Abstract
Innledning
dendrittiske celler spiller en nøkkelrolle som initiativtakerne til T-celle responser, og selv om tumor antigen-lastet dendrittiske celler kan indusere anti-tumorrespons, har sin effekt blitt avhørt, noe som tyder på et behov for å forbedre vaksinasjonsstrategier
Matherials Metoder
fokusert på karakteriseringen av benmarg-avledede dendrittceller pulsert med hel tumor lysat (TAA-DC), som en kilde av kjente og ukjente antigener, i en musemodell av brystkreft (MMTV-
Ras
). Dendrittiske celler ble evaluert for antigen opptak og for ekspresjon av MHC klasse I /II og ko-stimulerende molekyler og markører assosiert med modning.
Resultater
Resultatene viste at antigen-lastet dendrittiske celler er kjennetegnet ved en fenotypisk semi-moden /moden profil og ved oppregulering av gener som er involvert i antigen presentasjon og T-celle-grunning. Aktiverte dendrittceller stimulert T-celleproliferasjon og induserte produksjonen av høye konsentrasjoner av IL-12p70 og IFN-γ men bare lave nivåer av IL-10, noe som indikerer deres evne til å utløse en T
H1-immunrespons. Videre administrasjon av Antigen lastet-dendrittiske celler i MMTV-
Ras
mus utløste en sterk anti-tumor respons
in vivo
som demonstrert av en generell aktivering av immunceller og utgivelsen av T
H1 cytokiner.
Konklusjon
data~~POS=TRUNC her kan være nyttig i utformingen av antitumor DC-baserte terapier, viser en spesifikk aktivering av immunsystemet mot brystkreft.
Citation: Rainone V, Martelli C, Ottobrini L, Biasin M, Borelli M, Lucignani G, et al. (2016) Immunologisk Karakterisering av Whole Tumor Lysate-Loaded dendrittiske celler for Cancer Immunterapi. PLoS ONE 11 (1): e0146622. doi: 10,1371 /journal.pone.0146622
Redaktør: Natalia Lapteva, Baylor College of Medicine, USA
mottatt: 24 september 2015; Godkjent: 18 desember 2015; Publisert: 21 januar 2016
Copyright: © 2016 Rainone et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. All relevant data er innenfor papir
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av PRIN 2008 (. Progetti di Rilevante Interesse Nazionale, helsedepartementet, prosjekt ingen 20082NHWH9_001) mottatt av MC og AIRC (Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro; finansierte prosjektet n ° IG-9311) mottatt av MC. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Forkortelser : DC, dendrittiske celler; IDC, umodne dendrittiske celler; TAA, tumor-assosiert antigen; MMTV, murine brysttumorvirus; Ras, menneske-Rat sarkom; GM-CSF, granulocyttkolonistimulerende-makrofag-kolonistimulerende faktor; HSP, varmesjokkproteiner; MR, magnetic resonance imaging; SPECT, SPECT; BFA, Brefeldin A; PMA, forbolmyristatacetat; MFI, mener fluorescens intensitet; ICAM-1, intercellulære adhesjonsmolekyl 1; Rac1, Ras-relaterte C3 botulinum toxin substrat 1; ERAP1, endoplasmatisk retikulum aminopeptidase 1; TAP2, Antigen peptid transporter 2; TAPBP, TAP-assosiert glykoprotein eller tapasin; LRP1, lav-tetthet-reseptor-relaterte protein 1; CFS1R, kolonistimulerende faktor 1 reseptoren; CFS2R, kolonistimulerende faktor 2-reseptoren; TR1, type 1 regulatoriske T-celler; PD1, programmert celledød protein 1-reseptor; PDL1, programmert død-ligand 1; T
reg, T regulatoriske celler
Innledning
Cancer immunoterapi tar sikte på optimal utløsning av tumorspesifikke immunresponser med det endelige målet med å ødelegge kreftceller, og indusere langvarig immunitet som vil forebygge sykdom tilbakefall [1]. Induksjon av effektiv tumor-immunitet er en kompleks prosess som omfatter passende presentasjon av tumor-assosierte antigener (TAA), valg og aktivering av TAA-spesifikke T-celler og, til slutt, homing av TAA-spesifikke T-celler til tumorsetet og eliminering av maligne celler som uttrykker TAA [2,3,4]. Unnslippe fra immunovervåkning er imidlertid et grunnleggende biologisk funksjon av maligniteter som bidrar til ukontrollert tumorvekst, til slutt fører til død av verten.
Tumor-antigener, i motsetning til antigener assosiert med bakterier og andre patogener, er selvantigener, og immunsystem er ofte tolerant overfor dem. Av disse grunner har mye oppmerksomhet blitt gitt til utviklingen av vaksinasjonsstrategier for å maksimere immunstimulerende kapasitet av dendrittiske celler (DCS). DC er en familie av profesjonelle antigenpresenterende celler som spiller en sentral rolle i modulering av T-celle responser; Disse celler er svært viktig for beskyttelse mot patogener og i tumor immunologi. Denne erkjennelsen har styrket fundamental translasjonsforskning å forstå og utnytte deres unike immunmodulerende kapasitet mot kreft [2].
DC vaksiner ble vist å være trygge, gjennomførbare og effektive hos noen pasienter, særlig hvis DCS ble riktig modnet og aktivert [5,6]. Likevel, selv om immunologiske reaksjoner er observert i de fleste tilfeller, kliniske responsene bare påvist i et mindretall av pasientene [7]. Flere av de tidlige studier publisert var utilstrekkelig i sin utforming og tolkning, som umoden heller enn modne DC ble brukt [8]. Muligheter for å forbedre effektiviteten av DC i immunterapi av tumorer må ta hensyn til en rekke forskjellige variabler. Dermed har de siste rapportene viser at sammenlignet med umodne DC, modne DC har en høyere potens for å indusere spesifikke immunresponser og migrere både
in vitro Hotell og
in vivo product: [9]. Andre kjennetegn ved disse cellene som må vurderes er deres forskjellige undergrupper, den modalitet av antigen lasting, administrasjonsvei og dose og frekvens av DCs administrasjoner. Til slutt, den immuniserende evne DC
in vivo
er kritisk påvirket av deres modning staten og deres evne til å migrere mot lymfatisk vev.
Et stort antall DC kan genereres av
in vitro
kultur av monocytter eller CD34
+ stamceller med granulocytt-makrofag-kolonistimulerende faktor (GM-CSF) pluss interleukin-4 (IL-4) [10] eller IL-13. DC oppnådd på denne måten kan grunnes med tumorantigener for å optimalisere deres evne til å generere tumor-spesifikke T-celle-responser. Således kan celler bli lastet enten med hele tumorceller eller tumorcelle-lysat, tumor antigen-anrikede fraksjoner, eller, alternativt, med tumor-spesifikke antigener. Nærmer seg utnytte hele tumorceller som en kilde for antigen for DCS kan være spesielt nyttige: på denne måten hele repertoaret av antigener som er knyttet til en gitt tumor kan behandles. Dette kan forhindre tumorImmun flukt gjennom antigen-tap varianter eller mutasjoner i kritiske T-celle epitoper [11,12]. Tumor cellelysat representerer hele proteininnholdet i lyserte tumorceller. Fordelen med å bruke tumor lysat ligger i det faktum at de multiple antigener som kan sensitize T-celler kan bli heterogent uttrykt på voksende tumorer (spesielt de som ikke har molekylært definerte TAA). I tillegg kan den cellulært stress indusert av lytiske prosesser fremkalle adaptive mekanismer, inkludert ekspresjonen av varmesjokkproteiner (HSP), som frigjøres fra døde celler etter primær eller sekundær nekrose [13,14]. HSP kan forbedre anerkjennelse og opptak av døende celler ved DC; i tillegg kan tumor-avledede antigene peptider binder seg til HSP og resirkuleres for antigen-presentasjon i en særlig effektiv måte [14]. Antigen lasting er faktisk en delikat prosess som det ikke må forstyrre uttrykk for MHC klasse I- og klasse II- og co-stimulerende molekyler, så å la DC for å effektivt presentere antigener og stats T-lymfocytter. Optimalt manipulert DC må også uttrykke et stabilt, så vel som en aktivert fenotype og bør være beriket med adhesjonsmolekyler og kjemokinreseptorer for å tillate at deres målsøkende til sekundære lymfeorganer.
musebrysttumorvirus (MMTV) -indusert human –
Ras
uttrykke bryst svulst dyremodell er en svært informativ modell for menneskelig brystkreft. [15]. Dermed er aktiverende mutasjoner i Ras onkogen funnet hos ca 30% av menneskelige malignitet og MMTV-
Ras
mus har blitt skapt ved å plassere en aktivert v-Ha-
Ras
under kontroll av MMTV-promoter [16]. Ondartet bryst og spyttkjertelsvulster oppstår blant transgene mus mellom 9 og 20 uker med en topp på 12-15 ukers alder. Vi har tidligere definert optimale forhold for merking hele tumor lysat-lastet DC for MR og SPECT [17]. Resultatene fra disse studiene viste at disse prosedyrene ikke endrer DC funksjon og kan brukes til å spore
in vivo
migrasjon av merket DC til drenering LNS inn svulst bærende MMTV-
Ras
transgene mus.
på basis av disse funnene, karakterisert vi videre de immunologiske egenskaper av hel tumor lysat-pulset DC i form av celle-fenotype, funksjonalitet, og evne til å utløse bestemte anti-tumor-T-celle-responser
i vitro
bruker MMTV-
Ras
transgene mus modell. Videre en
in vivo
studie ble utført ved å injisere antigen-lastet DC i samme musemodell, og immunforsvaret profil og svulst utbruddet ble evaluert.
Data her rapporteres er i stand til å støtte DC -formidlet aktivering av immunsystemet mot svulst, som viser en semi-moden profil av dendrittiske celler og T
H1 fenotype av T-celler er i stand til i betydelig grad å forsinke tumorvekst.
Materialer og Metoder
Dyr
studiet ble godkjent av det italienske helsedepartementet (studieprotokoll 07/010 for dyret anlegget ligger ved Institutt for Biomedical og Clinical Sciences «L. Sacco», Milan). Dyrene ble forvaltet i henhold til prinsippene i «Guide for omsorg og bruk av forsøksdyr» og i samsvar med den italienske nasjonal lov (lovdirektiv. 116/1992) og anbefalinger fra Det europeiske fellesskap (86/609 /CEE) for pleie og bruk av forsøksdyr. Voksne kvinnelige FVB mus, 6-8 uker gammel, og FVB kvinnelige MMTV-
Ras
mus [17], 27 ± 8 uker gamle, ble opprettholdt på en 12-timers lys-mørke-syklusen i bur på 5 dyr med vann og mat tilgjengelig
ad libitum
. Mann og kvinne MMTV-
Ras
mus med tumorlesjoner var heterozygote for menneske-Ras transgen og ble opprettholdt i en ren FVB bakgrunn. MMTV-
Ras
muse menn i FVB mus bakgrunnen ble avlet for å villtype FVB hunner (Jackson Laboratories) for å opprettholde FVB bakgrunnen. PCR-baserte mus screeningsanalyse for å identifisere transgene mus ble utført.
Dendrittiske cellekultur
Total benmargceller ble ekstrahert fra tibias og lårben av villtype FVB mus, som tidligere beskrevet [17 ]. I korthet, etter fjerning av muskelvev, ble bein epifyser kuttet og benmarg ble spylt ut ved hjelp av et 26G1 /2 p sprøyte. Cellesuspensjonen ble dyrket i fullstendig Iscove (Euroclone, Italia) medium. Et spesifikt cytokin cocktail som inneholdt 3000 U /ml GM-CSF og 900 U /ml IL-4 (R Finnzymes, Espoo, Finland) med en Dendritic og antigenpresenterende Cell PCR Array (SA Biosciences Corporation, Frederick, Maryland, USA). En 96-brønners plate inneholdende RT2 qPCR Primer Analyser for et sett av 84 relaterte gener, fokusert på dendrittiske celleaktivering og modning, pluss fem husholdningsgener og tre kontrollene. Kontroller for genomisk DNA-forurensning, RT reaksjon kvalitet og generell PCR-resultater ble inkludert i hver matrise. Betydelig oppregulert og downregulated gener var bare de de som viste minst en todelt endring i nivået av mRNA uttrykk for den lastet versus losset DC i tre uavhengige forsøk (endring ≥2).
Naive syngene T-celle høsting
Den stimulerende kapasitet antigen lastet DC ble testet ved dyrking av tumor-lysat pulserende DC med CD3
+ naive responder splenocytter innsamlet fra MMTV-
Ras
mus etter svulst utbruddet. MMTV-
Ras
mus ble bedøvet med 4% kloralhydrat volum /volum (Sigma-Aldrich) og avlivet ved cervikal dislokasjon. Milt ble kuttet under sterile forhold i en laminær hette og satt gjennom en 100 mm plast sil (BD Falcon 2350, BD Biosciences, Bedford, MA) for celle utvinning. Splenocytter ble lagt på et sammenhengende 40-100% Percoll-gradient (Sigma) og vasket to ganger i PBS for å oppnå lymfocytt-rike celler. Cellelevedyktigheten ble bestemt ved anvendelse av Trypan blå farging. Splenocytter ble resuspendert i fullstendig Iscoves medium. T-celler ble renset ved hjelp av et Pan T Cell Isolation Kit (Myltenyi Biotech, Italia) ved å tappe magnetisk merket non-T-celler av celler totalt (negativ brøkdel inneholder CD3
+ celler). 5×10
5 Cellene ble deretter farget med anti-CD3-PECy5 (eBioscences) for å vurdere T-lymfocytt renhet ved strømningscytometri. Etter eluering, ble de resulterende celler ble 90% CD3
+ ved FACS-analyse.
Induksjon av proliferative T-cellere
in vitro
3×10
7 CD3
+ naive T lymfocytter ble resuspendert i 0,1% PBS /BSA (PBI International) ved romtemperatur og farget med 2,5 pg /ml av celle-permeant fluorescein-baserte karboksy-fluorescein-diacetat-suksimidyl-ester (CFSE-DA eller CFSE, Sigma Aldrich), som kovalent fester til cytoplasmiske komponenter av celler, noe som resulterer i uniform lyse fluorescens. Ved celledeling, er fargestoffet fordeles likt mellom datterceller, slik at oppløsningen av celledeling ved strømningscytometri. Celler ble inkubert ved 37 ° C i 10 minutter, resuspendert i 5 ml fullstendig kaldt Iscoves supplert med 10% BSA (I10 medium) og inkubert på is i 5 minutter. Cellene ble deretter vasket med I10 mediet ved 1200 rpm i 7 minutter, resuspendert ved en sluttkonsentrasjon på 3×10
6-celler i fullstendig Iscoves medium og utsådd i en 24-brønners plate (Corning Coster) i nærvær /fravær av 3×10
5 tumor-lysat pulserende DC i 7 dager. Cellene ble deretter høstet, vasket i PBS og farget med anti-muse-CD3-PECy7 (eBioscences) og analysert ved hjelp av strømningscytometri. Prosentandelen av prolifererende celler ble beregnet som følger:.
Indeksen spredning ble beregnet som følger:.
cytokinanalyse
10
5 tumor-lysat pulserende DC ble sådd i en 24-brønners plate med 10
6 syngeniske CD3
+ T-celler og inkubert ved 37 ° C, 5% CO
2 for 1, 3, 5 eller 7 dager [5 ug /ml PMA -Phorbol Myristate vinylacetat- og 1M Ionomycin (Sigma Aldrich) stimulert T-celler eller T-celler alene ble brukt som positive og negative kontroller, henholdsvis]. Plater ble sentrifugert ved 1000 rpm i 10 minutter og supernatantene ble samlet opp og lagret ved -20 ° C for bestemmelse av cytokinnivåer. IFN-γ, IL-12p70 og IL-10-konsentrasjonen i supernatantene ble målt ved spesifikk sandwich-enzymbundet immunosorbentanalyser (ELISA) (R D System, Minneapolis, MN, USA). Henhold til produsentens instruksjoner
cytokinanalyse ved strømningscytometri, 3×10
5 tumor-lysat pulserende DC ble sådd ut i et sterilt rør med 3×10
6 syngeniske CD3
+ T-celler og inkubert ved 37 ° C, 5% CO
2 for 1, 3, 5 eller 7 dager. 10 ug /ml Brefeldin A (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) ble tilsatt til kulturene i løpet av de siste 6 timene av stimulering for å blokkere proteinutskillelse. Celler ble vasket i PBS (PBI, Milano, Italia), delt i forskjellige flowcytometri rør, og farget i 1 time ved 4 ° C med et umerket antistoff anti-FCγR for å redusere en-spesifikke signaler. Cellene ble deretter farget med anti-CD11c PECy5 og anti-CD3-PECy7 (eBioscience) i 30 minutter ved 4 ° C i mørke, vasket og fiksert i Reagens A oppløsning (FIX ubehandlede mus mottok ikke noen behandlinger. Mus ble behandlet i to påfølgende uker med samme protokoll for injeksjon. Dyrene ble fulgt ukentlig til tidlig identifisere svulst utbruddet ved manuell palpasjon og ble avlivet to uker etter svulst etablering ved halshugging etter bedøvelsen med 4% kloralhydrat v /v (Sigma-Aldrich). Noen mus fra hver gruppe ble avlivet syv dager etter å ha mottatt den første immunisering og Miltene ble aseptisk samlet inn for analyse av T-celle-fenotype og måling av cytokinproduksjon; omvendt, ble alle gjenværende mus fulgt inntil slutten av immuniserings behandling og tumor utbruddet ble registrert. Mus deretter ble avlivet to uker etter kreft etablering og tumormasser ble samlet
Utbruddet forsinkelse ble beregnet som:.. Uke av utbruddet av behandlede-mus-uke med utbruddet av kontrollmusene
I Når det gjelder analyse av T-celle-fenotype, CD3
+ T-celler ble isolert fra miltceller fra immunisert eller tak MMTV-
Ras
mus ved magnetisk separasjon ved anvendelse av en pan-T Cell Isolation Kit (Myltenyi Biotech, Italia) og ble farget med fluorescensmerkede monoklonale antistoffer rettet mot et panel av celleoverflatemarkører [fluoresceinisotiocyanat (FITC), fykoerytrin (PE), fykoerytrin-cyanin 5 (PCy5) eller 7 (PCy7)] (eBioscience, San Diego, CA. , USA): CD4, CD8, CD25, CD69. Som en parameter av T-celle-effektorfunksjon, ble slått sammen evaluering av cytokin sekresjon utført ved strømningscytometri. 3×10
6 CD3
+ T-celler ble farget i 1 time ved 4 ° C med et umerket antistoff anti-FCγR for å redusere en-spesifikke signaler. Cellene ble deretter farget med anti-CD4 PECy5 og anti-CD8-PECy7 (eBioscience) i 30 minutter ved 4 ° C i mørke, vasket og fiksert i Reagens A oppløsning (FIX 0,05 ble betraktet som signifikant.
Resultater
DC immunfenotypen
Murine DC ble fremstilt fra benmarg forløpere og høstet etter 6-dagers kultur i nærvær av GM-CSF og IL -4, som beskrevet ovenfor. Kvaliteten og renhet av DC ble bestemt ved FACS-analyse på grunnlag av ekspresjon av markøren overflate CD11c; 88% cellene CD11c
+. Cellenes levedyktighet var høyere enn 90% i alle forsøk. Før lasting med tumor lysat ble DC karakterisert ved strømningscytometri for å analysere ekspresjon av MHC klasse I og II-molekyler, ko-stimulerende molekyler (CD86, CD80-, CD40), og markører assosiert med modning (CD83, CCR7, PD-L1). DCs viste lave nivåer av MHC klasse I og II molekyler, CD86, CD80 og CD40, og CCR7, og dermed viser en umoden fenotype. I alle tilfeller DC uttrykte betydelige nivåer av PD-L1, sannsynligvis forårsaket av GM-CSF og /eller IL-4 behandling (fig 1).
Unpulsed umodne DC (IDCS), tumor lysat-lastet DC (TAA -DCs) og LPS stimulerte-DCS, ble satt opp i parallell og høstet på samme tid for fenotype analyse. DC ble identifisert ved MHC-DR, CD11c (A) (øvre dot blot og nedre dot blot som viser gating strategi og MHC II-ekspresjon på CD11c
+ celler før og etter tumor-lysat-laste- og LPS stimulering, henholdsvis) og markørene vist i figuren (B). Tallene angir MFI (gjennomsnittlig fluorescens intensitet) for isotype kontroller (åpne histogrammer) og DC overflatemarkører (skraverte histogrammer). Representative resultater fra en av tre forsøk er vist her. Fold-økning i uttrykk nivåer av modning markører på kreft-lysat pulserende DC enn IDCS ble bestemt ved å uttrykke mikrofinansinstitusjoner som et forhold mellom den TAA-DC til unpulsed IDCS (C).
DC modning i respons på antigen lasting
tumor~~POS=TRUNC cellelysat representerer hele proteininnholdet i lyserte tumorceller. For å indusere DC aktivering og modning, ble cellene pulset med hele svulsten lysat av svulster på melkekjertler eksplanterte fra MMTV-
Ras
mus i 24 timer. Som vist i figur 1, denne fremgangsmåten førte til en betydelig økning i overflate ekspresjonen av spesifikke proteiner, inkludert PD-L1, sammenlignet med uttrykket nivåer av losses DC. Lignende resultater ble observert etter LPS stimulering (positiv kontroll) (fig 1)
DC levedyktighet ble ikke påvirket av antigen-lasting prosedyre (losset-DC. 100%
vs
lastet-DC og LPS-stimulerte-DC: 98% og 98,5%, henholdsvis), mens en betydelig parallell økning i funksjonell modne DC befolkningen kunne observeres (losset-DC: 11%
vs
lastet-DC og LPS-stimulert -DCs. 51% og 50%, henholdsvis)
konfokalmikroskopi evaluering av DC lasting med svulst lysat
kapasiteten på DC for å ta opp svulst lysat ble bekreftet av konfokal mikroskopi. Både murine celler og kreftceller lysate var florescence-merket og bildene ble anskaffet. Konfokalmikroskopi bilder av 24 timers co-kulturer av DC og tumor cellelysat viser at fluoriserende materiale fra lyserte tumorceller ble internalisert av DC. Analyser av Konfokalmikroskopi plan indikert at DC-grønn fluorescens ble omgir tumor-lysat-rød fluorescens, men tvert imot ble ikke observert. Bevis for internalisering i confocal flyene er vist ved forskjellige forstørrelser og oppsummert i en rekonstruksjon av flere confocal flyene i Z-aksen. Resultater dermed demonstrere cytoplasma lokalisering av tumorantigener i DC, som bekrefter at dag-6 umodne DC hadde en aktiv phagocytic evne og var i stand til å ta opp hele svulsten cellelysat (fig 2).
Konfokalmikroskopi ble brukt til å verifisere cytosolic lokalisering av tumor-avledet antigener følgende 24 timers co-kulturer av dag-6 DC og tumorcelle lysat. Tumor massene ble merket med PKH26 Red Fluorescent Cell Linker (rød) og DC ble farget med monoklonalt antistoff anti-CD11c FITC (grønn). Antigen belastning bekreftes ved visualisering av tumor antigen (rød) i løpet av dendrittiske celler (grønt). En representant fra tre uavhengige eksperimenter er vist; alle bildene er 20X mens zoom er 40X.
Gene uttrykk profil av tumor lysat-pulset DC
For å teste om svulsten lysat pulse modulerer den samlede genuttrykk fra DC, vi analysert ekspresjonen av 84 gener involvert i DC-aktivering og modning ved hjelp av rtPCR matriser. Vi sammenlignet uttrykket profilen til DC etter 6, 16 eller 24 timer inkubasjon med tumorantigener; resultatene ble bekreftet i minst tre uavhengige analyser.
Resultatene viste at 43 gener ble oppregulert (endring ≥ 2 i belastede DCs versus losset DC), og 7 gener ble nedregulert. Blant de oppregulert genene har vi funnet gener som er hovedsakelig involvert i cellemobilitet og gruppering, og i DC-T-celle-interaksjoner, for eksempel CD44, ICAM-1, CDC42, Rac1 og ERAP1 (figur 3A), og i antigenpresentasjon inkludert TAP2, TAPBP, CD1d1 og B2M (fig 3B). Oppregulert gener var også medlemmer av B7-familien, herunder B7.1 (CD80) og B7.2 (CD86), som spesifikt binder seg til deres kognate ligand på T-celler og gir det andre signal for T-celleaktivering og forbedring av DC funksjon, og CD40, et kostimulerende proteinet som er nødvendig for DC-aktivering ved å binde seg til CD40L på T
H celler (figur 3B).
