadium C (p = 0,589). Dette indikerer at den prognostiske betydningen av uPAR
E ble begrenset til scenen B pasienter. Derfor ble bare sammenhengen mellom uPAR
E og overlevelse av scenen B pasienter analyseres videre. Slik det ble ikke observert noen signifikant overlevelse forskjell mellom de svake og moderate flekker kategorier, ble disse kombineres for å danne en enkelt kategori «mellomliggende». Overlevelse signifikant dårligere i mellomgruppe enn den negative gruppen (p = 0,035), men ikke signifikant forskjellig mellom middels og sterke grupper (p = 0,206). Således, idet sistnevnte ble slått sammen til en enkelt positiv uPAR
E-gruppe. Kaplan Meier-analysen viste at pasienter i uPAR
E positiv gruppen fikk vesentlig dårligere total overlevelse enn de i uPAR
E negativ gruppe (figur 3a;. P = 0,006). Multivariat analyse viste at uPAR
E i den sentrale svulsten var en uavhengig negativ prognostisk indikator på total overlevelse i fase B RC pasienter etter justering for andre prognostiske variabler (HR 1.9 [95% CI 1.1 til 3.1] Wald-p 0,014) ( Tabell 2)
i fase B pasienter, (a). total overlevelse var signifikant redusert med uPAR
E positive i det sentrale området av svulst (n = 125) og (b): med sterk uPAR
E i invasiv foran tumorer (n = 168). I fase C-pasienter, (c): sterk uPAR
S i invasive foran tumor (n = 179) var signifikant assosiert med lengre total overlevelse. (D): Positive uPAR
PT i invasiv foran tumor (n = 179) ble også signifikant assosiert med lengre total overlevelse
Invasive front.. For trinn B og C sammen, var det ingen signifikant sammenheng mellom uPAR
E og total overlevelse (p = 0,179). Pasienter med stadium C svulster hadde ingen sammenheng (p = 0,848), men
p
-verdi nærmet betydning i trinn B (p = 0,087). I tilfelle det siste resultatet var en funksjon av små prøvenumrene i noen kategorier, dataene ble re-undersøkt ved å kombinere negativ, svak og moderat farging, som deres tilknytning til total overlevelse ikke signifikant forskjellig (p = 0,294). Kaplan Meier-analysen av uPAR
E uttrykk i den kombinerte gruppen viste pasienter med sterk ekspresjon av uPAR
E hadde en signifikant dårligere overlevelse (p = 0,017) (Fig. 3b). Dette vedvarte etter multivariabel analyse justering for andre prognostiske variabler (HR 1.5 [95% CI 1,1-2,3] Wald-p 0,031) (tabell 2).
uPAR
S på invasiv foran og overlevelse i scenen C svulster
Evaluering av uPAR uttrykk i RC stroma-forbundet celler benyttes to ulike tilnærminger. For det første ble samlet stromal fargeintensitet scoret som 0, 1, 2 og 3 (fig. 2b), på samme måte som uPAR
E. Sekundært nærvær av peritumoural betoning, ble (uPAR
PT uPAR-ekspresjon i stroma men konsentrert rundt de tumorceller) sammenlignet med dens fravær (figur 2c).
sentrale region.. Total overlevelse var ikke signifikant relatert til uPAR
S enten for trinn B og C kombinert (p = 0,492), stadium B alene (p = 0,071) eller stadium C alene (p = 0,436). Tilstedeværelsen eller fraværet av uPAR
PT i den sentrale tumoren viste ingen signifikant sammenheng med pasientens overlevelse.
Invasiv foran. uPAR
S ble ikke signifikant assosiert med total overlevelse for kombinerte fasene B og C (p = 0,226) eller trinn B alene (p = 0,641). Men innenfor stadium C, var det en generell tendens til økende overlevelse som uPAR
S uttrykk gått fra negativ til sterk (p = 0,015). Det var ingen overlevelse betydning mellom de negative og moderat, mens det var en signifikant forskjell mellom moderat og sterk (p = 0,031). Derfor negativ til moderat farging ble slått sammen til en enkelt kategori og sammenlignet med sterk ekspresjon. Sterk uPAR
S uttrykk var signifikant assosiert med lengre total overlevelse (fig 3c,. P = 0,009). Etter justering for andre prognostiske variabler denne forskjellen vedvarte (HR 0.6 [95% KI 0,4 til 0,9] Wald-p = 0,007) (tabell 3). Videre scenen C pasientgruppen med uPAR
PT stede i invasiv foran tumorvev viste også en lengre overlevelsestid sammenlignet med pasienter uten uPAR
PT (Fig 3d,. P = 0,017) på multivariable analyser (HR 0,7 [95% CI 0,5-0,9] Wald-p 0,016) (tabell 3).
uPAR på de tilstøtende ikke-neoplastiske slimhinnevevet
For epithelia uPAR uttrykk på tilstøtende ikke -neoplastic slimhinnevev (n = 312), 36 tilfeller viste sterk uPAR uttrykket (19 i trinn B og 17 i trinn C), 58 tilfellene hadde moderat ekspresjon (28 i trinn B og 30 i trinn C), 81 tilfellene hadde svak ekspresjon (41 i trinn B og 40 i trinn C) og 137 tilfeller var negative (68 i trinn B og 69 i trinn C). I trinn B, var det ingen sammenheng mellom fargeintensitet og overlevelse (p = 0,700) mens det i trinn C var det ingen forskjell i overlevelse mellom de negative, svak og mellomprodukt. Den eneste signifikant assosiasjon var lengre overlevelse for sterk enn for negativ (p = 0,018), men som dette var basert på bare 17 tilfeller med sterk farging, virket det unormale og kan være en type 1 feil som oppstår fra denne lite antall. uPAR-ekspresjon i stroma var nesten fraværende, med negativ ekspresjon i 320 tilfeller (156 i trinn B og 164 i trinn C) og bare moderat ekspresjon i 9 tilfeller (6 i trinn B og 3 i trinn C), utilstrekkelige uPAR ekspresjonssystemer prøver var tilgjengelig for en omfattende statistisk analyse.
Diskusjoner
Selv om den prognostiske betydningen av uPAR i kreft har blitt grundig studert, betydelige avvik har gjort mye av arbeidet mangelfulle. To store problemer forblir uløst: for det første, avviket om celletypene hvor uPAR er overuttrykt (dvs. uPAR
E eller uPAR
S), og for det andre, den prognostiske relevansen av uPAR i forskjellige celletyper og forskjellige stadier av tumorprogresjon. I denne studien har vi adressert den første paradoks ved å vise at uPAR-ekspresjon i forskjellige celletyper kan bli detektert ved hjelp av to-epitop-spesifikke anti-humant uPAR MAb # 3937 og R4. Disse antistoffene avgrenset mellom uPAR
E og uPAR
S uttrykk i RC vev, viser antigen uttrykk kan være forskjellig påvises i ulike celletyper og kreft steder i samme RC vev. Ved undersøkelse av uPAR
E og uPAR
S fra 349 stadium B eller C RC vev, var vi i stand til å tyde den andre kontroverser, avsløre at forhøyet uPAR
E i både den sentrale regionen og invasiv tumor foran negativt korrelert med stadium B total overlevelse, mens forhøyet uPAR
S på invasiv foran positivt korrelert med stadium C total overlevelse.
er en viktig faktor for å bli vurdert erkjennelsen av forskjellig uPAR epitoper av ulike antistoffer, ikke bare for deteksjon i ulike celletyper, men også for bestemmelse av den potensielle kliniske relevansen av prognostisk uPAR. Det er flere anti-uPAR polyklonale antistoffer (PABS) og MAbs som har blitt utviklet og studert mye i kliniske applikasjoner [6]. Av disse er MAb # 3937 (som # 3936) og R4 (som R2) som brukes oftest for uPAR
E og uPAR
S påvisning henholdsvis og stå i sentrum av ulike resultater som ble oppnådd ved forskjellige laboratorier. Flere faktorer kan forklare det spesielle ved disse forskjellige antistoffer, det primære er å binde seg til forskjellige «tilgjengelig» epitoper som gjenspeiler potensielt ulike rollene til uPAR i hver celletype. Som uPAR har 42 kjente samvirkende partnere [5], er det også mulig at antistoff-epitoper kan bli maskert av andre uPAR samvirkende partnere i forskjellige celletyper. Den multifunksjonelle natur uPAR er en funksjon av dens interactome [3,5], og derfor uPAR påvist ved forskjellige epitop-spesifikke MAbs kan ha forskjellige samvirkende partnere, som kan uttrykke divergerende funksjoner i adskilte celletyper. Dette konseptet er støttet av det faktum at den populasjonen av oppløselig uPAR (Supar) i spesifikke celletyper har vist seg diametralt endret fargemønstre reflekterende funksjonelle forskjeller som et resultat av strukturelle variasjoner [25].
