Abstract
fibroblast-lignende stromal -celler modulerer kreftceller gjennom utskilte faktorer og adhesjon, men disse forhold er ikke fullt ut forstått. Her har vi identifisert kritiske stromale faktorer som modulerer kreft vekst positivt og negativt. Ved hjelp av en celle ko-kultursystem, har vi funnet at gastriske stromale celler utskilt IL-6 som en vekst og overlevelsesfaktor for magekreftceller. Videre gastrisk kreft celler utskilt PGE2 og TNFa som stimulerte IL-6 sekresjon av stromale celler. Videre har vi funnet at stromale celler utskilt glyseraldehyd 3-fosfat dehydrogenase (GAPDH). Ekstracellulær GAPDH, eller dets N-terminale domene, hemmet magekreft cellevekst, et funn bekreftet i andre cellesystemer. GAPDH bundet til E-cadherin og downregulated mTOR-p70S6 kinase veien. Disse resultater viser at stromale celler kunne regulere kreftcellevekst gjennom balansen mellom disse utskilte faktorer. Vi foreslår at negativ regulering av kreft vekst ved hjelp av GAPDH kan være en ny anti-kreft strategi
Citation. Kawada M, Inoue H, Ohba S-i, Yoshida J, Masuda T, Yamasaki M, et al. (2015) stromale celler positivt og negativt modulerer veksten av kreftceller: Stimulering via PGE2-TNFa-IL-6 Pathway og Hemming via Utskilt GAPDH-E-cadherin Interaksjon. PLoS ONE 10 (3): e0119415. doi: 10,1371 /journal.pone.0119415
Academic Redaktør: Hiroshi Shiku, Mie Universitetet Graduate School of Medicine, JAPAN
mottatt: 02.10.2014; Godkjent: 13 januar 2015; Publisert: 18 mars 2015
Copyright: © 2015 Kawada et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering:. Denne studien ble støttet av MEXT KAKENHI Grant Antall 23112522. den Funder hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
konkurrerende interesser:.. forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
tumorvev er sammensatt av kreftceller og omkringliggende stroma. Stroma inneholder forskjellige typer celler innleiret i en matriks så som makrofager, endotelceller, immunceller, og fibroblast-lignende stromale celler [1, 2]. De stromale celler utviser fenotypisk plastisitet skiftende mellom fibrinoblast og myofibroblastic egenskaper [3, 4]. Myofibroblasts uttrykker vimentin og glatt muskulatur α-aktin (SM-α-aktin) [1] har en høy evne til å utskille vekstfaktorer, ECM-proteiner, og proteinaser [1, 5] og betegnes reaktive stroma eller kreft-assosiert fibroblaster (kafeer ) [5, 6]. Siden myofibroblast innholdet av tumorvev korrelerer godt med dårlig prognose av visse typer kreft [7], stromale celler, særlig myofibroblasts, er betydelig involvert i utvikling av kreft. Nyere rapporter har avklart hvilken rolle stromale celler i vedlikehold av kreft stamceller [8], metastatisk nisjer [9, 10], og chemoresistance [11, 12]. På grunn av en slik økende bevis, er stromaceller blitt et attraktivt mål for anti-kreft-strategier.
stromale celler regulerer veksten av kreftceller positivt og negativt gjennom utskilt faktorer og adhesjon [1, 5, 6, 13- 17]. Forskjellige vekstfaktorer så som hepatocytt vekstfaktor (HGF) [18], insulin-lignende vekstfaktor-I (IGF-I) [19], og fibroblast vekstfaktor-7 (FGF-7) [20] utskilles fra stromaceller . På den annen side, har kreftceller også utskille forskjellige faktorer for å modifisere eller «lære» stromale celler for å forbedre deres mikromiljø. Transformerende vekstfaktor-β1 (TGF-β1) er en av slike faktorer og stimulerer fibroblaster til å differensiere i myofibroblasts [1, 3]. Teser faktorer og interaksjoner mellom kreftceller og stromale celler forskjellig i hver kreft, og dermed er ikke fullt ut forstått [21].
Vi har studert tumor-stromal celle interaksjoner bruker co-kultur systemer av både celler [22] . Mens prostata stromale celler øke veksten av prostata kreft celler ved samtidig injisert i hårløse mus [19], våre
in vitro
co-dyrkingsmetoden ligner
in vivo
resultater [22]. Ved hjelp av denne modellen, har vi funnet ut at IGF-I utskilles fra prostata stromale celler og spiller en avgjørende rolle i prostatakreft utvikling [19]. Videre brukte vi
in vitro
co-kultur system som en screening analyse for å identifisere forbindelser som utøver anti-kreft aktivitet gjennom modulering av tumor-stromal celle interaksjoner. Som et resultat har vi oppdaget mange forbindelser fra naturlige kilder, slik som dyrkede buljonger av bakterier og sopp [23-26]. Blant dem, phthoxazolin A og leucinostatin A er funnet å inhibere sekresjon av IGF-I fra prostata stromale celler og undertrykke veksten av prostata kreftceller i nærvær av stromale celler [23, 24]. På den annen side hemmer NBRI16716A veksten av prostatacancerceller i en xenograft modell [26], men den påvirker ikke sekresjon av IGF-I fra prostata stromale celler. Våre foreløpige forsøkene tyder på at NBRI16716A kan stimulere stromale celler til å utskille uidentifiserte svulst undertrykkende faktorer. Dermed disse resultatene indikerer sterkt at vi kan kontrollere kreftutvikling ved modulering av tumor-stromal celle-interaksjoner.
I denne studien undersøkte vi samhandling ved hjelp av magekreft som modell. Vi har identifisert kritiske faktorer som modulerer veksten av kreftceller positivt og negativt. Disse funnene tyder nye anti-kreft strategier.
Materialer og metoder
Cellelinjer og reagenser
Menneskelig prostatakreft DU-145 celler, mennesketykktarmskreft DLD-1 celler, humane bukspyttkjertel cancer-cellelinjer MiaPaca2, BxPC-3, CAPAN-1 og PANC-1 ble erholdt fra American Type Culture Collection (ATCC). Menneske prostatakreft PC-3 celler og humane embryonale nyre 293 celler ble hentet fra DS Pharma. Den LNCaP-CR cellelinje [27] ble opprettet i vårt laboratorium fra menneskelig prostata kreft LNCaP celler (DS Pharma). Andre kreftcellelinjer ble beskrevet andre steder [28, 29]. Alle kreftcellelinjer ble opprettholdt i Dulbeccos modifiserte Eagles medium (DMEM) (Nissui) supplert med 10% føtalt bovint serum (FBS, Sigma), 100 enheter /ml penicillin G (Invitrogen), og 100 mikrogram /ml streptomycin (Invitrogen) ved 37 ° C med 5% CO
2. Hs738 menneskelige mage stromale celler (CRL-7869), CCD-18Co menneskelige kolon fibroblaster (CRL-1459), og Hs371 brystkjerteltumorer fibroblaster (CRL-7256) ble innhentet fra ATCC. NHLF normale humane lungefibroblaster og PRSC humane prostata stromale celler ble oppnådd fra BioWhittaker. PS humane pankreatiske stromale celler ble oppnådd fra DS pharma. Alle stromale celler ble opprettholdt i DMEM supplert med 10% FBS, 100 enheter /ml penicillin G, 100 ug /ml streptomycin, ITH (5 ug /ml insulin, 5 ug /ml transferrin, og 1,4 uM hydrokortison), og 5 ng /ml basisk FGF (Peprotech) ved 37 ° C med 5% CO
2 som beskrevet [22].
anti-pan-cytokeratin (sc-8018), anti-STAT3 (sc-8019), anti-GAPDH (sc-47724), anti-PAI-1 (SC-8979), anti-p70S6 kinase (sc-230), anti-14-3-3 epsilon (sc-1020), og anti-fosfo-MAPK (sc-7383) antistoffer ble innkjøpt fra Santa Cruz Biotechnology. Anti-vimentin (V2258), anti- SM-α-aktin (A2547), anti-α-tubulin (T9026), anti-fosfo (tyr705) -STAT3 (SAB4300033), anti-RPL-18A (HPA055259), og anti-FLAG M2 (F3165) antistoffer, kanin muskel GAPDH (G2267) og human erytrocytt GAPDH (G6019) ble kjøpt fra Sigma. Anti-fosfor-Ser /Thr kinase substrat (9614 og 9624), anti-ribosomalt protein S6 (RPS6) (2217), anti-fosfo (Ser235 /236) -RPS6 (2211), anti-fosfo (Ser240 /244 ) -RPS6 (2215), anti-fosfo (Ser473) -Akt (9271), anti-fosfo (Thr389) -p70 S6 kinase (9234), anti-fosfo (Tyr416) -Src familien (2102), anti -phospho- (Thr172) -AMPKα (2535), anti-Myc (2278), anti-caveolin-1 (3267), og anti-β-catenin (9562) antistoffer ble kjøpt fra Cell Signaling Technology. Anti-fosfor-14-3-3 antistoff ble kjøpt fra Abgent. Anti-fosfo (Tyr705) -STAT3 (612356) antistoff ble kjøpt fra BD Biosciences. Anti-RPL-18A antistoff ble kjøpt fra Abcam. Anti-humant IL-6-nøytraliserende antistoff (MAB206), rekombinant humant IL-6 (206-IL), og rekombinant human CXCL1 (275-CR /CF) ble innkjøpt fra R Sumilon) for sammenligning med en standard kulturplate (MS-8096F, Sumilon). For Transwell eksperimenter, 0,6 ml Hs738 celler (5 x 10
4 celler /ml) i DMEM supplert med 1% D-FBS og ITH ble først tilsatt til de ytre brønnene av Transwell plater med 0,4 um porestørrelse membraner (3470; Corning) og 0,1 ml av analysemedium ble tilsatt til de indre brønner. Etter 2 dagers dyrking, 10 ul av en magekreft cellesuspensjon (5 x 10
3) i serumfritt DMEM ble tilsatt til de indre brønnene og platene ble ytterligere dyrket i 3 dager.
Fremstilling av Hs738 kondisjonert medium (CM)
Hs738 celler ble dyrket ved 5 x 10
4 celler /ml i DMEM supplert med de indikerte konsentrasjoner av D-FBS og ITH for de angitte dagene. De dyrkede supernatanter ble oppsamlet ved sentrifugering. Å konsentrere mediet, ble Amicon Ultra-15-3K sentrifugale filter enheter (Millipore) eller 2-D opprydding kit (Amersham Biosciences) brukes. Mage cancerceller (3 x 10
5) ble inokulert i 1 ml av den CM av Hs738 celler eller analysemedium alene i 35 mm skåler og dyrket i 1 dag. Cellene ble vasket med PBS og cellelysatene ble preparert for Western blotting.
Proteome analyse av CM
For identifisering av fosforylerte proteiner fra magekreftceller, MKN-7 cellelysater ble påført på en HiTrap Q FF kolonne (GE Healthcare) forhåndslastet med 50 mM Tris-HCl pH7.3. Proteiner ble eluert ved trinnvise økninger på NaCl konsentrasjoner. Etter eluering, ble proteasehemmere og pyrofosfat tilsettes til de eluerte fraksjoner. De eluerte fraksjoner ble separert ved SDS-PAGE, og ble gelene farget med Coomassie brilliant blue (CBB) og båndene identiske med båndene av Western-blots oppnådd med anti-fosfo-Ser /Thr-antistoff ble skåret ut. De utskårne bånd ble fordøyd med trypsin, og de fordøyde peptidene ble deretter utsatt for LC-MS /MS-analyse (LTQ-Orbitrap; Thermo Scientific). For identifikasjon av vekst-hemmende proteiner i Hs738 CM, CM (50 ml) ble konsentrert ved å bruke Amicon ultra sentrifugal-15-3K filtreringsutstyr og påført på en Superdex 200 10/300 GL-kolonne (GE Healthcare) for gelfiltrering. Proteiner ble eluert med PBS, og effekten av de fraksjonerte proteiner på vekst av MKN-7-celler ble bestemt. Fraksjonene med veksthemmende aktivitet ble slått sammen og ytterligere separert ved 2D-gelelektroforese. Flekker av interesse ble kuttet ut, spaltet med trypsin, og deretter utsatt for LC-MS /MS eller MALDI-TOF-MS-analyse (APRO Life Science Institute).
cytokinanalyse
Cellene ble dyrket ved 5 x 10
4 celler /ml i DMEM supplementert med 1% FBS og D-ITH i 2 dager. CMS ble oppsamlet ved sentrifugering og mengden av IL-6, IL-6SR, og CXCL1 ble bestemt ved anvendelse av et humant IL-6 ELISA-sett (Thermo Scientific), en human IL-6SR Quantikine (R RayBio). Mengden av PGE2, 6-keto PG, ble thromboxian B
2, og leukotriene B4 bestemmes ved hjelp av kvantitative kits fra Cayman.
Immunohistochemistry
Tissue arrays ble deparaffinized i xylen og rehydrert i synkende alkoholer i vann. Deretter ble vevet arrays dyppet i 3% H
2o
2 til 13 minutter og kokt i 10 mM sitronsyre (pH 6,0) i 15 min. Immunhistokjemisk farging ble utført med anti-fosfo (Tyr705) -STAT3 (SAB43000033) ved anvendelse av ImmPRESS anti-kanin-Ig-peroksidase (Vector Laboratories) og ImmPACT DAB-substrat (Vector Laboratories). Den estimerte visuelle intensitet av fosfo-STAT3 immunfarging ble gradert på en vilkårlig 3-punktsskala:. Negativ, svakt positiv, og positiv
GAPDH aktivitet
GAPDH-aktivitet ble målt som beskrevet [33]. Alle reagenser ble kjøpt fra Sigma.
Bygging av rekombinant GAPDH
Menneskelig rekombinant villtype GAPDH og mutant GAPDH ble konstruert som beskrevet [34], med modifikasjoner som følger. Total RNA ble isolert fra Hs738 celler ved bruk av RNeasy MINIKIT (Qiagen). CDNA ble syntetisert ved anvendelse av AMV revers transkriptase (Promega) og full-lengde human GAPDH cDNA-fragment inneholdende
Nhe
I og
Xhol
I-setene ble generert ved PCR ved anvendelse av PfxDNA polymerase (Invitrogen) og forstand primer 1 (5′-TATGCTAGCGACTACAAGGACGACGACGACAAGATGGGGAAGGTGAAGGTCGGAG-3 «) og antisense-primer 2 (5′-TATCTCGAGTTACTCCTTGGAGGCCATGTGGG-3»).
Nhe
I /
Xho
jeg fragment av GAPDH ble satt inn i Dyre 17b vektor (Novagen). For mutant GAPDH (C152S), ble fragmentet en generert ved PCR ved anvendelse av primer forstand 1 og antisense-primer 3 (5′-AGGGGTGCTAAGCAGTTGGTGGTGGAGGAGGCATTGCTGATGATCTTGA-3 «) og fragment 2 ble generert ved PCR ved anvendelse av primeren forstand 4 (5»-TCAAGATCATCAGCAATGCCTCCTCCACCACCAACTGCTTAGCACCCCT-3) og antisense-primer 2. full-lengde mutant GAPDH-fragment ble generert ved PCR ved anvendelse av primer forstand en, antisense-primer 2, og fragmenter 1 og 2 som maler.
Nhe
I /
Xho
fragment av mutant GAPDH ble også satt inn i Dyre 17b vektor. Delesjonsmutanter av GAPDH ble konstruert ved invers PCR ved anvendelse av en KOD-Plus-mutagenese kit (Toyobo) og primersett for del1, 5′-gcagttggtggtgcaggaggcatt-3 «og 5′-gacaacgaatttggctacagcaac-3′, for Del2, 5»-ATCAAGTGGGGCGATGCTGGCGCTGAGTA- 3 «og 5′-CTTCCCCATCTTGTCGTCGTCGTCCTT-3′, og for Del3, 5»-CTCCACGACGTACTCAGCGCCAG-3 «og 5′-accaccaactgcttagcacccctg-3». Vektorene ble transfektert inn i BL21 (DE3)
E
.
coli plakater (Promega) eller ClearColiBL21 (Lucigen) og N-terminal FLAG-merket human villtype og mutant GAPDH ble renset ved hjelp av anti-FLAG M2 agarose (Sigma). Det delvis rensede GAPDH ble ytterligere renset ved gelfiltrering (GE Healthcare) og endotoksin fjerning harpiks (Thermo Scientific).
Binding av GAPDH til cellemembraner
Cellemembraner ble fremstilt ved å anvende ProteoExtract kit (Calbiochem ). Cellemembranene ble inkubert med human erytrocytt GAPDH på 5 U /ml eller FLAG-merket humant rekombinant vekt- GAPDH ved 5 ug /ml i 2 timer ved romtemperatur (RT) og immunopresipitert med anti-GAPDH-protein G-agarose kompleks eller anti- FLAG M2 agarose, respektivt. Immunopresipitatene ble analysert ved Western blotting.
Binding av GAPDH til rekombinant E-cadherin
A 96-brønners plate ble belagt med 100 pl humant rekombinant E-cadherin Fc-kimær (648-EC- 100, R Thermo Scientific). Eller Western blotting
Real time RT-PCR
Hs738 celler ble dyrket i 2 dager ved 5 x 10
4 celler /ml i DMEM supplementert med 1% FBS og D-ITH i nærvær av MEK-inhibitor I. Totalt RNA ble isolert ved anvendelse av RNeasy MINIKIT ( Qiagen). cDNA ble syntetisert ved anvendelse av AMV revers transkriptase og vilkårlige primere (Promega) fra 1 ug RNA. Real time RT-PCR ble utført på en termosykler Dice Real Time System (Takara) med SYBR Premiks Ex TaqII (Takara). Spesifikke primere ble kjøpt fra Takara.
Exosome forberedelse
Exosomes ble fremstilt fra dyrket supernatant av Hs738 celler som beskrevet [38].
Statistisk analyse
Alle data er representative for minst 3 uavhengige eksperimenter med lignende resultater. Statistisk analyse ble utført ved hjelp av Student
t
-test.
Resultater
Gastric stromale celler modulere veksten av magekreftceller
Vi etablerte menneskelige mage kreftcellelinjer som uttrykte grønt fluorescerende protein (GFP) (S1A fig.). Innstilling av samme organ, brukte vi menneskelige mage stromale celler (Hs738 celler) som var en blanding av myofibroblasts (vimentin (+) og SM-α-aktin (+)) og fibroblaster (vimentin (+) og SM-α-aktin ( -)) (S1B figur) som lignet andre stromaceller [4, 24].. Alle 5 magecancercellelinjer dannet svulster når injisert subkutant i nakne mus (fig. 1A), men ko-injeksjon av Hs738 celler signifikant undertrykt svulstene av MKN-1 MKN-7-celler, og MKN-28-celler (fig. 1A ). I motsetning til dette ble veksten av tumorer dannet av MKN-45 MKN-74 og celler øket ved tilstedeværelsen av Hs738 celler (Fig. 1A). Vi kunne ikke påvise metastaser av kreftceller etter subkutan inokulasjon, men alle kreftcellelinjer viste metastaser i bukhulen når injiseres i magen orthotopically (S2 fig.). Størrelsene på de primære svulster initiert av kreftcellelinjene injisert alene i magen var ikke signifikant forskjellig. Imidlertid er tallene og frekvenser av metastatiske foci hadde en tendens til å være høyere med MKN-45 og MKN-74-celler (dårlig eller moderat differensierte celler) og lavere i MKN-1 MKN-7 og MKN-28-celler (godt differensierte cellelinjer [39]) (S2 fig.). Disse resultatene viste at veksten av godt differensierte magecancercellelinjer ble undertrykket ved gastriske stromale celler og vekst av udifferensierte gastrisk cancer cellelinjer med høy metastatiske egenskaper ble øket med gastriske stromale celler. Siden det er foreslått er det forskjellige mekanismer i den tumor-stromale celleinteraksjoner av magekreft, har vi forsøkt å belyse dem i denne studien.
(A) Gastriske kreftceller ble injisert subkutant med eller uten Hs738 gastrisk stromal cellene i hunn nakne mus. Musene ble avlivet 37, 35, 34, 22, og 33 dager etter injeksjon av MKN-1, 7, 28, 45, 74 og mage kreft celler, henholdsvis, og tumorene ble skåret ut. Verdiene er middelverdier ± S.D. (N = 6). (B) MKN-7 og MKN-74 magecancerceller ble dyrket alene (mono) eller ko-dyrket med Hs738 celler ved forholdstall (magekreft: Hs738) 1: 1 og 1: 2 under de angitte konsentrasjoner av D-FBS. Veksten av kreftceller ble bestemt måle GFP fluorescensintensitet. Verdiene er middelverdier ± S.D. (N = 3). Representative mikrofotografier i 1% D-FBS henhold fluorescens mikroskopi. Grønn; GFP. Scale bar er 200 mikrometer.
For å studere tumor-stromal celle-interaksjoner, vi først utviklet en
in vitro
co-kultur system av magekreft cellelinjer og Hs738 celler som beskrevet før [22]. For å måle veksten av kreftceller selektivt i co-kultur med stromal celle, brukte vi GFP-transfektert mage kreft cellelinjer (S1 A Fig.). GFP fluorescensstyrkene i lyserte celler korrelerte godt med celle nummer samt MTT-analyser (S1C Fig.). For å redusere påvirkning av vekstfaktorer i FBS, brukte vi dialysert FBS (D-FBS). Når magekreft cellelinjene ble ko-dyrket med Hs738 celler, vekst av MKN-1, MKN-7, og MKN-28-celler ble undertrykt ved tilstedeværelsen av Hs738 celler (Fig. 1B og S3 fig.). Mens veksten av MKN-45-celler ble ikke endret ved ko-kulturen, ble det av MKN-74-celler øket ved ko-kultur med Hs738 celler, spesielt ved lavere konsentrasjoner av D-FBS (fig. 1B og S3A fig.). Selv om omfanget av påvirkning avhengig av konsentrasjonen av D-FBS disse resultatene fra
in vitro
co-kultur forsøkene var lik den
in vivo
resultater (Fig. 1A og S3 Fig. ).
Utskilte faktorer fra mage-stromaceller regulere proteinsyntese i magekreftceller
Én av egenskapene til kreftceller er forankrings-uavhengig vekst [40]. Fordi gastriske kreftceller ble inokulert på et monolag av Hs738 celler, kan endringen av vekst i ko-kulturen har blitt henført til forankrings-uavhengig vekst. Når vi sammenlignet veksten i henge forhold med normal tilhenger tilstand, veksten av alle magekreft cellelinjer tendens til å bli undertrykt etter suspensjon forhold (S3b fig.). På den annen side, Transwell eksperimenter viste at veksten av MKN-1 MKN-7, og MKN-28-celler ble redusert med ko-kultur med Hs738 celler, mens veksten av MKN-74-celler ble øket, og at av MKN- 45 celler var uendret (S3C fig.). Disse resultatene var konsistente med
in vitro
co-kultur eksperimenter (Fig. 1B og S3A fig.) Og indikerte at utskilling av faktorene fra Hs738 celler i stedet for forankringsuavhengig vekst var involvert i vekstregulering.
Siden utskilte faktorer ble muligens involvert i vekstregulering, så la vi kondisjonert medium (CM) fra Hs738 celler til mage kreft celler og funnet ut at fosforylering av Ser /Thr rester av proteiner, spesielt ~ 30 kDa proteiner, ble markert endret (fig. 2A). Fosforyleringen av ~ 30 kDa-proteiner i MKN-1 MKN-7, og MKN-28-celler ble signifikant redusert etter den CM, men at det i MKN-45 og MKN-74-celler ikke ble påvirket (fig. 2A og S4 fig. ). Proteomikk analyse av ~ 30 kDa-proteiner, viste at en av kandidatene ble ribosomalt protein S6 (RPS6) (S4B fig.). sirnas mot RPS6 redusert fosforylering av ~ 30 kDa-proteiner samt fosforylert RPS6 (S4C fig.). Videre ble immunopresipitater generert av anti-RPS6-antistoff påvist ved anti-fosfo-Ser /Thr-antistoff, så vel som anti-fosforylert RPS6 antistoff (S4C fig.). Dermed ~ 30 kDa-proteinet faktisk var RPS6. Egentlig Hs738 CM redusert fosforylering av RPS6 i MKN-1 MKN-7, og MKN-28-celler, men ikke av 14-3-3 protein, en annen kandidat til fosforylert protein (Fig. 2B og S4B fig.). Videre ble fosforylert RPS6 i MKN-7 celler funnet å redusere ved samtidig dyrket med Hs738 celler (Fig. 2C). Fosforylering av RPS6 er kjent for å spille en kritisk rolle i reguleringen av proteinsyntese [41]. Således våre resultater indikerte at Hs738 celler i det minste downregulated proteinsyntese og undertrykket vekst av MKN-1 MKN-7, og MKN-28 cellene gjennom utskilte faktorer.
(A) Gastriske kreftceller ble dyrket hexafluorophosphate.
doi:10.1371/journal.pone.0119415.s026
(PDF)
Acknowledgments
We
