Abstract
microRNAs (mirnas) har blitt funnet å være dysregulerte i ovarialcancer (EOC) og kan fungere som enten tumorsuppressorgener (TSGs) eller som onkogener. Hypermethylation av miRNA stiller svulsten undertrykkende funksjon av en miRNA eller hypermethylation av en TSG regulere at miRNA (eller vice versa) fører til dens tap av funksjon. Denne studien tar sikte på å evaluere virkningen av avvikende mikroRNA-125b (MIR-125b) uttrykk på ulike clinicopathological funksjoner i epitelial eggstokkreft og sin tilknytning til unormalt metylering av flere TSGs. Vi har registrert 70 nydiagnostiserte tilfeller av ovarialcancer, spilt inn sin sykehistorie og 70 friske frivillige kvinner. Serum MIR-125b-nivåer ble bestemt ved kvantitativ revers transkripsjon polymerasekjedereaksjon (QRT-PCR) og metylering status for forskjellige TSGs ble undersøkt ved metylering spesifikk PCR. ROC kurver ble konstruert for å beregne diagnostisk og prognostisk nytten av MIR-125b. Kaplan-Meier metoden ble brukt for å sammenligne overlevelseskurver. Uttrykk av MIR-125b ble funnet å være signifikant oppregulert (p 0,0001) sammenlignet med friske kontroller. Ekspresjonsnivået av MIR-125b ble funnet å være signifikant assosiert med FIGO stadium, lymfeknute og fjern metastase. ROC-kurven for diagnostisk potensial gitt betydelig AUC med en rettferdig sensitivitet og spesifisitet. ROC-kurver for prognose gitt betydelige AUC’er for histologiske grad, distal metastase, lymfeknute status og overlevelse. Uttrykket av MIR-125b også korrelerte signifikant med hypermethylation av TSGs. Våre resultater indikerer at DNA hypermethylation kan være involvert i inaktivering av MIR-125b og MIR-125b kan fungere som en potensiell uavhengig biomarkør for klinisk utfall i EOC
Citation. Zuberi M, Khan I, Mir R, Gandhi G, Ray PC, Saxena A (2016) Utility of Serum MIR-125b som en diagnostisk og prognostisk indikator og dens allianse med et panel av tumorsuppressorgener i ovarialcancer. PLoS ONE 11 (4): e0153902. doi: 10,1371 /journal.pone.0153902
Redaktør: Ratna B. Ray, Saint Louis University, USA
mottatt: 04.02.2016; Godkjent: 05.04.2016; Publisert: 19 april 2016
Copyright: © 2016 Zuberi et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. All relevant data er inkludert i papir og dens saksdokumenter filer
finansiering:. forfatterne fikk ingen spesifikke midler til dette arbeidet
konkurrerende interesser:. forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer.
Innledning
Eggstokkreft er den ledende årsak til kreft dødsfall på verdensbasis. Den høye frekvensen av dødelighet kan skyldes vanskeligheter med å diagnostisere det på et tidlig stadium og mangel på effektive behandlingsmetoder for pasienter med en avansert eller tilbakevendende sykdom [1]. Derfor er det en viktig forutsetning for å utvikle prognostiske og prediktive markører for å oppdage det tidlig, og for å bidra til å optimalisere behandlingen.
microRNAs (mirnas) er en klasse av små ikke-kodende RNA-molekyler som kan indusere post-transcriptional stanse av målgener ved å samhandle med deres 3′-UTR (ikke-translaterte region), for således å regulere mange viktige biologiske prosesser som celle utvikling, differensiering og apoptose [2]. Tatt i betraktning de viktige regulatoriske roller miRNA spiller i kreftutvikling og progresjon, har flere studier blitt gjennomført for å identifisere miRNA som potensielle biomarkører for kreft diagnose, prognose og personlig terapi [3].
Aberrant miRNA uttrykket har vært hyppig observeres i forskjellige typer av humane tumorer. Studier tyder på at mirnas kan fungere som enten tumor-suppressor gener (TSGs) eller onkogener [4]. Nyere studier rapporterte feilregulering av MIR-125b i ulike kreftformer [5,6]. Imidlertid har den mekanismen som MIR-125b bidrar til ovarialcancer (EOC) ikke blitt dokumentert og er fortsatt relativt uklart. Høy uttrykk for MIR-125 hadde blitt observert i hjernesvulst og prostatakreft [7,8] mens MIR-125 nivåer ble sett til å redusere i bryst og magekreft [9,10]. Til dags dato er ikke klart uttrykk nivået av MIR-125b i epitelial eggstokkreft ennå. Per antatte promoter-regionen, er arrangøren av MIR-125b innebygd i CpG island [11].
Tatt i betraktning de ovennevnte funn, testet vi uttrykket av MIR-125b i serum av epiteliale kreftpasienter eggstokkene å belyse sin nytteverdi som et diagnostisk /prognostisk markør. Vi har også analysert metylering mønster i et panel av tumorsuppressorgener som DAPK1, p16, RASSF1A, PTEN, BRCA1 og P14 og utforsket sin tilknytning til den avvikende uttrykk for MIR-125b.
Materialer og metoder
Pasientprøver prøver~~POS=HEADCOMP
Blodprøver prøver~~POS=HEADCOMP ble anskaffet fra klinisk diagnostiserte epiteliale kreftpasienter på eggstokkene. Pasientene (n = 70) ble rekruttert fra Institutt for gynekologi og obstetrikk, Lok Nayak Hospital, New Delhi mellom juni 2012 og oktober 2014. Samme antall (n = 70) av frivillige kvinner (alder matchet) fungerte som kontroller. Serum ble separert ved sentrifugering. Alle prøver ble samlet inn og lagret ved -70 ° C og tint umiddelbart før analysen. Komplett kliniske data og nåværende behandling plan ble oppnådd. Formålet med prøvetakingen ble forklart til alle pasienter og skriftlig informert samtykke ble innhentet før innmelding. Studien ble godkjent av Institutional etikkomiteen ved Maulana Azad Medical College, New Delhi, India.
DNA Extraction
Genomisk DNA ble isolert fra blodprøver fra pasienter og kontroller ved hjelp av Geneaid DNA Isolation Kit (Taiwan) i henhold til produsentens instruksjoner. Kvaliteten og integritet av DNA fra disse vev ble sjekket ved elektroforese på 1% agarosegel, kvantifisert spektrofotometrisk, og deretter lagret ved -20 ° C for videre bruk.
Bisulfite Modifisering av DNA
bisulfite behandling ble utført ved hjelp av BisulFlash DNA Modification Kit (Epigentek, USA) i henhold til produsentens retningslinjer. Denne prosedyren endrer unmethylated cytosines til uracil nukleotider, men endrer ikke denaturert cytosin nukleotider. Bisulfitt omdannelse av DNA ble utført ved 95 ° C i 20 minutter, hvorunder unmethylated cytosines ble omdannet til uracil helt. Dette ble etterfulgt av den konverterte DNA opprydding og lagring ved -80 ° C før bruk.
Metylering spesifikk PCR
Metylering spesifikke PCR (MSP) er sensitiv og spesifikk for metylering av praktisk talt alle blokk av CpG steder innenfor en CpG island. Hyppigheten av CpG steder i CpG øyer gjør denne teknikken nyttig og ekstremt sensitiv for slike regioner. Bisulfite behandlet DNA ble forsterket med spesifikke PCR primere (S1 Table) som skiller metylert og unmethylated DNA. Disse primere forsterke forskjellige størrelser produkter for DAPK1, p16, RASSF1A, PTEN, BRCA1 og P14 (for denaturert og unmethylated sekvenser) som vist i tilleggsfilen (S1 fig). PCR ble utført i en 25 pl blanding inneholdende 10 mL av drøm Taq Master Mix (Fermentas) inneholdende optimert buffer, 4 mM MgCl
2, rekombinant Taq DNA polymerase, 0,4 mM av hver dNTP, 0,6 pM av hver primer, og 4,0 mL av bisulfitt-behandlede templat-DNA.
RNA ekstraksjon, polyadenylering og cDNA-syntese
RNA fra serumprøver ble isolert ved Trizol-metoden og som er lagret i RNase-frie rør ved -70 ° C. Kvaliteten og integritet av RNA ble bestemt av A
260/280 ratio. Den Poly-A tailing ble utført ved hjelp av Poly A polymerase enzym og rATP (Agilent, Cat # 600036). Revers transkriptase og andre nødvendige reagenser for cDNA-syntese ble deretter tilsatt for å omdanne den poly (A) tailed mirnas inn i cDNA ved anvendelse av en oligo-dT adapter primer levert med kittet. Adapteren primer har en unik sekvens på sin 5 «ende som tillater forsterkning av cDNA i sanntid QRT-PCR reaksjoner.
miRNA påvisning av qPCR
Relativ kvantitativ real-time PCR (qPCR ) ble anvendt for å måle ekspresjonen av miRNA. qPCR ble utført på en Rotor Gene (Qiagen), ved hjelp av Maxima SYBR grønn qPCR Mastermix (Fermentas), MIR-125b spesifikk forover primer (Qiagen) (tabell 1), en felles universell revers primer og snU6 som en endogen kontroll. 100 ng av cDNA-produkt amplifisert i revers transkripsjonstrinnet ovenfor ble kvantifisert i en 20 pl reaksjonsvolum ved anvendelse av følgende amplifikasjon program: DNA
Taq-polymerase
aktivering ved 95 ° C i 5 minutter, etterfulgt av 40 amplifiseringscykluser av denaturering ved 95 ° C i 10 sekunder, annealing ved 61 ° C i 20 s, og forlengelse ved 72 ° C i 10 sek. Til slutt, ble en smeltekurve generert ved å ta målinger fluorescerende hver 0,5 ° C i 25 s fra 50 ° C til 95 ° C for å sikre et enkelt PCR-produkt. De Real-Time PCR eksperimenter ble gjentatt atleast tre ganger.
Ct-verdiene for rengjøring U6 snRNA og teste mir-125b ble brukt til å beregne delta Ct (ΔCt) verdier mellom test- og referanse gener i både normal friske kontroller og testpasienter. Delta Ct (ΔΔCt) verdier mellom friske kontroller og pasienter var basert på forskjellen i ΔCt verdier mellom de to settene. Dette ble brukt til å beregne den eksponentielle forskjellen basert på to
-ΔΔCt. Verdiene ble normalisert og uttrykt i form av fold uttrykk i forhold til friske kontroller.
Statistical Analysis
korrelasjoner mellom metylering nivåer av tumorsuppressorgener og de kliniske og patologiske parametre ble analysert med Chi kvadratet test eller Fisher eksakt sannsynlighet analyse. Forskjellen på MIR-125b uttrykk nivåer mellom ovarialcancer pasienter og kontroller ble undersøkt av Student
t
-test. ROC-kurver ble konstruert ved å bruke XLSTAT programvare. Survival analyse ble utført ved hjelp av Kaplan-Meier plott og log-rank (Mantel-Cox) test. Dataanalyse for qPCR ble utført ved den komparative terskelsyklusen (Ct) -metoden. Hver prøve ble undersøkt i tre paralleller, og mengdene av PCR-produktene som produseres ble normalisert til internkontrollen. Gene og miRNA uttrykk nivåer ble oppnådd ved relativ kvantifisering ved hjelp av to
(- ΔΔCt) -metoden. Funnene i større eller mindre enn 1, ble ansett å indikere overekspresjon eller underexpression, respektivt. Alle verdier ble standardisert i forhold til de normale kontrollverdier, som ble representert som en verdi på 1. Forholdet av MIR-125b og metylering status av TSGs ble undersøkt ved hjelp av Mann-Whitney
U
test. SPSS versjon 16.0 for Windows (SPSS Inc, IL, USA) og GraphPad Prism 6 for Windows (versjon 6.05) ble brukt for statistisk analyse. Resultatene ble ansett som viktig når
p
var. 0,05
Resultater
Pasient egenskaper
Kliniske-patologiske funksjoner, inkludert alder, histologisk grad og type , tumorstørrelse, menopausal status: Figo stadium, lymfeknute status, CA125 nivåer etc. er vist i tabell 2. for å klargjøre ekspresjon av MIR-125b på utbruddet av kreft, ble epiteliale kreftpasienter eggstokk delt inn i to grupper, ≤ 45 år (57,1%) og 45 år (42,8%). Tilfeller ble delt i henhold til FIGO iscenesettelse av EOC og histopatologiske typer.
Distribusjon av MIR-125b uttrykk mønster i saker og kontroller
Tabell 3 viser fordelingen av MIR ganger endring uttrykk blant sakene og kontroller. Det var signifikant forskjell (p 0,0001) observert med serum MIR-125b uttrykk i epitelial eggstokkreft. Ett-sample t-test ble brukt til å evaluere miRNA uttrykket mellom pasienter og friske kontroller. Nivået på MIR uttrykk i kontrollene ble satt til en og deretter beregnes Mir uttrykk i matchet ovarialcancer prøver. Serumet uttrykk for MIR-125b ble funnet å være 5 folder mindre i kontrollene enn den tilsvarende ovarialcancer pasient (Tabell 3).
Uttrykk av MIR-125b og dens diagnostisk potensial i epitelovarialcancer kreft
Sanntids relativ kvantifisering analyse viste mer enn fem ganger økning i serum MIR-125b uttrykk blant ovarialcancer pasienter enn friske kontroller (Tabell 3). ROC kurve analyser ble utført for å evaluere prediktiv kraft MIR-125b for ondartet kreft i eggstokkene og illustrert i figur 1. Relativ uttrykk for serum MIR-125b kunne diskriminere pasienter med ondartet kreft i eggstokkene fra friske kontroller, med en kraft AUC av 0,728 ( 95% CI = 0,64 til 0,81) på en sensitivitet på 62,3% og spesifisitet på 77,1% fra en cut-off score på 3,76.
(A) Dot plott som viser den relative uttrykk for MIR-125b pasienter og kontroller (svart) ROC kurve for MIR-125b stiller sin diagnostisk potensial i epitelial eggstokkreft.
MIR-125b oppregulering i forhold til clinicopathological funksjoner
Tabell 2 viser sammenhengen mellom MIR -125b uttrykk og clinicopathological karakteristikker av epiteliale kreftpasienter på eggstokkene. Rundt 64% av pasientene i 45 år viste høy uttrykk for MIR-125b. Nesten 70% av pasientene med moderat grad svulst utstilt økt uttrykk av MIR-125b bortsett fra 48% av pasientene med godt differensiert tumor og 32% dårlig differensiert tumor. Forhøyet uttrykk for MIR-125b ble sett i rundt 65% serøs adenokarsinom pasienter og ca 50% av pasientene med mucinous adenokarsinom. Når korrelert med tumorstørrelse, ble observert høy uttrykk for MIR-125b når svulsten var på sitt første stadium dvs. 10cm
3. Dessuten, alle pasienter i tidlig stadium (stadium I og II) viste høy ekspresjon av MIR-125b. Pasienter som ikke har noen metastase dvs. involverer pasienter i tidlig stadium, oppsummerte nesten 67% av pasienter med økt uttrykk av MIR-125b sammenlignet med pasienter (5%) med metastatisk sykdom. Tilsvarende 65% av pasientene uten lymfeknutemetastase viste høyere uttrykk av MIR-125b. Menopausal status, nulliparity, serum CA125 nivåer og konsentrasjon hemoglobin (Hb) ikke assosierer signifikant med uttrykket av MIR-125b. Figur 2 viser signifikant sammenheng med hensyn til scenen, lymfeknutemetastaser og fjernmetastaser status med uttrykk for MIR-125b i epiteliale kreftpasienter på eggstokkene.
MIR-125b med hensyn til stadium av epitelovarialcancer kreft.
En klar avgrensning ble observert med hensyn til uttrykk av MIR-125b og FIGO stadier i epitelial eggstokkreft. Alle pasientene i stadium I og stadium II presenteres høyere uttrykk av MIR-125b mens pasienter i stadium III og IV telles bare 10% og 5% av pasienter med økt uttrykk henholdsvis (figur 2A).
MIR-125b er oppregulert i ikke metastasized tumorer.
En statistisk signifikant (p = 0,002) korrelasjon ble observert mellom den metastase status av ovarialcancer pasienter og MIR-125b uttrykk. Uttrykk av MIR-125b ble funnet å være spesielt økt hos pasienter uten metastaser (Fig 2B).
MIR-125b er oppregulert i pasienter uten lymfeknutemetastaser.
Som med fjernmetastaser pasienter uten lymfeknutemetastase viste en statistisk signifikant (p = 0,001) korrelasjon med uttrykk for MIR-125b (figur 2C).
uttrykk av MIR-125b og dens prognostisk potensial i epitelial eggstokkreft
MIR-125b ble analysert for sin sykdomsprogresjon, prognostisk betydning og overlevelse i EOC. MIR-125b ble evaluert for sykdomsprogresjon ved sammenslutningen av sitt uttrykk med Figo scener og diverse andre clinicopathological parametere av epitelial eggstokkreft. Den prognostisk betydning ble belyst av ROC kurver. For å bruke ROC kurven analyse, ble de kliniske og tumor egenskaper gjort binær og derfor dikotomisert. Stage ble dikotomisert så tidlig (I + II) eller sent (III + IV), tumor grade så lavt (G1 + G2) eller høy (G3), node engasjement som ingen spredning til lymfeknuter eller spredning til lymfeknuter, fjernmetastaser som stede eller fraværende, overlevelse som død på grunn av epitelial eggstokkreft eller annet (sensurert /live)
uttrykk for MIR-125b og histologisk grad ga en signifikant AUC av 0,676 (95% KI: 0,558 til 0,793). med en sensitivitet på 66,7% og spesifisitet på 62,6% fra en optimal cut-off-verdi på 3,91 (figur 3A) (tabell 4). ROC-kurven for fjernmetastaser ga en AUC på 0,891 (95% CI: 0,838 til 0,944) med en sensitivitet og spesifisitet på henholdsvis 94,1% og 70,5% ved en optimal cut-off-verdi på 4,34 (figur 3B). En AUC på 0,773 (95% CI: 0,658 til 0,887) ble erholdt i ROC-kurve i forhold til lymfeknutemetastase og ved en optimal cut-off-verdi på 5,85, var sensitiviteten 73,7% og spesifisiteten var 80,8% (figur 3C). ROC-kurven for å overleve ga en AUC på 0,660 (95% KI: 0,564 til 0,756) med en sensitivitet på 64,3% og spesifisitet på 67,0% på et optimalt cut-off score på 3,91 (figur 3D)
overlevelsesanalyse ble gjort av Kaplan-Meier kurve og log-rank test (figur 4A). Det var ingen signifikant sammenheng funnet mellom MIR-125b uttrykk og total overlevelse av pasienter med ≤1 ganger uttrykk for MIR-125b. Imidlertid, når histologiske undergrupper ble estimert til å overleve separat, ble det funnet at pasienter med mucinkjertler histotypes hadde en overlevelsestid på 16 måneder, mens pasienter med serøse histotypes oppviste en overlevelsestid på 9 måneder (figur 4B).
uttrykk av MIR-125b i samarbeid med arrangøren hypermethylation av tumorsuppressorgener
den relative uttrykk for MIR-125b ble vurdert i forhold til arrangøren hypermethylation kjente tumorsuppressorgener-DAPK1, p16, RASSF1A , PTEN, BRCA1 og P14. Ut av disse, RASSF1A og PTEN genene viste en statistisk signifikant sammenheng mellom avvik hypermethylation av sin promotor og den relative uttrykk for MIR-125b i epiteliale kreftpasienter på eggstokkene. Pasienter med RASSF1A arrangøren hypermethylation demonstrert nedregulering av MIR-125b uttrykk (p = 0,005) (fig 5). Tilsvarende pasienter med PTEN arrangøren hypermethylation viste nedregulering av MIR-125b uttrykk (p = 0,01). Ingen andre tumorsuppressorgenet viste en statistisk signifikant sammenheng med MIR-125b uttrykk.
(A) DAPK1 (B) p16 (C) RASSF1A (D) PTEN (E) BRCA1 (F) P14. Positive og negative viser tilstedeværelse eller fravær av arrangøren hypermethylation av den angitte tumorsuppressorgenet hhv.
Diskusjoner
Utviklingen av epitelial eggstokkreft kreftutvikling er en flertrinns prosedyre som innebærer feilregulering av onkogener og tumorsuppressorgener. Moderne studier har rapportert at mikroRNA-forbundet transcriptionally regulert genekspresjon spiller en avgjørende rolle i initiering, utvikling og progresjon av epitelial eggstokkreft, ved å holde en regulerende sjekk på celleproliferasjon, cellesyklus, apoptose, og metastasering. MIR-125b har blitt rapportert å være involvert i flere krefttyper [12]. MIR-125b fungerer enten som en onkogen eller tumor suppressor genet. Det er oppregulert og viser onkogene potensial i noen kreftformer som det utløser celledeling, mens hindrer apoptose. På den annen side er det åpenlyst nedregulert i forskjellige andre kreftformer. Vår forståelse med hensyn til motstridende roller MIR-125b i overflod av kreft er fortsatt begrenset. Et aspekt av våre mål var å utforske den avvikende uttrykk for MIR-125b i epitelial eggstokkreft i forhold til clinicopathological attributter. Det andre aspektet var å teste uttrykket av MIR-125b med henvisning til unormalt denaturert TSGs for å levende konkludere deres mulige rolle i enten regulere eller blir regulert av MIR-125b.
MIR-125b er tenkt å målrette kjennetegnene til kreft i den ene eller den annen vei, som regulerer flere gener som er involvert i reaksjonsveien, som fører til utvikling av kreft fenotype. Avvikende DNA metylering har et kritisk utfall på epitelial eggstokkreft initiering og progresjon. Flere forskere har sett for hypermethylation av miRNA promoter i ulike kreftformer som en grunn for inaktivering av det aktuelle miRNA og fremheve den antatte rolle epigenetisk avbrudd i å produsere avvikende mønstre av uttrykk for miRNAs i kreftceller [13]. Flere linjer av bevis støtter ideen om at feilregulering av miRNA kan føre til avvikende DNA metylering i kreft og at mirnas stand til å regulere
DNMT
gener velig nedregulert i kreft [14,15]. mirnas som virker som tumor-suppressorer har blitt funnet å være metylert i tumorceller indikerer betydningen av å studere de to kreftene sammen-epigenetikk og mirnas [16]. Dessuten kan DNA-metylering profilen av tumorer brukes som en signatur for å definere tumortypen, klinisk prognose og behandling respons [17,18]. mirnas transkribert fra CpG øyer gjennomgår DNA-metylering-assosierte undertrykkelse med en lignende kromatin sammenheng til kodende gener, slik som binding av transkripsjonelle repressoren metyl-CpG-bindende domene proteiner [19,20]. Slike genetiske studier avsløring har banet vei til å identifisere de mekanismer som er ansvarlig for å forårsake kreft ødeleggelse på molekylært nivå. Basert på lignende linjer, valgt vi et panel av tumorsuppressorgener, som er kjent å være utsatt i ovarialcancer for å undersøke hvorvidt deres avvikende metylering direkte eller indirekte påvirker ekspresjonen av MIR-125b som i sin tur fører til utvikling av kreft. Av de undersøkte tumorsuppressorgener RASSF1A og PTEN gener dukket opp som sannsynlige kandidater som kan spille en avgjørende rolle i modulerende uttrykk for MIR-125b. Poliseno et al. har vist seg rollen PTEN transkripsjoner i moduler miRNA målretting ved å undersøke PTENP1 nivåer [21]. Identifisering og validering av mange
PTEN
for målretting microRNAs indikerer at post-transcriptional regulering spiller en sentral rolle i å bestemme PTEN overflod i kreftceller [22-25]. Cellene er svært følsomme for selv svak nedgang i PTEN nivåer, fremhever viktigheten av mikroRNA-mediert PTEN regulering i kreft [26]. RASSF1A er en tumor suppressor som er en negativ regulator i RAS-MAPK sti og har redusert uttrykk i ulike kreftformer. Det er blitt foreslått at RASSF1A deltar i celleproliferasjon og apoptose ved å regulere MAPK reaksjonsveien og har effekter på karsinogenese [27]. En annen studie av Banno et al. rapportert at redusert uttrykk for RASSF1A gen skjer ved hypermethylation eller undertrykkelse av genuttrykk av miRNAs. Uttrykk for miRNA selv kan økes eller reduseres ved promoter metylering, basert på forskjeller mellom normale og kreftceller [28]. Derav vår studie har ekstrapolert disse resultatene og kan gi en ny retning for å undersøke uttrykket av MIR-125b i en ny dimensjon.
Nyere teknologiske fremskritt har hjulpet påvisning av miRNAs med optimal sensitivitet og spesifisitet. Sirkulasjons mirnas er fremstår som lovende diagnostiske biomarkører for kreft om nytten sin for å oppdage tidlige svulster fortsatt uklart. MIR-125b har vist seg å målrette flere gener som er mer eller mindre relevant i dannelsen av tumor i ulike celletyper. MIR-125b fungerer som klassiske onkogen i en rekke forskjellige tumorer hvor dets overekspresjon kan føre til undertrykkelse av et svulsthemmer-gen eller blokkerer dets apoptotisk maskineri. Dette er videre støttet av funn som MIR-125b uttrykk nivåer er korrelert med redusert overlevelse [29,30]. En fersk studie av Yamada et al. har også rapportert en forhøyet nivå av MIR-125b i tykk- og endetarmskreft. De identifiserte MIR-125b som en tidlig deteksjon biomarkør i kolorektal kreft på grunn av den betydelige AUC (0,806) i ROC kurve [31]. Giray et al. funnet en oppregulering av MIR-125b uttrykk i leverkreft og foreslo at det kunne tjene som en roman, ikke invasiv biomarkør i denne kreft [32]. Jiang og medarbeidere viste også en oppregulering av MIR-125b in vivo og in vitro i endometriet [33]. I tillegg har overekspresjon av MIR-125b blitt undersøkt i flere cancertyper slik som kreft i bukspyttkjertelen [34], prostatakreft [35], brystkreft [36,37], lungecancer [38], glioblastom [39], oligodendroglial kreft [ ,,,0],7] blant andre kreftformer. Omvendt, har MIR-125b er vist å bli nedregulert i en rekke tumorer slik som blærekreft, [40], spiserørskreft [41], osteosarkom [42], prostatakreft [43], leverkreft [44], brystkreft [ ,,,0],45], ikke-småcellet lungekreft (NSCLC) [46], brystkreft [47], magekreft [48], glioblastom [49] etc. i eggstokkreft, har motstridende studier på MIR-125b gjort det en nødvendighet å kartlegge sin rolle dypt. Lee et al. rapporterte en nedregulering av MIR-125b i eggstokkreft vev og cellelinjer sammenlignet med friske kontroller [50]. Luo og kolleger har også nylig rapportert en nedregulering av MIR-125b i eggstokkreft vev og cellelinjer [51]. Gadducci et al. også observert lignende resultater [52]. He et al. foreslo en roman terapeutisk tilnærming ved hjelp av MIR-125b ligne i behandling av eggstokkreft [53]. Guan et al. rapporterte at overekspresjon av MIR-125b resulterte i hemming av ovariecancer celleproliferasjon [54]. På den annen side, Kong og medarbeidere rapporterte en oppregulering av MIR-125 i eggstokkreft, og foreslo at oppregulering av MIR-125b uttrykk bidrar til cisplatin motstand gjennom undertrykkelse av Bak1 uttrykk [55]. Diverse uttrykk for MIR-125b ble rapportert i multiresistent eggstokkreft cellelinjer av Sorrentino et al [56].
Foreningen av MIR-125b med ulike clinicopathological funksjoner reflektere at Mir-125b kunne fungere som en tidlig biomarkør for kreft i eggstokkene. Den forhøyede ekspresjon i en tidlig fase i forhold til det avansert stadium taler volumer av sin betydning i indikerer utbruddet av sykdommen. Uttrykket av MIR-125b i forhold til fjernmetastaser status og lymfeknute status foreslå dens mulige potensialet i tidlig diagnostisering av kreft i eggstokkene.
Konklusjon
Stadig flere studier har vist at MIR -125b spiller en avgjørende rolle i ulike cellulære prosesser og mange sykdommer spesielt karsinomer. Det er bemerkelsesverdig at funksjonene til Mir-125b er kontroversielle i ulike typer kreft. Derfor de kontroversielle egenskapene til Mir-125b i ulike svulster tyder på at Mir-125b har forskjellige funksjoner i kreft patogenesen og progresjon, mens de underliggende mekanismene på annen celle sammenheng trenger ytterligere bekreftelse. De fremskritt som MIR-125b holder i kliniske applikasjoner trenger en nærmere titt for fremtidig behandling av kreft.
Hjelpemiddel Informasjon
S1 Fig. Elektrofore bandet mønster for hypermethylation for et panel av tumorsuppressorgener visualisert på 2% agarosegel under UV transillumination
doi:. 10.1371 /journal.pone.0153902.s001
(EPS)
S1 Table. Sekvens av primere med annealing temperaturer og bandet størrelse som brukes for MS-PCR
doi:. 10,1371 /journal.pone.0153902.s002 plakater (RTF)
Takk
Vi er takknemlig til Dr. V Sreenivas for hans hjelp og samarbeid i statistisk analyse av dette manuskriptet.
