Abstract
Kreft i bukspyttkjertelen er fortsatt en av de viktigste årsakene til kreft-relaterte dødsfall på grunn av aggressiv vekst, høye metastatisk priser under den tidlige fasen, og mangelen på en effektiv terapeutisk tilnærming. Vi viste tidligere at Qingyihuaji (QYHJ), en syv-urt kinesisk medisin formel, oppviste betydelige anti-kreft effekt i bukspyttkjertelkreft, assosiert med endringer i tumoren mikromiljøet, spesielt hemning av kreft-assosiert fibroblast (CAF) aktivering. I denne studien, genererte vi CAF og paret normal fibroblast (NF) kulturer fra resected menneskelige kreft i bukspyttkjertelen vev. Vi observerte at kafeer utstilt en forbedret evne til å fremkalle kreft i bukspyttkjertelen celle migrasjon og invasjon sammenlignet med NFS, mens QYHJ behandlet kafeer utviste redusert migrasjon og invasjon fremmende kapasitet in vitro. Resultatene av videre analyser viste at sammenlignet med NFS, kafeer utstillings økt CXCL1, 2 og 8 uttrykk, bidrar til den forbedrede invasjonsfremmende kapasitet på disse cellene, mens QYHJ behandling undertrykte betydelig CAF spredningsaktiviteter og produksjon av CAF-avledet CXCL1, 2 og 8. Disse in vitro observasjonene ble bekreftet i mus modeller av menneskelig kreft i bukspyttkjertelen. Samlet utgjør disse resultatene antydet at undertrykke tumor-fremme kapasitet på kafeer gjennom kinesisk urtemedisin demper bukspyttkjertelkreft celle invasjon
Citation. Chen L, Qu C, Chen H, Xu L, Qi Q, Luo J , et al. (2014) Kinesisk urtemedisin undertrykker Invasion-Fremme kapasitet kreft-assosiert fibroblaster i kreft i bukspyttkjertelen. PLoS ONE 9 (4): e96177. doi: 10,1371 /journal.pone.0096177
Redaktør: Donald Gullberg, Universitetet i Bergen, Norge
mottatt: 31 oktober 2013; Godkjent: 04.04.2014; Publisert: 29 april 2014
Copyright: © 2014 Chen et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne studien ble støttet av National Science Fundation of China (81001061, 81370068, 81273953, 81173461); Shanghai Nature Science Fund, Shanghai, Kina (09ZR1406800); Foundation doktorgradsprogrammer av Ministry of Education of China (20090071120076); Shanghai Science and Technology Committee Rising Star Program (11QA1401300); Medisinsk Talenter Training Program of Health Bureau of Shanghai (XYQ2011008); og Fudan University Zhuo-Xue program. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
på grunn av aggressiv vekst og et høyt metastatisk hastighet i løpet av den tidlige fasen, kreft i bukspyttkjertelen fortsatt en svært dødelig malign sykdom [1], og bare omtrent 10-20% av kreft i bukspyttkjertelen er resectable ved tidspunktet for diagnose [ ,,,0],2]. Gemcitabin har vært standard behandling for avansert kreft i bukspyttkjertelen; imidlertid, er median overlevelse 5-6 måneder, med den hyppige utviklingen av chemo-resistens i løpet av behandlings [3]. Dermed kreft i bukspyttkjertelen er fortsatt en forferdelig sykdom, og det er et stort behov for videre studier for å avdekke molekylære mekanismer for tumorinvasjon og metastase å utvikle en effektiv terapeutisk tilnærming for å forebygge og /eller behandle kreft i bukspyttkjertelen.
kreft assosiert fibroblaster (kafeer), dominerende komponenter i tumor stroma, er blitt ekstrahert fra flere humane invasive karsinomer, inkludert kreft i bukspyttkjertelen [4], [5], [6]. Bukspyttkjertelen duktale adenokarsinom er preget av en omfattende stromal respons kalt desmoplasia [7]. Innenfor tumor stroma, kafeer er den primære celletype, som spiller en viktig rolle i tumorprogresjon [5]. Kafeer utsondre flere faktorer, blant annet CXC, CC chemokiner, og andre inflammatoriske mediatorer, som fremmer spredning, invasjon og metastasering av kreft celler. Dessuten har akkumulere bevis vist at kafeer spille en nøkkelrolle i oppkjøpet av legemiddelresistens i tumor terapi [8], som negativt påvirker kliniske utfall [9], [10]. Derfor, hemmer aktiveringen av kafeer kan representere en potensiell terapeutisk tilnærming for kreft i bukspyttkjertelen behandling.
QYHJ, en syv-urt kinesisk medisinsk formel brukes til behandling av kreft i bukspyttkjertelen i Kina, hemmer både tumorvekst og metastasering i hårløse mus modeller av kreft i bukspyttkjertelen [11], [12], [13]. I tillegg er den kombinerte bruk av QYHJ med konvensjonell vestlig medisin forlenger overlevelsestiden hos pasienter med levermetastaser fra bukspyttkjertelkreft [14]. Imidlertid gjenstår det underliggende molekylære mekanismen uklart.
Her har vi vist at kafeer utstilt en forbedret evne til å fremkalle kreft i bukspyttkjertelen celle migrasjon og invasjon sammenlignet med NFS, mens QYHJ behandlet kafeer utviste redusert migration- og invasjon fremmende kapasiteter in vitro. I tillegg viste vi at sammenlignet med NFS, kafeer uttrykke høye nivåer av CXCL1, 2 og 8, og bidrar til økt invasjon fremmende kapasitet på disse cellene. Dermed kunne QYHJ behandling undertrykke aktivitetene spredning og CXCL1, 2 og 8 uttrykk nivåer i kafeer. Samlet utgjør disse resultatene tyder på at undertrykke tumor-fremme kapasitet på kafeer med kinesisk urtemedisin demper bukspyttkjertelkreft celle invasjon.
Materialer og metoder
Etikk erklæringen
Alle dyr forsøkene ble gjennomført i samsvar med retningslinjene i National Institutes of Health for omsorg og bruk av forsøksdyr. Studien protokollen ble også godkjent gjennom komité for bruk av levende dyr i undervisning og forskning, Fudan University, Shanghai. Ved slutten av studien ble alle dyrene halshugget gjennom ryggmargen separasjon ved nuchae å minimere lidelse. De fibroblaster ble isolert fra resected vev av to pasienter med bukspyttkjertel duktale adenokarsinomer (PDAC). Før prøvetaking, ble skriftlig informert samtykke innhentes fra hver pasient i henhold til institusjonelle retningslinjer, og studien ble godkjent gjennom komiteene for etisk vurdering av forskning ved Fudan University i Shanghai Cancer Center.
Cellelinjer og mus
human bukspyttkjertelkreft cellelinje Capan1 og BxPC3 ble oppnådd fra American Type Culture Collection og dyrket i Dulbeccos modifiserte Eagle-medium (DMEM; Gibco, Carlsbad, CA) tilsatt 10% føtalt bovint serum (FBS; Gibco, Carlsbad, CA) ved 37 ° C med 5% CO
2. Morfologien av Capan1 cellelinjen regelmessig ble vurdert, og cellene ble undersøkt med hensyn til fravær av mykoplasma forurensning (MycoAlert, Lonza, Rockland, ME, USA). De Capan1 og BxPC3 cellelinjer ved 30-40 passasjer ble brukt i vår studie.
Kvinne BALB /c-nu /nu hårløse mus i alderen 4-6 uker ble hentet fra Shanghai Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Sciences (Shanghai, Kina), som ligger i laminær skap under spesifikke patogen-frie forhold og gitt mat og vann
ad libitum
.
Isolering av kafeer og sammenkoblede NFS
stromal fibrolasts ble isolert som tidligere beskrevet [15]. I korthet, ble kirurgisk resekterte kreft i bukspyttkjertelen vev oppnådd fra to pasienter med pankreatisk duktus adenokarsinom. Skriftlig informert samtykke ble innhentet før vev samling. Den friske pankreas tumorvev og tilstøtende normalt vev (minst 2 cm fra den ytre tumor margin) ble oppmalt til 1-3 mm
3 fragmenter og spaltet med 0,25% trypsin ved 37 ° C i 30 minutter. De resulterende fragmenter ble sentrifugert ved 600 xg i 5 minutter og vasket en gang med DMEM inneholdende 10% føtalt bovint serum. Vevet fragmentene ble deretter sådd ut og inkubert ved 37 ° C. Dyrkningsmediet ble endret to ganger i uken i 3-4 uker. Under disse betingelser, ble fibroblaster eksplantert fra vevfragmenter mens andre celler ble for det meste holdt tilbake i vevet. Fibroblaster dannet multi-layer kolonier spredning på kultur parabolen. Etter 3-4 uker dyrkede celler ble omtrent trypsinert og re-belagt i T25 kulturflasker (passasje en). Fibroblastene ble deretter sub-dyrket i ytterligere 2-3 passeringer inntil kulturene var fri for forurensning av epitelceller og deretter holdt i DMEM supplert med 10% føtalt bovint serum, 2% penicillin og streptomycin (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) . Cellene ble dyrket ved 37 ° C i en fuktig atmosfære som inneholder 5% CO
2.NF og CAF stammer ble brukt på 4-5 passasjer.
Immunohistochemistry og immunfluorescens
Immunohistochemistry (IHC) ble utført som tidligere beskrevet [16]. Kort sagt ble tumor vevsprøver fiksert i 10% formalin og innstøpt i parafin voks. Ufargede 3-mikrometer seksjoner ble deretter kuttet fra parafinblokker for IHC analyse. Seksjonene ble farget med følgende antistoffer: kanin anti-vimentin (1:200), kanin anti-α-SMA (1:100), kanin anti-CXCL1 (1:100), kanin anti-CXCL2 (1:200) og kanin anti-CXCL8 (01:25) ved 4 ° C over natten. Snittene ble inkubert med sekundære antistoffer, og avidin-biotin-peroksidase-komplekset ble benyttet i henhold til produsentens instruksjoner (Vector Laboratories, CA, USA). Et immunglobulin-negativ kontroll ble anvendt til å utelukke ikke-spesifikk binding. To uavhengige etterforskere og en patolog, som alle ble blindet av modell /behandling typen for serien av prøver, utført alle prosedyrer. For å evaluere kvantitativt CAF-indusert proliferativ aktivitet i hver gruppe, vi beregnet Forholdet av området positive for vimentin og α-SMA flekker til det totale arealet i histologiske seksjoner fra ti felter under lett mikroskopi (200 x) [11].
For immunfluorescens farging, ble cellene fiksert med 4% paraformaldehyde og inkubert med anti-Pan-CK (1:100), anti-α-SMA (1:100), anti-vimentin (1:100) , anti-E-cadherin (1:100), anti-CD31 (1:200) og anti-D2-40 (1:100) ved 4 ° C over natten. Cellene ble deretter inkubert med fluorescens-konjugert sekundært antistoff i 1 time. Etter vasking ble cellene montert sammen med monteringsmedium inneholdende DAPI (Vector Laboratories). En negativ kontroll, hvori det primære antistoff ble utelatt, ble anvendt for å teste for antistoffspesifisitet. Bildene ble tatt med en confocal Leica fluorescens mikroskop.
Narkotika og reagenser
QYHJ, en syv-urt kinesisk medisinsk formel, som består
Scutellria barbata plakater (Ban Zhi Lian)
Heydyotis diffusa plakater (Bai hua hun hun cao),
Amorphophallus kiusianus product: (hun liu gu),
Coix Lacryma-Jobi plakater (Yi rEN),
Gynostemma pentaphyllum product: (Jiao gu lan),
Ganoderma luncidum plakater (Ling Zhi) og
Amomum cardamomum plakater (Bai dou kou), ble fremstilt som tidligere beskrevet [11], [12], [1. 3]. I korthet ble QYHJ pulver oppnådd fra Jiang-Yin Jiang Pharmaceutical Co., Ltd. For å sikre standardisering og opprettholde den mellom satsene påliteligheten av QYHJ, ble en høy-ytelse-væskekromatografi (HPLC) kromatografiske fingeravtrykk utviklet for kvalitetskontroll. Fingeravtrykks kromatogrammer av QYHJ formelen er vist i vår forrige rapport [17]. Den endelige avkok av QYHJ ble fremstilt etter oppløsning av urte pulver i destillert vann til den ønskede konsentrasjon. Den daglige dosering for kanin og nakne mus var 15 g /kg og 18 g /kg, henholdsvis, beregnet i henhold til følgende human-kanin eller humane-muse overføring formel: Db = Da x (Rb /Ra) x (Wb /Wa ) 2/3, hvor D, R, og W representerer dosering, form koeffisient, og kroppsvekt, henholdsvis, og a og b representerer humant og mus eller kanin, respektivt. Human rekombinant CXCL1, 2 og 8 ble oppnådd fra Peprotech (Rocky Hill, NJ, USA). Den anti-CXCR1 blokkerende antistoff ble erholdt fra R kondisjonert medium ble nylig overført uten lagring.
For å få CM fra QYHJ-behandlede kafeer, ble isolerte kafeer platet på T25 kolber (1 × 10
6 celler) og dyrket i DMEM inneholder 10% QYHJ- inneholder Serum eller Ctrl-inneholder Serum. Tjuefire timer senere ble mediet fjernet og cellene ble vasket to ganger med PBS. Celler ble deretter inkubert med 5 ml friskt DMEM-medium i ytterligere 48 timer. CM ble deretter høstet som beskrevet ovenfor.
Enzyme-Linked Immunosorbent (ELISA) assay
serum CXCL1, 2, og 8-konsentrasjoner ble målt ved anvendelse av en ELISA som tidligere beskrevet [17]. Blodprøven ble lagret ved romtemperatur i 30 minutter, sentrifugert (12 000 x g) i 15 min, og oppbevart ved -80 ° C. Konsentrasjonene ble målt ved bruk av en sandwich-ELISA-sett (DuoSet; R 0,05 ble ansett som statistisk signifikant. Alle statistiske analyser ble utført ved hjelp av SPSS 15.0 programvarepakken.
Resultater
Generering av kreft-assosiert fibroblast (CAF) kulturer
Vi hentet fibroblaster fra resected eksemplarer av to pancreatic ductal adenokarsinomer. Tumormasser ble dissosiert, og forskjellige celletyper ble fraskilt under dannelse av populasjoner av kafeer. Vi har også isolert en andre populasjon av fibroblaster fra en noncancerous område av pankreas på minst 2 cm fra den ytre tumor margin i hvert av de samme to pasienter. Vi har betegnet disse cellene «normale fibroblaster (NFS)». Alle forsøkene ble utført ved sammenligninger mellom kafeer og de tilsvarende NFS, og derved unngå skjevhet følge av inter forskjeller. Renheten av de dyrkede fibroblastceller ble verifisert ved farging ved hjelp av vimentin og PDGFR-β (mesenchymale cellemarkør) og E-cadherin og cytokeratin (CK) (epitel cellemarkør). I tillegg ble D31 og D2-40 anvendes for å utelukke endotelial opprinnelse (figur 1A og fig S1). Alle cellekulturer ble vimentin og PDGFR-β positive og 91% til 100% E-cadherin, cytokeratin, CD31 og D2-40 negativ. Sammenlignet med NFS, de etablerte kafeer uttrykte høye nivåer av alfa glatt muskulatur aktin (α-SMA), en markør for aktiverte fibroblaster, vanligvis uttrykt i CAF, men ikke normale hvil fibroblaster. Disse observasjonene ble ytterligere bekreftet ved Western blot-analyse (figur 1B). Til sammen våre resultater indikerte at vi opprettet paret CAF og NF kulturer fra menneskelig PDAC.
A. Fibroblaster ble hentet fra resected vev av to pancreatic ductal adenokarsinomer. Renheten av de dyrkede fibroblastceller ble verifisert ved immunfluorescens å detektere Pan-CK (rød), E-cadherin (grønn), vimentin (rød), α-SMA (rød), PDGFR-β (rød), CD31 (rød) og D2-40 (rød). De cellekjerner ble motfarget med DAPI (blå). Positive kontroll vev for CD31 og D2-40 farging er blitt anvendt (figur S1). B. Western blot analyse bekreftet uttrykk mønster av markørene som brukes i A.
Kreft i bukspyttkjertelen celler behandlet med kondisjonert medium fra QYHJ-behandlede kafeer viste redusert invasjons
kafeer bidra til invasive og metastatiske prosess i human bukspyttkjertelkreft [5]. I denne studien undersøkte vi migrasjon og invasjon-induserende effekter av CAF på humane kreft i bukspyttkjertelen celler ved hjelp av Transwell kamre med eller uten Matrigel belegg. Transwell analyser viste at det kondisjonerte medium (CM) fra kontrollbehandlede kafeer oppviste en forbedret evne til å indusere cellemigrering kreft i bukspyttkjertelen og invasjon (figur 2 og figur S2). Deretter evaluerte vi virkningen av QYHJ på CAF-indusert cellemigrering og invasjon, ble det fra CM QYHJ eller kontrollbehandlede kafeer høstet og effekten av dette medium på bukspyttkjertelkreft cellemigrering og invasjon ble også evaluert. Vi observerte at CM fra QYHJ-behandlede kafeer utviste redusert migrasjon og invasjon fremmende kapasitet sammenlignet med kontrollbehandlede kafeer (figur 2 og figur S2), disse resultatene antydet at QYHJ behandling kan undertrykke kreft i bukspyttkjertelen celle migrasjon og invasjon gjennom målretting kafeer .
celle migrasjon og invasjon kapasitet på kreft i bukspyttkjertelen celler behandlet med kondisjonert medium (CM) fra NFS, Ctrl-behandlede kafeer og QYHJ behandlet kafeer ble sammenlignet ved bruk av Transwell kamre med eller uten Matrigel belegg. Antallet celler som reiste gjennom membranen ble talt i 10 felt under × 20 objektiv. Original forstørrelse, × 200. Resultatene er gjennomsnitt ± SD av verdiene oppnådd i tre uavhengige forsøk. Statistisk signifikans ble beregnet ved hjelp av ANOVA. *
P
. 0,05
QYHJ hemmer utskillelsen av CXCL1, 2 og 8 danner kafeer
kafeer direkte stimulere tumorcelle spredning gjennom ulike vekstfaktorer, hormoner og cytokiner i en kontekstavhengig måte [5]. Vi har tidligere vist at kafeer fremme migrasjon og invasjon av Capan1 celler in vitro, og dette hotellet ble hemmet etter behandlet med QYHJ. Vi ved siden forsøkt å identifisere potensielle molekyler som medierer sammenhengen mellom fibroblaster og kreftceller. Tidligere studier har vist at medlemmene i CXC chemokin underfamilier, inkludert GRO1 (CXCL1), GRO2 (CXCL2) og IL-8 (CXCL8), er blant en av de mest up-regulerte gener identifisert i kafeer sammenlignet med NFS i bukspyttkjertelen kreft [21]. Derfor undersøkte vi uttrykket av disse faktorene i kafeer og paret NFS. Vi observerte at kafeer utstillings økt CXCL1, 2 og 8 mRNA og protein uttrykk sammenlignet med NFS. I tillegg observerte vi at QYHJ behandling undertrykte betydelig ekspresjon av CXCL1, 2 og 8 i begge CAF-cellelinjer (figur 3A-B). ELISA-analyse bekreftet også at kafeer behandlet med QYHJ utskilt lavere nivåer av CXCL1, 2 og 8 i mediet (figur 3C). Dermed disse resultatene antydet at QYHJ inhiberer ekspresjon av CXCL1, 2 og 8 i kafeer.
A-B. Kafeer ble behandlet med QYHJ holdig Serum eller Ctrl-Inneholder Serum i 48 timer. Cellene ble deretter høstet, og et uttrykk for CXCL1, 2 og 8 ble evaluert ved anvendelse av sanntids-PCR (A) og Western blotting (B). C. De isolerte kafeer ble belagt i T25 kolber (1 × 10
6 celler) og dyrket i DMEM inneholder 10% QYHJ holdig Serum eller Ctrl-Inneholder Serum. Tjuefire timer senere ble mediet fjernet, og cellene ble vasket to ganger med PBS. Cellene ble deretter inkubert med 5 ml friskt DMEM-medium i ytterligere 48 timer. Mediet ble deretter høstet, og den CXCL1, 2 og 8-konsentrasjoner ble påvist ved ELISA. ANOVA ble anvendt for å bestemme den statistiske signifikans. *
P
. 0,05
QYHJ hemmet CAF spredning in vitro
Tidligere studier har indikert at antall kafeer i stroma er signifikant assosiert med dårlig differensiering og prognose av kreft [22], [23], [24], og reduserte CAF-tall ble også observert når tumoren ble behandlet [11]. Vi har derfor en hypotese om at QYHJ påvirker CAF spredning. In vitro-analysen spredning indikerte at QYHJ behandling hemmet spredning av kafeer i begge cellelinjer (figur 4), og dermed bidra til undertrykte CXC chemokine sekresjon fra kafeer.
Om lag 5 × 10
3 kafeer i 0,1 ml ble platet ut i to brønner av 96-brønners plater. Etter inkubering over natten ble suspensjonen fjernet og overført til DMEM inneholdende 10% QYHJ-inneholdende serum eller kontroll-inneholdende serum. De celleproliferasjonsprosesser indeksene ble vurdert daglig bruker Cell Counting Kit-8. Resultatene er presentert som gjennomsnitt ± SD av verdiene som ble oppnådd i tre uavhengige forsøk. *
P
0,05.
CXCLs økt migrasjon og invasjon av menneskelige kreft i bukspyttkjertelen celler
CXC kjemokiner har vært assosiert med kreft celle invasjon i mange typer kreft hos mennesker [25]. Som vi har observert at CAF utstilt økt CXC kjemokiner uttrykk og sekresjon, bekreftet vi om oppregulert utskillelsen av CXC kjemokiner bidrar til økt kapasitet for å indusere kreft i bukspyttkjertelen celle migrasjon og invasjon. Vi har testet effekten av CXC kjemokiner på cellemigrering og invasjon ved hjelp av transwell kamre med eller uten Matrigel belegg. Tilsetningen av rekombinant humant CXCL1, 2 og 8 økt både migrering og invasjon av CAPAN 1-celler i transwell analyser. Videre er inhiberingen av CXC kjemokin signalering ved hjelp av reseptor-antagonister vesentlig blokkert CXC kjemokin-indusert cellemigrering og invasjon (figur 5 og figur S3).
migrering og invasjon analyser ble utført på Capan1 celler behandlet med vehikkel, 100 /ml CXCL1, 2, og 8, eller deres antognists 20 ug /ml anti-CXCR1-antistoff og 400 nM SB 225002 som angitt, ved hjelp av Transwell cellekamre. Antallet celler som invaderte membranen ble tellet i 10 felt under x 20 objektiv. Original forstørrelse, × 200. Resultatene er presentert som gjennomsnitt ± SD av verdiene som ble oppnådd i tre uavhengige forsøk. Den statistiske signifikans ble beregnet ved hjelp av ANOVA. *
P
0,05.
QHYJ behandling sperre tumorigenesis og uttrykk for CXCL1, 2, 8 in vivo
For ytterligere å bekrefte effekten av QYHJ på CAF spredning aktivitet og CXCLs produksjon in vivo, vi etablert mus xenograft modeller med Canpan1 celler. Musene ble tilfeldig inndelt i QYHJ og kontrollgrupper som ble behandlet med QYHJ (0,2 ml, gavage, daglig) eller normalt saltvann som en kontroll, respektivt. Vi har observert at QYHJ behandlingen resulterte i redusert tumorvekst (figur 6A). I samsvar med resultatene av in vitro analyser, QYHJ redusert CAF proliferasjon i tumorer (figur 6B). Dessuten bekreftet IHC som tumorer som ble behandlet med QYHJ utviste den reduserte ekspresjon av CXCL1, 2, og 8 (figur 6D). Derfor våre resultater antydet at QHYJ behandling hemmet CAF spredning og uttrykk for CXCL1, 2 og 8, potensielt reflekterer anti-kreft effekt av QHYJ i bukspyttkjertelkreft.
A. Effekt av QYHJ på tumorvekst i et subkutant transplanterte tumormodell. Capan1-celler (2 x 10
6cells i 200 ml) ble injisert subkutant inn i høyre armhule til hver BALB /c-nu /nu nakne mus. Den neste dag, ble musene behandlet oralt med eller uten QYHJ. De gjennomsnittlige tumorvolumer av bærer-behandlede (saltvann) og QYHJ-behandlede tumorer ble målt. Gjennomsnitt ± standard avvik ble bestemt i hver behandlingsgruppe. De tumorvekstkurver er vist i det øvre felt, og bilder av svulster subkutant transplantert fra begge grupper er vist i det nedre panel. T-test ble anvendt for å bestemme den statistiske signifikans. *
P
0,05 sammenlignet med QYHJ-behandlede gruppen. B. IHC farging for vimentin og α-SMA på deler av svulster å evaluere CAF proliferative aktiviteter. En pil viser fibroblast og pilspiss indikerer bukspyttkjertelkreft celle. Original forstørrelse, 200 ×. CAF proliferative aktiviteter (høyre) ble kvantitativt bedømt etter beregning av forholdet mellom vimentin eller α-SMA-antistoff-positiv farging område til det totale areal i hvert felt, og den midlere verdi fra ti felt under 200 x mikroskopi er angitt. *
P
0,05. C. IHC beising ved anvendelse av anti-CXCL1, 2, og 8-antistoffer ble utført under anvendelse av deler av transplanterte tumorer. Original forstørrelse, × 200. De positive tallene for CXCL1, 2 og 8 i svulster er vist til høyre. T-test ble anvendt for å bestemme den statistiske signifikans. *
P
0,05.
Diskusjon
I denne studien viste vi at QYHJ hemmer kreft i bukspyttkjertelen celle invasjon og metastasering ved å målrette kafeer, spesielt produksjon av CXCL1, 2 og 8. Disse funnene ytterligere bekreftet vår tidligere spekulasjoner om at celler i svulsten mikromiljøet kan tjene som sentrale mål for kinesisk urtemedisin [11].
Tradisjonell kinesisk medisin (TCM) er basert på en unik teori dannet i ensom sikt praktisk erfaring. For de siste tusen årene har TCM blitt allment praktisert i Kina, og mer enn 90% av moderne kinesiske kreftpasienter har fått TCM terapi under behandling [26]. Nylig, TCM har vært brukt i utlandet, og er anerkjent i mange land, spesielt for behandling av onkologiske [27]. TCM er basert på konseptet med holism, tatt i betraktning det innbyrdes forholdet av menneskekroppen og miljøet rundt på makronivå. På mikroskopisk skala, anser vi den helhetlige sammenhengen mellom kreftceller og mikromiljøet. Faktisk har nyere studier bekreftet at kreftceller ikke handler isolert, men heller bestå i en rik mikromiljøet levert av fastboende fibroblaster, betennelsesceller, endotelceller, pericytes, leukocytter og ekstracellulære matrise [28]. Etter hvert som kreft utvikler seg, blir den omgivende mikromiljøet aktivert, coevolving gjennom kontinuerlig parakrin kommunikasjon, for å støtte karsinogenese [29]. Kreft i bukspyttkjertelen er preget av en omfattende stromal respons kalt desmoplasia [7]. Kafeer er den primære celletype i svulsten stroma, og viktigheten av en rolle for kafeer i tumorprogresjon er godt akseptert [5]. Derfor, som kreft er ikke lenger ansett som en diskret enhet definert kun gjennom trekk av kreftceller i svulsten, til slutt påvirker hele organismen, og tilbyr TCM en helhetlig tilnærming til å regulere integriteten til alle kroppens funksjoner og samspillet mellom mennesker og omgivelsene.
