Abstract
Aberrant overekspresjon av cyklooksygenase-2 (COX2) er observert i urothelial carcinoma av blæren (UCB). Studier som evaluerte COX2 som en prognostisk markør i UCB rapportere motstridende resultater. Vi har fastslått den prognostiske potensialet av COX2 ekspresjon i UCB og kvantitativt oppsummere resultatene med de fra litteraturen gjennom en meta-analyse. Nydiagnostiserte UCB pasienter rekruttert mellom 1998-2001 i 18 spanske sykehus ble prospektivt inkludert i studien og fulgt opp (median, 70,7 måneder). Diagnostiske lysbilder ble gjennomgått og jevnt klassifisert av ekspert patologer. Kliniske data ble hentet fra sykehuset diagrammer. Microarray inneholder ikke-muskel invasiv (n = 557) og muskel invasiv (n = 216) svulster ble analysert ved immunhistokjemi hjelp kvantitativ bildeanalyse. Expression ble evaluert i Cox regresjonsmodeller for å vurdere risikoen for tilbakefall, progresjon og sykdomsspesifikk dødelighet. Meta-hazard ratio ble beregnet ved hjelp av våre resultater og de fra 11 flere evaluerbare studier. COX2 uttrykk ble observert hos 38% (211/557) av ikke-muskel invasiv og 63% (137/216) av muskel invasive svulster. Expression var assosiert med avansert patologisk stadium og grad (p 0,0001). I univariable analysene COX2 uttrykk – som en kategorisk variabel – ble ikke forbundet med noen av resultatene analysert. Som en kontinuerlig variabel, ble en svak sammenheng med tilbakefall i ikke-muskel-invasive tumorer observert (p-verdi = 0,048). I de multivariable analysene, gjorde COX2 uttrykk ikke uavhengig forutsi noen av de vurderte utfall. Den meta-analyse bekreftet disse resultatene. Vi fant ikke bevis for at COX2 uttrykk er en uavhengig prognostisk markør for tilbakefall, progresjon eller overlevelse hos pasienter med UCB
Citation. Czachorowski MJ, Amaral AFS, Montes-Moreno S, Lloreta J, Carrato A, Tardón A, et al. (2012) syklooksygenase-2 uttrykk på blærekreft og pasient Prognose: Resultater fra en stor klinisk Cohort og Meta-Analysis. PLoS ONE 7 (9): e45025. doi: 10,1371 /journal.pone.0045025
Redaktør: Xiaolin Zi, University of California Irvine, USA
mottatt: Mai 20, 2012; Akseptert: 11. august 2012; Publisert: 13.09.2012
Copyright: © Czachorowski et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Arbeidet ble delvis støttet av Fondo de Investigaciones Sanitarias, Instituto de Salud Carlos III, departementet for vitenskap og innovasjon, Spania (G03 /174, 00/0745, PI051436, PI061614 og G03 /174); Red Tematica de INVESTIGACION Cooperativa en kreft RD06 /0020-RTICC; Consolider ONCOBIO; EU-FP6-STREP-37739-slipp-toppen; EU-FP7-HEALTH-F2-2008-201663-UROMOL; EU-FP7-HEALTH-F2-2008-201333-DECanBio; USA-NIH-RO1-CA089715; og en PhD fellesskap tildelt MJC fra «la Caixa» foundation, Spania, og et postdoktorstipend tildelt AFSA fra Fundación Científica de la AECC. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
urothelial carcinoma av blæren (UCB) er den vanligste blærekreft type i utviklede land [1]. UCB hovedsakelig manifesterer (70-80% av pasientene) som en ikke-muskel invasiv tumor (NMIBC: PTA-PT1) kjennetegnes av en generelt god prognose følgende transurethral reseksjon hos pasienter med lavgradige svulster (pTaG1 /2) og intravesikal kjemoterapi og /eller Bacillus Calmette Guerin (BCG) drypping hos pasienter med høy grad av tumorer (pTaG3 eller pT1G2 /3) [2]. Omtrent 70% av NMIBC pasienter lider et tilbakefall etter behandling, og ytterligere 15% fremgang, utvikling av nye svulster stiller muskel invasjon (MIBC: pT2-pT4); risikoen for progresjon er høyere blant pasienter med høy grad av svulster [2]. På grunn av en høy grad av tilbakefall og behov for nøye oppfølging over en pasients liv, forblir UCB en av de mest kostbare tumorer for å behandle på en per pasient basis [3]. En lavere andel (20-30%) av UCB pasienter blir diagnostisert med muskel invasive svulster (MIBC; pT2-pt4) preget av dårlig prognose: 50% av disse pasientene dør av sin kreft [2]. Genomisk profilering og genuttrykk analyser indikerer en sterk sammenheng mellom disse patologiske klassifikasjoner og den underliggende molekylære arkitekturen i UCB [4].
Økende bevis indikerer at kronisk betennelse kan øke risikoen for UCB [5]. Studier som undersøker langvarig bruk av cyklooksygenase-2 (COX2) hemmer ikke-steroide antiinflammatoriske midler (NSAIDs) har rapportert en nedgang i UCB risiko [6], [7]. COX2 er et prostaglandin syntetase endoperoxide som katalyserer produksjon av prostanoider etter induksjon av proinflammatoriske cytokiner, vekstfaktorer, tumorpromotorer og andre eksterne stimuli [8]. COX2 aktivisering medierer cellulære prosesser også innblandet i kreftutvikling som angiogenese, celle overlevelse /spredning og apoptose [9]. Videre har studier vist at blæren vev fra pasienter med cystitt eller UCB utstillinger forhøyet COX2 nivåer i motsetning til benign blæren vev [10], [11].
Selv om mange grupper har undersøkt den prognostiske potensialet av COX2 ekspresjon i UCB [12] – [31], er det ingen klar enighet om sin nytte. Målet med denne studien var å vurdere om COX2 protein uttrykk i UCB celler er assosiert med prognose ved hjelp av en stor og standardisert kohort av nydiagnostiserte blærekreftpasienter. En meta-analyse ble også gjort for å oppsummere disse resultatene sammen med de fra andre studier publisert om emnet.
Materialer og metoder
Studiepopulasjon
Totalt 773 nylig diagnostisert UCB tilfeller i alderen 22-80 år (gjennomsnitt ± SD = 66 ± 10 år) med en median oppfølging av 70,7 måneder (range 0.7-117.7 måneder) og tilgjengelig svulstvev ble brukt i dagens analyse. Alle saker ble rekruttert mellom 1998 og 2001 fra 18 sykehus i fem regioner i Spania som en del av den spanske blærekreft (SBC) /epidemiologi av Kreft urothelium (Epicuro) studie, en sykehusbasert case-control studie beskrevet tidligere [32 ]. En patolog gjennomgang panel jevnt klassifisert T scenen og Karakter (G) for hver svulst biopsi i henhold til kriteriene i TNM klassifisering og WHO-ISUP [33], ved hjelp av tre klasse omdefinering gitt av WHO [34], [35 ]. Alle blære tumorprøver brukes i studien ble samlet før administreringen av enhver intravesikal eller systemisk behandling. Klinisk informasjon relatert til diagnostiske prosedyrer, tumor egenskaper og behandling ble samlet inn fra medisinske poster, og en datastyrt spørreskjema ble brukt for innsamling av sosiodemografiske data. NMIBCs ble fjernet ved transuretral reseksjon og pasienter fikk intravesikal kjemo- eller immunterapi (dvs. BCG) etter ønske. Flertallet av pasienter med MIBCs ble behandlet av radikal cystektomi; i tilfeller hvor kirurgi ikke var mulig, ble radioterapi eller kjemoterapi administrert systemisk. Oppfølging informasjonen ble samlet årlig fra sykehuset poster og gjennom direkte telefonintervjuer av utdannede skjermer ved hjelp av strukturerte spørreskjemaer. Blant NMIBCs, ble gjentakelse definert som fremkomsten av en ny NMIBC etter et tidligere negativ oppfølging systoskopi, og progresjon, som utviklingen av en MIBC. Hos pasienter i utgangspunktet presentere med MIBCs, ble noen svulst tilbakekomst etter behandling vurderes progresjon, uavhengig av om svulsten tilbakefall var lokale eller distal. Tumor spesifikk overlevelse ble vurdert kun for pasienter med MIBCs. Informert skriftlig samtykke ble innhentet fra deltagerne i samsvar med etiske komiteer for hver deltakende sykehus.
Immunohistochemistry
Tissue blokker av formalinfiksert, parafininnstøpte primære blæren svulster ble brukt til å bygge vev mikromatriser (TMA) inneholdende tumor kjerner av 0,6 mm i diameter representert i to eksemplarer og er valgt fra de mest representative områder av tumoren på hvor T og G var basert. Etter deparaffinisation og varme-indusert antigen henting, ble alle lysbilder farget samtidig på Histologi og Immunohistochemistry Kjerne Unit av CNIO bruker PT LINK system som per produsentens instruksjoner (Dako Inc., Glostrup, Danmark). Kort fortalt ble vevssnitt inkubert med anti-COX2 kanin monoklonalt antistoff (ThermoFisher Scientific, Fremont, CA, USA; # RM-9121-R7, pre-utvannet, klar til bruk) ved romtemperatur, etterfulgt av visualisering ved hjelp av Envision Flex visualisering system (Dako Inc., Glostrup, Danmark) og eksponering for diaminobenzedine. Vev ble deretter kontra med haematoxylin, dehydrert og montert. En del av tykktarmen vev ble brukt som en positiv kontroll.
Evaluering av COX2 Farging
COX2 uttrykk ble kvantifisert ved hjelp av ARIOL SL-50 (versjon 3.1.2, Applied Imaging Corp., San Jose, CA, USA) høy gjennomstrømming lysbilde bildebehandling skanner. Alle kjerner ble fotografert og behandlet ved hjelp av et lysmikroskop og medfølgende TMA Multistain bildebehandling. Programmet ble trent av en patolog (SM) for å maksimere inkludering av positivt farget tumor epitel mens stromal materiale minimere, som tidligere beskrevet [36]. COX2 ekspresjon resultatet ble beregnet som produktet av den midlere intensitet av farging (ved å definere bakgrunnen og metningsgrenser antistoffet og bildesensoren, henholdsvis), og andelen av cellulært antistoff-positive område dividert med totalt cellulært område. Verdier fra gjentatte kjerner ble i gjennomsnitt for å gi et endelig uttrykk poengsum for hver pasient. Videre er en tilfeldig valgt TMA (som representerer 10% av alle kjerner) ble analysert ved direkte visuell mikroskopisk undersøkelse av en uavhengig patolog (MMM) for å muliggjøre sammenligning med automatiserte måle- metode. Patologen-avledede resultatet ble beregnet som produktet av COX2 fargeintensitet (1 = svak 2 = middels, 3 = sterk) og en kvartil av prosentandelen av epitel-tumorceller farget (0-4, der 0 representerer 0% farging) , som gir en slutt kategorisk score i området fra 0-12. Det var en høy og signifikant korrelasjon mellom maskinen og patolog avledet score (Spearman rho = 0,85; 95% CI = 0,79 til 0,90, p-verdi 0,00001). COX2 uttrykk ble analysert både som en kontinuerlig variabel og kategoriske variabler partisjonert ved median og ekstreme tertiles. I tillegg uttrykk ble undersøkt som en kategorisk variabel dikotomisert ved en terskel (0,340 vilkårlige enheter [au]) ovenfor som COX2 uttrykk ble ansett å være
positiv
. Dette uttrykket terskel ble utledet ved å sammenligne patologen s (MMM) binære tilordning av positivt uttrykk (dvs. resultatet fra 0 vs. poengsum ≥1, som beskrevet ovenfor) til maskin-avledede kontinuerlig stillingen ved hjelp av mottakeren opererer karakteristikk (ROC) kurve analyse (område under kurven = 0,95;. 86% sensitivitet og 92% spesifisitet) [37]
Meta-analyse
den meta-analysen inkluderte COX2 uttrykk resultater fra vår egen serie (med ROC- avledet kategorisk uttrykk variabel) og relevante studier publisert før 1 januar 2012 identifisert ved å søke i PubMed og ISI Web of Knowledge. Søkestrengen som ble brukt var: (cox2 OR cox-2 eller cyklooksygenase-2 OR «cyklooksygenase 2» ELLER ptgs2) og (PROGNOS * OR overlevelse eller dødelighet eller tilbakefall eller tilbakefall eller progresjon) og ( «blærekreft»). Studiene ble ansett som kvalifisert hvis: (i) de rapporterte effekten tiltaket (som timer, overlevelseskurver eller log-rank p-verdier) av COX2 protein uttrykk på tilbakefall, progresjon eller sykdomsspesifikk overlevelse; (Ii) COX2 ble vurdert i primærsvulster stiller homogenitet i tumorhistologi (≥75% UCB), og subphenotype (≥75% NMIBC
eller
MIBC); (Iii) de ble skrevet på engelsk eller spansk (tabell S1). Anmeldelser, sammendrag, ikke-kliniske studier, og like publikasjoner ble ekskludert. Timer og 95% CI’er var direkte hentet fra publikasjoner når det er tilgjengelig. For de som rapporterer bare log-rank p-verdi eller Kaplan-Meier overlevelseskurver, HRS og 95% konfigurasjons ble uavhengig beregnet ved to av medforfatterne (MJC, AFSA) ved hjelp av regneark utarbeidet av Sydes og Tierney med noen uoverensstemmelser løses av diskusjonen [38]. I noen indikert tilfeller, ble forfatterne direkte kontaktet for avklaring eller levering av data som ikke vises i de publiserte manuskripter (Tabell S1). Nivået av heterogenitet blant studier ble beregnet ved hjelp av I
2-statistikken [39], og publikasjonsskjevhet ble bestemt ved å analysere trakt plott og Egger største asymmetri test [40].
Statistical Analysis
foreninger mellom demografiske og klinisk-patologisk parametere og COX2 uttrykk ble vurdert ved hjelp av Fishers eksakte test. I NMIBCs, ble uttrykket også vurdert utpreget i lavgradig /risiko (pTaG1 /G2) og høyverdig /risiko (PTA /pT2G3) svulster, basert på våre tidligere bevis som tyder differensial prognostiske, genetiske og molekylære profiler mellom disse undergruppene [41 ], [42]. Tilbakefall-fri, progresjonsfri, og generelle sykdomsspesifikke overlevelseskurver ble generert ved hjelp av Kaplan-Meier-metoden, med statistisk signifikans vurdert ved hjelp av log-rank test. Tid til hvert endepunkt ble beregnet fra datoen for primærbehandling til datoen for arrangementet, dato for siste oppfølging, eller dato for pasientens død. Individer som ikke presentere alle fall fram til slutten av studien, de tapt for oppfølging, eller de som døde av andre årsaker ble sensurert enten ved siste legebesøk eller ved død. Tid til tilbakefall og progresjon ble definert ved bruk av «mid-time» mellom datoen for forrige sykdomsfri besøk og at når en ny hendelse ble diagnostisert. Overlevelsestiden ble målt som tiden fra første behandlingen til død som følge av kreft. Univariable og multivariabel Cox-proporsjonal farer analyse ble brukt til å beregne hazard ratio (HR) og 95% konfidensintervall (KI). Schoenfeld restanalyse viste ingen avvik fra den proporsjonale farer forutsetning i multivariable modeller.
Alle statistiske analyser ble gjort ved hjelp av Stata (versjon 10.1 SE, StataCorp, College Station, TX, USA). Statistiske tester var tosidig og p-verdier mindre enn 0,05 ble betraktet som signifikant. Bemerkningen [43] retningslinjer for prognostiske studier samt PRISMA [44] retningslinjer for systematiske oversikter og metaanalyser ble overholdt i utarbeidelsen av manuskriptet.
Resultater
Pasienter og COX2 Expression i blærekreft TMA
COX2 uttrykk ble undersøkt i 557 pasienter med NMIBCs og 216 personer med MIBCs. Median COX2 uttrykk var 0,121 au (område 0 til 42,590; interkvartile området 1,382) i NMIBCs, og 0,760 au (0 til 30,806; 3,600) i MIBCs (p-verdi = 4 × 10
-12). Representative COX2 farging mønstre i UCBs er vist i figur S1. Av pasienter med NMIBCs, ble 41% (230/557) som ble behandlet bare med transuretral reseksjon, mens resten (56%) som mottar endovesical BCG immunterapi og /eller kjemoterapi etter transuretral reseksjon eller annen behandling (3%; Tabell 1). Nesten halvparten (46%) av pasientene med MIBCs ble behandlet av cystektomi, mens resten får systemisk kjemoterapi, strålebehandling, overfladisk eller annen behandling, eller en kombinasjon av disse (tabell 2).
COX2 Expression og Clinicopathological funksjoner
To hundre elleve (38%) NMIBCs og 137 (58%) MIBCs uttrykt COX2 (tabell 1 og 2, henholdsvis), med positive uttrykk definert som en score lik eller større enn ROC-avledet terskelen til 0,340 au. Pasient og tumor egenskaper i den analyserte prøven var ikke signifikant forskjellig fra den første SBC /Epicuro studiepopulasjonen med unntak av geografisk region og tumorstørrelse i NMIBC pasienter (data ikke vist). Fordelingen av COX2 positivitet ble bestemt i henhold til etablerte blærekreft kunngjør inkludert tumorinvasjon og karakter, tumor multiplisitet, tumorstørrelsen og behandling, blant andre. Demografiske faktorer som alder, kjønn og region var ikke forbundet med COX2 uttrykk, og heller ikke var typen av primær behandling mottas av pasienter (tabell 1 og 2). I NMIBCs ble COX2 uttrykk signifikant assosiert kun med T og G; å være mer fremtredende i lavgradig /risiko pTaG1 /2 svulster enn i høyverdig /risiko PTA /pT1G3 svulster (p-verdi 0,0001, tabell 1). Nærmere vurdering av COX2 distribusjon i aktuelle molekylære undergrupper av UCB [4], avslørte en større andel av pTaG2 enn pTaG1 svulster positivt uttrykker COX2 i lavgradige NMIBCs (p 0,0001, subtype 1. Figur S2). COX2 uttrykk skilte seg ikke blant høyverdig /risiko NMIBCs (p = 0,075), men en større andel av MIBCs positivt uttrykt COX2 enn gjorde alt høyverdig /risiko NMIBCs kombinert (p 0,0001, subtype 2, Figur S2). Bare svulst mangfold var assosiert med positiv COX2 uttrykk i MIBC pasienter (p-verdi = 0,008, Tabell 2).
COX2 Expression og prognose i blærekreftpasienter
Vi analyserte foreningen av COX2 uttrykk med tumorresidiv og progresjon hos pasienter med NMIBCs og med progresjon og sykdomsspesifikk overlevelse hos pasienter med MIBCs (tabell 3, figur 1). Når regnet som en kontinuerlig variabel i univariable analyse ble COX2 uttrykk marginalt forbundet med økt risiko for tilbakefall hos NMIBCs (HR = 1,02, 95% CI = 1,00 til 1,04, p-verdi = 0,048, Tabell 3). Men forsvant denne foreningen på multivariabel analyse ved justering for region, kjønn, tumorstadium og klasse, mangfold, tumor størrelse, og behandling. Videre COX2-ekspresjon ble ikke signifikant assosiert med tilbakefall i NMIBCs når den betraktes som en kategorisk variabel, verken i univariable eller multivariable analyse (figur 1 A, Figur S3AC; tabell 3). Til slutt ble det observert noen signifikant sammenheng mellom COX2 uttrykk og progresjon eller overlevelse hos pasienter med NMIBCs eller MIBCs, uavhengig av om uttrykket ble betraktet som en kontinuerlig eller kategorisk variabel i ikke-justert eller justerte analyser (Figur 1B-D, figur S3b, 3D -H, Tabell 3)
Stiplede kurver. pasienter med svulster positive for COX2 protein flekker; heltrukne kurver: pasienter med svulster negative for COX2 protein farging. Betydning verdier fra tosidige logrank test.
Meta-analyse av COX2 Expression og blærekreft prognose
Tjue publikasjoner om COX2 uttrykk og blærekreft prognose ble identifisert gjennom litteraturgjennomgang ( tabell S1) [12] – [31]. Tre av dem manglet prognostiske data, to overlappende med andre større studier og fire inkluderte pasient årskull som ikke oppfyller kriteriene som er skissert tidligere, forlater 11 evaluerbare publikasjoner [12] – [14], [19], [21] – [25 ], [28], [29] pluss studien for meta-analyse (figur S4). Studier ble klassifisert av svulsten subtype (r) de rapporterte om (det vil si NMIBC eller MIBC), og om justering for kovariabler ble vurdert for hvert endepunkt prognostisk kontrollert (dvs. univariable eller flere variable, figurene 2 og 3). Av de fire meta-analyser utført med univariable data, bare metaHR av foreningen mellom COX2 uttrykk og tilbakefall i NMIBCs viste marginal betydning (metaHR = 1,35, 95% CI = 1,00 til 1,83, figur 2). Dette resultatet ble ikke påvirket av studien heterogenitet (I
2 p-verdi = 0,13), men viste betydelig publikasjonsskjevhet, noe som gjenspeiles av Egger test (p-verdi = 0,019). De resterende meta-analyser vurderer univariable data foreslo økt, om enn ikke-signifikant, risiko for tumorprogresjon hos pasienter med NMIBCs (metaHR = 2,07, 95% CI = 0,76 til 5,64) og MIBCs (metaHR = 1,45, 95% KI = 0.77- 2,74), og død hos pasienter med MIBCs (metaHR = 1,13, 95% KI = 0,8 til 1,59, figur 2). Spesielt, oppsummeringen virkning for progresjon i NMIBCs og som ble observert for å overleve i MIBCs ble begge betydelig påvirket av studien heterogenitet (I
2 p-verdier: 0,006 og 0,004, respektivt), med den tidligere også i betydelig grad påvirket av publikasjonsskjevhet ( Egger test p-verdi = 0,001).
på grunn av en mangelen av publiserte prognostiske studier utfører multivariabel analyse på pasienter med NMIBCs, kunne vi bare ta den multivariable meta-tilknytning progresjon og overlevelse hos pasienter med MIBCs (figur 3). En liten, ikke-signifikant økt oppsummering risiko for progresjon (metaHR = 1,12, 95% CI = 0,53 til 2,35, figur 3) ble observert i COX2 uttrykke MIBCs som var upåvirket av studien heterogenitet (I
2 p-verdi = 0,139 ). Tilsvarende ble en null Sammendrag effekt observert for overlevelse (metaHR = 0,97, 95% CI = 0,69 til 1,36; figur 3). Denne effekten var påvirket verken av studien heterogenitet (I
2 p-verdi = 0,114) eller av publikasjonsskjevhet (Egger test p-verdi = 0,108.
Diskusjoner
Til tross for mange publiserte studier, motstridende funn råde på COX2 uttrykk som selvstendig prognostisk markør hos pasienter med UCB. Den aktuelle studien antyder at COX2 uttrykk er ikke en uavhengig markør assosiert med tilbakefall, progresjon eller overlevelse hos pasienter med UCB.
Ved hjelp av den største kohort av pasienter med NMIBCs evaluert for COX2 uttrykk til dags dato, observerte vi at 38% av disse svulstene uttrykte proteinet Andre grupper har rapportert frekvenser som strekker seg 53-88%,. men disse studiene brukt ulike COX2 antistoffer og uttrykk evaluering teknikker og hadde mindre utvalgsstørrelser [16], [28], [29], [45], [46]. i samsvar med rapporterte resultater [11], [18], [45] observerte vi signifikant høyere COX2 uttrykk i MIBCs (58%) enn i NMIBCs. Denne frekvensen er lik den som er observert i andre store, histologisk homogene studier [21], [28], mens grupper som bruker heterogene årskull av squamous og overgangs karsinomer rapportere frekvenser forskjellige fra vår egen [12] , [29]. Sammen er disse funnene gjenta viktigheten av homogenitet, eller lagdeling, i tumormarkørstudier.
Sammenhengen mellom COX2 og klinisk-patologiske egenskaper er fortsatt et omstridt tema i litteraturen. Flertallet av studiene rapporterer en sammenheng mellom COX2 overekspresjon og avansert tumorinvasjon og klasse, men bruker heterogene populasjoner av NMIBCs
og Selge MIBCs i sine vurderinger [21], [25], [26], [28], [47]. Gitt den kjente forskjell i COX2 uttrykk mellom NMIBCs og MIBCs, ville en sammenslutning av denne typen kan forventes i en blandet tumor befolkning. Etter pooling NMIBCs og MIBCs i vår studie vi også observere en sterk signifikant sammenheng mellom COX2 overekspresjon og avansert tumorinvasjon (p 0,0001) og klasse (p 0,0001). Spesielt, flere grupper rapporterer ingen sammenheng mellom COX2 uttrykk og T og G [14], [29], [45]; spesielt de som arbeider strengt med homogene årskull av MIBCs [12], [23]. Tilsvarende i vår studie, COX2 uttrykk var ikke signifikant forskjellig mellom pT2, pt3 og pt4 svulster (p = 0,896). Interessant, observerte vi lavere COX2 positivitet i PT1 og høyverdig /risiko NMIBCs, enn i PTA og /risiko NMIBCs svulster lav grad. Dette resultatet kan virke counterintuitive hvis klasse progresjon er ansett som en lineær egenskap og COX2 uttrykk anses å øke lineært med T og G. Men det er sterke bevis som indikerer at UCB eksisterer som to molekylært distinkte undergrupper, med høyverdig /risiko NMIBCs ha en molekylær signatur mer lik MIBCs enn å lavgradige /risiko NMIBCs [4], [42]. I dette henseende, observerte vi at COX2 positivitet økte signifikant med økende T og G innenfor hver molekyl tumor undertype (figur S2). Shirahama et al. [26] rapporterte en COX2 fordeling lik vår, observere 8% positivitet i PT1 svulster og 50% i MIBCs ved bruk av hel del flekker og en 5% uttrykk terskel. Sammen er disse resultatene gjentar ulikhet i COX2 uttrykk mellom NMIBCs og MIBCs først rapportert av Komhoff et al. [47], og fremheve viktigheten av å vurdere uttrykk i riktig molekylær sammenheng.
For å minimalisere virkningene som følge av å velge en vilkårlig uttrykk terskel, undersøkte vi COX2 protein uttrykk som en kontinuerlig variabel og tre kategoriske variabler. Bare når betraktet som en kontinuerlig variabel i univariable analysen var COX2 uttrykk funnet å være assosiert med en svak økning i risikoen for tilbakefall. Meta-analyse, som består av fem andre univariable studier, gjentok denne foreningen og viste en 35% økt risiko for tilbakefall hos pasienter med COX2 uttrykker NMIBCs. Men begge effektestimater utstillingen bare marginal betydning, tyder på at de observerte foreninger kan skyldes tilfeldigheter. Videre observerte foreningen i univariable analysen holder ikke justert for vanlige prognostiske faktorer for tilbakefall i multivariat analyse. Endelig kan sammendraget effekt observert i meta-analysen har blitt fordreid av to små studier som valgte bare høyrisiko NMIBCs (T1G3 [19] og Cis [24]). Når ble utført en sensitivitetsanalyse fjerne disse to studier fra meta-analysen, ble sammenhengen mellom tilbakefall og COX2 uttrykk ikke lenger vedlikeholdt (metaHR = 1,14, 95% CI = 0,94 til 1,38). Den observerte forskjellen mellom effektestimater av progresjon i denne studien og meta-analyse kan også være knyttet til inkludering av disse to studiene. Ved eksklusjon deres, sammendraget HR viste ingen sammenheng med progresjon (metaHR = 0,98, 95% CI = 0,47 til 2,03). Disse resultatene støtter ikke en rolle for COX2 uttrykk i NMIBCs som en uavhengig prognostisk markør for tilbakefall eller progresjon.
Flere grupper har undersøkt muligheten for COX2 uttrykk for å forutsi utfallet hos pasienter med MIBCs. Til tross for bred inter-studie variasjon i metode, antistoffer anvendt, prøvestørrelse, og justeringsparametere i tilfelle av multivariable analyse viste at de fleste av disse studiene identifiserer ikke signifikant sammenheng mellom COX2 ekspresjon og progresjon eller overlevelse, i samsvar med våre funn [13 ], [14], [23], [28], [29]. Shariat og Margulis og deres kolleger observert en negativ sammenheng mellom høy COX2 uttrykk og tumorprogresjon og dødelighet [21], [25]. Men begge studiene støttet seg på heterogene utvalgspopulasjoner som inkluderte en liten andel av pasienter med NMIBCs; potensielt regnskap for de observerte foreninger gitt misforhold i COX2 uttrykk mellom overfladiske og avanserte blære svulster [45]. I en annen studie Wülfing et al. rapportert at høy COX2 uttrykk var en uavhengig prediktor for dårlig total overlevelse i en undergruppe av 62 pasienter med MIBC behandlet med cisplatin-basert kjemoterapi [29]. Vi har ikke identifisert noen meningsfull samhandling mellom COX2 uttrykk og behandling (data ikke vist), og var ikke i stand til å gjenskape sine funn i en mindre undergruppe av 39 pasienter behandlet med cisplatin (HR = 1,47, 95% CI = 0,48 til 4,51, p- verdi = 0,497). Aziz et al. rapporterte en 36% overlevelse fordel forbundet med økte nivåer COX2 i en kohort av 266 pasienter med MIBCs (221 med UCB) som var uavhengig av lymfeknute status og neo /adjuvant kjemoterapi [12]. Mens vi også observert økt overlevelse blant pasienter med COX2 overekspresjon MIBCs, gjorde denne foreningen ikke komme betydning, i samsvar med andre univariable [23], [28] og multivariable [26] analyser.
Vår studie hadde et stort utvalg størrelse, inkluderte bare nye situasjoner og satset på omfattende og nøyaktig ervervet oppfølging informasjon som strekker seg over ti år. I tillegg brukte vi automatisert scoring av immunostained TMA, en strategi som gir en reproduserbar vurdering av uttrykk som korrelerte sterkt med den uavhengige evalueringen av en undergruppe av prøver av en uavhengig patolog. COX2 farging ble utført i en laboratorium for å unngå heterogenitet i immunhistokjemisk farging og score, og evaluert som en kontinuerlig variabel i prognostisk analyse for å unngå mulig skjevhet i forbindelse med valg av et uttrykk terskel. Dessuten gir den lysegenskaper en nøyaktig gjengivelse av blærekreft i befolkningen som ikke inklusjonskriteriene ble brukt i rekrutteringsprosessen som inkluderte en god blanding av poliklinikk og fylkeskommunale sykehusene. Til slutt ble de anbefalingene fra bemerkningen og PRISMA studier fulgt i alle de rapporterte analyser.
Til tross for disse hensynene og forsøker å nøyaktig kvantifisere COX2 uttrykk bare i epitelceller, patologen trente automatisert bildesystem kan ha innlemmet noen immunostained stromal materiale som finnes på vevet kjernen, for derved å øke type i-feil. For å redusere potensiell feil vi i gjennomsnitt uttrykket score fra like kjerner og også utforsket en metode undersøkt av Henriksen et al. [48] hvori høyere score ble anvendt (data ikke vist). Begge metodene produsert tilsvarende materielle sammenhenger mellom COX2 uttrykk og klinisk-patologisk parametere eller timer. Videre bør justeres analyser for progresjon i NMIBCs tolkes med forsiktighet gitt det lave antall hendelser i forhold til kovariater. Dessuten kan ulike pasientforvaltningspraksis på tvers av rekrutterings sykehus øke prøve heterogenitet, nødvendig inkludering av både rekrutteringsområde og behandlingsregime i våre multivariable analysene
Resultatene som presenteres her fokusere på COX2 uttrykk nivåer målt i tumor epitelceller. – bare en del av det komplekse samspill mellom tumor og vertens immun /inflammatoriske respons [49]. Den prognostiske potensialet COX2 (hvis noen) kan bare bli avslørt når vurderes sammen med andre tumormarkører. Når du skal undersøke flere potensielle prognostiske parametre i UCB, Hilmy et al. konkluderte med at systemiske faktorer av den inflammatoriske respons som for eksempel nivåer av C-reaktivt protein var overlegne i forhold til tumor-baserte faktorer som grad, COX2 ekspresjon eller T-lymfocyttinfiltrasjon [18]. Videre, i modeller av livmorhalskreft, Ferrandina et al. observert at mens COX2 ekspresjon var gjensidig utelukkende i svulsten og stromale inflammatoriske celler, kunne høy ekspresjon i begge celletyper kan brukes som en selvstendig markør for dårlig overlevelse [50].
