Abstract
Aim
For å undersøke LMP10 uttrykk og dens mulige innvirkning på klinisk utfall i humant papillomavirus (HPV) positive og HPV-negative tonsill- og undersiden av tungen plateepitelkarsinom (TSCC og BOTSCC).
Bakgrunn
utfallet er bedre i HPV-positive TSCC og BOTSCC sammenlignet med matchende HPV-negative tumorer, med omtrent 80% vs. 40% 5-års sykdomsfri overlevelse (DFS ) med mindre aggressiv behandling enn dagens kjemoradioterapi. Siden nåværende behandling resulterer ofte i skadelige bivirkninger, vil mindre intensiv behandling, med vedvarende pasientoverlevelse være et attraktivt alternativ. Imidlertid kan andre markører sammen med HPV status er nødvendig for å velge pasienter og for dette formål LMP10 uttrykket er her undersøkt i parallell med HPV status og klinisk utfall.
Materialer og metoder
Fra 385 pasienter diagnostisert mellom 2000 og 2007 ved Karolinska Universitetssjukhuset, 278 formalinfiksert parafin innebygd TSCC og BOTSCC biopsier, med kjent HPV DNA status, ble testet for LMP10 kjernekraft og cytoplasma uttrykk (brøkdel av positive celler og fargeintensitet). Dataene ble deretter korrelert til klinisk utfall.
Resultater
En fraværende /lav sammenlignet med en moderat /høy LMP10 atom brøkdel av positive celler ble korrelert til en bedre 3-års DFS i HPV -positivt gruppe pasienter (log-rank p = 0,005), men ikke i HPV-negative gruppe. I HPV-negative gruppe pasienter, i motsetning til HPV-positive gruppe, moderat /høy LMP10 cytoplasmafraksjonen og svak /moderat /høy LMP10 cytoplasmisk intensitet korrelert til en bedre 3-års DFS (p = 0,003 og p = 0,001) og 3 års total overlevelse (p = 0,001 og 0,009).
Konklusjon
LMP10 atom uttrykk i HPV-positive gruppen og LMP10 cytoplasmisk uttrykk i HPV-negative gruppe pasienter korrelert til bedre klinisk resultat
Citation. Tertipis N, Haeggblom L, Nordfors C, Grün N, Näsman A, Vlastos A, et al. (2014) Korrelasjonen av LMP10 Expression og klinisk utfall i humant papillomavirus (HPV) Positive og HPV-negative Tonsillar og Base av Tongue kreft. PLoS ONE 9 (4): e95624. doi: 10,1371 /journal.pone.0095624
Redaktør: Anthony WI. Lo, det kinesiske universitetet i Hong Kong, Hong Kong
mottatt: 07.02.2014; Godkjent: 27 mars 2014; Publisert: 21 april 2014
Copyright: © 2014 Tertipis et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Den svenske Cancer Foundation 120417; Den svenske Medical Research Council K2011-56X-15282-07-06; Stockholm Cancer Foundation 121043; Henning og Ida Perssons Foundation; Karolinska Institutet 2013fobi37387; Stockholm fylkeskommune 520007; Kongen Gustaf V Jubilee fondet; Kreft og allergiforbundet. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser. Medforfatter Torbjörn Ramqvist er en PLoS ONE Editorial styremedlem. Dette endrer ikke vår tilslutning til PLoS ONE redaksjonelle retningslinjer og kriterier.
Innledning
I 2007, det internasjonale byrået for kreftforskning (IARC) erkjente humant papillomavirus (HPV) som en risikofaktor for orofaryngeal plateepitelkarsinom (OPSCC) basert på data fra andre og oss [1], [2], [3], [4]. Videre HPV-positive OPSCC, med tonsill- og undersiden av tungen plateepitelkreft (TSCC og BOTSCC) står for 80% av tilfellene, har en bedre prognose enn de tilsvarende HPV-negative tumorer (80% vs. 40% -60 % 3-års sykdomsfri overlevelse (DFS) [1], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12]. parallelt med en nylig økning i forekomsten av HPV-positive OSCC i mange land, kurativ behandling for hode og hals plateepitelkarsinom (HNSCC), inkludert OPSCC, har blitt mer aggressive med f.eks cellegift eller strålebehandling som resulterer i mer alvorlige bivirkninger [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22], [23], [24] . Mindre aggressiv behandling vil trolig være tilstrekkelig for de fleste pasienter med HPV-positive TSCC og BOTSCC, hvor HPV er oftest funnet og hvor HPV har størst innvirkning på overlevelse [25]. Likevel, før tapering behandling, andre markører i kombinasjon med HPV status ville være til nytte for å velge pasienter med HPV-positive TSCC og BOTSCC med en meget sannsynlig positiv respons overfor terapi [26], [27], [28], [29], [30], [31], [32] . Nyere studier har identifisert noen markører, f.eks fraværende /lav HLA klasse I eller CD44 intensitet uttrykk, eller høy CD8 + tumor infiltrerer lymfocytter (TIL) teller i HPV-positive TSCC og BOTSCC, som alle viste seg å være gunstige prognostics faktorer, og indikerer en 95-100% sannsynlighet for 5-års sykdom spesifikk overlevelse [26], [27], [28], [29], [30], [31], [32]. Dessverre, de ovennevnte biomarkører bare gjenkjenne en brøkdel av alle pasienter med en god sannsynlighet for å svare godt på behandling og for at flere biomarkører til de ovenfor er nødvendig.
LMP10 (lavmolekylært protein 10) er en beta subenhet av 20S proteasomet, identifisert som et tredje IFN-g induserbar enhet ved Nandi et al 2006 [33]. Sammen med LMP2 og LMP7, LMP10 bygge opp den såkalte immunoproteasome skuespill ved intensivert immunrespons. Som en komponent av antigenet behandlingsmaskiner (APM), er LMP10 implisert i banen til peptidet trimming under peptid presentasjon av HLA-molekyler. Defekter i ulike APM komponenter har blitt funnet i mange svulster og har vist sammenheng med klinisk utfall av pasienter [34], [35], [36], [37].
I denne studien undersøkte vi derfor for LMP10 uttrykk i HPV-positive og HPV-negative TSCC og BOTSCC, på 278 pasienter diagnostisert mellom 2000-2007 ved Karolinska universitetssykehus, og en eventuell sammenheng med LMP10 uttrykk for å overleve.
pasienter, materialer og metoder
Etikk erklæringen
studien ble utført i henhold til etiske tillatelser 2005 /431-31 /4, 2005 /1330-1332 og 2009 /1278-1231 /4 fra Regional etisk Komité ved Karolinska Institutet, Stockholm, Sverige. Skriftlig informert samtykke ble innhentet fra alle deltakerne i studien
Pasienter og Biopsi
I løpet av 2000-2007, 385 pasienter diagnostisert med TSCC og BOTSCC (definert som ICD-10-koder:. C09, C01 0,9 henholdsvis) ved Karolinska universitetssykehus, ble identifisert gjennom det svenske Kreftregisteret. Av disse 278 pasienter, med diagnostiske før behandling biopsier, som tidligere testet for HPV-DNA og med tilstrekkelig materiale, ble inkludert i denne studien [27]. De 258 pasienter behandlet med kurativ hensikt ble deretter omfattet i overlevelsesanalyse. Konvensjonell strålebehandling (RT) (2,0 Gy /dag, for 6,5-7 uker, totaldose: 68 Gy) eller akselerert RT (1,1 + 2,0 Gy /dag for 4,5 uker, totaldose: 68 Gy) ble gitt til 192/258 ( 74,4%) av pasientene, mens 66/258 (25,6%) av pasientene hadde også induksjonskjemoterapi og samtidig RT. Interstitiell stråling (brachyterapi) ble også gitt til noen pasienter (78 Gy helt). Pasienter med nodal sykdom gikk hals disseksjon 6-8 uker etter avsluttet RT. Pasientene ble fulgt hver 3. måned for de første 2 årene, og hver 6 måneder i løpet av tredje året, og deres overlevelsesdata ble hentet fra pasientenes poster. Studien ble utført i henhold til etiske tillatelser 2005 /431-31 /4, 2005 /1330-1332 og 2009 /1278-1231 /4 fra Regional Etisk Komité ved Karolinska Institutet, Stockholm, Sverige.
HPV analyse
HPV DNA av 27 HPV-typer og betaglobin ble analysert av en perle-basert multiplex analyse på en Magpix instrument (Luminex Corporation) som tidligere beskrevet [30].
Immunohistochemistry
i korte trekk, formalinfiksert parafin innebygd (FFPE) svulst biopsi lysbilder (4 mikrometer) ble de-paraffinized i xylen og rehydrert i etanol av avtagende konsentrasjoner. Deretter ble de oppvarmet i citrat-buffer (pH 6,0) for antigen gjenfinning. Uspesifikke seter ble blokkert med 1,5% hesteserum fortynnet i fosfatbufret saltvann (PBS). Parafinsnitt ble inkubert over natten ved + 8 ° C med primært antistoff, MECL-1 C-2 (anti-LMP10 antistoff fra Santa Cruz Biotechnology), i et fuktig kammer, etterfulgt av sekundært antistoff applikasjon og en standard ABC-HRP kit for antigendeteksjon . Den kromogen-3′-diaminobenzydine (DAB) ble anvendt for visualisering. Hematoxylin ble påført for kontraetterfulgt av dehydrering i etanol med økende konsentrasjoner og xylen.
Evaluering av Immunhistokjemi Farging
LMP10 cytoplasmisk og nukleær farging, inkludert negative og positive kontroller (figur 1), ble evaluert ved to uavhengige forskere blindet for data og klinisk resultat, lik den som tidligere beskrevet [32]. Fraksjonen av maligne celler farget for LMP10 i kjernen og cytoplasma ble bedømt hver for semi-kvantitativt i 4 grader av prosentandeler av fargede tumorceller: 0 (0%), 1 (1-25%), 2 (26-75% ) eller 3 (76-100%). Intensiteten av fargingen ble bedømt hver for seg og evaluert som fraværende, svak, moderat og sterk farging. Intensiteten av fargingen ble definert ved å sammenligne intensiteten av fargingen i ondartede celler, og fargingen av interne kontroller (normal lymfoid vev) per sats. I mindretall av tilfellene hvor fargingen innenfor den samme prøve ble ikke engang, intensiteten av de fleste cellene ble anvendt i analysen. Flekker og evaluering av HLA klasse I antigener ble utført på de samme tumorprøver i to tidligere studier som beskrevet andre steder [27], [28]
(A). Svak /moderat cytoplasma uttrykk for LMP10; (B): Moderat /høy kjernekraft og fraværende cytoplasma uttrykk for LMP10; (C): Fraværende eller umulig å oppdage LMP10 kjernekraft og cytoplasma uttrykk; (D): Moderat kjernekraft og cytoplasma uttrykk for LMP10. Forstørrelse 400X.
Statistical Analysis
Begge pasientkarakteristika og kategoriske data ble analysert ved hjelp av Chi kvadrat-test, eller for sammenligning av gjennomsnittsverdier, student t-test. To-tailed p-verdier (5% signifikansnivå) ble rapportert for alle analyser. Overlevelse ble målt i dager diagnose før en hendelse inntraff, eller inntil 3 år etter diagnose når pasientene ble sensurert. Død på grunn av noen årsak (hendelse) ble inkludert i definisjonen av total overlevelse (OS), mens bare tilbakefall av sykdommen (TSCC eller BOTSCC) ble brukt for beregning av sykdomsfri overlevelse (DFS). Spesielt, død av pasienter uten noen tidligere tilbakefall ble sensurert på dag 0 ved beregning av DFS. Kaplan-Meier estimatoren ble brukt for DFS og OS, og forskjeller i overlevelse av pasienter ble testet ved hjelp av log-rank test. Den Cox modellen ble brukt for beregning av de justerte og ujusterte hazard ratio (HRS). Alle beregninger og analyser ble utført ved hjelp av IBM Corp., SPSS Statistics, versjon 21.0.
Resultater
Pasient, Tumor Kjennetegn og HPV
Det som kjennetegner de 278 pasienter, 195 (70%) med TSCC og 83 (30%) med BOTSCC og deres tumorer er vist i tabell 1. i alt 207/278 (74%) av tumorene ble HPV-positive. Pasienter med HPV-positive tumorer var yngre (gjennomsnittlig og median alder 60) enn de med HPV-negative tumorer (gjennomsnitt og median alder 64 og 62 år henholdsvis) (p 0,001) (tabell 1, og data ikke vist). Totalt 258/278 (92,8%) pasienter fikk behandling med kurativ hensikt (tabell 1), 199/207 (96%) av de med HPV-positive tumorer (median alder av 60 år), og 59/71 (83%) av de med HPV-negative tumorer (median alder 62 år). Bare de 258 pasientene som ble behandlet med kurativ hensikt ble inkludert i analysen av 3 års DFS og OS.
LMP10 Expression og HPV i TSCC og BOTSCC
LMP10 kjernekraft og cytoplasma uttrykk var evaluert for alle 278 pasienter og er eksemplifisert i figur 1. LMP10 atom uttrykk viste ingen signifikant forskjell mellom de TSCC og BOTSCC grupper, hverken med hensyn til fraksjonen av positive celler og heller ikke med intensiteten av fargingen (p = 0,115 og p = 0,313, henholdsvis tabell 2). Imidlertid brøkdel av LMP10 cytoplasmiske-positive celler var relativt høyere i HPV-positive i forhold til HPV-negative gruppe (p = 0,033) mens det ikke var noen signifikant forskjell i LMP10 cytoplasmisk intensitet farging mellom gruppene (p = 0,211, Tabell 2).
LMP10 Nuclear Farging og HPV status i sammenheng med klinisk utfall
LMP10 atom uttrykk ble evaluert både for brøkdel av positive celler i kjernen, og for intensiteten av nukleær farging, og er korrelert til overlevelse av de 258 pasientene som ble behandlet med kurativ hensikt (illustrert som Kaplan-Meier-kurver i figurene 2 og 3 respektivt)
A og D:. DFS (A) og OS (D ) for TSCC og BOTSCC uavhengig av HPV status av tumoren. B og E: DFS (B) og OS (E) av pasienter med HPV-positive TSCC og BOTSCC. C og F:. DFS (C) og OS (F) av pasienter med HPV-negative TSCC og BOTSCC
A og D: DFS (A) og OS (D) for TSCC og BOTSCC uansett av HPV status av tumoren. B og E: DFS (B) og OS (E) av pasienter med HPV-positive TSCC og BOTSCC. C og F:. DFS (C) og OS (F) av pasienter med HPV-negative TSCC og BOTSCC
En fraværende /lav (≤25%), sammenlignet med et moderat /høy ( 26-100%), fraksjon av LMP10 atom positive celler korrelerte til en bedre 3-års DFS i hele gruppen av pasienter, og for pasienter med HPV-positive svulster, men ikke blant pasienter med HPV-negative tumorer (log-rank test , p = 0,002; p = 0,005 og p = 0,688 henholdsvis) (figur 2 A-C). Det var imidlertid ingen signifikant forskjell i tre år OS, når man sammenligner lignende parametre, for hele gruppen, HPV-positive og HPV-negative grupper (log-rank test, p = 0,115, p = 0,158 og 0,561 henholdsvis) ( Figur 2 D-F).
en fraværende, sammenlignet med svak /moderat /sterk (nåværende), LMP10 atom intensitet farging ble korrelert med en bedre 3-års DFS for hele gruppen (p = 0,01) og HPV-positive gruppe (p = 0,037), men ikke for HPV-negative gruppe (p = 0,473) (figur 3A-C). For tre år OS dette ble bare observert for hele pasientgruppen (p = 0,014) (figur 3 D).
Den mulige påvirkning av LMP10 atom uttrykk samt LMP10 atom intensitet farging ble forfulgt separat for HPV-positive og HPV-negative grupper.
ble utført en multivariat Cox-regresjonsanalyse for pasienter med HPV-positive og HPV-negative tumorer separat, inkludert brøkdel av LMP10 atom positive celler eller LMP10 atom intensitet, alder og tumorstadium, med hensyn til 3 års DFS og 3-års OS. For HPV-positive gruppe en fraværende /lav fraksjon sammenlignet med et moderat /høy fraksjon av LMP10-positive celler var fremdeles en determinant av en bedre 3-års DFS (p = 0,027) (tabell 3), men ikke alder eller stadium, (p = 0,079 og p = 0,744) (data ikke vist). Videre er ingen av disse parametrene var determinanter av 3-års OS, med unntak av alder (p = 0,006, data ikke vist) (tabell 3). LMP10 atom intensitet farging nådde ikke statistisk signifikans for enten tre års DFS eller 3-årig OS (tabell 3). Den tilsvarende analyse for HPV-negative gruppen foreslo at atom LMP10 uttrykk hadde ingen innvirkning på klinisk utfall i denne gruppen (3-års DFS og 3-års OS) (tabell 3).
LMP10 Cytoplasmatiske farging og HPV status i sammenheng med klinisk utfall
LMP10 cytoplasma uttrykk ble evaluert både for brøkdel av positive celler og intensiteten av flekker og var korrelert til overlevelse for de 258 pasientene som ble behandlet med kurativ hensikt (illustrert som Kaplan-Meier kurvene i figurene henholdsvis 4 og 5)
A og D:. DFS (A) og OS (D) for TSCC og BOTSCC uavhengig av HPV status av tumoren. B og E: DFS (B) og OS (E) av pasienter med HPV-positive TSCC og BOTSCC. C og F:. DFS (C) og OS (F) av pasienter med HPV-negative TSCC og BOTSCC
A og D: DFS (A) og OS (D) for TSCC og BOTSCC uansett av HPV status av tumoren. B og E: DFS (B) og OS (E) av pasienter med HPV-positive TSCC og BOTSCC. C og F:. DFS (C) og OS (F) av pasienter med HPV-negative TSCC og BOTSCC
En moderat /høy i forhold til en fraværende /lav brøkdel av LMP10 cytoplasmatiske positive celler korrelert til en bedre 3-års DFS for pasienter med HPV-negative tumorer, men ikke for hele gruppen av pasienter, og heller ikke for pasienter med HPV-positive tumorer, (log-rank-test, p = 0,003; p = 0,488 og p = 0,086 henholdsvis (figur 4 A-C). for tre år OS tilsvarende korrelasjon var betydelig både for HPV-negative og hele gruppen, men ikke for HPV-positive gruppen (log-rank test, p = 0,001, p . 0,001 og p = 0,159, henholdsvis), (figur 4 D-F)
Svak /moderat /høy (nåværende) LMP10 cytoplasma intensitet flekker i forhold til fraværende LMP10 farging ble korrelert til en bedre 3-årig DFS for pasienter med HPV-negative tumorer, men ikke for hele gruppen, eller for pasienter med HPV-positive tumorer (log rank test p = 0,001, p = 0,219 og 0,368, henholdsvis) (figur 5 A-C). for 3 års OS det tilsvarende korrelasjonen var betydning både for HPV-negative og hele gruppen, men ikke for HPV-positive gruppe (log rank test p = 0,009, p = 0,01 og p = 0,334, respektivt (figur 5 D -F).
den mulige påvirkning av LMP10 cytoplasma uttrykk ble forfulgt separat for HPV-positive og HPV-negative grupper (Tabell 3). For at en multivariat Cox-regresjonsanalyse ble utført for pasienter med HPV-positive og HPV-negative tumorer, inkludert brøkdel av LMP10 cytoplasmiske-positive celler, alder og fase, med hensyn til 3-års DFS og 3-års OS. ble utført en tilsvarende analyse for LMP10 cytoplasma intensitet. For pasienter med HPV-negative tumorer, både et moderat /høy fraksjon av LMP10 cytoplasmiske-positive celler, og tilstedeværelse av LMP10 cytoplasmatisk farging ble korrelert til en bedre 3-års DFS (p = 0,014 og p = 0,006, respektivt) (tabell 3 ). Tilsvarende tall for 3-årig OS var p = 0,010 og p = 0,051 (Tabell 3). Alder og scenen nådde ikke statistisk signifikans i analysen for pasienter med HPV-negative tumorer (data ikke vist).
Den tilsvarende analyse for HPV-positive gruppen foreslo at cytoplasma LMP10 uttrykk hadde ingen innvirkning på klinisk utfall (3-års DFS og 3-års OS) (tabell 3).
LMP10 Expression, HLA klasse i Expression og HPV status i sammenheng med klinisk utfall
i nyere studier har vi vist at fraværende eller lav HLA klasse i uttrykket ble korrelert til bedre overlevelse hos pasienter med HPV-positive TSCC og BOTSCC, mens det motsatte var tilfelle for pasienter med HPV-negative TSCC og BOTSCC [27], [28]. For å undersøke om korrelasjonen av LMP10 uttrykk forut overlevelse uavhengig av HLA klasse I ekspresjon eller ikke, to multivariat Cox-regresjonsanalyse med hensyn til 3-års DFS ble utført, med HLA klasse I data oppnådd fra Näsman et al [27].
i den første analysen, ble HPV-positive TSCC og BOTSCC undersøkt og analysen inkluderte brøkdel av LMP10 atom positive celler, alder, scene og HLA klasse i uttrykket analysert som intensiteten av HCA2-farging. Som vist i tabell 4, både LMP10 og HCA2 intensitet var uavhengige prediktorer for 3-års DFS.
I den andre analysen, HPV-negative TSCC og BOTSCC ble studert og analysen inneholdt brøkdel av LMP10 cytoplasmatiske positive celler, alder, scene og brøkdel av HLA klasse i positive celler analysert ved HCA2 flekker. Som vist i tabell 4, både brøkdel av LMP10 og HCA2 positive celler var uavhengige prediktorer for 3-års DFS.
Diskusjoner
Denne studien undersøkte LMP10 uttrykk både i kjernefysiske og cytoplasmatiske avdelinger i forhold til HPV status og klinisk utfall i 195 TSCC og 83 BOTSCC tilfeller. LMP10 atom og cytoplasmisk ekspresjon, inkludert både brøkdel av positive celler og intensiteten av fargingen var tilsvarende i HPV-positive og HPV-negative tumorer, med unntak av den høyere andel av LMP10 cytoplasmiske positive celler i HPV-positive gruppe.
Videre er en fraværende /lav fraksjon av LMP10 positive celler i kjernen, samt fraværende nukleær farging intensitet korrelert til en bedre 3-års DFS for pasienter med HPV-positive tumorer, men ikke for de med HPV-negative tumorer . Baksiden var funnet for cytoplasmatisk LMP10 farging, hvor et moderat /høy fraksjon av positive celler og svak /moderat /høy intensitet var korrelert for å bedre 3-års DFS og OS i HPV-negative, men ikke i HPV-positive gruppe.
grunnen til forskjellen med hensyn til kjernefysiske og cytoplasma LMP10 farging og overlevelse for de HPV-positive og HPV-negative grupper er ikke opplagt. I tidligere studier LMP10 cytoplasmisk ekspresjon har blitt evaluert i blære og spiserørskreft for både brøkdel av positive celler og intensiteten av fargingen, men ble ikke vist å ha noen innvirkning prognostiske [34], [35], [37]. Men i disse studiene var det ingen analyse av kjernefysisk og cytoplasma uttrykk. I denne studien, evaluering og analyse av kjernefysisk og cytoplasma farging gitt ytterligere informasjon.
Så vidt vi vet er det ingen tidligere studier på LMP10 uttrykk i forhold til overlevelse i HNSCC. Meissner
et al.
Viste en sammenheng med overlevelse i HNSCC for både LMP2 og LMP7 [38] og i en fersk undersøkelse, uttrykk for LMP7 ble også korrelert til overlevelse i spytt kreft [39]. Imidlertid ble tumorene ikke analysert for tilstedeværelse av HPV i en hvilken som helst av disse studiene.
Oppdagelsen av at en lav atom LMP10 uttrykk korrelert til en bedre 3-års DFS i HPV-positive gruppe, mens en tilsvar høy cytoplasma LMP10 uttrykk korrelert til en bedre 3-års DFS i HPV-negative gruppen~~POS=HEADCOMP foreslår flere implikasjoner. Først av alt, tyder våre studie som LMP10 kunne brukes som en prognostisk markør for pasienter med enten HPV-positive eller HPV-negative tumorer. Vi har tidligere vært i stand til å vise at en biomarkør, i det samme reaksjonsvei, HLA klasse I ekspresjon, kan anvendes på en differensiell måte for å forutsi klinisk resultat i HPV-positive og HPV-negative tumorer. Således er en fraværende /lav HLA klasse I ekspresjon en positiv prognostisk faktor for pasienter med HPV-positive tumorer, mens det motsatte er tilfelle for pasienter med HPV-negative tumorer, hvor en høy HLA klasse I ekspresjon er av nytte [27]. Dermed, både med hensyn til HLA klasse I og LMP10 uttrykk i forhold til overlevelse, var det forskjeller mellom HPV-positive og HPV-negative tumorer, selv om disse var mer uttalt for HLA klasse I. Spesielt, som demonstrert av den multivariate analysen i tabell 4, uttrykk for LMP10 og HLA klasse i var uavhengige prediktorer for overlevelse for både HPV-positive og HPV-negative svulster. De underliggende mekanismene bak reguleringen av LMP10 og HLA klasse I uttrykk i disse svulstene bør derfor i det minste delvis være atskilt.
Det er ikke kjent om tilstedeværelse av HPV kan påvirke LMP10 uttrykk direkte, og selv om dette er tilfelle, er mekanismen bak denne regulering ikke kjent. Det har vist seg at HPV E5 har potensialet til å ned-regulere ekspresjon av HLA klasse I [40]. Enten E5 påvirker også uttrykk for LMP10 har, så vidt vi vet, er ikke undersøkt. Det er blitt vist at human papillomavirus har evnen til å regulere HLA klasse I-tungkjede, så vel som noen av de antigen prosessering maskinkomponenter i transkripsjonsnivået [41]. Imidlertid, den transkripsjonelle regulering av f.eks LMP2 promoteren ble funnet å være avhengig av E7 proteinet fra HPV18 og lav risiko for HPV-6b, men ikke ved E7 fra HPV16. Dette tyder på at det er en potensialforskjell i de cellulære effekter forårsaket av E7 proteinet fra HPV16 og HPV18. Verdt å merke seg er at flertallet av de TSCC og BOTSCC tilfeller er positive for HPV16. Enten uttrykk for LMP10 kan reguleres ved E7 har, så vidt vi vet, er ikke undersøkt. Verdt å merke seg, i det foreliggende studiet brøkdel av LMP10 cytoplasmiske positive celler var høyere i HPV-positive i forhold til HPV-negative gruppe. Men det var ingen signifikant forskjell i LMP10 cytoplasma intensitet farging mellom gruppene. Dette indikerer muligheten for noen, men ikke en sterk regulering av HPV i disse tumorceller.
Det er noen begrensninger i vårt studium. Primært studien er retrospektiv, men dette kan ikke påvirke resultatene. I tillegg var det færre HPV-negative tilfeller, som er en direkte representasjon av forekomsten høy HPV i OSCC hos pasienter fra Sverige i dag.
I konklusjonen, viser denne studien at LMP10 uttrykk i TSCC og BOTSCC er korrelert til sykdomsfri overlevelse for begge pasienter med HPV-positive og HPV-negative tumorer og har potensiale til å bli brukt i en klinisk sammenheng. Men siden atom LMP10 uttrykk spår overlevelse for pasienter med HPV-positive tumorer, mens cytoplasma LMP10 uttrykk korrelerer til overlevelse for HPV-negative tumorer, ville LMP10 uttrykk må analyseres i forhold til tumor HPV status.
Takk
Vi takker Caitrin Jane Crudden for gjennomlesning av manuskriptet.
