Abstract
Bakgrunn
Prostata-spesifikt antigen (PSA) screening, selv om vanlig, har nylig blitt kalt inn spørsmålet. For å finne prostatakreft (PCA) diagnostiske biomarkører som kan gjøre opp for manglene i Ptil, sammenlignet vi secretomes av flere godartede og PCA cellelinjer, utvalgte kandidatmolekyler, og deretter bekreftet sin klinisk verdi.
Metodikk /hoved~~POS=TRUNC Funn
Vi først identifisert av ekstracellulære proteiner ved todimensjonal gelelektroforese (2-DE) koblet med væskekromatografi-massespektrometri (LC-MS /MS) identifikasjon. Vi deretter validert utskilte proteiner på cellenivå, og endelig avgjort om de kan brukes som PCA diagnostiske biomarkører ved hjelp prostatavevet og serumprøver av kinesiske frivillige ved immunohistostaining og sandwich-ELISA. Vi har fått troverdige ekstracellulære protein 2-DE grafer av prostata cellelinjer. De 5 stedene som viste overlegen repeterbarhet ble valgt for LC-MS /MS-analyse, som identifiserte sju kandidatmolekyler. En av kandidatmolekyler, spondin-2 (SPON2), ble bare uttrykt i det kondisjonerte media (CM) av androgen reseptor (AR) positiv PCA-cellelinjer. Ved hjelp av vevet microarray av immunohistostaining, fant vi SPON2 å være over-uttrykt ved PCA. SPON2 farging var mer intens i Gleason score sum 7-8 og i PCA pasienter med metastaser. Ved mottaker operatør karakteristisk (ROC) kurve analyse, fant vi at serum SPON2 nivået ble hevet i PCA pasienter, viser sensitivitet og spesifisitet egnet for diagnostisk bruk. Vi fant også at SPON2 kan brukes til å identifisere PCA pasienter med serum PSA nivå ikke høyere enn 10 ng /ml fra friske eldre menn.
Konklusjon /Betydning
SPON2 er et nytt serum og histologisk diagnostisk biomarkør for PCa. Det kan unngå noen av problemene med PSA-testing og ble her funnet å tilby relativt høy sensitivitet og spesifisitet i forhold til PSA
Citation. Qian X, Li C, Pang B, Xue M, Wang J, Zhou J (2012) Spondin-2 (SPON2), en mer prostata-kreft-spesifikke diagnostiske Biomarker. PLoS ONE 7 (5): e37225. doi: 10,1371 /journal.pone.0037225
Redaktør: Christina Lynn Addison, Ottawa Hospital Research Institute, Canada
mottatt: 20 desember 2011; Godkjent: 15 april 2012; Publisert: May 15, 2012 |
Copyright: © 2012 Qian et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Studien ble støttet av et forskningsstipend til Jianguang Zhou og Jian Wang fra National Natural Science Foundation of China (nr 30870961 og 81172445). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
i USA, prostatakreft (PCA) alene står for 28% av alle krefttilfeller hos menn [1]. Prostataspesifikt antigen (PSA), et androgen-regulert serin protease fremstilt ved både normale prostata epitelceller og prostatakreft (PCA), er den mest brukte serum biomarkør for PCa [2]. Fastsetting av serum PSA nivåer og digital endetarms eksamen (DRE) anbefales av de fleste kliniske retningslinjer for tidlig deteksjon av prostatakreft [3].
Selv om PSA screening har mange fordeler, har det blitt stilt spørsmål i nyere år. En av de store ulempene ved PSA er at det ikke kan brukes til å overvåke friske menn for prostatakreft med samtidig høy følsomhet og høy spesifisitet [4]. Nivået av total PSA er forhøyet i akutt prostatitt og benign prostatahyperplasi (BPH) [5], [6]. Blant menn med lett forhøyede PSA nivåer på 4-10 ng /ml, fire menn må gjennomgå biopsi for å påvise en mann med PCa [3]. PSA screening kan også føre til feildiagnostisering og forhindre pasienter fra å søke behandling på en riktig måte. Thompson et al. oppdaget at blant 2950 eldre menn med PSA-nivå på 4,0 ng per milliliter eller mindre, ble PCa diagnostisert i 449; 67 av dem hadde en Gleason score summen av 7 eller høyere [7]. Disse eksemplene markere at det haster med å oppdage nye prostata-kreft-spesifikke serum biomarkører som kan skjelne livstruende PCas, samt PCas med serum PSA nivå ≤10 ng /ml.
Her er vi sammen konsentrert tilstand medium (CM) protein todimensjonal gelelektroforese (2-DE) graf av BPH-1 (BPH en epitelcellelinje, og dens cytokeratin uttrykk profil er i overensstemmelse med en prostatisk luminal epitelcelle [8]), LNCaP og c4-2 (et derivat cellelinje av LNCaP som er androgen-uavhengig, sterkt tumorigen, og metastatisk [9]). Ca 400 sølvfarging-positive flekker ble oppnådd per 2-DE gel. Etter eliminering av bakgrunnsstøy, standardisering, og kampanalyse, valgte vi 5 plassene som forskjeller dukket stabil for LC-MS /MS identifikasjon. Syv kandidatmolekyler ble identifisert. En av kandidatmolekyler, SPON2, ble bare uttrykt i CM av androgen-reseptor-positive (AR-positive) PCA cellelinjer.
Etter vev microarray immunhistokjemisk farging, fant vi at SPON2 uttrykk i PCA vev ble høyere enn hos normale prostata og BPH vev. SPON2 uttrykk var høyere i PCA vev med Gleason score til 7-8 og i de fra metastatiske pasienter. Ved hjelp av en sandwich ELISA-protokollen, sammenlignet vi 13 friske, eldre menn til 70 PCA pasienter og fant at serum SPON2 nivået ble hevet i sistnevnte. Arealet under mottageroperatøren karakteristikk (ROC) kurven (AUC) av serum SPON2 var større enn 0,90, hvilket indikerer en høyere diagnostisk verdi. ROC-kurven også foreslått at serum SPON2 konsentrasjoner på omtrent 8 ng /ml ga den høyeste nøyaktighet og beste positive og negative prediktive verdi 97,2% og 100%, henholdsvis, samt beste følsomhet (100%) og spesifisitet (84,6%) . Sammenligning av ROC kurver av serum SPON2 og PSA fra PCA pasienter med PSA nivåer under 10 ng /ml med friske kontroller, SPON2 ble funnet å skille PCA pasienter med serum PSA≤10 ng /ml fra friske, eldre aldrende menn, mens PSA kunne ikke .
Resultater
Screening av kandidatmolekyler i CM av PCa cellelinjer
Åtti mikrogram konsentrert og renset ekstracellulære proteiner i CM av BPH-en, LNCaP og C4 2 ble separert ved to-DE. Skannede bilder av sølv-farget 2-DE gels er vist i figur 1A-C. Resultatene ble analysert ved hjelp av PDQuest programvare, avslører ca 400 protein spots per gel, hvorav fem var oppregulert i CM fra LNCaP og c4-2 celler i tre uavhengige gjentatte forsøk (De tilsvarende regionene er forstørret og vist i figur 1D.) . De fem forskjellig uttrykt protein flekker ble videre påvist ved LC-MS /MS, og sju kandidatmolekyler ble identifisert: triosefosfatisomerase 1 (TPI1), thrombospondin 1 (THBS1), fosfoglyseratmutase 1 (PGAM1), spondin-2 (SPON2), syndecan bindende protein 1 (ST1), peroxiredoxin 1 (PRDX1), og nucleophosmin (NPM1). Som vist i tabell 1, alle syv proteiner hadde høy sekvens dekning og Mascot score. Sannsynligheten baserte Mowse score på hvert sted og passet peptider for hvert protein er vist i figur S1. Vi klarte ikke å finne ut hvilken av de fire kandidat proteiner identifisert i Spot 1 (tabell 1) var oppregulert i CM fra LNCaP og c4-2 celler. Videre undersøkelser av hvert protein på cellenivå, er fortjent.
To-dimensjonal electrophoregram tilstand media fra (A) BPH-en, (B) LNCaP, og (C) c4-2 celler er vist. (D) tilsvarende forstørrede områder av utvalgte protein flekker fra disse cellelinjene er også vist. Proteiner i tilstands media av alle celler ble løst ved todimensjonal gelelektroforese og sølv-farget. Hvite piler indikerer differensial flekker.
Expression of SPON2 var oppregulert i CM av AR-positive PCA cellelinjer
Først fem av syv kandidatmolekyler ble identifisert ved hjelp av RT-PCR i seks prostata cellelinjer, i livmorhalskreft cellelinje Hela, og i brystkreftcellelinje MCF-7. En av kandidatmolekyler, SPON2, i samsvar med tendensen hos den valgte 2-DE sted, var oppregulert i CM av LNCaP og c4-2 forhold til BPH-1 (figur 2A). RT-PCR-resultater antydet at SPON2 mRNA ble sterkt uttrykt i androgen-reseptor-positiv PCA-cellelinjer. Western blot av cellelysater (CL) og CM protein også vist at SPON2 var bare positiv i CM av LNCaP og c4-2 (figur 2B). Dette var konsistent med resultatene av semi-kvantitativ RT-PCR. Vi har etablert en metode for SPON2 sandwich-ELISA kvantifisering. Ved plotting av log for korrigerte avlesninger de optiske tetthet (x-akse) versus log av deres korresponderende SPON2 konsentrasjon (y-aksen), ble en lineær ligning montert som figur 2C. SPON2, på 10 ug konsentrert ekstracellulært protein i CM fra forskjellige prostata cellelinjer, ble kvantifisert ved hjelp av sandwich-ELISA, som vist i Figur 2D. Vi har funnet, i overensstemmelse med resultatene av semikvantitativ RT-PCR, som SPON2 ble bare uttrykt i CM av AR-positive cellelinjer PCa LNCaP, c4-2, og C4-2B. Vi valgte SPON2 som kandidat for histologiske og serologisk testing.
(A) Semi-kvantitativ revers transkripsjon PCR-analyse av fem kandidatmolekyler. (B) Western blot-analyse av cellelysater og tilstand media protein med anti- SPON2 og anti-prostata-spesifikt antigen (PSA) antistoff. (C) Standardkurve for SPON2 sandwich-ELISA. (D) SPON2 kvantifisering i 10 mikrogram ekstracellulært protein i stand media av forskjellige prostata cellelinjer.
Immunohistostaining foreslo SPON2 var en potensiell biomarkør for PCa
To seksjoner fra en vevsblokk separat farget med hematoksylin eosin (HE) og med SPON2 er vist i figur 3. HE-farging er vist som kontroll. Ekspresjonen av SPON2 i forskjellige tilfeller er også vist i figur 3A-D. Den midlere integrert optisk tetthet (IOD) for SPON2 protein ekspresjon (immunhistokjemi) i 73 prøver inneholdende 10 prostata vevsprøver normal, 19 prøver BPH-vev, for 44 prøver med forskjellige Gleason score PCA vev, og prøver av PCa vev både med og uten metastaser var beregnet ved hjelp av Image-Pro Plus 6.0-programvare (tabell S1).
SPON2 integrert optisk tetthet (IOD) summer av alle pasienter med prostatakreft (A), gruppe Gleason scorer sum 7-8 (B) og metastasering (C ) var alle høyere enn både normal og benign prostatahyperplasi (SNK * representerer SNK gruppering testresultater og grupper med samme bokstav er ikke signifikant forskjellig, GS ** representerer Gleason scorer sum; M *** representerer metastasestatus).. Samme regioner i samme prøvene farging med hematoxylin og eosin (HE) og SPON2 separat ble vist i (D).
SPON2 IOD summer var representert ved median (interkvartilt område), f.eks M (Q
R), og statistisk testet ved å gruppere SNK-test (q test). Vi fant ut at SPON2 uttrykk var høyere ved PCA enn i enten normalt eller BPH vevsprøver, til en statistisk signifikant grad (figur 3A)
PCA prøvene ble delt inn i tre grupper etter Gleason scorer sum. Gleason score summer ikke mer enn seks, Gleason scorer summer 7 eller 8, og Gleason score sum 9 eller 10. Vi fant SPON2 uttrykk i gruppen oppsummerer 7 eller 8 for å være høyere enn i enten normale eller BPH vevsprøver, til en statistisk signifikant grad. Prøver som var summer ikke mer enn 6 viste betydelig mer uttrykk enn BPH (figur 3B)
PCA prøvene ble også delt inn i to grupper basert på pasientenes status:. Prøver fra pasienter uten metastaser (M0) og prøver fra pasienter med metastase (M1). Vi fant ut at SPON2 uttrykk var betydelig høyere i gruppe M1 enn i normal eller BPH vev (Figur 3C).
Serum SPON2 nivåer ble forhøyet i PCA pasienter
serum SPON2 nivåer av 13 sunt , eldre menn og 70 PCA-pasienter (Tabell S2) ble kvantifisert ved bruk av SPON2 sandwich-ELISA med den ovennevnte standardkurve (figur 2C). Vi fant serum SPON2 nivå av PCA pasienter (95% konfidensintervall, 95% CI = 27,55 til 52,69) var signifikant høyere enn for friske, eldre menn (95% KI = 0 til 7,78) (
P
0,001)
(A) SPON2 i 70 prostatakreftpasienter og 13 friske eldre menn ble sammenlignet. Willcoxon to prøvetesting ble anvendt for å bestemme signifikans av forskjellene mellom gruppene. (B) En SPON2 mottageroperatøren karakteristikk (ROC) kurve for ovennevnte tilfeller er vist. (C) SPON2 og prostataspesifikt antigen (PSA) ROC kurver for prostatakreftpasienter med serum PSA≤10 ng /ml og friske eldre menn er vist.
De 70 PCA Pasientene ble delt i to grupper, 9 med serum PSA nivå ≤0 ng /ml og 61 med serum PSA nivå 10 ng /ml. De serum SPON2 og PSA-nivåer av disse to grupper av pasienter ble sammenlignet med en gruppe av friske, eldre menn (tabell 2). Serumet SPON2 av PCa med PSA≤10 ng /ml og 10 ng /ml var signifikant høyere enn for friske kontroller (
P
= 0,0013 og
P
0,001). Som forventet, serum PSA nivåer av PCa 10 ng /ml var signifikant høyere enn for friske kontroller, mens PSA≤10 ng /ml ikke viste noen statistisk signifikans mot friske kontroller (
P
= 0,2852). ROC-analyse for serum SPON2 og PSA fra PCA pasienter med PSA-nivå eller under 10 ng /ml og friske kontroller ble også gjennomført (figur 4C). AUC var 0,915 (SE = 0,063, 95% KI = 0,790 til 1,039,
P
= 0,001) og 0,645 (SE = 0,146, 95% KI = 0,359 til 0,931,
P
= 0,256), respektivt. For serum SPON2 nivåene av disse pasienter og friske kontroller, en grenseverdi på 8 ng /ml ga sensitivitet på 100% og spesifisitet på 84,6%. For Ptil, ved anbefalt /ml grenseverdi 4 ng, sensitivitet og spesifisitet var bare 44,4% og 92,3%, henholdsvis.
Diskusjoner
Alle proteiner utskilt av levedyktige celler utgjør en organismes » secretome «. Noen utskilte proteiner blir sluppet ut i blodet, så secretome forskning kan bidra til å avdekke nye kandidat serum biomarkører med potensial klinisk betydning [10].
Gross et al. sammenlignet secretome proteinprofilene i medium fra LNCaP-celler stimulert med androgener, østrogen og interleukin-6 og oppdaget at β2-mikroglobulin (B2M) ble spesifikt oppregulert i tilstanden-medium av androgen-indusert LNCaP-celler [11]. Videre forskning antydet at serum B2M nivåer er forhøyet hos pasienter med metastatisk, androgen-uavhengig prostatakreft. Sardana G. utført en kvalitativ analyse av proteomikk CM fra PCA-cellelinjen PC3 (AR)
6 og oppdaget en ny PCa serum biomarkør, Mac-2BP [12]. Dette tyder på at analysen av CM kan avsløre mer romanen, verdifulle PCA serum biomarkører.
SPON2 (spondin-2, Mindin, DIL-1) tilhører F-spondin familie av utskilte ekstracellulære matrix proteiner [13] . SPON2 er differensielt uttrykt i cancer og ikke-kreft lungeceller [14]. Det er viktig for initiering av den medfødte immunrespons, og representerer et unikt mønster-gjenkjennelse molekylet i den ekstracellulære matriks for mikrobielle patogener [15]. En annen studie rapporterte at den virker som en integrin ligand og er kritisk for inflammatorisk cellerekruttering [16]. Nyere forskning har antydet at R-spondin familiemedlemmer regulerer Wnt veien av en felles mekanisme og at R-spondin2 er et utskilt aktivator av Wnt /β-catenin signal [17], [18]. Iris Simon oppdaget at SPON2 er oppregulert i sera av eggstokkreft pasienter [19]. Renate Parry forskning antydet at SPON2 mRNA uttrykkes hovedsakelig i prostata (både tumor og normale prøver), og ved vesentlig lavere nivåer i andre vev [20]. Romanuik analyse viste at SPON2 er beriket i menneskelige prostata kreft cellelinjer enn i andre menneskelige kreftcellelinjer [21]. Ved hjelp av LNCaP tumor xenograft nakne mus-modellene, ble SPON2 anvendt for antistoffbaserte radioterapi av prostatakreft [20]. Sardana et al analysert CM proteomforskning fra PC3, LNCaP og 22Rv1 prostatacancercellelinjer ved todimensjonal kromatografi og tandem massespektrometri, erholdt fire kandidat biomarkører inkludert spondin-2, og oppdaget at dets ekspresjonsnivå i sera viste en signifikant forskjell mellom pasienter med eller uten prostatakreft [22]. Alle disse resultatene tyder SPON2 kan være en ny biomarkør for PCa.
En prostata vev microarray ble immunohistostained med anti-SPON2 antistoff. Vi fant at den SPON2 fargeintensitet av PCa var betydelig mer intens enn for friske, eldre menn og BPH pasienter. SPON2 farging var mer intens i prøven med Gleason score oppsummerer 7-8 og i prøver fra pasienter med metastatisk PCA pasienter.
Vi brukte en sandwich ELISA-protokollen for å sammenligne serum SPON2 nivåer av 13 friske kontroller og 70 PCA pasienter som bruker Willcoxon 2 smake testing og å vurdere den diagnostiske effektivitet ved bruk av ROC kurver. Vi har funnet at serum SPON2 nivået ble signifikant forhøyet i PCA-pasienter. Arealet under ROC-kurven var større enn 0,90, hvilket indikerer nøyaktighet. Serum SPON2 konsentrasjoner. 8 ng /ml ga de beste positive og negative prediktive verdier, 97,2% og 100%, henholdsvis, den beste følsomhet (100%), og den beste spesifisitet (84,6%)
Av Willcoxon to sample testing, fant vi også at serum SPON2 nivåer av PCA pasienter hvis serum PSA-nivå var på eller under 10 ng /ml var signifikant høyere enn for friske kontroller, men deres serum PSA nivå var det ikke. Basert på AUC med 95% KI og P-verdier, ROC kurver for serum SPON2 og PSA antydet at SPON2 kan skille PCA pasienter med serum PSA≤10 ng /ml fra friske, eldre kontroller og at Ptil ikke kan.
Dessverre vi ikke samle alle sera fra BPH, akutt prostatitt, eller prostata intraepitelial neoplasi kandidat pasienter, blant annet på grunn av pasientenes preferanser og delvis på grunn av vanskelighetene med unntak samtidig PCa uten biopsi. Videre studier på disse pasientene er nødvendig, men å kombinere resultater med de ovennevnte immunohistostaining resultater, tror vi at SPON2 viser potensialer som en mer PCA- spesifikt serum biomarkør enn PSA.
Basert på disse resultatene, konkluderte vi at SPON2 var en ny serum og histologisk diagnostikk biomarkør for prostatakreft, viser selvstendig diagnostisk verdi og en evne til å unngå noen av problemene iboende i Ptil.
Materialer og metoder
Etikk erklæringen
Serumprøver prøver~~POS=HEADCOMP ble tatt før noen klinisk behandling fra Cancer Hospital av den kinesiske Academy of Medical Science (tabell S2). Alle frivillige var innfødt kinesisk, xanthoderm. Sytti PCA inneliggende pasienter fra sykehuset også frivillig. Deres diagnoser ble verifisert ved biopsi, og alle ga sitt skriftlig informert samtykke. Tretten friske, eldre menn (også med skriftlig informert samtykke) frivillig til å tjene som kontrollgruppe. Bare menn funnet av DRE og B-mode ultralyd for å ha noen prostata legioner fikk lov til å tjene som kontroller. Protokollene for innsamling og analyse av prøvene ble godkjent av National Cancer Center (NCC) Ethics Committee of China i samsvar med den nåværende revisjon av Helsinkideklarasjonen. Prøvene ble lagret ved -80 ° C inntil analyse. De serum PSA nivåer av pasientene ble kvantifisert ved hjelp av en Roche Elecsys automatisk elektrokjemiluminescens immunologisk samt sin supplerende PSA elektrokjemiluminescens oppdage kit (Roche Diagnostics, GmbH). Tilsvarende standard kurve forberedelse og serum PSA kvantifisering strengt adlød driften protokollen tilbys av Roche.
Cell kultur
Menneskelig prostata carcinom cellelinjer, LNCaP, c4-2, C4-2B (også avledet celle linjen LNCaP som er androgen-uavhengig, svært tumorigent, og metastatisk [9]), PC3 og DU145, som hadde blitt brukt i referanse [23] ble oppnådd som gaver fra Leland WK Chung (Cedars Sinai Medical Center, Los Angeles, CA, USA); cellelinje BPH-en var en gave fra J. Zhang (Nankai University, Tianjin, Kina, PR.) og hadde blitt brukt i referanse [24]. Brystkreft cellelinje MCF-7 og livmorhalskreft cellelinje HeLa ble kjøpt fra ATCC og bevart i vårt laboratorium. De ble dyrket i RPMI 1640 medium (Gibco, Paisley, UK) supplert med 10% føtalt bovint serum.
Protein separering av 2-DE og sølvfarging
Collection, analyse, konsentrasjon, og rensing av proteiner fra CM ble utført som i referanse [25]. Utfelt proteinprøver (80 ug) ble lastet for 2-DE proteinseparasjon ved bruk av 7 cm ReadyStrip IPG Strips (pH 3-10, lineære) i henhold til produkthåndboken
2-D elektroforese for Proteomics
(Bio -Rad), ble Hvert eksperiment gjentatt tre ganger, uavhengig av hverandre. Gelene ble sølvfarget som i referanse [26]. Scanning ble gjennomført med en planskanner og behandlet med PDQuest programvare (Bio-Rad). Hver gel ble normalisert ved total gyldig sted intensitet, og forskjellig uttrykt flekker ble definert som flekker med mer enn en to gangers forskjell mellom cellelinjer.
I gel fordøyelsen, LC-MS /MS, og database spørring
i gel fordøyelsen, LC-MS /MS, og database spørring er rutinemessige operasjoner i instrumentet sentrum av vårt institutt. Protokoller er oppført i Tekst S1.
Semi-kvantitativ revers transkripsjon PCR (RT-PCR)
Total RNA ble renset ved hjelp Trizol Reagens (Invitrogen Life Technologies). Første-tråd cDNA ble dannet ved anvendelse av First Strand Synthesis System (Toyobo, Japan) i henhold til produsentens instruksjoner. Primere for semikvantitativ RT-PCR er vist i Tabell S3.
Western blot
Ekstracellulære proteinene i CM og holoproteins i CL ble høstet og analysert som beskrevet i referanse [25]. Western blot analyser ble også utført som beskrevet, unntatt at vi brukte geit anti-humant SPON2 (R 0,05 ble betraktet som signifikant. I mer enn tre distribusjons måling datagrupper, brukte vi SNK gruppering (q testing) og Kruskal-Wallis test. Alle de ovennevnte analyser ble utført ved å bruke statistiske software SAS 8,0 for Windows. ROC-kurver ble bygget ved hjelp av SPSS 13.0 for Windows.
Hjelpemiddel Informasjon
Figur S1.
LC-MS /MS identifikasjon av utvalgte stedene. A. Mowse score på plass 1. B. Sequence dekning av peptider til SPON2 (matchede peptider vist i fet skrift). C. Sequence dekning av peptider til THBS-en (matchede peptider vist i fet skrift). D. Sequence dekning av peptider til TPI1 (matchede peptider vist i fet skrift). E. Sequence dekning av peptider til PGAM1 (matchede peptider vist i fet skrift). F. Mowse score på plass 2. G. Sequence dekning av peptider til ST1 (matchede peptider vist i fet skrift). H. Mowse score på plass 3. I. Sequence dekning av peptider til TPI1 (matchede peptider vist i fet skrift). J. Mowse score på plass 4. K. Sekvens dekning av peptider til PRDX1 (matchede peptider vist i fet skrift). L. Mowse score på plass 5. M. Sequence dekning av peptider til NPM1 (matchede peptider vist i fet skrift)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0037225.s001 plakater (TIF)
Tabell S1.
Detaljer om menneskelige prostata vev microarray brukes i denne forskningen papir inkludert SPON2 IOD sum vi beregnet.
doi: 10,1371 /journal.pone.0037225.s002 plakater (DOC)
Tabell S2.
Detaljer om PCA pasienter og normale aldrende menn som brukes i denne forskningen papir inkludert serum SPON2 nivået vi beregnet.
doi: 10,1371 /journal.pone.0037225.s003 plakater (DOC)
tabell S3.
Grunning for Semi-Kvantitativ RT-PCR.
doi: 10,1371 /journal.pone.0037225.s004 plakater (DOC)
Tekst S1.
Protokoller for In gel fordøyelsen, LC-MS /MS og Database spørring.
doi: 10,1371 /journal.pone.0037225.s005 plakater (DOC)
