Abstract
Mutasjoner i
KRAS
onkogen bokføres biomarkører som predikerer manglende respons på anti- epidermal vekstfaktor reseptor (EGFR) antistoff terapi. Men noen pasienter med
KRAS
vill type svulster fortsatt ikke svare, slik at andre nedstrøms mutasjoner i
BRAF, PIK3CA Hotell og
NRAS
bør undersøkes. Heri vi brukt direkte sekvensering for å analysere mutasjonsstatus for 676 pasienter i
KRAS
(kodon 12, 13 og 61),
BRAF plakater (ekson 11 og ekson 15),
PIK3CA
(ekson 9 og ekson 20) og
NRAS plakater (codons12, 13 og 61). Clinicopathological kjennetegn foreninger ble analysert sammen med total overlevelse (OS) av metastatisk kolorektalcancer (mCRC). Vi fant 35,9% (242/674) svulster næret en
KRAS
mutasjon, 6,96% (47/675) hadde en
BRAF
mutasjon, 9,9% (62/625) hadde en
PIK3CA
mutasjon og 4,19% (26/621) hadde en
NRAS
mutasjon.
KRAS
mutasjon coexisted med
BRAF
,
PIK3CA Hotell og
NRAS
mutasjon,
PIK3CA
exon9 mutasjon dukket opp oftere i
KRAS
muterte tumorer (P = 0,027), mens
NRAS
mutasjon nesten eksistert i
KRAS
wild-typer (P 0,001). Kvinnelige pasienter og eldre gruppen næret en høyere
KRAS
mutasjon (P = 0,018 og p = 0,031, henholdsvis);
BRAF plakater (V600E) mutasjon viste en høyere frekvens i tykktarmskreft og fattige differensiering svulster (p = 0,020 og p = 0,030, henholdsvis); proksimale svulster dukket opp en høyere
PIK3CA
mutasjon (P 0,001) og fjernt metastatiske svulster delte en høyere
NRAS
mutasjon (P = 0,010). Men i denne studien ingen signifikant resultat ble funnet mellom OS og genmutasjon i mCRC gruppe. Så vidt vi vet, den første store retrospektive studie på omfattende genetiske profil som assosiert med anti-EGFR MoAb behandling utvalg i østasiatiske CRC befolkning, dukket en bestemt genotype fordeling bilde, og resultatene gitt en bedre forståelse mellom clinicopathological egenskaper og genmutasjoner i CRC pasienter
Citation. Shen Y, Wang J, Han X, Yang H, Wang S, Lin D, et al. (2013) Effektor av epidermal vekstfaktor reseptor Pathway: Den Genetisk profilering av
KRAS
,
BRAF
,
PIK3CA
,
NRAS
Mutasjoner i tykktarmskreft kjennetegn og personlig medisin. PLoS ONE 8 (12): e81628. doi: 10,1371 /journal.pone.0081628
Redaktør: Anthony WI. Lo, det kinesiske universitetet i Hong Kong, Hong Kong
mottatt: 14. august 2013, Akseptert: 23. oktober 2013, Publisert: 10.12.2013
Copyright: © 2013 Shen et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne studien ble støttet delvis med tilskudd fra Forskningsrådet Special Fund for offentlig velferd Industry of Health (200902002-1), National Science and Technology Major Project (2008ZX09312, 2012ZX09303012), National High Technology Research and Development Program of China (2011AA02A110) (http: //www.863.gov.cn/); Beijing Science and Technology Commission (Z121107005112005, Z121102009212055), spesielle midler for Central Health Authority (B2009B124) og Major Research Program of Cancer Institute og Hospital of Chinese Academy of Medical Sciences (LC2012A18). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
tykktarms~~POS=TRUNC kreft~~POS=HEADCOMP (CRC) fortsatt får flertall av dødelighet i verden [1]. I mCRC svulster, ble umåtelig dårlig prognose observert. Heldigvis har den raske utviklingen i biologiske midler en lovende fremtidig behandling. Cetuximab eller panitumumab har monoklonalt antistoff (MOAB) målrettet på epidermal vekstfaktor reseptor (EGFR), er implementert i klinisk praksis, og dukket opp som en effektiv monoterapi eller kjemoterapi adjuvant tilnærming for mCRC behandling [2]. Disse MoAb blokkerer nedstrøms intracellulær signalisering av EGFR, som inkluderer to hovedsignalveier, RAS-RAF-MAPK aksen, som hovedsakelig involvert i celleproliferasjon, og fosfatidylinositol 3-kinase (PI3K) -PTEN-AKT, viktige formidlere av overlevelse, og motilitet-invasjonen [3].
Selv om tidligere kliniske studier har indikert at pasienter som gjennom
KRAS
mutasjoner i kodon 12 og 13 er ikke-responsive til EGFR-rettet behandling [4] , [5], [6], [7], og villtype-status virker en reaksjon tilstand, noe vill-type pasienter som fortsatt ikke klarer å svare på anti-EGFR-monoklonale antistoffer [8], og mekanismen er fortsatt uklar. Det er mulig at mutasjoner i nedstrøms effektorer av EGFR signalveien, slik som
BRAF
,
PIK3CA Hotell og
NRAS
, kan indusere en negativ effekt på responsen i anti-EGFR målrettet behandling [9], [10], [11].
til dags dato, genetisk profilering av enkelte svulster påvirke valg av behandling og behandlingsrespons er påvist i klinisk praksis er imidlertid store data om hyppigheten av onkogener mutasjoner ble presentert i vestlige populasjoner og få data er tilgjengelig for kineserne. Siden genmutasjon status endrer med etniske forskjeller [12], designe vi denne studien å undersøke etnisitet spesifikke rolle mutasjoner i utvikling og progresjon av CRC.
KRAS
,
BRAF
,
PIK3CA Hotell og
NRAS
mutasjoner i primærsvulster fra kinesiske CRC pasienter ble oppdaget og deres potensielle sammenhenger med clinicopathological faktorer ble analysert . Videre har vi samlet overlevelse data for mCRC undergruppe pasienter, for å oppnå en tilstrekkelig innsikt mellom genmutasjon og overlevelse status. Vi beregnet at disse dataene kan være til nytte utformingen av fremtidige kliniske studier og individualisert behandling i CRC-pasienter.
Materialer og metoder
Pasienter
Vi har undersøkt 676 påfølgende pasienter som gjennomgikk kirurgi for tykktarmskreft ved Cancer Institute /Hospital of Chinese Academy of Medical Sciences (Beijing, Kina) mellom august 2010 og desember 2011 ble alle pasientene utført primær reseksjon i vårt sykehus, og ingen pasienter hadde fått kjemoterapi før operasjonen. Hver pasient ble kontaktet for å gi tilgjengelige formalinfikserte, parafininnstøpte (FFPE) CRC vev. Skriftlig informert samtykke ble innhentet fra den enkelte pasient, og den eksperimentelle protokollen ble godkjent av Institutional Review Board (IRB) i Cancer Institute /Hospital of Chinese Academy of Medical Sciences og Peking Union Medical College. CRC diagnose ble bekreftet med hematoxylin og eosin (HE) farging og histologisk analyse. Total overlevelse ble definert som perioden fra starten av diagnostisert CRC til død uansett årsak eller siste oppfølging. Pasientenes demografiske og clinicopathological data er presentert i tabell 1.
DNA Extraction og Mutasjon analyse
Før uttak av genomisk DNA, alle CRC-prøver ble identifisert av to patologer i orden for å sikre representative ondartede celler finnes i hver prøve ble vevsblokker kuttet i 5 mikrometer seksjoner, deretter mikrodisseksjon ble utført for å garantere hver vevsprøve testet inneholdt 80% kreftceller. DNA ble ekstrahert fra QIAamp DNA Blood Mini Kit (Qiagen, Hilden, Tyskland) i henhold til produsentens instruksjoner og lagret ved -80 ° C inntil bruk.
Vi oppdaget at mutasjon hotspots i
KRAS
(kodon 12 og 13),
BRAF plakater (exon15),
PIK3CA plakater (ekson 9 og ekson 20) og
NRAS plakater (kodon 61), hvor de fleste mutasjoner oppstå i disse genene [13], [14], dessuten sjeldne typer mutanter for
KRAS plakater (kodon 61),
BRAF plakater (ekson 11) og
NRAS
(kodon 12 og 13) ble også inkludert. Programmet for PCR forsterkning i
KRAS
,
BRAF
,
NRAS Hotell og
PIK3CA
exon20 ble som følger: 1 min av første denaturering ved 95 ° C, 35 sykluser med amplifikasjon bestående av 30 s ved 94 ° C, 40 s ved 57 ° C og 30 s ved 72 ° C, med en endelig ytterligere forlengelse ved 72 ° C i 7 min.
PIK3CA
ekson 9 forsterkning ble gjennomført med en touchdown PCR program: 94 ° C (2 min); 3 sykluser med 94 ° C (30 sek), 64 ° C (30 sek), 70 ° C (30 sek); 3 sykluser med 94 ° C (30 sek), 61 ° C (30 sek), 70 ° C (30 sek); 3 sykluser med 94 ° C (30 sek), 58 ° C (30 sek), 70 ° C (30 sek); 32 sykluser ved 94 ° C i (30 sek), 57 ° C (30 sek), 70 ° C (40 sek); En syklus på 70 ° C (5 min). Ved utførelse av PCR, ble et ikke-templat kontroll inkludert i hver gruppe. Etter PCR reaksjon, produktene var renset og utsettes for direkte sekvensering (ABI 3500 × L Genetic Analyzer, Applied Biosystems, Carlsbad, CA, USA).
Statistical Analysis
Statistisk analyse ble utført av SPSS 17.0 statistisk programvare (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). The Chi-square (χ
2) test ble brukt for å sammenligne andelen genmutasjoner mellom ulike clinicopathologic faktorer. Multippel logistisk regresjonsanalyse ble utført for å undersøke effektene av variablene på genmutasjoner, ved hjelp av en bakover trinnvis (sannsynlighetsforhold) metode med odds-ratio (OR) beregnet, og variable som viste statistisk signifikant sammenheng med genmutasjoner ble underkastet endelig regresjonsanalyse. Overlevelsesanalyse ble utført med Kaplan-Meier-overlevelsesfunksjon med fremgangsmåten i log-rank test. De to-sidig signifikansnivå ble satt til
P
. 0,05
Resultater
KRAS
Mutation
KRAS
mutasjonsstatus kan ikke overdras til 2 av 676 (0,30%) prøver, 35,9% (242/674) hadde en
KRAS
mutasjon, 25,7% (173/674) i codon12, 6,8% (46/674) i codon13, og 2,1% (14/672) i codon61. Videre en pasient næret en dobbel
KRAS
mutasjon i begge codon12 og 13 (GGT GTT, GGC AGC). Den tilsvarende ordre på
KRAS
codon12 mutasjonsfrekvens var G12D, G12V, G12A, G12C, G12S og G12R; i
KRAS
codon13, den hyppigste mutasjonen var G13D, etterfulgt av G13C og G13S. Den store mutasjon subtype i codon61 var Q61H, og Q61L, Q61R ble også funnet i denne studien (figur 1).
KRAS
mutasjon dukket oftere hos kvinner enn menn (41,3% vs 32,3%, p = 0,02), og pasienter som er eldre enn 60 år viste også en høyere rate av
KRAS
mutasjon (39,9% vs 32,0%, p = 0,03). Vi fant ikke andre signifikante sammenhenger mellom
KRAS
mutasjon og pasientenes clinicopathological egenskaper (Tabell 1)
Panel A: KRAS-mutasjoner (codons12 13:. N = 674; codon61: n = 672). Panel B: BRAF-mutasjoner (exon11: n = 676, exon15: n = 675). Dataene presenteres som prosent (totalt antall prøver).
BRAF
Mutation
Status for
BRAF
mutasjonen ble oppdaget i 99,8% (675/676) prøver, 6,96% (47/675) hadde en
BRAF
mutasjon, 4,4% (30/675) i exon15 og 2,5% (17/676) i exon11. Den V600E mutasjon i exon15 var den hyppigste subtype (1,8%, 12/675), og etterfulgt av V600M mutasjon og andre typer. I exon11, mutasjonene distribuert vidt, R461K og G465E var relativt mer vanlig i disse mutasjonene (figur 1).
BRAF Hotell og
KRAS
mutasjoner var ikke gjensidig utelukkende, 4,55% (11/242) av
KRAS
muterte tumorer næret en
BRAF
mutasjon (av som 7/242 [2.89%] exon15 og 4/242 [1.66%] exon 11 mutasjoner). Men
BRAF plakater (V600E) bare eksistert i
KRAS
vill typer (0,0% vs 2,78% [12/431], P = 0,005). I denne gruppen V600E mutasjon viste en sterk sammenheng med primær tumorlokalisering, svulst i tykktarmen dukket oftere til båtplass en V600E mutasjon (9/285 [3,2%] i tykktarm vs 3/390 [0,8%] i rektum; P = 0,020 ), dessuten med svulsten differensiering blir verre, en høyere V600E mutasjon rente dukket opp (5/87 [5,7%] i dårlig differensiering vs 7/555 [1,3%] i moderat differensiering; P = 0.030). Ingen annen signifikant sammenheng ble funnet mellom
BRAF
mutasjon og pasientenes egenskaper (tabell 1).
PIK3CA
Mutation
PIK3CA
mutasjonsstatus kan ikke overdras til 7,54% (51/676) prøver, 9,9% (62/625) næret en
PIK3CA
mutasjon, 7,0% (45/643) i exon9 og 2,67% (17 /636) i exon20. Den E545K i exon9 dukket opp oftere enn noen annen mutasjon subtype, etterfulgt av E542K, E545G, Q546E og andre. I motsetning til nesten alle mutasjoner i exon20 var H1047R, bare én prøve var H1047Y mutasjon, spekteret av disse mutasjonene ble vist i figur 2. Vi har også oppdaget at en prøve næret en dobbeltmutasjon i exon9 (L540V og Q546E), foruten, denne prøve hadde også et
KRAS
mutasjon (G13D). Det var en sterk signifikant sammenheng mellom
PIK3CA
exon9 og
KRAS
mutasjoner (23/230 [10,0%] i
KRAS
mutant vs 22/412 [5,3%] i
KRAS
vill typer, P = 0,027), mens denne foreningen ikke ble funnet i
PIK3CA
exon20 med
KRAS
mutasjon (P = 0,673).
BRAF Hotell og
PIK3CA
mutasjoner var ikke gjensidig utelukkende, 10% (4/40) av
BRAF
mutasjon eksisterer på
PIK3CA
mutasjon (hvorav 3/40 [7,5%] ekson 9 og 1/40 [2,5%] exon20). For clinicopathological egenskaper analyse, pasienter med svulst ligger i rektum hadde signifikant lavere
PIK3CA
mutasjonsraten enn andre steder i tykktarm og rektosigmoid overgangssonen (6,1% vs 15,1%, P 0,001) og proksimale svulster dukket opp en høyere
PIK3CA
mutasjonsraten (19,8% vs 7,4%, P 0,001). Ingen annen signifikant sammenheng ble funnet i denne analysen (tabell 1)
Panel A: PIK3CA mutasjoner (exon9: n = 643, exon20: n = 636).. Panel B: NRAS mutasjoner (codons12 13: n = 630, codon61: n = 643). Dataene presenteres som prosent (totalt antall prøver).
NRAS
Mutation
Vi oppdaget
NRAS
mutasjon i 92,0% ( 621/676) prøver, og 4,19% (26/621) næret en
NRAS
mutasjon. Selv
NRAS
er tett for å
KRAS
som også inngår i Ras genet [13], i motsetning til
KRAS
, mest
NRAS
mutasjonen skjedde i codon61 ( 2,02%, 13/643), snarere enn i codon12 eller 13 (1,75%, 11/630). De hyppigst mutasjonen subtype i codon61 var Q61R, og G12D i codon12 /13 (figur 2). Dessuten, en G15W og en G60E mutasjon ble også påvist i disse prøvene. Videre fant vi likevel at
NRAS
mutasjon dukket opp en sterk signifikant sammenheng med
KRAS
vill typer (1/227 [0.44%] i
KRAS
mutant vs 25/394 [6,3%] i
KRAS
vill typer, P 0,001). Interessant,
NRAS
codon61 mutasjon bare skjult i
KRAS
vill typer (0,0% vs 3,2% [13/410], P = 0,006), mens
NRAS
codon12 og 13 delte ikke denne foreningen (P = 0,063). Bare én prøve næret en
BRAF
mutasjon (V600E) med en
NRAS
mutasjon (G15W), og 6,78% (4/59)
PIK3CA
mutasjon næret en
NRAS
mutasjon (hvorav 2/59 [3.39%] i kodon 12 og 13, 2/61 [3.28%] i codon61). Videre
NRAS
mutasjonen forekom oftere i fjernmetastaser svulster (12,2% vs 3,3%, p = 0,010), og forskjellig tumor stadium viste en annen
NRAS
mutasjonsraten (p = 0,030) . (Tabell 1).
I multivariate logistisk regresjonsanalyse, har vi valgt kjønn, alder, primær tumorlokalisering, tumor differensiering, tumorstadium og fjernmetastaser som kovariater, og
KRAS
mutanter dukket opp mer hyppigere hos pasienter eldre enn 60 (P = 0,023), samt hos kvinnelige pasienter (p = 0,016).
BRAF
mutasjoner viste ingen signifikant sammenheng med egenskaper (data ikke vist), mens
BRAF plakater (V600E) mutanter delt signifikant sammenheng med tumor differensiering (P = 0,016). Som for
PIK3CA
mutasjoner, tykktarmskreft dukket en høyere mutasjonsrate enn endetarmskreft (P 0,001), men
NRAS
mutasjoner viste oftere i rektum cancer (P = 0,031), selv om ingen signifikant sammenheng ble funnet i univariat analyse (P = 0,09). Videre er en sterk signifikant sammenheng fortsatt eksisterte mellom
NRAS
mutanter og fjernmetastaser i multivariat analyse (tabell 2).
Analyse av genmutasjon i mCRC Pasienter
Femti-fem av 676 pasienter ble bekreftet som mCRC, og alle disse 55 prøvene ble samlet inn før kjemoterapi. Vi videre undersøkt mutanter distribusjon og clinicopathological egenskaper foreningen i denne gruppen. 27,3% (15/55) hadde en
KRAS
mutasjon, henholdsvis hvorav 93,3% (14/15) i codon12 og 6,7% (1/15) i codon13,.
BRAF
mutasjonsraten var 10,9% (6/55), 66,7% (4/6) i exon15 og 33,3% (2/6) i exon11.
PIK3CA
mutasjonen ble påvist i 18,0% (9/50) svulster, 66,7% (6/9) ble påvist i exon9 og 33,3% (3/9) i exon20. 12.24% (6/49) svulster ble oppdaget som
NRAS
mutanter, hvorav 50% (3/6) i codons12 og 13, 33,3% (2/6) i codon61, foruten, næret en sample en G15W mutasjon. Statistisk analyse indikerte at
KRAS
mutasjon var signifikant høyere i dypere invasjonen scenen (5/7 [71,4%] i T4 vs 10/48 [20,8%] i T3, OR 9.500, 95% KI 1,599 til 56,426 ; P = 0,013), og tumor med dårlig differensiering viste en høyere
NRAS
mutasjonsraten enn moderat differensiering (5/19 [26,3%] vs 1/30 [3,3%], ELLER 10,357, 95% KI 1,103 -97,266; P = 0,027). Vi fant ikke noe annet signifikant sammenheng mellom genmutasjon (inkludert subgruppe analyse) og clinicopathological egenskaper (data ikke vist).
Total overlevelse analyse i mCRC Pasienter
Samlet overlevelse for pasienter i denne undergruppen ble analysert med Kaplan-Meier-metoden, i dette relativt liten undergruppe (n = 55), ble overlevelse informasjon som er samlet hell i bare 45 pasienter, hvorav 37 hadde fått cellegift etter operasjonen, enten med infusjon fluorouracil, folinsyre og irinotecan (FOLFIRI) eller infusjon fluorouracil, folinsyre, og oksaliplatin (FOLFOX4). Men den relative lite utvalg størrelse utgjør ingen signifikant resultat mellom genmutasjon og OS, inkludert genet undergrupper analyse (data ikke vist).
Diskusjon
I løpet av de siste tiårene, store mengder forskningsdata dukket opp fra molekylære grunnlaget [15], narkotika etterforskning og bruk [3], genetiske profilering effekter [16] studier har ført til blomstrende forskning på identifisering av flere molekylære undergrupper og målrettet ved kolorektalkreft. Etter oppdagelsen av at mutant
KRAS
svulster var resistente mot anti-EGFR antistoffer, er pasienter med metastatisk kolorektalcancer nå anbefales for å oppdage
KRAS
codons12 og 13 mutasjonsstatus før MoAb terapi [8] , [17], [18]. Men selv i
KRAS
vill type svulster, opptil 65% av pasientene var fortsatt resistente mot anti-EGFR monoklonale antistoffer [8]. Dessuten, selv om påvisning av
KRAS
mutasjonsstatus før MoAb terapi er allment akseptert, er det liten enighet om sin spådd og prognostisk rolle, for publiserte studier gitt ulike resultater i forholdet mellom
KRAS
mutasjon og kliniske resultater i CRC, og de viktigste effektbokser i nedstrøms signalveien fra
KRAS
, for eksempel
BRAF
,
PIK3CA Hotell og
NRAS
var allerede studert i mange kliniske studier som viste evnen til å presentere som potensielle prediktive eller prognostiske biomarkører [14], [19].
så vidt vi vet, denne studien undersøkte første gang genmutasjon typen distribusjon i kinesisk CRC befolkning, og involverte ikke bare
KRAS
, men også
BRAF
,
PIK3CA
,
NRAS
sammen for omfattende analyse mellom genmutasjon og clinicopathological egenskaper, i tillegg total overlevelse av metastatisk kolorektalcancer. Tidligere studier som regel fokusert på
KRAS
,
BRAF
,
PIK3CA product: [20], [21], [22], men inkluderer ikke
NRAS
mutasjon, eller studere utvalgsstørrelsen var for liten til å trekke bekreftet konklusjoner [20]. Mange studier kunne ikke samle nok egnede prøver å beskrive en relativt komplett disposisjon for kinesiske CRC pasienter i genetiske profilen, og vår undersøkelse forsøkte å presentere nøkkelen mediert genmutasjon av CRC, til en viss grad, som representerer den østasiatiske befolkningen.
KRAS
genet koder for en liten G-protein som fungerer som en nøkkel svinger i EGFR veien, mutasjoner i
KRAS
genet fører til konstituerende signalering gjennom EGFR sti og aktiv nedstrøms MAPK og
PIK3CA
avhengige trasé [18], [23]. Tidligere studier har analysert
KRAS
mutasjon distribusjon fra vestlige befolkningen, noe som indikerte at G12D var den hyppigste mutasjonen subtype i codon12, etterfulgt av G12V, G12C, G12S, G12A og G12R [24]. Men i denne studien, tilsvarende ordre for
KRAS
codon12 mutasjonsfrekvens var G12D, G12V, G12A, G12C, G12S og G12R. Som for codon13, forble forskjellen i subtype distribusjon (G13 /D /C /R i vestlige befolkningen vs G13 /D /C /S i denne studien). I tillegg til å få mer informasjon og utvide anerkjennelse av
KRAS
mutasjon, utvalgsstørrelsen av vår serie tillatt oss å forsket den sjeldne codon61 mutasjon, siden mutante svulster med
KRAS
codon61 førte til signifikant lavere responsrate enn villtype (0,0% mot 35,7%, p = 0,0055) [14], mens mutasjonen forekomsten (2,1%) var enda høyere enn noen codon12 og 13 mutasjoner, så foreslo vi at codon61 deteksjon bør tas i betraktning under klinisk praksis. Denne studien viste en 35,9%
KRAS
mutasjonsraten, som var lik tidligere studier [4], [9], [14], [22], og pasienter som er eldre enn 60 dukket opp oftere til båtplass en
KRAS
mutasjon. I mellomtiden, i mCRC pasienter,
KRAS
mutasjon var signifikant høyere i dypere invasjonen scenen (OR 9.500, 95% KI 1,599 til 56,426; P = 0,013), som var i samsvar med Li HT og kolleger [25] rapporterte at
KRAS
mutasjon hadde en sterk tilknytning til Dukes «iscenesettelse, med høyest mutasjonsraten i Dukes» D iscenesettelse svulster. Våre molekylære data gitt en vurdering av muligheten for sykdomsprogresjon. Da pasienter med rask fjernmetastaser virket mer sannsynlig å være innledende resistente mot anti-EGFR-MoAb, fordi
KRAS
mutasjon opprettholdes gjennom hele CRC utvikling, progresjon og metastasering, med en høy (95%) samstemmighet presentere ved grunnskoler og relaterte metastaser [26] – [27]
BRAF
genet er medlem av RAF genet familien, som koder for en serin-treonin protein kinase, fungerer som en nedstrøms effektor. aktivert KRAS. Tidligere studier har rapportert at
KRAS Hotell og
BRAF
mutasjoner ble gjensidig utelukkende i mCRC, og
BRAF
mutasjon forekommer hos ca. 5% -10% svulster [14], [28 ], [29]. Men i denne studien fant vi at
KRAS Hotell og
BRAF
mutasjoner var ikke gjensidig utelukkende, 4,55% (11/242) av
KRAS
muterte tumorer næret en
BRAF
mutasjon, våre data ble støttet av Mao C og kolleger [20], selv om de fikk en ekstremt høy
BRAF
mutasjon forekomsten (25,4%, 15/59), for rapporterte studier av
BRAF
mutasjoner som oftest presentert en høyere mutasjonsfrekvensen i vestlige befolkningen (8,5% -13,9%) [29] – [30] enn den kinesiske (1,1% -7,0%) [25], [31]. I vår studie, BRAF mutasjon (6,96%) var i samsvar med tidligere resultater, og den nedre BRAF mutasjonsfrekvens kan attributt til pasienter studerte populasjonen. Men forskjellen i mutasjonsfrekvens indikerer også at geografiske og etniske variasjoner spille en rolle i genmutasjon fordeling. I de rapporterte studier, ble de fleste av de innsamlede data fra bare
BRAF
V600E mutasjon type, andre typer som V600M ble ikke inkludert [14], [29], mens vi også bekreftet dette punktet for
BRAF product: (V600E) bare eksistert i
KRAS
villtyper (0,0% vs 2,78% [12/431], P = 0,005). Men
BRAF
mutasjon assosiert med dårlige kliniske resultater ble påvist i flere studier [10], [14], [29], her vi rapporterte en
BRAF
mutasjonsraten for 4,4% (30 /675) i exon15 og 2,5% (17/676) i exon11, som var både høyere enn
KRAS
codon61 (2,1%) mutasjon. Som De Roock W og kolleger [14] anbefales
BRAF
bør testes senere etter
KRAS
, vi skal begge
BRAF
exon15and 11 må tas i betraktning, i for å velge bedre egnede undergruppe pasienter. I tillegg V600E mutasjon var signifikant høyere i tykktarmskreft enn endetarm kreft (OR 4,035, 95% KI 1,062 til 15,330; P = 0,041) og dårlig differensiering svulst næret en høyere V600E mutasjon (P = 0,030). Disse data indikerte at kolorektal kreft behandling bør betraktes fra en dypere grad, for tykktarm og endetarm kreft kreves ulik behandling i forskjellig stadium.
Vi har bekreftet sammenhengen mellom
KRAS Hotell og
PIK3CA
mutasjoner i CRC, som var sammenlignbare med tidligere studier [14], [20], [25], [32], og bare exon9 (ikke inkludert exon20) delte en sterk tilknytning til
KRAS
mutasjon [14]. Dette var konsistent med funnene at forsterkningen i funksjon ved exon9 mutasjoner (den skruelinjeformede domene) var svært avhengig av RAS-GTP-binding, spesielt i E542K og E545K, mens exon20 mutasjoner (kinasedomenet) aktive var sannsynligvis i fravær av RAS -GTP binding [33].
PIK3CA
mutasjonsfrekvensen varierer mellom 13,6% -18,0% i vestlige befolkningen [34] – [35], mens vi rapporterte en relativ lav mutasjonsfrekvens (9,9%). Studerte befolkningen kan føre til denne forskjellen i hovedsak, for andre studier som er basert på kinesiske befolkningen også viste lavere mutasjonsfrekvens (4,9% -8,2%) [20], [36]. I logistisk regresjonsanalyse,
PIK3CA
mutasjon dukket opp oftere i tykktarmskreft enn rektum samtidig, som ble støttet av en fersk undersøkelse [37]. Tidligere studier indikerte at
PIK3CA
mutasjon eksistens implisitt negativ prognose, enten en kortere median progresjonsfri overlevelse (PFS) [38], eller en kortere median OS [39] – [40]. Men siden
PIK3CA
mutasjon effekten syntes å bli betraktet sammen, separat effekten av hver subtype først uklar, for flere studier hadde vist at exon9 og exon20 mutasjon ført til forskjellige resultater [14], [41]. Den store europeiske konsortiet studien indikerte enn bare exon20 mutasjon var assosiert med dårligere klinisk resultat [14], og ble støttet av andre forskningsdata [16], [42]. Men fordi exon20 mutasjon var relativt lavt sammenlignet med exon9 (2,96% vs 9,96%) [14], og i vår studie (2,67% vs 7,0%). De rapporterte data bør anses som klinisk relatert hypotese og krevde bekreftelse, basert på ytterligere genetisk profilering og kliniske studier etterforskning.
RAS-genet (KRAS, NRAS, HRAS) koder en serie av GTP /BNP relatert brytere som formidle ekstracellulære signaler, noe som resulterer i regulering av vekst og overlevelse av celler [43]. Som en av RAS-familien,
NRAS
delt nære relasjoner til
KRAS product: [13], mens i motsetning til
KRAS
mutasjon opptar en så stor andel i tykktarmskreft,
NRAS
mutasjoner var sjeldne. Irahara N og kolleger [44] rapporterte en 2,2% (5/225) mutasjon forekomst, og 2,64% (17/644) mutasjonsraten i en annen studie [14], mens vi har oppdaget 4,19% (26/621) svulster næret en
NRAS
mutasjon. Jo høyere NRAS mutasjon forekomsten presentert en bestemt egenskap for kinesiske befolkningen. Så sjeldent data ble rapportert hos kinesiske pasienter for NRAS mutasjonsstatus, kan vår studie gi noen originale bidrag. Men fremtidige undersøkelser for å tegne et bedre bilde på dette området.
NRAS
mutasjoner var ikke gjensidig utelukkende med
BRAF Hotell og
PIK3CA
mutasjon, selv om en annen studie ikke dele dette [44].
NRAS
mutasjon coexisted med
KRAS
villtype (P 0,001), av notatet, codon61 mutasjon bare dukket opp i
KRAS
villtype svulster (p = 0,006) og codon12 og 13 hadde en betydelig høyere mutasjonsraten i fjerne metastatiske svulster (p = 0,016). Disse dataene kan delvis bidra til å forklare den anti-EGFR MoAb motstand i
KRAS
vill type pasienter, som
NRAS
mutasjoner var signifikant assosiert med lavere sykdomskontrollrate og responsraten til MoAb [14] [45], og vi anbefaler
NRAS
mutasjonsdeteksjon bør tas i betraktning før MoAb behandling, spesielt i
KRAS
villtype svulster. Men vurderer den lave mutasjons forekomsten, omfanget av
NRAS
mutasjonen effekten var fortsatt forvirret, større utvalgsstørrelse eller forhåndsvalgt pasienter etterforskning virket viktig i fremtiden design.
Det var flere begrensninger i denne retrospektive studerer, herunder relativt lite antall (n = 45) av pasientene i overlevelsesanalyse, da den begrensede informasjonen kan ikke understøtte bekreftet konklusjoner i foreliggende undersøkelse. I tillegg bør andre potensielt negative faktorer, slik som tap av ekspresjon av fosfatase og tensin homolog (PTEN) være involvert, og således viktige virkninger av disse biomarkører i klinisk praksis oppholdt ytterligere validering. Videre, som epigenetisk status eller mikro ustabilitet (MSI) spiller en betydelig rolle i CRC svulster, disse funksjonene bør være involvert i analysen. Dessuten genuttrykk i de viktigste effektbokser, kan ulike kreft steder gir informasjon for bedre forståelse i CRC, enten i kreftutvikling eller tumorprogresjon og disse bør tas hensyn til i fremtidige studier. Som høy gjennomstrømning deteksjonsmetode har blitt implementert i screening genvarianter eller sekvensering, ulike typer gen alter har blitt undersøkt grundig i tykk- og endetarmskreft [46], disse studiene har gitt potensielle gener som trenger nærmere undersøkelser.
I en fersk randomisert studie [47], pasienter ble forhåndsvalgt for bare
KRAS
codon12, 13 og 61 villtype svulster, men behandling med panitumumab til irinotecan ble ikke bedre total overlevelse sammenlignet med irinotecan alene, deretter videreutvikling av molekylær utvalg var nødvendig med tanke på pasientenes velferd. En annen multisenter randomisert placebokontrollert sti testet en roman multikinasehemmer inhibitor (Regorafenib) [48], selv om studien fått et betydelig resultat i å forlenge median OS (6,4 vs 5,0 måneder, hazard ratio 0 · 77; 95% CI 0 · 64-0
