Abstract
Mål
For å undersøke den kliniske betydningen av uttrykket av MHC klasse i kjederelaterte gen A (MICA) hos pasienter med avansert ikke-småcellet lungekreft og utforske forholdet mellom MICA uttrykk og effekt av cytokin-indusert killer cell (CIK) terapi for behandling av avansert ikke-småcellet lungekreft .
Metoder
Vi innhentet data på 222 pasienter med avansert ikke-småcellet lungekreft, inkludert data om MICA uttrykk, alder, kjønn, ECOG score, patologisk typen, scene, behandlingshistorie ( inkludert 38 pasienter som fikk autolog CIK celle infusjon) og total overlevelse (OS). MICA ekspresjon i lungekreft vevet ble evaluert ved immunhistokjemisk farging. Analyser av MICA uttrykk, og CIK terapi forening med overlevelses utfall ble utført ved hjelp av Cox proporsjonale modeller, Kaplan-Meier metoder, og log-rank test.
Resultat
s
MICA ble uttrykt i både membranen og cytoplasma. MICA uttrykk korrelert med stadium av lungekreft, ECOG score, kjønn og alder. Multivariat Cox regresjonsanalyse viste at uttrykket av MICA var en uavhengig prognostisk faktor av avansert ikke-småcellet lungekreft (p = 0,002). I subgruppeanalyse, fordelt vi de 222 pasientene i CIK og kontrollgrupper. I CIK gruppen, medium OS (MOS) av pasienter med høy uttrykk for MICA var lengre enn hos dem med lav uttrykk for MICA (27 måneder kontra 13 måneder). I kontrollgruppen, MOS hos pasienter med et høyt uttrykk for MICA var kortere enn hos pasienter med lav MICA uttrykk (9 mnd vs 18 måneder). COX regresjonsanalyse viste at MICA uttrykket påvirker effekten av CIK terapi (p 0,0001).
Konklusjon
1) Den høye uttrykk for MICA er en av indikatorene på en dårlig prognose for avanserte ikke-småcellet lungekreft pasienter. 2) Den høye uttrykk for MICA kan være en av de prediktive faktorer for vellykket CIK terapi
Citation. Chen Y, Lin G, Guo ZQ, Zhou Zf Han Zy, Ye Yb (2013) Effekter av MICA uttrykk på prognosen for avansert ikke-småcellet lungekreft og effekt av CIK Therapy. PLoS ONE 8 (7): e69044. doi: 10,1371 /journal.pone.0069044
Redaktør: Alfons Navarro, Universitetet i Barcelona, Spania
mottatt: 2 mars 2013, Godkjent: 05.06.2013; Publisert: 23.07.2013
Copyright: © 2013 Chen et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater unrestrict`ed bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering.: prosjektet ble støttet av Stiftelsen for unge forskere fra Fujian Provincial Department of Health, Kina. (Grant No. 2011-1-24). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
lungekreft er fortsatt den ledende årsak til kreft-relaterte dødelighet i verden, og om lag 1,4 millioner mennesker er diagnostisert med lungekreft hvert år [1]. Omtrent, er 85% av alle lungekreft tilfeller kategorisert som ikke-småcellet lungekreft (NSCLC), og mer enn 50% av NSCLC pasienter har avansert lokal invasjon og /eller fjernmetastaser. I det siste tiåret, har mange forskere fokusert på de immunologiske aspekter av lungekreft. Immunterapi har nylig blitt den fjerde viktigste behandlingsform for ondartede svulster etter kirurgi, stråling og kjemoterapi [2], [3], [4], [5].
genesis og utviklingen av en svulst er tett relatert til responsen av immunsystemet. Teorien om «immunoediting» har forsøkt å beskrive et komplekst samspill mellom et utviklings svulst med en utviklende immunrespons. Dette antas å omfatte tre faser; en eliminasjonsfase hvor immunsystemet ødelegger svulsten, en likevektsfase hvor tumoren og immunsystem eksistere, og en flukt fase hvor tumoren utvikler seg mekanismer for å unngå ødeleggelse av immunsystemet. Molekyler som er opp eller ned i løpet av regulerte immunoediting kan representere potensielle prognostiske markører [6]. De store histokompatibilitetskompleks klasse I kjederelaterte (MIC) proteiner representerer en ny familie av høyt glykosylert, membran-forankret MHC klasse I-molekyler. Selv om de deler lignende struktur til klassisk klasse I tunge kjeder, MICA og MICB ikke forbinder med β2-mikroglobulin eller med transportøren forbundet med antigen prosessering (TAP) [7]. MIC-proteiner har en begrenset vevsfordeling, og de er sjelden uttrykt av normale celler. Det har blitt rapportert at MICA blir konstitutivt uttrykt av intestinale epitelceller og er bredt uttrykkes i en rekke forskjellige maligniteter. Derfor er det anses å være et tumorassosiert antigen (TAA) [8], [9], [10].
MIC-proteinene fungerer som ligander for den stimulerende C-type lektin-lignende NKG2D-reseptoren, først identifisert på NK-celler, og senere vist å bli uttrykt på CD8 +, αβ og γδ T-celler. NKG2D er en type II-transmembrant glykoprotein som blir uttrykt som en disulfidbundet homodimer på celleoverflaten. Det fungerer som et aktiverende reseptor etter ligandbindende, støtter den cytotoksiske aktiviteten til NK-celler og T-celler mot tumorceller [11], [12]. Tumorceller stabilt transfektert for å uttrykke MICA og murine versjoner av NKG2D ligandene RAE-1 eller H60 ved høye nivåer, blir fjernet av CD8 + T-celler og NK-celler [13], [14], som tyder på at tumorceller som over-uttrykker NKG2D ligander bli mer følsomme for immun celleformidlet cytolyse. Ikke desto mindre, har nylige rapporter identifisert en mekanisme som tumorer synes å være i stand til å snu denne overvåking mekanisme. Løselige former av MICA ble identifisert til å bli utøst av svulster og vist å forårsake nedregulering av NKG2D ved å engasjere med reseptoren på kreft infiltrerende lymfocytter (Tīlss), svekke T-cellefunksjon [15]. Denne studien har planer om å undersøke avanserte NSCLC tilfeller å gjennomføre en retrospektiv analyse utforske sammenhengen mellom MICA uttrykk og prognosen av avanserte NSCLC pasienter.
cytokin-indusert killer (CIK) celler er en unik populasjon av cytotoksiske T-lymfocytter med en karakteristisk CD3 + /CD56 + fenotype, og de kan genereres fra cytokin cocktail-induserte perifere mononukleære blodceller (PBMC). Disse cellene har vist høyere proliferativ og cytolytiske aktiviteter sammenlignet med CD3- /CD56 + lymfokin-aktivert killer celler (LAK) [16]. I dag er CIK-celler gjenkjent som en ny type antitumor effektor-celle, med en sterkere antitumoraktivitet og et bredere spekter av tumorer målrettede enn andre rapporterte antitumor effektorceller. Videre kan CIK celler regulere og generelt forbedre immunforsvaret hos kreftpasienter [17], [18]. Aktuelle data fra fase I /II-studier på de anti-NSCLC effekter av CIK celler er svært begrenset, og de terapeutiske fordelene med CIK celler er ukjent i NSCLC pasienter. Som målrettet og kjemoterapi har gjort materielle gjennombrudd i individuell behandling, bør vi utforske de prediktive faktorer for immunterapi for å forbedre effekten av CIK terapi hos NSCLC pasienter. Noen studier har vist at den NKG2D-reseptoren er sterkt uttrykt på overflaten av CIK-celler, og det forventes at en cytolytisk effekt kan være mediert av interaksjonen mellom NKG2D reseptoren på CIK celler og MICA ligand på kreftceller [19], [20], [21]. Så teoretisk sett kan CIK celler gjenkjenner MICA ligander på lungekreftcellemembraner og drepe kreftcellene. Enten høy MICA ekspresjon kan brukes som en prediktiv faktor på CIK terapi resultatet fremdeles gjenstår å bli bestemt. Vi planlegger å studere MICA uttrykk og effekten av CIK terapi for å finne ut om MICA uttrykk er en prediktiv faktor for vellykket CIK terapi.
Materialer og metoder
Etikk erklæringen
All prosedyrer ble utført i samsvar med Helsinkideklarasjonen deklarasjonen~~POS=HEADCOMP, og med godkjenning fra etikkomiteen i Fujian Provincial Cancer Hospital. Skriftlig informert samtykke ble innhentet fra alle deltakerne.
Pasienter og Prøver
Pasienter (n = 222) med avansert eller lokalt avansert ikke-småcellet lungekreft (III-IV fase) fra 12
th Institutt for Fujian Provincial Cancer Hospital ble registrert mellom desember 2005 og desember 2010. nøkkelen eksklusjonskriterium var mangel på tilstrekkelig vev for immunhistokjemi (IHC). Nøkkel clinicopathological data ble samlet inn fra disse pasientene, inkludert TNM stadium, ECOG score, kjønn og alder. Generell pasientinformasjon er vist i tabell 1. Alle svulster mottatt følgende reseksjon i operasjonssalen eller transbronchial lunge biopsi eller aspirasjon biopsi ble umiddelbart fast og plassert i 10% nøytral bufret formalin, før behandling og innstøping i parafin for å sikre optimal vev fiksering og bevaring for histologisk undersøkelse. De opprinnelige histopatologiske lysbilde sett og rapporter innhentet fra hvert enkelt tilfelle, og disse ble anmeldt for å bekrefte diagnosen og nøyaktigheten av eksisterende data, og å fullføre noen opplysninger mangler i databasen der det er mulig.
Behandlinger
av 222 pasienter 32 nektet behandling etter å ha blitt diagnostisert. De resterende 190 pasienter fikk behandlinger, inkludert kjemoterapi, målrettet terapi, strålebehandling, CIK behandling, og den beste støttende symptomatisk behandling. For tilfeller av lokalavansert lungekreft (22 tilfeller med stadium IIIA, 6 tilfeller med stadium IIIB) behandling modellen besto av preoperative kjemoterapien, kirurgi og postoperativ adjuvant kjemoradioterapi. Fire av tjuefire pasienter fikk fire sykluser av supplerende CIK behandling (tabell 2). Pasientene fikk autolog CIK cellen behandling etter kjemoradioterapi. CIK cellen behandling ble gitt på en måneds mellomrom. Pasientene var kvalifisert for CIK vedlikeholdsbehandling inntil de ikke lenger enige om å fortsette vedlikeholdsbehandling eller inntil sykdomsprogresjon inntraff. For hver behandling ble pasientene gitt en infusjon på minst 1,0 × 10
10 CIK celler.
Avanserte tilfeller (34 tilfeller med stadium IIIB, 128 tilfeller med stadium IV), mottatt behandlingsregimer av kjemoterapi, EGFR-TKI målrettet terapi, og CIK behandling. Kjemoterapi inkluderte første-linje, andre-linje, og tredjelinjebehandling. Førstelinje kjemoterapi brukes tredje generasjons kjemoterapeutika som inneholder en platina to-narkotika diett. Den andre kjemoterapi med mono docetaxel og pemetrexed ble brukt oftere enn tredje kjemoterapi og behandling ble gitt i henhold til sykdomssituasjonen. EGFR-TKI behandling med 250 mg gefitinib qd eller 150 mg erlotinib ble videreført inntil sykdomsprogresjon eller til toksisitet kunne ikke bli tolerert. Det var 34 pasienter med fremskreden sykdom som fikk CIK behandling (Tabell 2). CIK cellen behandling ble gitt på en måneds mellomrom. For hver behandling ble pasientene gitt en infusjon på minst 1,0 × 10
10 CIK celler.
CIK Cell Forberedelse
CIK celler ble isolert og dyrket i henhold til standard protokoll. Perifert blod (50 ml) trekkes fra pasienter ved bruk av heparin som antikoagulant. Mononukleære celler ble isolert ved hjelp av Ficoll-Conray tetthetsgradient-sentrifugering, og deres levedyktighet bestemt ved trypan blå eksklusjon. 2,0 x 10
6 /ml mononukleære celler ble platet ut på seks-brønners skåler og dyrket med medium I inneholdende RPMI 1640 pluss 1,0 x 10
6U /L humant interferon gamma (IFN-γ), 5,0 x 10
5U /L rekombinant human interleukin-2 (IL-2), 10% varmeinaktivert humant serum, 25 mM HEPES, 2 mM L-glutamin, 100 U /ml penicillin og 100 ug /ml streptomycin. Cellene ble inkubert i en fuktet atmosfære med 5% CO
2 ved 37 ° C. Etter 24 timer ble 100 ug /l monoklonalt antistoff (MAb) mot CD3 og 1,0 x 10
5U /L-IL-1α ble tilsatt. Etter ytterligere 48 timer ble supernatanten aspirert og cellene ble dyrket i Medium II; Medium I i fravær av INF-γ. Mediet ble skiftet hver tredje dag. Cellelevedyktigheten ble bestemt ved anvendelse av trypan-blå farging. CIK celler ble transfundert tilbake i donorer etter åtte dager med kultur. Alle CIK cellekulturer ble testet med hensyn til forurensning (bakterier, sopp og mykoplasma) gjennom hele studien for å sikre kultur kvalitet og sikkerhet transfusjon.
Fenotype analyse av CIK celler
Fenotypene av dyrkede celler var bestemt ved strømningscytometri (BD FACSCalibur). Cellene ble merket med monoklonale antistoffer (m ABS) som gjenkjenner human CD3, CD4, CD8, CD56, og NKG2D.
Immunhistokjemi
Immunohistokjemisk påvisning av MICA ble utført med en rutine streptavidin-biotin peroksidase teknikk ansette kanin polyklonale anti-MICA antistoff. Rutine parafin seksjonering, avvoksing, og hydrering ved anvendelse av 3% -ig hydrogenperoksyd ble utført for å blokkere endogen peroksidase-aktivitet. Mikrobølgeovn antigen gjenfinning ble gjort før blokkering med føtalt kalveserum i 2 timer. Ca 50 ul (1:25) av kanin-polyklonalt anti-humant MICA ble tilsatt, og blandingen ble inkubert ved 4 ° C over natten. Ca 50 ul biotinylert geite-anti-kanin-IgG sekundært antistoff arbeidsoppløsning ble tilsatt, og blandingen ble inkubert ved 37 ° C i 30 minutter etterfulgt av diaminobenzidin farge. Prøven ble motfarget med hematoksylin, vasket med etanol og saltsyre, mettet med litiumkarbonat til fargen tilbake til blå, og deretter dehydrert med gradient alkohol og xylen før montering med nøytral harpiks.
Utelatelsen av primært antistoff og dens erstatning med PBS ble anvendt som den negative kontroll, og tumor-infiltrerende leukocytter ble benyttet som interne positive kontroller for MICA farging. En del av kolorektal vev som hadde vist seg å være positivt for MICA ble også brukt som en positiv kontroll [22], [23].
Evaluering av farging
To uavhengige patologer undersøkt immunhistokjemi undersøkt lysbilder uten forutgående kunnskap om den kliniske historie av pasientene. MICA uttrykk ble evaluert i henhold til fargeintensitet og scoret som følger. Intensiteten av farging ble klassifisert i fire kategorier: 0 = ingen farging eller bare en uspesifikk bakgrunnsfarge, 1 = lys gul, 2 = gul eller dyp gul, og 3 = brun eller brun. Prosentandelen av positive celler ble bedømt semikvantitativt og klassifisert i fem grupper: 0 = ≤5% positive celler, 1 = 6% -25% positive celler, 2 = 26-50% positive celler, 3 = 51-75% positive celler, og 4 = 76% -100% positive celler. Den histokjemisk score på immunoreaktivitets ble oppnådd ved å legge intensiteten og prosent score. Histochemical skår ble delt inn i to grupper, saker med score til 0-4 ble definert som lav-uttrykk gruppen, og saker med score til 5-7 ble definert som høy-uttrykk gruppe. [23], [24], [25].
Prognose evaluering
total overlevelse (OS) fungerer som gullstandarden i evalueringen av den terapeutiske effekten av tumor terapi, så vi vedtatt OS ved vurdering av prognosen. Pasientene ble fulgt fra dato for diagnose av Stage IIIB /IV sykdom til dødsdato. Pasienter uten kjent dato for død ble sensurert ved tidspunktet for den siste oppfølging.
Statistisk analyse
Statistisk analyse av dataene ble utført ved hjelp av SPSS pakken (versjon 13 for Windows) . Chi-kvadrat test (Fishers eksakte test) og t-test ble brukt for å vurdere forskjellene i kategoriske variabler og kontinuerlige variabler, henholdsvis. Pasienter som død relatert til deres lungekreft ble vurdert i de sykdomsspesifikke overlevelses beregninger. De som døde av ikke-lungekreft relaterte årsaker uten tegn på tilbakefall ble sensurert på tidspunktet for død. Overlevelseskurver ble anslått av Kaplan-Meier-metoden, og forskjeller i overlevelse ble vurdert av log-rank test. Multivariat analyse av Cox proporsjonale farer forholdet modellen ble brukt til å teste betydningen av prognostiske faktorer, inkludert MICA uttrykk, kjønn, alder, histologi, ECOG score, og CIK terapi. En p-verdi 0,05 ble ansett som statistisk signifikant
Resultater
MICA uttrykk
Immunhistokjemisk uttrykk for MICA innenfor lungesvulster var stort sett homogen.. Det kombinert kornet cytoplasma farging med cellemembranen farging. Ingen farging av stroma, ekstracellulær matrise, eller kjerner ble observert, mens tumor infiltrerende leukocytter farget positivt for MICA (figur 1).
Ekspresjon av MICA i normal lunge epitel (A). MICA lav-uttrykk i lunge tumorvev (B), MICA høy-uttrykk i lunge tumorvev (C).
Analyse av MICA uttrykk i de 222 NSCLC tilfeller avdekket at 98,2% av lungesvulster viste positiv farging for MICA. Førtifem (20,3%) av prøvene demonstrerte lys gul farging, 33,8% (n = 75) var gul eller dyp gul, og 44,1% (n = 98) ble brun eller brun farge (tabell 3). En variabel andel av MICA-positive celler ble også observert; 47.3% (n = 105) av tumorene viste utstrakt ekspresjon av MICA positive celler (76% -100%), mens 1,8% (n = 4) av tilfellene viste MICA immunreaktivitet på mindre enn 5% av tumorceller (tabell 4 ).
Karakterisering og fenotyper av CIK celler
De utvidede CIK celler ble analysert ved flowcytometri. Fenotypisk analyse av CIK-celler fra 38 pasienter etter 14 dagers dyrking viste at prosentandelen av CD4 +, CD8 +, CD3-CD56 + CD3 + CD56 + -celler var 45,2 ± 7,5%, 37,1 ± 9,2%, 25,2 ± 9,8% og 18,2 ± 5,6 %, respektivt (figur 2). Vi analyserte uttrykk for NKG2D på in vitro utvidede CIK celler. Vi har funnet at bare 2,6 ± 1,2% av CD4 + T-celler ble NKG2D +, mens de øvrige CIK cellene uttrykte NKG2D. Prosentandelen av NKG2D + i CD8 +, CD3-CD56 +, og CD3 + CD56 + populasjoner var 88,6 ± 5,4%, 97,2 ± 2,1%, og 92,8 ± 3,8%, henholdsvis (figur 3).
Sammenligning av MICA uttrykk med pasient- og kreftegenskaper
histokjemisk score på immunoreaktivitets ble oppnådd ved å legge intensiteten og prosent score. Saker med score til 0-4 ble definert som lav-uttrykk gruppen, og saker med score til 5-7 ble definert som høy-uttrykk gruppe. Den lave utfoldelse gruppen inkluderte 84 tilfeller (37,8%) og høy-uttrykk gruppen inneholdt 138 tilfeller (62,2%). Analyse utnytte histokjemisk poengsum metoden viste statistisk signifikante sammenhenger mellom MICA uttrykk og iscenesettelse av lungekreft, ECOG score, kjønn og alder. Det var ingen signifikant sammenheng mellom MICA uttrykk og patologisk type (tabell 5).
Univariat overlevelsesanalyse
Blant 222 pasienter, var det 160 menn og 62 kvinner og median total overlevelse var 13 måneder, 95% KI (11,918 til 14,082), og 1-års overlevelse og 2-års overlevelse var 52,3% og 19,8%, henholdsvis (figur 4A). Ved univariat analyse, MICA uttrykk, kjønn, alder, TMN scenen, ECOG score, og CIK terapi var alle prediktorer for total overlevelse (alle p 0,05), mens histologisk subtype var ikke (p = 0,544) (Tabell 6). Median overlevelse for pasienter med høyt uttrykk for MICA var betydelig kortere enn de med lav-uttrykk for MICA, p = 0,01 ved log-rank test (figur 4B).
OS i 222 pasienter (A ). OS i den generelle befolkningen og ved MICA uttrykk (B). OS i den generelle befolkningen ved MICA uttrykk og CIK terapi (C).
For å bekrefte betydningen av CIK terapi i behandling av avansert NSCLC med høy uttrykk for MICA, vi delt 222 pasienter i en CIK gruppe og en kontrollgruppe. I subgruppeanalyse mediet OS (MOS) av pasientene i CIK gruppen med høy ekspresjon av MICA var lengre enn OS for pasienter med lav uttrykk for MICA (27 måneder kontra 13 måneder). I kontrollgruppen, MOS av pasienter med høy ekspresjon av MICA var kortere enn i pasienter med lav ekspresjon av MICA (9 måneder 18 måneder vs) (figur 4C). Videre COX regresjonsanalyse viste at MICA uttrykket har en betydelig effekt på CIK behandling (p = 0,001).
multivariat overlevelsesanalyse
I multivariat analyse, MICA uttrykk, kjønn, alder, ECOG score og CIK terapi var uavhengige prognostiske faktorer (Tabell 7). Vi kunne se at risikoen for død for pasienter med høyt uttrykk for MICA var 3,08 ganger høyere enn for pasienter med lav uttrykk for MICA. Dette tyder på at høy ekspresjon av glimmer var en indikator på dårlig prognose i avanserte NSCLC kreftpasienter. Samspillet mellom MICA og CIK (p 0,0001), indikerte at MICA overekspresjon var en uavhengig prediktor for vellykket CIK terapi. Dette var i tråd med resultatene av den univariate subgruppeanalyse. Vi gjorde ikke presentere kliniske stadier i den multivariate analysen som de pasienter som deltok i studien var alle avanserte NSCLC tilfeller.
Diskusjoner
Terapi for avansert NSCLC har kommet inn i en epoke av individualisert behandling. Som immunterapi for behandling av lungekreft blir tilgjengelig, er det nå viktig å identifisere faktorer som forutsier hvilke pasienter som reagerer best på immunterapi.
MICA er sjelden uttrykt av normale celler selv om det har blitt rapportert at MICA er konstitutivt uttrykt av intestinale epitelceller, og er bredt uttrykkes i en rekke forskjellige maligniteter, for eksempel bryst, eggstokk, tarm, nyre, bukspyttkjertel, prostata kreft, leverkreft, melanom og [8], [9], [10]. Denne retrospektiv analyse av 222 NSCLC-tumorer undersøkt rollen til stressrelaterte protein MICA som en prognostisk markør i avansert NSCLC og utforsket forholdet mellom MICA ekspresjon og effekten av CIK terapi for behandling av avansert NSCLC. Analyse av MICA uttrykk i de 222 NSCLC svulster viste at immunhistokjemisk uttrykk for MICA innenfor lungesvulster var stort sett homogen. Flertallet av lungesvulster i denne studien viste sterk cytoplasma og cellemembran uttrykk for MICA, men normal lungeepitelet ikke uttrykke dem. Disse funnene tyder på at uttrykket av MICA oppstår bare etter malign transformasjon i løpet av lungekreft utvikling, som er konsistent med andre funn i mange andre kreftformer. Derfor er disse molekyler har potensiale til å bli brukt som tumor markører for lungekreft. Andreas Busche et al. [26] oppdaget MICA i 40 NSCLC tilfeller ved immunhistokjemi, og fant at 5 av 17 adenokarsinom tilfeller og 5 av 23 plateepitel karsinom tilfeller hadde positiv MICA uttrykk, noe som medførte at 27,5% av NSCLC tilfeller hadde positiv MICA uttrykk. Jo høyere MICA uttrykk sett i våre pasienter kan skyldes forskjeller mellom befolkningsgrupper og raser, eller at alle pasienter som deltok i vår studie var avanserte tilfeller, mens de 40 tilfellene meldt i Busche studie dekket området fra scenen jeg å iscenesette IV. Ved chi-kvadrat-test og en eksakt sannsynlighet test, fant vi at pasienter med stadium IV sykdom gjorde utvise betydelig høyere MICA uttrykk enn pasienter med stadium III sykdom. Tatt i betraktning resultatene ovenfor, inferred vi at den positive frekvensen av MICA uttrykk vil øke etter hvert som stadium av lungekreft avansert. Men vi trenger fortsatt å forstørre størrelsen på utvalget og inkludere pasienter i alle faser for å teste hypotesen.
Det er vel kjent at den cytotoksiske funksjon av NK-celler er direkte aktivert av kreftceller, mens CD8 + T celler krever samtidig pre-sensibilisering og HLA stimulering. Induserbar-overflate uttrykk for MICA som svar på stress eller ondartet transformasjon er tenkt å markere dysfunksjonelle celler for eliminering av cytotoksiske lymfocytter via NKG2D-medierte mekanismer [27], [28]. Faktisk, ektopisk ekspresjon av NKG2D ligander av tumorer induserer perforin avhengig sterk NK og cytotoksiske T-lymfocytt (CTL) responser in vivo, [13], [29]. Tidligere studier har vist at MICA uttrykk er uavhengig en markør for en god prognose i kolorektal kreft og osteosarkomer [22], [30]. Motsatt, oppregulering av MICA er en uavhengig indikator på dårlig prognose i bryst kreft [23] og MICA uttrykk korrelerte ikke med prognoser i eggstokkreft [24]. Men vår studie av avansert NSCLC viser en signifikant sammenheng mellom MICA uttrykk og iscenesettelsen av lungekreft. I overlevelsesanalyse, pasienter med dårlig prognose var mer sannsynlig å ha høye nivåer av MICA på sine svulster enn de med en god prognose.
MICA uttrykk på lungekreft celler er et tveegget sverd. MICA er en stress-indusert molekyl som er forbundet med immunovervåkning. Imidlertid har nyere rapporter identifisert en mekanisme som tumorer synes å være i stand til å styrte immunovervåkning mekanisme. Tumorceller er kjent for å konstitutivt uttrykke MICA protein på celleoverflaten; Men disse cellene også felle MICA i en oppløselig form, eventuelt gjennom proteolyse [8], [15]. Utstøtingen av oppløselig MICA er kombinert med en samtidig reduksjon i NK-celleoverflate-ekspresjon av NKG2DL, noe som fører til redusert immunstimulerende signaler for cytotoksiske lymfocytter [15]. I tillegg er oppløselig MICA forbundet med en systemisk nedregulering av NKG2D ekspresjon på overflaten av CD8 + T-celler og på γδ T-celler, og derved hemme antitumoraktivitet av disse immunceller [31] lenger. For lungekreftceller, ble MICA hovedsakelig uttrykt i membranen og cytoplasma. Så det kunne utledes at kreftceller med høy uttrykk for MICA i membranen kan blokkere NKG2D reseptorer ved å slippe sMICA, og dermed unndra immune avvisning. Dette kan være en av årsakene til dårlig prognose av lungekreft tilfellene med høyt uttrykk for MICA. Derved kan MICA har variable effekter på prognose og for den biologiske oppførsel av tumorer og tumor innflytelse genese og progresjon.
Cytokin-indusert killer (CIK) celler er heterogene ex vivo-ekspanderte T-lymfocytter, med en blandet T -NK fenotype, som er i stand til å utøve et bredt MHC-frie antitumor aktivitet mot både faste og hematologisk kreftsykdom [18], [32], [33], men kliniske studier med CIK cellene er fortsatt i sin barndom, og bare rapportere om et forholdsvis lite antall pasienter i de fleste av disse studiene. For tiden, tyder akkumulerte bevis på at amplifikasjonen og immunresponsen hos CIK celler er relatert til aktivering av reseptoren NKG2D signalveien [19], [20], [21], [34]. Det har vist seg at den sterkt uttrykt NKG2D reseptor på CIK celler kan kommunisere med ligander, som glimmer, på tumorceller og aktiverer sekundære budbringersystemer signalveier nedstrøms fra NKG2D-reseptoren. CIK celler som binder til tumorceller gjennom økt ekspresjon av NKG2D og dets ligering stimulerer CIK-celler til å frigjøre perforin, som spiller en rolle i å lysere tumorceller. Det viktige Implikasjonen er at CIK immunterapi ikke kan begrenses til en bestemt type kreft eller HLA haplotype, utvide spekter av potensielle pasienter som kan ha nytte av en slik tilnærming. Videre kan CIK celler omgå en viktig tumorImmun flukt mekanisme når tumorceller nedregulerer HLA uttrykk. Vårt laboratorium har også bekreftet at, med unntak av CD4 + T-celler, de andre CIK celler uttrykker NKG2D. Derfor forventer vi at flertallet av CIK celler kan gjenkjenne MICA ligand på lungetumoren cellemembranen gjennom sin NKG2D reseptor og blir aktivert til å drepe kreftceller.
Gjennom enkeltfaktoranalyse av 222 tilfeller av avansert ikke-småcellet lungekreft i vår studie ble det funnet at CIK behandlingen hadde en signifikant effekt på OS (p = 0,040). COX regresjonsanalyse viste at CIK behandling kan benyttes som en av de uavhengige prognostiske faktorer for avansert ikke-småcellet lungecancerpasienter. Denne studien videre analysert sakene i undergrupper og fant at pasienter med høyt MICA uttrykk hadde en betydelig større overlevelsesgevinst fra CIK behandling. Ytterligere COX regresjonsanalyse viste at, i skjæringspunktet mellom MICA og CIK effekt, er p-verdien 0,0001, noe som antyder at CIK behandlingen har en god virkning på pasienter med høy MICA ekspresjon og høy ekspresjon av glimmer kan anvendes som en prediktor for effekten av CIK behandling.
Våre resultater er begrenset av det lille antallet av CIK behandlede pasienter, den retrospektive arten av analysen, er variabelt antall behandlingssykluser, og studien mangler en evaluering av korte -term effekter. Derfor er en behandlingsmodell for MICA uttrykk guidet CIK for avanserte ikke-småcellet lungekreft pasienter trenger videre etterforskning med en utvidet prøvestørrelse i videre prospektive kliniske studier.
I konklusjonen, evaluering av MICA uttrykk på svulster celler hos pasienter med fremskreden ikke-småcellet lungekreft vil bidra til ytterligere å bestemme prognosen for pasienten. Pasienter med høy MICA uttrykker svulster har en forholdsvis dårligere prognose, men på grunn av samspillet mellom den aktiverende reseptor NKG2D på CIK celler og MICA på tumorcellene, kan høy ekspresjon av MICA forbedre effektiviteten av CIK terapi og forbedre overlevelse. Dette gir en ny individuell behandling for fremtidig immunterapi, og et teoretisk grunnlag for fremtidige prospektive studier med en utvidet utvalgsstørrelsen.
Takk
Forfatterne ønsker å takke dr Liyuan Zhang og Weifeng Zhu (Department for patologi, Fujian Provincial Cancer Hospital) for deres tekniske råd og histologiske observasjoner.
