Abstract
Bakgrunn
5-Fluorouracil (5-FU) er en av de mest klassiske kjemoterapi medikamenter. Nanopartikkel stoffet levering kjøretøy tilbyr overlegenhet over mål effekt forbedring og reduksjon av bivirkninger. Lite er imidlertid kjent som den spesifikke effekten av nanopartikler på peritoneal formidling av tykktarmskreft. Målet med denne studien er å forberede en NPS (nanopartikler) lastet med 5-FU og undersøke karakteristisk for NPs og rollen til den i peritoneal metastaser knuter dannelsen av menneskets tykktarm kreft.
Metodikk /hovedfunnene
Fremstilt NPS (nanopartikler) lastet med 5-FU (5-Fluorouracil) av PEG-PLGA med fremgangsmåten ifølge dobbel emulsjon. Deretter vurdere egenskapene til NPS ved scanning-elektronmikroskopi, å analysere fordelingen av partikkeldiameter og bestemmelse av lasteeffektivitet. Oppdage frigjørings funksjonene i NPs in vitro og in vivo. Nakne mus med peritoneal-metastaser ble behandlet med 5-FU oppløsning eller 5-FU-NPS gjennom bukhulen. Tell knuter på bukhinnen og mesenterium og kartlegge størrelsen på dem. Vi fikk NPs med gjennomsnittlig diameter på 310 nm. In vitro viser frigjøringstest NPs kan frigjøre equably i 5 dager med utgivelsen sats på 99,2%. In vivo, kan NPS gruppe holde høyere plasmakonsentrasjon av 5-FU lengre enn den i oppløsning gruppe. Antallet peritoneal formidling nodul under 1 mm i 5-FU-sol-gruppen (17,3 ± 3,5) og 5-FU-NP-gruppen (15,2 ± 3,2) er mindre enn kontrollgruppen (27,2 ± 4,7) (P 0,05). Det totale antall knuter i 5-FU-NP-gruppen (28,7 ± 4,2) er betydelig mindre enn i 5-FU-sol-gruppen (37,7 ± 6,3) (P 0,05).
Konklusjon /Betydning
De nye anti-tumor nanopartikler lastet med 5-FU ved PEG-PLGA kan slippe opprettholde 5 dager og har hemmende virkning til peritoneal formidling av tykktarmskreft hos mus
Citation. Tang Q, Wang Y Huang R, Du Q, Wang G, Chen Y, et al. (2014) Fremstilling av anti-tumor partikler og dens Hemming til peritoneal Formidling av tykktarmskreft. PLoS ONE 9 (6): e98455. doi: 10,1371 /journal.pone.0098455
Redaktør: Vipul Bansal, RMIT University, Australia
mottatt: 19 januar 2014; Godkjent: 04.05.2014; Publisert: 04.06.2014
Copyright: © 2014 Tang et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av «Wu Jie-ping» Medicine Foundation of China, (nr 04102303) og Special Foundation Harbin Technical Innovation for talentfull person (nr 2006RFQXS075) og Science Fund for Distinguished Unge Forskere i Heilongjiang-provinsen i Kina etter Grant No. JC04-02. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
tykktarms~~POS=TRUNC kreft~~POS=HEADCOMP er den tredje største årsaken til kreft-relaterte dødsfall på verdensbasis. Peritoneal metastasering av tykktarmskreft er vanlig med forekomst på ca 13% som ble rapportert i studie på store prøven tidligere [1] .Peritoneal metastaser oppstod hos 7% av pasienter med tykktarmskreft i den innledende behandlingen og i 4% ~19% av pasientene etter radikal kirurgi [2] sikret prognose av tykktarmskreft peritoneal metastaser er dårlig hvis median overlevelse er bare 5~9 måneder [3] .Den nåværende systemiske kjemoterapiregimer basert på 5-FU for tykktarmskreft ikke har oppnådd tilfredsstillende resultater, særlig i behandling av peritoneal formidling [4]. Ett av problemene med denne type terapi er den begrensede levering av systemisk administrerte medikamenter til peritoneal [5]. Direkte intraperitoneal administrering kan føre til 5-FU absorberes i blodsirkulasjonen raskt resultere i utilstrekkelig dose ankommer lokal nodul i bukhulen. Det er nødvendig å utvikle nye strategier for behandling av peritoneal formidling i tykktarmskreft å oppnå bedre resultater. Nanopartikkel, som en roman bærer for anti-svulst narkotika, har blitt betalt en nøye med på av det medisinske feltet i begynnelsen av 1978 til nå [6]. I de senere årene har studier på polymer nanopartikkel gjort en enorm fremgang i kraft av biokompatibilitet og bionedbrytbarhet av polymere nanopartikler [7]. De polymere kuler kan beskytte stoffet fra ugunstige ytre forhold og kontrollere utgivelsen [8]. Sammenlignet med mikrosfærer, NPS har sin egen overlegenhet over målet effekt forbedring og reduksjon av bivirkninger [9] – [10]. Neovessels i tumor er mer gjennomtrengelig for nanopartikler i henhold til 400-600 nm å passere, som ikke bare kan forbedre mål-funksjon, men også kan redusere bivirkninger av anti-tumor medikamenter [11]. Mens, intraperitoneal administrasjon av nanopartikkel antitumor midler for behandling av tykktarmskreft peritoneal formidling har ikke blitt grundig undersøkt. I lys av dette, utarbeidet vi den 5-FU nanopartikler med en ny teknikk for det første, og viste anti-tumor nanopartikler kan hemme dannelsen av peritoneal spredning av tykk- og endetarmskreft.
Materialer og metoder
Etikk uttalelse
Alle dyreforsøk ble godkjent av Institutional Animal Care og bruk komité og etikk komité Harbin Medical University og i samsvar med retningslinjene i dyreforsøk Center of Harbin Medical University.
Forberedelse av 5-FU /PEG-PLGA nanopartikler
til å begynne med, er PLGA-PEG lagt inn 80 ml diklormetan. 4 ml 10% (vekt /vekt) NaOH-oppløsning inneholdende 5-FU blir sakte injisert inn i blandingen under høy skjær emulgering (Fa25 emulgator, Fluko, USA): En gjennomsiktig emulsjon ble således oppnådd. Dryppet dem inn i 160 ml av 5-FU mettet oppløsning inneholdende 5% (w /v) av PVA under kraftig omrøring (Fa25 emulgator, Fluko, USA) i 5 minutter for å oppnå den doble emulsjonen (w /o /w) . Løsningsmidlet inndampning ble utført under vakuum med en roterende evaporator (RE-85A rotasjonsfordamper, Henan Yuxin Instrument Corporation). NPs gjenvinnes ved hjelp av sentrifugering ved 12 000 rpm, og senere vasket med 5-FU mettet, vandig oppløsning og destillert vann som var alle lyofilisert til sist.
evaluere kvaliteten av NPS
Evaluer morfologien karakteristisk for NPs.
1 mg NPs er spredt i en ml vann. NPS suspensjoner ble droppet på lysbildet og sprutet gull på når det er tørt. Morfologien av NPS undersøkes ved scanning-elektronmikroskopi (JSM-6700F, JEOL, og Japan).
Analyse av partikkelstørrelse.
Partikkelstørrelsesfordelingen bestemmes av laserstørrelse analysator (LS -13320 laser størrelse analysator, BeckmanCoulter, USA). Hvert produkt blir analysert for 30 ganger etter suspendert i destillert vann.
Bestemmelse av innkapslings-effektivitet.
5-FU lasting effektivitet bestemmes ved termisk gravimetrisk analyse (STA409 termisk analysator, Tyskland). En viss mengde tørre NPs ble varmet opp ved oppvarming på 10 ° C /min under nitrogen.
Evaluering av in vitro versjonen Character av NPs
50 mg 5-FU NPs var dispergert i 10 ml PBS (pH = 7,4). Denne oppløsning tilsettes til en dialysepose, som ble satt til 90 ml PBS (pH = 7,4), forseglet, og omrørt (ca 75 o /min) ved 37 ° C. En prøve på 10 ml ble samlet på bestemte tidsintervaller fra ytre PBS og supplere like mengder av frisk PBS.
Evaluere In Vivo Slipp Character av NPs ved HPLC
Kunming mus ble kjøpt fra Shanghai Laboratory Animal senter (Shanghai, Kina). Mus som ble plassert under identiske betingelser fikk fri tilgang til en standard diett og vann fra springen og utsatt for med en 12-timers lys: 12-h mørke syklus. 90 Kunming mus er delt inn i 2 grupper tilfeldig. 5-FU-NPS gruppe (n = 45) er eksperimentgruppen, mens kontrasten gruppen er 5-FU løsning gruppe, som begge er delt inn i henholdsvis 9 lag med 5 mus ved randomisert metode. Behandle mus ved hjelp av intra-abdominalt med en dose på 40 mg /kg. For å lindre lidelse, ble musene utført med inhalering anestesi ved etyleter før du får blod. Blodet og satt inn i hepariniserte sentrifugerør i 5 minutter ved 3000 rpm fra øyehulene tilsvar ved 0.083,0.167,0.333,0.5,1.0,1.5,2.0,3.0,4.0 timer. Ta Supernatantvæsken 200 ul i EP røret inn med 25 ul intern kontroll (50 ug /ml 5-Bru løsning) og 800 ul eddiksyre eter nettopp ble tilsatt presist, blandet uniformitet i henhold til turbulent omrøring i 1 minutt og sentrifugert i 5 minutter ( 5000 rpm). Filtrer den overliggende væske ved mikroporøs film (0. 45 um), og deretter tørke den ved nitrogengass og oppløse det ved mobile fase 100 ul. Til syvende og sist blir prøven injisert i HPLC, slik at vi kan beregne plasmakonsentrasjonen av 5-FU.
Cell kultur
Den menneskelige kolon kreftceller HCT116 kjøp fra «celle ressurser sentrum Shanghai Institute of life Science, Chinese Academy of Sciences «, som ble opprettholdt i 1640-medium som var supplert med 10% føtalt bovint serum, 100 U /ml penicillin G og 100 lg /ml streptomycin ved 37 ° C i en fuktet inkubator inneholdende 5 % CO2.
Celleviabilitet assay
Cellelevedyktigheten ble bestemt ved anvendelse av en 3- (4,5-dimetyltiazol-2-yl) -2,5-diphe-145 nyltetrazolium-bromid (MTT) assay så tidligere beskrevet [12].
kolonidannelse assay
HCT116-celler ble sådd ut i 3,5-cm skåler (1000 celler /skål) og dyrket i 2 uker for å tillate for kolonidannelse. 5-FU og 5-FU-NPS tilsatt i retter separat. Koloniene ble løst i metanol, farget med 0,1% krystallfiolett og telles.
Evaluering av 5-FU-NPS Effekter på peritoneal formidling i musemodell
BALB /c-nu hårløse mus ( alderen 4 uker) ble kjøpt fra Shanghai Laboratory Animal senter (Shanghai, Kina). Alle dyreforsøk ble godkjent av Institutional Animal Care og bruk komité i Harbin Medical University. Nakne mus ble plassert i SPF under identiske forhold og fri adgang til en standard diett og vann fra springen og utsatt for med en 12-timers lys: 12-h mørke syklus. HCT116-celler (5 x 10
5 /mus) /ml saltvann ble injisert inn i bukhulen til 4 ukers gamle (BALBc nu /nu) mus. Fem mus ble allokert til hver gruppe. 5-FU-sol og 5-FU-NPS ble administrert i bukhulen ved MTD på 40 mg /kg kroppsvekt ukentlig fra dag 7. Musene ble avlivet på dag 28 etter bedøvet med ethyletherfor lindre lidelser. Antallet av peritoneal-noduler ble tellet henholdsvis i henhold til en diameter i henhold til 1,0 mm eller mer enn 3,0 mm ved mikroskopi og data er vist fra representative experiments.Tumor volum ble beregnet på grunnlag av formelen V = π x L x S x S /6 (L, den lange aksen;. S, den korte aksen)
Cellesyklus syklus~~POS=HEADCOMP og apoptose analyse med flowcytometri
Se supplerende metoder i File S1
Resultater
Analyser morfologi, partikkelstørrelsesfordelingen, og innkapsle effektiviteten av 5-FU-NP
Som SEM fotogaver (figur 1A) morfologi av NPs avslører en sfærisk eller elliptisk struktur med blank overflate og ikke tilhenger med hverandre. SEM bilde av NPs i 10000 og 48000 forsterkning ble vist i Figure.S1 i File S1. Partikkelstørrelse er demonstrert i partikkelstørrelsesbestemmelse, med gjennomsnittlig diameter på 310 nm blir godt fordelt (figur 1B). De opprinnelige parametrene av laser-size analyse for NPs ble oppført i Figure.S2 i File S1. Innkapsling effektiviteten av NPs er (15,38 ± 0,56)% oppdaget fra 5 prøver.
(a) SEM scan viste NPs med sfærisk form og glatt overflate. (B) Nanopartikkel størrelse ble analysert ved hjelp av laserstørrelse analysator. Resultatene viste gjennomsnittlig diameter på NPs er ca 310 nm. Fordeling av nanopartikler var spekter fra 255 nm til 469 nm og 70% var mindre enn 385 nm. P . 0,05
In vitro Frigjøring av 5-FU fra NPs
Resultatet av in vitro frigjøring av 5-FU fra NPs er vist i (Figure.2). 5-FU kan frigjøre holde i 5 dager med akkumulere utgivelsen beløpet opp til 99,2% .Linear anfall av Q for å frigjøre tid (t) blir utgivelsen funksjon. Q = 20,9037 + 0,80953 * t
5-FU-NP Farmakokinetikk in vivo
i denne forskningen, retensjonstid av 5-FU er 4,6 minutter som er vist i kromatogrammet (figur 3A, 3B, 3C). Standardkurve av ligninger Y (toppareal-forhold på 5-FU og intern standard), og C er Y = 0.06266C + 0,01752 (R = 0,99687) (n = 5), er det laveste detekterbare grensen 0,05 ug /ml, rille RSD hos lav, mediale og høy konsentrasjon er 9,05%, 4,73%, 2,97% henholdsvis, og gjenvinningsgraden er 87,43% 102,91% 108,64% hhv.
Kromatogrammet ble vist i (a) for blind-plasmaen, (b ) for plasma med 5-FU og 5-Bru, og (c) for prøven i plasma med 5-FU og 5-Bru. (5-Bru som endo-parameter). Den C-T-kurve indikerte at den midlere oppholdstiden for (d) 5-FU-NPS er lengre enn 0,490 (e) 5-FU-løsning (0,271 h). Og konsentrasjonen kan ikke identifiseres 2 h senere for 5-FU løsning gruppe.
Figure.3 illustrerer flyten av CT i plasma etter at mus har blitt administrert i magen (figur 3D, 3E) . Arealet av CT-kurve (AUC0~t) når musene administreres og den midlere oppholdstid (MRT0~t) er beregnet ved bruk av farmakokinetikken statistisk programvare DAS2.0, og deretter fortsette på den T-test med SPSS10.0 programvare (tabell 1).
5-FU-NPs undertrykker vekst av kolorektal kreft celler
for å undersøke hvordan 5-FU-NPs påvirke spredning av tykktarm kreft celler, vi utført MTT og klone formasjons analyser i HCT116 cellene. MTT-resultatene viste at antallet levedyktige celler i 5-FU-NPS var betydelig mindre enn den negative kontrollceller ved 24 h, 48 h, 72 h, 96 h som også færre enn den for 5-FU-sol gruppe ved 48 h, 72 h, 96 h (figur 4A). Som forventet, 5-FU-NPs hemmet vekst av celler i forhold til kontrollgruppen. Celler ble deretter dyrket i 14 dager for å utføre klon dannelsesbestemmelsen. Som resultatene viste at 5-FU-sol og 5-FU-NPS både kan redusere kolonitall i forhold til kontrollgruppen. Lenger mer, 5-FU-NPS resulterte i en reduksjon i koloni-tall større enn 35% sammenlignet med 5-FU-sol gruppe (figur 4B). Cellesyklus ble blokkert av både 5-FU-løsning og 5-FU-NPs sammenlignet med kontrollgruppen (figur S3 i File S1). Videre apoptose analyse analysen ble også utført for å erklære hvordan 5-FU-NPs tegnet på evnen til tykktarmskreftcelle. (Figur S4 i File S1) Den flowcytometri Resultatene viste at 5-FU-sol og 5-FU-NPs kan fremme apoptose av tykktarm kreft celler sammenligne med uekte eller PEG-PLGA. Som resultatene viste at 5-FU-NPS kan forsterke effekten av 5-FU på cellesyklusen eller apoptose delvis sammenlignet med 5-FU-sol, men virkningen var ikke signifikant.
(a) HCT116 celle linje ble tilsatt med 5-FU-NP eller 5-FU-sol eller PEG-PLGA eller håne, og underkastet en celle-levedyktighet assay i 24 timer, 48 timer, 72 timer og 96 timer. (B) En klone-analysen ble utført i mock, PEG-PLGA, 5-FU-sol og 5-FU-NPS grupper. * P 0,05, sammenlignet med kontroll. ** P 0,05, sammenlignet med 5-FU-sol. (C) Representative bilder etter å ha tatt med PEG-PLGA, 5-FU-sol og 5-FU-NPs og håne.
Hemmende effekt av 5-FU-NP på peritoneal formidling dannelsen av tykk- og endetarmskreft in vivo
effekten av 5-FU-NPs på peritoneal formidling ble evaluert. Makroskopisk dessemination med synlige tumorknuter var til stede i bukhulen (Figure.5B). Alle mus ble avlivet på dag 14, og antallet tumorknuter i mesenteriet ble tellet (Table.2). Det midlere antall av metastaserende knuter mindre enn 1 mm i 5-FU-sol-gruppen (17,4 ± 3,6) og 5-FU-NP-gruppen (15,2 ± 3,2) er mindre sammenligning med kontrollgruppen (27,2 ± 9,7) (P 0,05) . Det totale antall knuter i 5-FU-NP-gruppen (28,7 ± 5,5) er betydelig mindre enn i 5-FU-sol-gruppen (37,6 ± 5,4) (P 0,05) .De tilfeller av peritoneal formidling var 100% i alle grupper . Insidensen av levermetastaser i 5-FU-NP-gruppen (33,3%) er lavere enn kontrollgruppen (100%) (p 0,05). (Figure.5A)
(a) Metastatisk knuter i bukhulen ble telt i henhold til en diameter mindre enn 1 mm, 1~3 mm eller mer enn 3 mm. (B) Synlige tumornoduler var til stede i bukhulen i representative bilder av nakne mus ble avlivet 4 uker etter i.p. injeksjon med HCT116 cellene.
Diskusjoner
Peritoneal formidling er alvorlig problem for avansert tykktarmskreft pasienten på grunn av sin dårlig prognose og mangel på effektiv behandling [13]. 5-FU, et av de mest klassiske anti-tumor medikamenter, som kan hemme DNA-syntese behandling av tumorceller, er mye brukt i fordøyelsessystemet kreft [14] – [15]. Imidlertid, doseavhengige toksisitet begrenset den felles administrering ved venøs injeksjon og mindre dosering ankommer peritoneal-noduler ved systemisk sirkulasjon resultat i dårlig renseeffekt for peritoneal metastase av kreft i tykktarmen [16] – [17]. Derfor er det viktig å finne den nye strategien for peritoneal metastasering av tykktarmskreft. I denne studien, utarbeidet vi en anti-tumor NPs last med 5-FU kan bidra til helbredelse av peritoneal spredning av kreft i tykktarmen.
5-FU-NPs ble utarbeidet av høy skjæring emulgering i stedet for ultrasonisk emulgering, som forstørres emulgere energi slik at erholdt NPS med diameter på 310 nm (Figure1A). Våre tidligere studier har vist at vi kan få NPs i forskjellig størrelse ved å justere indre vannfase volum og spredning tid [18]. Sammenlignet med hjelp av ultrasonisk emulgering rapportert tidligere, forenkler prosessen med eksperimentet og overvinner begrensningen av relativ lav produksjon på grunn av den anstrengelse av den ultrasoniske emulgering [19]. Videre er partikkelstørrelsen av mikrokule effektivt redusert og godt fordelt. Undersøkt fra partikkelstørrelsesfordelingen, diameteren på 70% nanopartikler er mindre enn 385 nm med fordelingsområde fra 255 nm til 469 nm (Figure1B). Vi forsøker å erstatte PLA med PLGA (50:50) og kjeden av PEG 5000-2000, noe som bidrar til å skape godt fordelt 5-FU-NPS hvis innkapslende Utbyttet var 15,4%. Når det gjelder den PEG-PLGA med gunstig histocompatibility og biologisk nedbrytbarhet, er de anvendes generelt i de medisinske og biologiske bærere [20] – [21]. Denne forskningen viser at dette 5-FU-NPs kan holde frigi vedlikeholde for ca 5 dager sakte og jevnt in vitro som simulert kroppen miljø inne i bukhulen (figur 2).
For å erklære in vivo slippe karakter av denne romanen 5-FU-NPs, farmakokinetikk eksperimenter ble praktisert in vivo. Legemidlene innkapslet av NPS, en ny type medisinsk bærer, blir vanligvis tatt inn ved lever og milt for det første, som inneholder rikelig endoteliale system [22] – [23]. Ifølge studien på mus, fant vi at det eksisterer en form for disharmonisk compartment modell mellom ulike individuelle data og blod narkotika nivå. 5-FU-NP viser to kammer modell in vivo sammenligning med kontrollgruppen presentere ett kammer modell, hvilket resulterer i anvendelsen av statistisk øyeblikk. Den midlere oppholdstid (MRT (0-t)) av 5-FU-NP gruppe er 0,490 h (P 0,01), som er åpenbart lengre enn kontrollgruppen (0,271 h) (figur 3D, 3E). Det er vist at 5-FU-konsentrasjonen ikke kan identifiseres i 2 h for kontrollgruppen, noe som viser felles 5-FU ble dekomponert in vivo kort tid. Området CT kurven (AUC (0-t)) er 4,372 mg /L • h Cmax er 17.06 mikrogram /ml i 5-FU-NPs gruppen sammenlignet med kontrollgruppen er 67,77 ng /ml, noe som kan resultere fra forrang inntak . i mål vev for narkotika lastet med nanopartikler (tabell 1)
Anti-tumor NPs kan hemme tumormetastaser i bukhulen har vært indikert i mange studier [24] – [25]. Det er imidlertid ikke klart hvordan behandlingen effekten av anti-tumornanopartikler for tykktarmskreft peritoneal formidling. De MTT-studier bekreftet vår hypotese at 5-FU nanopartikkel terapeutiske midler er mer effektive enn normalt 5-FU løsning spesielt etter 48 h (Figure4A). De samme resultatene ble vist i klon formasjon analysen (figur 4B) .På den annen side, er funksjonen av 5-FU effekt på apoptose eller cellesyklusen ble hverken forsterkes av 5-FU-NPS sammenlignet med 5-FU-NPS, som var bevist i apoptose og cellesyklus analyse av flowcytometri metoder (figur. S3, S4 i File S1). Som vist i figur 4C, 5-FU-sol og 5-FU-NPs ført til endrede morfologiske egenskaper sammenligner med mock, som identifisert av en spredt fordeling av celler i kultur og en spindle- eller stjernelignende morfologi av cellene ( Figure4C). Denne endringen av morfologiske karakteristika kan resultere fra 5-FU-NPS effekt på epitelial-mesenkymale overgang funksjon i kreftceller [26], som bør være studium i fremtiden. På den annen side, for å demonstrere in vivo-effektiviteten av 5-FU-NPS terapeutiske midler for peritoneal spredning, har vi utviklet en peritoneal metastase modell for å etterligne den humane tilstand. Numrene på noduler ble evaluert ved diameter og delt inn i 3 grupper. Resultatene viser at 5-FU-NPS har evnen til å inhibere dannelsen nodul overlegen i forhold til både positiv kontrollgruppe og negative kontrollgruppen (Figur 5A, 5B).
Som konklusjon, for å oppnå en bedre prognose for pasienter med intraperitoneal metastaser, er etablering av effektiv behandlingsstrategi avgjørende. I denne studien vi med hell fremstilt antitumornanopartikler ladet med 5-FU, som viste hemming virkninger i tykktarmskreft cellelinjen og peritoneal-disseminations i naken mus-modellen. Derfor kan det være en roman anti-tumor forberedelse til peritoneal metastaser med dype prospekter i klinisk anvendelse. Likevel må det bli ytterligere undersøkt for detalj mekanismen i fremtiden.
Hjelpemiddel Informasjon
Fil S1.
1. Utfyllende resultater. Fig.S1 SEM skanninger av 5-FU-NPs. Fig.S2 5-FU NPs størrelse analyse. Fig.S3 Cellesyklus blokkert av 5-FU-NPs. Fig.S4 Apoptose fremmet av 5-FU-NPs. 2. Supplerende metoder. Laser størrelse analyse av partikkel. Flowcytometri og cellesyklusanalyse. Flowcytometri apoptose analyse med PI og annexin V flekker
doi: 10,1371 /journal.pone.0098455.s001 plakater (DOC)
