Abstract
Bakgrunn
Median overlevelse er 10 måneder og to års overlevelse er 20% i metastatisk ikke-småcellet lungekreft (NSCLC) behandlet med platinabasert kjemoterapi. En liten brøkdel av ikke-plateepitelkreft lungekreft båtplass EGFR mutasjoner, med forbedret resultat for gefitinib og erlotinib. Eksperimentelle bevis tyder på at BRCA1 overekspresjon øker følsomheten for docetaxel og motstand mot cisplatin. RAP80 og Abraxas er i samspill proteiner som danner komplekser med BRCA1 og kunne modulerer virkningen av BRCA1. For ytterligere å undersøke effekten av EGFR mutasjoner og BRCA1 mRNA nivåer på utfallet i avansert NSCLC, utførte vi en prospektiv ikke-randomisert fase II klinisk studie, testing hypotesen om at tilpasset behandling ville gi bedre resultat enn ikke-tilpasset behandling. I en eksplorativ analyse, vi undersøkte også effekten av RAP80 og Abraxas mRNA nivåer.
metodikk /hovedfunnene
Vi har behandlet 123 metastatisk ikke-plateepitel lungekarsinom pasienter ved hjelp av en tilpasset tilnærming. RNA og DNA ble isolert fra microdissected prøver fra parafin-embedded svulstvev. Pasienter med EGFR mutasjoner fikk erlotinib, og de uten EGFR mutasjoner fikk kjemoterapi med eller uten cisplatin basert på deres BRCA1 mRNA nivåer: lav, cisplatin pluss gemcitabin; middels, cisplatin pluss docetaxel; høy, docetaxel alene. En eksplorativ analyse undersøkt RAP80 og Abraxas uttrykk. Median overlevelse skredet 28 måneder for 12 pasienter med EGFR mutasjoner, og var 11 måneder for 38 pasienter med lav BRCA1, 9 måneder for 40 pasienter med mellomliggende BRCA1 og 11 måneder for 33 pasienter med høyt BRCA1. To års overlevelse var 73,3%, 41,2%, 15,6% og 0%, henholdsvis. Median overlevelse var påvirket av RAP80 uttrykk i de tre BRCA1 gruppene. For eksempel for pasienter med både lav BRCA1 og lav RAP80, skredet median overlevelse 26 måneder. RAP80 var en betydelig faktor for overlevelse hos pasienter som behandles i henhold til BRCA1 nivåer (hazard ratio, 1.3 [95% CI, 1 til 1,7]; p = 0,05).
Konklusjon /Betydning
Kjemoterapi tilpasses etter BRCA1 uttrykk nivåer er assosiert med utmerket median og 2-års overlevelse for enkelte undergrupper av NSCLC pasienter, og RAP80 kan spille en avgjørende modulerende effekt på denne modellen av tilpassede kjemoterapi.
Trial Registrering
ClinicalTrials.gov NCT00883480
Citation: Rosell R, Perez-Roca L, Sanchez JJ, Cobo M, Moran T, Chaib jeg, et al. (2009) Tilpasset Behandling i Non-småcellet lungekreft Basert på EGFR mutasjoner og BRCA1 mRNA uttrykk. PLoS ONE 4 (5): e5133. doi: 10,1371 /journal.pone.0005133
Redaktør: Mikhail V. Blagosklonny, Ordway Research Institute, USA
mottatt: 01.12.2008; Godkjent: 03.03.2009; Publisert: 05.05.2009
Copyright: © 2009 Rosell et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne studien fikk delvis støtte fra Redes de Cancer, Spania (tilskudd RD06 /0020/0056). Finansieringskilde var ikke involvert i innsamling, analyse eller tolkning av data, skriving av rapporten, eller beslutningen om å sende inn for publisering
Konkurrerende interesser:. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer.
Innledning
median overlevelse for pasienter med avansert eller metastatisk ikke-småcellet lungekreft (NSCLC) er bare 10-11 måneder med enten standard cisplatin-basert kjemoterapi [1], [ ,,,0],2] eller tilpasset cisplatin-basert kjemoterapi basert på excision reparasjon kryss utfyller 1 (ERCC1) mRNA uttrykk, [3] og de to-års overlevelse er bare 14-21%. [1], [2], [3]
De to proto-onkogener kjente til å bli mer vanlig mutert i lunge adenokarsinom er K-RAS og EGFR [4]. Lunge cancer som skyldes aktivering av mutasjoner i den epidermale vekstfaktor-reseptor (EGFR) – hovedsakelig enten delesjon i exon 19 eller L858R mutasjon i exon 21 – svare på lite molekyl tyrosinkinaseinhibitorer (gefitinib og erlotinib), [5], [6], [7] med en nylig rapportert median overlevelse til gefitinib på 17,5 måneder. [8] Responsraten var 90% i våre retrospektiv trial undersøke EGFR mutasjoner hos pasienter behandlet med gefitinib, [9] og samlede data fra prospektive studier med gefitinib hos pasienter med EGFR mutasjoner viste en svarprosent på 80%. [10] Men ingen EGFR mutasjoner ble funnet i 454 pasienter med plateepitelkarsinom i lungene. [11]
en voksende mengde bevis indikerer at brystkreft susceptibility gen 1 (BRCA1) confers følsomhet overfor apoptose indusert ved antimikrotubulær medikamenter (paclitaxel og vinkristin), men fremkaller resistens mot DNA-skadende midler (cisplatin og etoposid) og radioterapi. [12], [13], [14], [15] disse pre-kliniske funn støttes av en rekke eksperimentelle modeller i bryst- og eggstokk-kreft celler: induserbar uttrykk for BRCA1 forbedret paclitaxel følsomhet; [16] en short interfering RNA-mediert inaktivering av endogent BRCA1 førte til paclitaxel og docetaxel motstand; [17 ], [18], [19] og rekonstituering av BRCA1-manglende celler med vill-type BRCA1 forbedret følsomhet for paclitaxel og vinorelbin. [17] Denne differensialmodulerende effekt av BRCA1 mRNA-ekspresjon ble også observert i tumorceller isolert fra maligne effusjoner av NSCLC og mage kreftpasienter, hvor BRCA1 mRNA nivåer korrelerte negativt med cisplatin følsomhet og positivt med docetaxel følsomhet [20] To retrospektive studier -. i NSCLC [21] og eggstokkreft [19] pasienter – fant at lave eller middels BRCA1 mRNA nivåer korrelert med en betydelig lengre overlevelse etter platinabasert kjemoterapi, [19], [21] mens overlevelsen hos pasienter med høyere BRCA1 uttrykk økt etter taxan-basert kjemoterapi. [19]
BRCA1 er rekruttert til områder av DNA pauser, spiller en sentral rolle i DNA-reparasjon og i cellesyklus sjekkpunkt kontroll. Binding av mellommann for DNA-skade sjekkpunkt 1 (MDC1) protein til fosforylert halen av histon H2AX letter dannelsen av BRCA1 atom foci på dobbel-strand pauser. [22] Den reseptor-assosiert protein 80 (RAP80) fungerer oppstrøms av BRCA1 og er nødvendig for akkumulering av BRCA1 til områder av DNA pauser. [23], [24], [25] Abraxas rekrutterer RAP80 å danne et kompleks med BRCA1. Både Abraxas og RAP80 er nødvendig for DNA-skade reparasjon, og celler utarmet av Abraxas eller RAP80 utstillings overfølsomhet for bestråling. [23]
For å undersøke hvorvidt tilpasse behandlingen kan forbedre utfallet i avanserte NSCLC pasienter, vi har gjennomført en prospektiv ikke-randomisert fase II studie av tilpasset behandling basert på EGFR mutasjonsstatus og BRCA1 mRNA uttrykk nivåer. Vi har valgt å begrense registrering til ikke-squamous cell carcinoma for å maksimalisere muligheten for å administrere erlotinib hos pasienter med EGFR mutasjoner. Pasienter med enten exon 19 delesjon eller mutasjon L858R mottatte erlotinib, mens de med vill-type EGFR fått kjemoterapi basert på BRCA1 nivåer: de med lave nivåer fikk cisplatin pluss gemcitabin; de med middels nivå fikk cisplatin pluss docetaxel; og de med høye nivåer fikk docetaxel alene. I en eksplorativ analyse, vi undersøkte også effekten av RAP80 og Abraxas mRNA nivåer hos disse pasientene.
Resultater
Pasienter
Mellom mars 2005 og juli 2007 totalt 123 pasienter fra 25 sentre ble inkludert i studien (figur 1). Trettifem pasienter ble ekskludert: 3 pasienter hadde ingen tumorceller i biopsien; 5 pasienter hadde mindre enn 50 tumorceller i biopsi, noe som gjør det umulig å sikre korrekte resultater; 19 pasienter var villtype EGFR men med utilstrekkelig tumorprøve etter EGFR vurdering for BRCA1 uttrykk analyse; 2 pasienter nektet å delta; og 6 pasienter ble trukket tilbake av sin lege på grunn av kliniske faktorer som ikke er relatert til studiet. For alle 123 pasienter, RNA isolering og PCR forsterkning var vellykket. I gjennomsnitt, resultatet av genetiske analyser ble tilgjengelig i 8 dager (range, 6-11 dager). Median antall sykluser med kjemoterapi administrert i BRCA1 gruppene var 5 (range, 1,8). Median oppfølging var 8 måneder (range, 1-28 måneder). Tolv pasienter hadde EGFR mutasjoner og ble tildelt motta erlotinib (EGFR gruppe). Av de 111 pasientene med villtype EGFR, 38 var i laveste tercile av BRCA1 uttrykk og ble tildelt motta cisplatin pluss gemcitabin (lav BRCA1 gruppe), 40 var i mellom tercile og ble tildelt motta cisplatin pluss docetaxel (middels BRCA1 gruppe), og 33 var i høyeste tercile og ble tildelt å motta docetaxel alene (høy BRCA1 gruppe) (figur 1).
Mellom mars 2005 og juli 2007 totalt 123 pasienter fra 25 sentre ble innmeldt i studien. Grunner for pasienten tilbaketrekking: 3 pasienter hadde ingen tumorceller i biopsien; 5 pasienter hadde mindre enn 50 tumorceller i biopsi, noe som gjør det umulig å sikre korrekte resultater; 19 pasienter var villtype EGFR men med utilstrekkelig tumorprøve etter EGFR vurdering for BRCA1 uttrykk analyse; 2 pasienter nektet å delta; og 6 pasienter ble trukket tilbake av sin lege på grunn av kliniske faktorer som ikke er relatert til studiet. De to pasientene i EGFR gruppen som ikke ble evaluert for respons døde innen en måned inn i studien; de 13 pasientene i BRCA1 som ikke ble evaluert for respons mottas . 3 behandlingssykluser
De kliniske kjennetegn ved de fire gruppene er vist i tabell 1 og tabell S1. Median alder for alle pasienter var 60 år. Proporsjonalt flere kvinner enn menn var i laveste tercile av BRCA1 uttrykk. EGFR mutasjoner ble hyppigere observert hos ikke-røykere (P = 0,03) og kvinner (p = 0,0001). Femti-fem prosent av pasientene hadde en funksjonsstatus på 1, og 83% hadde stadium IV sykdom. Sytten prosent av pasientene hadde hjernemetastaser. Pasienter med EGFR mutasjoner hadde en median på to metastaser, sammenlignet med en side hos pasienter med villtype EGFR (tabell S2).
Den samlede svarprosenten var 90% for EGFR-gruppen, 25 % for lav BRCA1 gruppen, 45,7% av det mellomliggende BRCA1 gruppen, og 41,9% for den høye BRCA1 gruppe (tabell 2). I intent-to-treat analyse, svarprosenten var 75% for EGFR gruppen, 21,1% for lav BRCA1-gruppen, 40% for mellom BRCA1-gruppen, og 39,4% for høy BRCA1-gruppen (tabell 2).
Median overlevelse ble ikke nådd, men overskredet 28 måneder for EGFR gruppen, sammenlignet med 10 måneder (95% KI, 8,5 til 15-5) for pasienter i alle tre BRCA1 grupper. To års overlevelse for pasienter i EGFR gruppen var 73,3% og for alle pasienter i BRCA1 gruppene var det 26,7%. For pasienter i lav BRCA1 gruppe, median overlevelse var 11 måneder (95% KI, 1,1 til 20,9) og 2-års overlevelse var 41,2%. For de i mellom BRCA1 gruppe, median overlevelse var 9 måneder (95% KI, 05.04 til 12.06) og 2-års overlevelse var 15,6%. For pasienter i høy BRCA1 gruppe, median overlevelse var 11 måneder (95% KI, 8,2 til 13,8) og 2-års overlevelse var 0% (tabell 2, figur 2).
Median overlevelse ble ikke oppnådd for 12 pasienter i EGFR-gruppen og 11 måneder for 38 pasienter i lave BRCA1 gruppe, 9 måneder for 40 pasienter i den mellomliggende BRCA1 gruppe, og 11 måneder for 33 pasienter i høy BRCA1 gruppen (p = 0,01) (se tabell 2) .
Median tid til progresjon var 13 måneder (95% KI, 7,7 til 18,3) i EGFR-gruppen, sammenlignet med 6 måneder (95% KI, 4,7 til 7,2) for pasienter i alle tre BRCA1 grupper. For pasienter i de lave og middels BRCA1 grupper, tid til progresjon var 5 måneder (95% KI, 02.07 til 07.03). For pasienter i høy BRCA1 gruppe, tid til progresjon var 8 måneder (95% KI, 05.01 til 10.09) (tabell 2, figur S1).
RAP80 og Abraxas mRNA transkripter
Basert på resultatene fra eksperimentelle modeller [23], [24], [25], et unders analyse av sammenhengen mellom BRCA1, RAP 80 og Abraxas mRNA-ekspresjon ble utført i 86 av 111 pasienter uten EGFR mutasjoner for hvem tilstrekkelig tumorvev var tilgjengelig. Pasientens egenskaper for disse 86 pasienter var lik dem fra alle 111 pasienter; signifikant flere kvinner enn menn hadde lav BRCA1 uttrykk (P = 0,009). Responsen var signifikant høyere hos pasienter med middels og høye BRCA1 nivåer (P = 0.004). (Tabell S3). En nær korrelasjon ble funnet mellom BRCA1 og RAP 80 nivåer (ρ = 0,27; P = 0,02) og mellom RAP 80 og Abraxas nivåer (ρ = 0,41; P 0,001), men ikke mellom BRCA1 og Abraxas nivåer (ρ = 0,10; P = 0,39).
Median overlevelse var påvirket av RAP 80 nivåer. Hos pasienter med lave BRCA1 nivåer, var median overlevelse ikke oppnådd hos pasienter med lave RAP 80 nivåer, mens det var 8 måneder for pasienter med middels RAP 80 og 7 måneder for de med høy RAP 80 (tabell 3, figur 3). Hos pasienter med mellomliggende BRCA1 nivåer, median overlevelse var 5 måneder hos pasienter med lav RAP 80 nivåer, mens det var 13 måneder for pasienter med middels RAP 80 nivåer og 16 måneder for de med høy RAP 80 nivåer. Hos pasienter med høy BRCA1 nivåer, median overlevelse var 6 måneder hos pasienter med lav RAP 80 nivåer, 12 måneder hos pasienter med middels RAP80 nivåer, og 11 måneder for de med høy RAP 80 nivåer (Tabell 3).
median overlevelse ble ikke nådd for 11 pasienter med lav RAP 80 nivåer, 8 måneder for 9 pasienter med middels RAP 80 nivåer, og 7 måneder for 5 pasienter med høyt RAP 80 nivåer (P = 0,006).
Hos pasienter med lave BRCA1 nivåer, tid til progresjon var 14 måneder hos pasienter med lav RAP 80 nivåer, mens det var 4 måneder for pasienter mellom RAP80 nivåer og 6 måneder for de med høy RAP 80 nivåer (tabell 4, Figur S2). Hos pasienter med mellomliggende BRCA1 nivåer, tid til progresjon var 4 måneder hos pasienter med lave RAP 80 nivåer, mens det var 9 måneder for pasienter med middels RAP 80 nivåer og 6 måneder for de med høy RAP 80 nivåer. Hos pasienter med høy BRCA1 nivåer, tid til progresjon var 2 måneder hos pasienter med lav RAP 80 nivåer, 10 måneder hos pasienter med middels RAP 80 nivåer, og 4 måneder for de med høy RAP 80 nivåer (Tabell 4).
Lignende resultater ble oppnådd når median overlevelse og tid før progresjon ble sammenlignet ifølge Abraxas mRNA-ekspresjonsnivåene (tabellene S4 og S5). En eksplorativ multivariat analyse i de 86 pasienter, med bruk av en Cox proporsjonal farer modell, identifisert ECOG funksjonsstatus og RAP 80 som viktige variabler for overlevelse (hazard ratio: ytelse status 1, 2,72; p = 0,005, RAP 80, 1.3 ; P = 0,05) (Tabell S6). Overlevelse ble ikke påvirket av andre kliniske kjennetegn, typer metastaser, andre kjemoterapi (36 pasienter), eller Abraxas nivåer. Den Cox modell for tid til progresjon viste også at bare allmenntilstand og RAP 80 var signifikante variabler (tabell S7).
Diskusjoner
Mutasjoner i EGFR tyrosin kinase domene indusere lunge adenokarsinom i mus [ ,,,0],26] og en positiv respons på første- og andrelinje gefitinib og erlotinib i avansert NSCLC. [7], [8] i denne studien, har overgått median overlevelse 28 måneder hos 12 pasienter med EGFR mutasjoner som ble behandlet med erlotinib, med en median tid til progresjon på 13 måneder og en to-års overlevelse på 73,3%; disse resultatene er lik funnene i en meta-analyse av prospektive studier med gefitinib hos pasienter med EGFR mutasjoner. [10] Median overlevelse var 11 måneder hos pasienter med lavest BRCA1 uttrykk, behandlet med cisplatin pluss gemcitabin, og to-års overlevelse ble 41,2%, noe som er bra sammenlignet med median og to-års overlevelse oppnådd med gemcitabin pluss cisplatin eller pemetrexed og cisplatin (10.3 måneder og 22%) i en fersk randomisert studie. [2] Hos pasienter med høyest BRCA1 uttrykk, behandlet med docetaxel alene, median overlevelse var 11 måneder, identisk med det som ble oppnådd i en stor fase III studie hos pasienter behandlet med docetaxel pluss cisplatin. [1] Men i vår studie, ingen pasienten var i live på to år, mens i fase III studie , to-års overlevelse var 21% [1] Forbløffende 11 pasienter med lavest uttrykk for både BRCA1 og RAP 80 hadde et utfall lik som oppnås ved pasienter med EGFR mutasjoner som ble behandlet med erlotinib. median overlevelse ble ikke nådd, og tid til å progresjon var 14 måneder (tabell 3, figur 3) .Chemotherapy reaksjon er solid basert på det faktum at DNA-reparasjonsgener krever en serie av molekylære gjenkjennelses trinn som gjør det mulig for DNA-skade respons proteiner for å lokalisere ved og i nærheten av DNA-lesjoner. Binding av mellommann for DNA-skade sjekkpunkt 1 (MDC1) protein til fosforylert halen av histon H2AX (γH2AX) letter dannelsen av BRCA1 atom foci på dobbel-strand pauser indusert ved bestråling eller kjemoterapi. Ved dimerisering med BRCA1-forbundet RING domene (BARD1) protein gjennom RING domene, danner BRCA1 en E3 ubiquitin ligase. Nylig har det blitt vist at RAP 80 mål BRCA1-BARD1 E3 ligase til MDC1-γH2AX-avhengige lysin 63-koblede ubiquitin proteiner på dobbel-strand pauser (anmeldt i Wang Elledge [27]). Tre studier viste at oppheving av RAP 80 redusert dannelse av BRCA1-induserte foci til 28%, [23] 2% [24] og 0%. [25] Videre er BRCA1 uavhengig Abraxas og RAP 80 foci formasjon. [ ,,,0],23] Vi har derfor en teori om at hvis RAP 80 ble hevet, kan det føre til resistens mot cisplatin-basert kjemoterapi selv i nærvær av lave BRCA1 nivåer. Den utforskende vurdering av RAP 80 i denne studien bekrefter sin modulerende effekt på BRCA1 tilpasset modell. For eksempel, median overlevelse hos pasienter med lavest BRCA1 uttrykket minskes når RAP-80 ekspresjon økes: 8 måneder med mellomliggende RAP 80 nivåer og 7 måneder med høy RAP 80 nivåer (tabell 3). Overekspresjon av BRCA1 overfører følsomhet for docetaxel og paklitaxel [12], [17], [19], [20] pasienter med de høyeste nivåene av BRCA1, behandlet med docetaxel, hadde en median overlevelse på 11-12 måneder når RAP80 uttrykk var også høy, men bare seks måneder når RAP 80 uttrykk var lav (tabell 3). Pasienter med mellomliggende BRCA1 nivåer, behandlet med cisplatin pluss docetaxel, hadde en total gjennomsnittlig overlevelsestid på 9 måneder, som økte til 13-16 måneder når RAP-80-nivåene var middels eller høy (tabell 3). Disse resultater kan forklares ved pre-kliniske funn at RAP 80 er i stand til å translocate til bestråling induserte foci i HCC1937 celler som uttrykker en avkortet BRCA1 som er i stand til å migrere til atom foci. [28] Denne viser at RAP-80 kunne erstatte BRCA1 DNA-reparasjon funksjon i celler som mangler BRCA1. Derfor, selv om ulike platina dubletter viser den samme [29] – eller litt annerledes [2] – overlevelse generelle forskjeller kan bli funnet når du tilpasser kjemoterapi basert på en modell av BRCA1 og RAP 80.
I denne undersøkelsen , ingen korrelasjon ble funnet mellom BRCA1 og Abraxas mRNA uttrykk. Men det var en indikasjon på at uttrykket nivåer av Abraxas modulere effekten av BRCA1. For eksempel pasienter med lavest BRCA1 uttrykk, behandlet med cisplatin pluss gemcitabin, oppnådd en median overlevelse på 18 måneder og tid til progresjon på 11 måneder når Abraxas nivåer var lav (tabell S4).
I tillegg til den potensiell prediktiv rolle BRCA1, confers BRCA1 overekspresjon aggressiv oppførsel i transgene modeller av små celle og plateepitel celle lungekarsinom, samt i en undergruppe av lunge adenokarsinomer skjuler den iboende T /T-antigen kreft signatur. [30] dårlig prognose har også vært forbundet med BRCA1 overekspresjon tidlig NSCLC. [31] i denne studien, to-års overlevelse var 41% hos pasienter med de laveste nivåene av BRCA1, 16% hos de med middels nivå og 0% hos de med de høyeste nivåene.
mekanismene for BRCA1 overekspresjon eller nedregulering i NSCLC gjenstår å avklare. Imidlertid har det nylig blitt vist at DNA-bryter raskt aktivere heterochromatin protein 1-β (HP1-β), som fremmer histon H2AX fosforylering, initiere BRCA1 signaleringsanordning for DNA-reparasjon. [32] Intriguingly, kasein kinase 2 fremmer mobilisering av HP1-β og er assosiert med dårlig prognose i NSCLC. [33] Selv om BRCA1 metylering er observert i duktalt brystkreft, er det bare funnet i 4% av NSCLCs. [34] Low BRCA1 ekspresjon i tumorer kan skyldes tap av histone metyltransferaser, noe som fører til redusert kromatin H3 metylering i lysin 9, med påfølgende nedregulering av HP1-β. [35]
i denne fase II, ikke-randomisert studie, den genetiske faktoren og behandlingsforskjell er helt co-eksisterende, og det bør utvises forsiktighet ved tolkning av resultatene. Imidlertid indikerer utforskende analyse at det er noen bevis for å skreddersy kjemoterapi basert på BRCA1 og RAP 80 nivåer. Videre, i en fersk studie av 96 scene IV NSCLC pasienter som behandles med docetaxel pluss gemcitabin, observerte vi at så BRCA1 mRNA nivåer økt, sannsynligheten for respons økt og risikoen for progresjon redusert. For pasienter med de høyeste BRCA1 nivåer, svarprosenten var 58,6%, sammenlignet med 13,8% for de med middels nivå og 27,6% for de med de laveste nivåene. [36] Basert på disse funnene og de av denne studien, den spanske Lung Cancer Group er nå å endre protokollen for en planlagt internasjonal fase III studie i avansert NSCLC å inkludere tilpasning basert på RAP 80 samt BRCA1 mRNA uttrykk. Pasienter i kontrollgruppen får cisplatin pluss docetaxel og de i den eksperimentelle armen får kjemoterapi basert på RAP 80 og BRCA1 mRNA nivåer: lav RAP 80 nivåer (uavhengig av BRCA1 nivåer), cisplatin pluss gemcitabin; middels eller høy RAP 80 og lav eller middels BRCA1, cisplatin pluss docetaxel; middels eller høy RAP 80 og høy BRCA1, docetaxel alene
Materialer og metoder
Protokollen for denne rettssaken er tilgjengelig som tilleggsinformasjon.; se Protocol S1 og protokoll S2.
Etikk uttalelse
Protokollen ble godkjent av hvert senter institusjonelle etikk Review Board, og alle pasienter gitt skriftlig informert samtykke før innmelding.
Pasienter
Vi rekrutterte pasienter til denne fase II prospektiv multisenterstudie basert på screening av EGFR mutasjoner fulgt av BRCA1 mRNA uttrykk analyse i parafin-embedded svulstvev. Klinisk valgbarhet inkludert stadium IIIB med pleuravæske eller stadium IV NSCLC, målbar sykdom ved Response evalueringskriterier i solide tumorer (RECIST), funksjonsnivå 0-2 av Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) kriterier, tilstrekkelig hematologisk, nyre- og leverfunksjon. Hjernemetastaser ble tillatt. Pasienter med plateepitelkreft svulster, før systemisk behandling ved avansert NSCLC eller andre klinisk signifikante kreftformer i fem år var ikke kvalifisert
Pasienter med EGFR mutasjoner -. Enten ekson 19 sletting eller L858R mutasjon – fikk 150 mg daglig oral erlotinib kontinuerlig til progresjon eller utålelige bivirkninger. Hver syklus var 28 dager. Pasienter med vill-type EGFR mottatt tilpasset kjemoterapi basert på BRCA1 mRNA nivåer. Pasienter i den laveste tercile av BRCA1 uttrykk fikk cisplatin 75 mg /m
2 på dag 1 pluss gemcitabin 1250 mg /m
2 på dag 1 og 8. pasienter i mellom tercile fikk cisplatin 75 mg /m
2 på dag 1 pluss docetaxel 75 mg /m
2 på dag 1. Pasienter i høyeste tercile fikk docetaxel 75 mg /m
2 på dag 1. All kjemoterapi ble gjentatt hver tredje uke for maksimalt seks sykluser med mindre det var tidligere tegn til sykdomsprogresjon eller utålelige bivirkninger.
Baseline vurdering inkludert en medisinsk historie, fysisk undersøkelse og kreft målinger av palpable lesjoner samt lesjoner vurderes av computertomografi skanninger. Grunnlinjen vurderingsmetode ble gjentatt annenhver syklus, og deretter hver sjette uke inntil sykdomsprogresjon.
Molecular analyserer
svulstvev innsamling og laser capture mikrodisseksjon.
BRCA1, RAP80 og Abraxas genekspresjon og EGFR mutasjoner ble analysert i RNA og DNA isolert fra parafininnstøpte tumorvev. For hver tumorprøve et hematoksylin /eosin farget skive ble analysert ved vår patolog for å velge tumorområdet. To 5-micron skiver ble montert på spesialglass (PEM-Membran lysbilder, Palm, Oberlensheim, Tyskland) for laser capture mikrodisseksjon (CAPmover Microdissector, Carl Zeiss Microimaging, Barcelona, Spania) for å sikre et minimum av 90% av tumorceller. Ett lysbilde ble brukt for RNA isolering og andre ble brukt for DNA isolering.
genekspresjonsanalyse. Ble utført
genekspresjonsanalyser i RNA isolert fra svulsten vevsprøver. cDNA ble syntetisert ved anvendelse av M-MLV retrotranscriptase enzym. Mal cDNA ble innført i Taqman Universal Master Mix (AB, Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) med spesifikke primere og probe for hvert gen (tabell S8). De primer og probe sett ble utformet ved hjelp Primer Express 2.0-programvare (AB) og RefSeq sekvenser (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=gene). Kvantifisering av genuttrykk ble utført ved hjelp av ABI Prism 7900HT Sequence Detection System (AB).
EGFR mutasjonsanalyse.
Ved isolering av DNA fra microdissected vev, ble materialet inkubert med proteinase K og DNA ble ekstrahert med fenol-kloroform og etanolutfelling. Primere for PCR-amplifikasjon i kjedede reaksjoner for eksoner 19 og 21 av EGFR er vist i bære informasjonen. Mutasjoner ble analysert ved hjelp av to metoder:. DNA-sekvense og lengde analyse av fluorescensmerkede PCR-produkter for EGFR strykninger i ekson 19, og sekvensering og 5 «nukleaseaktiviteten analysen (TaqMan) for EGFR mutasjon i ekson 21 (L858R)
(for ytterligere informasjon om de molekylære analyser, se tekst S1).
Statistisk analyse
Pasientene ble delt inn i grupper basert på terciles av BRCA1 uttrykk ettersom denne divisjonen er mindre utsatt for skjevhet i flere sammenligninger. Cut-off poeng for BRCA1 terciles ble hentet fra den spanske Lung Cancer Gruppe data base, som omfatter kliniske og genetiske egenskapene til mer enn 600 spanske lungekreftpasienter. Svarene ble registrert i henhold til RECIST kriterier. Median tid til progresjon og total overlevelse ble beregnet fra starten av behandlingen til den første dokumenterte sykdomsprogresjon eller død, henholdsvis.
For å sammenligne kvantitative variabler blant pasienter i hver av behandlingsgruppene, for å utforske assosiasjoner mellom variabler innenfor hver gruppe, og å studere mulig sammenheng mellom baseline og svar, vi brukte parametriske tester (t-test eller ANOVA) eller tilsvarende ikke-parametriske tester (U Mann-Whitney, Kruskall Wallis) når normalitet ikke holder . Den normalitet av kontinuerlige variabler ble sjekket med Kolmogorov-Smirnov test. For å sammenligne kategoriske variabler og svarprosenter med sine 95% CI’er blant behandlingsgruppene, brukte vi enten tosidig Fishers eksakte test eller Chi-kvadrat test.
Foreningen av risikofaktorer med tid til -event endepunkter ble analysert med tosidig logrank test, og Kaplan-Meier metoden ble brukt til å plotte den tilsvarende tid til progresjon og overlevelseskurver. En univariate Cox regresjonsanalyse, med hazard ratio og deres 95% CI’er ble brukt for å vurdere sammenhengen mellom hver potensiell prognostisk faktor og overlevelse og tid til progresjon. Disse faktorene ble da inkludert i en multivariat Cox regresjonsmodell for å vurdere selvstendig betydning for hver variabel på overlevelse og tid til progresjon. Sannsynligheten ratio test ble brukt for å vurdere godheten av passform, og Wald test ble brukt til å vurdere koeffisienten betydning. For potensielle multiple sammenligninger, ble p-verdiene korrigert med Bonferroni korreksjon.
Åtti seks av de 111 pasienter uten EGFR mutasjoner for hvem tilstrekkelig tumorvev var tilgjengelig ble inkludert i en unders sub-analyse av forholdet mellom BRCA1, RAP80 og Abraxas uttrykk. Spearmans rank test ble benyttet for å vurdere sammenhengen mellom BRCA1, RAP80 og ABRAXAS mRNA uttrykk.
Alle statistiske beregninger ble utført med SPSS programvare statistikkpakke, versjon 15.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) og S-PLUS 6,1. Tosidige p-verdier på mindre enn 0,05 ble betraktet som signifikant.
Hjelpemiddel Informasjon
Tekst S1.
Supplemental tekst
doi: 10,1371 /journal.pone.0005133.s001 plakater (0,04 MB DOC)
Tabell S1.
Clinicopathological egenskaper, genuttrykk nivåer, EGFR mutasjonsstatus og utfall for alle pasienter
Doi: 10,1371 /journal.pone.0005133.s002 plakater (0,07 MB XLS)
Tabell S2.
Typer metastaser
Doi: 10,1371 /journal.pone.0005133.s003 plakater (0,05 MB DOC)
tabell S3.
Kjennetegn på 86 pasienter hvor rap 80 og Abraxas ble analysert
doi: 10,1371 /journal.pone.0005133.s004 plakater (0,07 MB DOC)
Tabell S4.
Median overlevelse i henhold til nivåer av BRCA1 og Abraxas
doi: 10,1371 /journal.pone.0005133.s005 plakater (0,03 MB DOC)
Tabell S5.
Tid til progresjon i henhold til nivåer av BRCA1 og Abraxas
doi: 10,1371 /journal.pone.0005133.s006 plakater (0,03 MB DOC)
Tabell S6.
multivariabel COX-modellen for å overleve med BRCA1 og RAP 80 som kontinuerlige variabler
Doi: 10,1371 /journal.pone.0005133.s007 plakater (0,03 MB DOC)
Tabell S7.
multivariabel COX modell for tid til progresjon med BRCA1 og RAP 80 som kontinuerlige variabler
Doi: 10,1371 /journal.pone.0005133.s008 plakater (0,03 MB DOC)
Tabell S8.
Primere og prober som brukes i genuttrykk analyser
doi: 10,1371 /journal.pone.0005133.s009 plakater (0,04 MB DOC)
Figur S1.
tid til progresjon i henhold til behandlingsgruppen. Tid til progresjon var 13 måneder i EGFR gruppen, 5 måneder i de lave og middels BRCA1 grupper og 8 måneder i høy BRCA1-gruppen (se tabell 2)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0005133.s010
(8,92 MB TIF)
Figur S2.
Tid til progresjon for pasienter i lav BRCA1 gruppen ifølge RAP 80 uttrykk nivåer. Tid til progresjon var 14 måneder for pasienter med lav RAP 80 nivåer, 4 måneder for de med middels RAP 80 nivåer og 6 måneder for de med høy RAP 80 nivåer (se tabell 4)
doi:. 10,1371 /journal.pone .0005133.s011 product: (10.31 MB TIF)
Protocol S1.
Trial Protocol
doi: 10,1371 /journal.pone.0005133.s012 plakater (1,12 MB PDF)
Protocol S2.
