Abstract
parakrin funksjon er en viktig mekanisme for celle-celle-kommunikasjon innenfor vevet mikromiljø i normal utvikling og sykdom.
In vitro
cellekultur modeller som simulerer vev eller tumor-mikromiljøet er nødvendige verktøy for å avgrense epitel-stromal interaksjoner blant parakrin funksjon, men en enkelt tre-dimensjonale (3D) tumormodell spesifikt å studere parakrin funksjon er i dag mangelfull. For å fylle dette tomrommet vi utviklet en ny 3D ko-kulturmodell av tolags alginat hydrogel-mikrokuler, som omfatter prostatakreft epithelial og stromale celler i separate rom av mikrokulene. Cellene forble begrenset og levedyktig innenfor sine respektive områder i over 30 dager. Som et bevis på prinsippet om parakrin funksjon av modellen, målte vi shedded komponent av E-cadherin (SE-CAD) i det kondisjonerte medium, en større membranbundet celle klebemiddel-molekyl som er sterkt dysregulerte i kreftformer, inkludert prostata kreft. I tillegg til å vise at SE-cad kan bli pålitelig kvantifisert i betinget media, tidsforløpet eksperimenter viste også at mengden av SE-cad er påvirket av epitel-stromal interaksjon. I konklusjonen, studien etablerer en ny 3D
in vitro
co-kultur modell som kan brukes til å studere celle-celle parakrint interaksjon
Citation. Fang X, Sittadjody S, Gyabaah K, Opara EC, Balaji KC (2013) Novel 3D Co-Culture Modell for Epithelial-stromale celler Interaksjon i prostatakreft. PLoS ONE 8 (9): e75187. doi: 10,1371 /journal.pone.0075187
Redaktør: Elad Katz, AMS bioteknologi, Storbritannia
mottatt: 03.06.2013; Akseptert: 11. august 2013, Publisert: 20.09.2013
Copyright: © 2013 Fang et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet støttes av Wake Forest University institusjonelle fond til KC Balaji og ved NIH stipend CA079448 til X. Fang. Funder nettsted er https://www.wakehealth.edu/. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet.
Konkurrerende interesser: Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Flere av
in vitro
celler co-kultur modeller tilgjengelig til. studie celle-celle-interaksjoner bruke to-dimensjonale (2D) Petri-skåler eller plater [1,2,3]. Men i de fleste levende organismer cellene er innleiret i en tre-dimensjonal (3D) mikromiljøet, omgitt av andre celler og som påvirkes av løselige faktorer utskilt i det ekstracellulære miljø. Alternativt sandwich-modeller kan brukes til flerlags vekst av celler, men begrensningene er åpenbare, da cellene ville endre sine morfologiske egenskaper, metabolisme og genuttrykksmønster i 2D kultur, spesielt når de er fra høyere organismer [4,5]. I tillegg konvensjonelle 2D cellekulturer begrense mobilnettet kommunikasjon og transport av løselige faktorer, oksygen og næringsstoffer, fjerning av avfall og cellenes stoffskifte som er til stede i innfødte biologiske miljøer [6,7]. Derfor er det viktig å utvikle
in vitro
modellsystemer som simulerer vev microenvironments å produsere pålitelige og biologisk meningsfulle eksperimentelle resultater.
3D modellering systemer som simulerer vev mikro ble utviklet for å håndtere begrensninger knyttet 2D modeller [8]. Mens 3D
in vitro
cellekultur modeller vinne flere begrensninger av 2D-modeller, er nødvendig forbedring i 3D-modellering for å diskriminere bestemte typer celle-celle interaksjon som celle-celle direkte, autokrine eller parakrine funksjoner. Fremskritt innen biomaterialer og bioteknologi teknikker tillater bruk av nye materialer som kollagen gels, laminin og Matrigel ™ i cellekultur, utvikle syntetisk ekstracellulære matrise og lage en rekke 3D-modeller [5,9,10,11,12,13,14, 15]. Blant de biomaterialer tilgjengelige, besitter alginat hydrogel foretrukne egenskaper for celletransplantasjon, levering av legemidler og tissue engineering. Alginat er et polysakkarid og en biokompatibel polymer avledet fra brun tang. Ved tilsetning av divalente kationer så som kalsium eller barium, kan alginat polymerene være ionisk tverrbundet for å danne en hydrogel. Den hydrofile natur alginat stillasene gir høy celle lasting som forblir levedyktige og funksjonelle i kultur [16,17,18]. I tillegg er produksjonen av alginat hydrogel relativt enkel og innkapsling kan oppnås under ikke-stringente betingelser. Ulike celletyper, inkludert nerveceller, osteoblaster, chondrocytes, myoblasts, har blitt innkapslet, kultivert og utvidet i alginat hydrogel [19,20,21,22,23].
I denne studien har vi etablert en 3D prostatakreft epitel-stromal samhandling i alginat hydrogel mikrosfærer av co-dyrking prostatakreft c4-2 celler (stabilt transfektert med protein kinase D1 (PKD1) eller kontroll vektor) og normale prostata stromale celler (WPMY-1 celler) i samme mikrokapselen, men i separate underlagene. Dette systemet er enkelt å studere parakrin påvirkning mellom de to celletyper, fordi direkte interaksjon mellom epitelceller og stromale celler ikke er tillatt. Som et bevis på prinsipp å studere parakrint funksjon, målte vi utgytelsen av E-cadherin (SE-cad) i løselige medier. SE-cad er en 80 kDa spaltet fragment av E-cadherin, et trans celle lim protein som er dysregulerte i flere kreftformer, inkludert prostata [3,24,25,26]. Forhøyet sE-CAD har blitt rapportert i væsker og serum av pasienter med en rekke kreftformer og andre sykdommer [25,27,28,29,30] og serumnivåer har vist seg å korrelere med en positiv metastatisk prostata kreft og tilbakefall av sykdommen. Dermed er sE-cad foreslått å være en roman biomarkør for kreft prognose. Vi har tidligere beskrevet nedregulering av PKD1 i avansert prostatakreft [31], og at PKD1 fremmer E-cadherin Shedding gjennom økte matriksmetalloproteinaser (MMP) -2 og -9 sekresjon [24].
Materialer og metoder
Cell Kultur
c4-2 celler stabilt transfektert med pcDNA3.1 vektor (vektor celler) eller PKD1-GFP (PKD1 celler) ble utviklet i vårt laboratorium som tidligere beskrevet [31]. Normal prostata stromale celler (WPMY-1) ble oppnådd fra ATCC. Celler ble dyrket i DMEM-medium (høy glukose) (HyClone, Cat # SH30243.01) med 10% FBS og 1% Antibioltic-antimykotika (HyClone Cat # SV30079.01) i 15 cm sterilt dyrkingsplate og inkubert ved 37 ° C med 5% CO
2. Når cellene nådde 80% konfluens, ble mediet fjernet fra hver plate, og cellene ble vasket med sterilt PBS tre ganger, behandlet med trypsin (HyClone, Cat # SH30236.01) i 20 minutter og overført til sterile sentrifugerør. De ble vasket med PBS igjen, og deretter resuspendert i DMEM medium for innkapsling.
Fabrikasjon av mikrokapsler
stromal, vektor og PKD1 celler ble innkapslet i alginat hydrogel ved hjelp av en mikro fluidic enhet med noen modifiseringer av innkapsling som beskrevet av Tendulkar et al. og Khanna et al. [32,33]. I korthet, ble først celletype (stromal eller vektor eller PKD1) blandet med 1,5% (w /v) av ultrarent lav viskositet høy-mannuronate alginat (LVM) (NovaMatrix, Sandvika Norge) og ekstrudert gjennom den mikrofluid innkapslingsinnretning. Dråpene generert ble oppsamlet i 100 mM kalsiumkloridoppløsning. Etter tverrbinding av alginat i fem minutter i CaCl
2, ble mikrokapslene vasket med 0,9% NaCl inneholdende 20 mM CaCl
2. Mikrokapslene ble så inkubert med poly-L-Ornitin (PLO) (0,1% vekt /volum) i 20 minutter for å skape et PLO lag, som tjener som en perm selektiv basalmembran. PLO-belagte mikrokapsler ble deretter blandet med den andre celletype (stromal eller vektor eller PKD1) suspendert i 1,5% (w /v) LVM og innkapsles på nytt ved hjelp av mikro-fluidisk enhet for å oppnå flerlags mikrokapsler. Mikrokapslene ble vasket med 0,9% NaCl inneholdende 20 mM CaCl
2 og dyrket i DMEM inneholdende føtalt bovint serum (10% v /v) ved 37 ° C med 5% CO
2.
levedyktighet analysen
for levedyktighet vurdering av innkapslede celler, ble et par kapsler fra hver tilført gruppe tatt ut og overført til rene 24-brønners plater, media ble aspirert forsiktig ut og celler farget. Enkeltcelletype kontrollfarging: cfda SE (Vybrant® cfda SE Cell Tracer kit, Invitrogen) rekonstituert i serumfritt DMEM (SFM, HyClone) (1: 400) ble tilsatt til hver brønn (500 ul /brønn) og inkubert i 15 minutter ved 37 ° C, 5% CO
2 i inkubatoren. Deretter SFM med cfda SE ble erstattet med DMEM med 10% FBS og inkubert på nytt i ytterligere 30 minutter ved 37 ° C, 5% CO
2 i inkubatoren. Den serumholdig medium ble deretter erstattet med 50 ug /ml propidiumjodid (PI) (Life Technologies /Invitrogen, Grand Island, NY) og inkubert ved romtemperatur i 2 min, og mikrokapslene ble vasket 3 ganger for å fjerne overskudd PI. Mikrokapslene ble så observert i henhold invertert fluorescensmikroskop (Zeiss Axiovert 200M) og avbildes. Antall levende og døde celler ble bestemt kvalitativt fra det sammensatte bildet anskaffet ved hjelp av Image-Pro plus (versjon 6.3.1.542). Dobbel celletype farging: For å demonstrere differensial compartmentalization av ulike celletyper i flere lag mikro-kapsler, de indre kjerneceller ble pre-farget med Cell Tracker grønn (Invitrogen, katt # C2925) og ytterlaget cellene var pre- farget med Cell-tracker Orange (Invitrogen), før syntesen av lagdelte mikrokapsler. Før observasjon, ble mikrokapslene farget med SYTOX Blå Nucleic Acid Stain (Invitrogen, katt # S11348) for døde celler. De lagdelte mikrokapsler ble deretter avbildes ved hjelp av fluorescerende mikroskop (Zeiss Axiovert 200M).
Enzyme Linked immunoabsorbans måling (ELISA)
For å evaluere parakrine funksjoner av innkapslede celler, nivåene av sE-cad ble målt i kulturen media. Hver gruppe av mikrokapsel ble dyrket i quadruplets og det brukte medium ble oppsamlet hver annen dag. Mens samle de brukte media, ble mediene i hver brønn grundig blandet; 1 ml (halvparten av totalvolumet) ble tatt ut fra hver brønn og erstattet med 1 ml friskt komplett DMEM med 10% FBS og 1% antibiotika. Prøven media ble lagret i en ren Eppendorf rør ved -20 ° C. For celler som vokser i 2D vev kultur behandlet petriskåler, ble media samlet når cellene nådde 90-100% samløpet (tre-dagers inkubasjon). Celletallet ble tellet for hver cellelinje for senere normalisering. Nivåene av SE-cad ble kvantifisert ved hjelp av ELISA kit fra R . D-systemer, Quantikine (human SE-cadherin) som per produsentens instruksjoner
Resultater
Celleviabilitet opprettholdes i minst en måned i sfærer
Basert på tidligere rapporter om multi-layer mikrokapsler produsert for protein levering [32,33] vi designet to-lags mikrokapsler som var sammensatt av et alginat indre kjerne og ytre laget av alginat (figur 1 ) adskilt av en elektrostatisk -koblet polykationisk permselektiv poly-L-ornithine (PLO) pels med en porestørrelse 150 kDa [32]. Mens modellen forhindres direkte celle-celle interaksjon, kan cellulære sekreter trenge gjennom PLO pelsen slik at for parakrint aktivitet. Som et første skritt mot å validere modellen for parakrint funksjon, vurderes vi celle levedyktighet.
Venstre er en tegneserie modell av to lag mikrosfære. Indre kjerne og ytre lag ble separert ved PLO belegg som vist. Celler som vokser i separate lag ble markert med røde piler. Høyre er en faktisk microsphere observert under lett mikroskop. Stromale celler ble dyrket i den indre kjernen i 7 dager, og ytterste laget er blank.
stromale celler (WPMY-1), c4-2 vektor celler (c4-2 celler stabilt transfektert med pcDNA3 0,1) og c4-2 PKD1 celler (c4-2 celler stabilt transfektert og uttrykker PKD1) forble levedyktig innenfor indre kjerne eller ytre lag i dobbeltlags mikrokapsler for 4 uker, og forble begrenset til sine respektive lag uten migrasjon gjennom PLO ( Figur 2). Deretter to forskjellige celletyper ble ko-dyrket i indre kjerne eller ytre lag av den samme mikrokapsel, og begge celletyper forble levedyktige i ko-kultur i minst 4 uker uavhengig av lag eller celletype kombinasjon (figur 2). Resultatene viser at alginat mikrosfærer kan anvendes for å dyrke epiteliale eller stromale celler compartmentalized i forskjellige lag
in vitro
i minst en måned.
BS, mikrokapsler med tomme indre kjerne og stromale celler i ytterste laget. PS, mikrokapsler med c4-2 PKD1 celler ved indre kjerne og stromale celler ved ytre laget. Grønn, levende celler på indre kjerne. Rød, levende celler på ytre laget. Blå, døde celler. Scale bar, 100 um.
Celler dyrket i sfærer demonstrert sekresjonsfunksjonen
For å bevise at levedyktige celler i sfærer også være funksjonell, målte vi konsentrasjonen av løselige E-cadherin fragment (sE-cad, eller shedded E-cadherin) i kondisjonerte medier som en markør av sekretorisk funksjon. E-cadherin er en viktig transmembrane celle-celle adhesjonsmolekyl som er dysregulerte i flere humane krefttyper [3,34]. Det ekstracellulære domene av E-cadherin spaltes av flere ekstracellulære proteaser. Spaltningen resulterer i shedding av et ca. 80 kDa-fragmentet, som har vist seg å være en biomarkør av aggressiv fenotype i flere humane kreftformer, inkludert prostata [25,27,28,29,30]. Våre tidligere studier vist at feilregulering av PKD1 påvirker E-cadherin Shedding i prostatakreftceller [24]. Derfor brukte vi stabilt transfektert c4-2 PKD1 celler å kvantifisere shedded E-cadherin nivå. For å inkludere en rekke positive og negative kontroller, testet vi SE-cad nivå betinget media av forskjellige humane cellelinjer, inkludert både normale og neoplastiske celler. Mens noen celletyper viser ikke mye bevis på E-cad garnet røyter reflekteres av lav /sporingsnivået SE-Cad, andre utskilt høye nivåer av SE-cad i betinget media (figur 3). Resultatene viste at pasienter med metastatisk cellelinjer (MCF-7, PC3 og LNCaP-celler) har høy sE-Cad nivå, og godartede cellelinjer (HEK293T-celler, 3T3-celler og MS1-celler) viste lav /spor nivå av SE-Cad. Det var signifikante forskjeller mellom SE-Cad nivåer av metastatiske celler og godartede celler, som ble bekreftet av t-test (figur 3). Disse resultatene er i samsvar med publisert litteratur som SE-cad nivå korrelerer med celle invasivitet [25].
SE-Cad nivå ble målt med ELISA og ble normalisert for å reflektere utskillelsen av 10
7 celler for hver cellelinje. SE-Cad nivået av metastatisk cellelinjer (MCF-7, LNCaP og PC3) ble sammenlignet med HEK293T (som en representant av normale cellelinjer) og P-verdier ble beregnet ved t-test. Hver kolonne representerer gjennomsnittet av tre parallelle forsøk. Feil stolpe representerer standard feil.
Co-kulturen i epitel og stromale celler påvirkninger shedded E-cadherin sekret som et bevis på parakrint funksjon
For å teste parakrint samspillet mellom to forskjellige celle linjer, stromale celler, c4-2 vektor celler og c4-2 PKD1 celler ble dyrket i mikrokapsler i en rekke kombinasjoner og sE-cad i det kondisjonerte medium ble kvantifisert. Når en enkelt celletype ble dyrket i enten indre kjerne eller ytre lag av mikrokapslene, gjorde stromale celler ikke utskiller sE-CAD, mens begge c4-2 vektor-celler og c4-2 PKD1 celler gjorde når innkapslet sammen i separate rom (figur 4A ). Kvantifisering av SE-Cad ble utført i celler dyrket i 2D miljø og lignende resultater ble observert (figur 4B). Resultatene validere påliteligheten av modellen for å diskriminere epitelial fra stromale cellenes funksjon.
A, ble cellene dyrket i 3D miljø i 6 dager. BS, mikrokapsler med tomme indre kjerne og stromale celler i det ytre lag. BV, mikrokapsler med blank indre kjerne og c4-2 vektor celler i ytterlaget. BP, mikrokapsler med blank indre kjerne og c4-2 PKD1 celler i ytre laget. SE-Cad nivå ble målt med ELISA. B-celler ble dyrket i 2D miljø (petriskål). SE-Cad nivået ble målt ved ELISA og normalisert for å reflektere sekresjon av 10
7-celler for hver cellelinje P-verdier ble beregnet ved t-test. Hver kolonne representerer gjennomsnittet av tre (2D kultur) eller fire (3D kultur) parallelle eksperimenter. Feil stolpe representerer standard feil.
c4-2 PKD1 celler økt utskillelse av SE-cad forhold til c4-2 vektor celler (kontroll) (figur 4), som er i tråd med våre tidligere publikasjoner [ ,,,0],24]. Vi har også tidligere vist at PKD1 up-regulert E-cadherin uttrykk [24]. I dagens eksperimentell modell c4-2 PKD1 celler, men ikke c4-2 vektor celler aggregere for å danne kompakte kolonier (etter dyrket i tre uker i mikrokapsler) (figur 5), som er et veletablert fenotypen til øket E-cadherin uttrykk. Når epiteliale og stromale celler ble ko-dyrket i uavhengige lag i den samme mikrokapsel, er mengden av sE-cad utskilt av c4-2-celler (både vektor og PKD1 transfekterte celler) ble redusert, noe som tyder på stromaceller påvirke epitelial sE-cad sekresjon (Figur 6). Fordi stromal og epitelceller er compartmentalized og ute av stand til å samhandle direkte, postulerer vi at stromale celler påvirke epitelceller sekretorisk funksjon via parakrint mekanisme.
Mikrokapsler ruges i 23 dager vises. PB, mikrokapsler med c4-2 PKD1 celler ved indre kjerne og ytre lag blank. VB, mikrokapsler med c4-2 vektor celler ved indre kjerne og ytre lag blank. Green, CFDA farging for levende celler. Rød, propidiumjodid (PI) farging for døde celler. Piler indikerer cellekolonier. Scale bar, 100 um.
SE-cad nivå ble målt med ELISA etter samtidig kultur i 30 dager. SB, mikrokapsler med stromale celler ved indre kjerne og ytre lag blank. BV, mikrokapsler med blank indre kjerne og c4-2 vektor celler i ytterlaget. BP, mikrokapsler med blank indre kjerne og c4-2 PKD1 celler i ytre laget. SV, mikrokapsler med stromale celler ved indre kjerne og c4-2 vektor celler i ytterlaget. SP, mikrokapsler med stromale celler ved indre kjerne og c4-2 PKD1 transfekterte celler i det ytre lag. P-verdier ble beregnet ved t-test. Hver kolonne representerer gjennomsnittet av fire parallelle eksperimenter. Feil stolpe representerer standard feil.
Diskusjoner
Den doble lagdelte microsphere modellen beskrevet i denne studien er et 3D-miljø som simulerer
in vivo
mikromiljø, mottagelig til enkel og skalerbar materiale produksjon, rensing og behandling, ingen merkbar cytotoksisitet, og er kjemisk kompatibel med vandige løsninger og fysiologiske betingelser. I motsetning til andre for tiden tilgjengelig 3D
in vitro
modell, mikromodellen i denne studien gjør det mulig å spesifikt analysere parakrint samspill mellom ulike typer celler. Men denne modellen oppviser også visse begrensninger. Mengden av kvantifiserbar sekresjon av SE-cad av celler som vokser i indre kjerne er lavere enn den til det samme antall og type celler dyrket i ytre sjikt av mikrokapselen (data ikke vist). Dette reduserte sekresjon kan skyldes det faktum at sE-CAD utskilt av cellene i den indre kjerne må diffundere gjennom to lag av hydrogel før de går inn det kondisjonerte mediet. Det er også mulig at permselektiviteten av PLO strøk redusert sekresjon av SE-Cad. For å optimalisere denne modellen for påvisning av andre spesifikke proteiner, kan de kjemiske egenskaper av tverrbundet PLO strøk må være optimalisert for spesifikke studie behov. Påvirkningen av exosome bør også tas i betraktning, som E-cadherin ble identifisert i mikrovesikler renset fra normale murine dendrittiske celler og humane kreftceller [35,36]. Det er fortsatt mulig at SE-Cad kan bli fanget i exosomes, men lite er kjent om hvordan mikrovesikler regulere celle-celle interaksjon i parakrint systemet.
En annen bekymring er vedvarende mekanisk eiendom alginat hydrogel, som ionisk tverrbundet alginater viste redusert gel styrke etter 90 dager
in vitro product: [37]. For å løse dette problemet, kan stabile kovalente kryssbindinger bli introdusert i alginat hydrogel som bruker bi-funksjonelle kryssbindere. Dessuten er det mulig at en lengre periode
in vitro inkuberinger
kan resultere i en ubalanse i de rådende ionekonsentrasjoner (som er nødvendig for å opprettholde mikrokapsel stabilitet), men ikke under
in vivo
forhold, som ingen degradering av disse alginat sfærer ble observert i minst tre måneder i vår siste
in vivo
studier (upubliserte data). På tross av disse begrensningene, kan modellen som beskrevet brukes effektivt til å studere den parakrine epitel-stroma-interaksjon.
Epithelial-stromal interaksjoner spiller en viktig rolle i normal utvikling og neoplastisk transformasjon. I normal human prostata de stromale celler er hovedsakelig sammensatt av glatte muskelceller og fibroblaster, mens det resterende blir tatt opp av endotelceller, pericytes, lymfocytter og makrofager [38]. Det har blitt rapportert at karsinom-assosiert stroma (CAS) kunne endre cellemorfologi /vekst /aggressivitet av neoplastiske humane prostata epitelceller, men ikke normale prostatiske epitelceller [39]. Lignende effekter ble rapportert ved bruk av prostata kreft celle i co-kultur med pleuripotent bein stromale celler [40]. Normale fibroblaster ikke vise en slik transformerende virkning på epitelceller, noe som tyder på en karakteristisk epitel-stromal interaksjon i løpet av neoplastiske prosess celler [39]. I denne studien viser vi at en mulig mekanisme av stromal innflytelse på epiteliale kreftceller er gjennom en parakrin mekanisme. Som et bevis på prinsippet demonstrert vi reduksjon i SE-cad sekresjon av prostatakreftceller i nærvær av stromale celler og modellen kunne antagelig brukes til å studere andre cellulære funksjoner påvirkes av parakrint mekanisme.
stromal interaksjons påvirkninger spredning, apoptose og metastasering av epitelceller. I kreft i bukspyttkjertelen, en motstander av Hedgehog (Hh) hemmet tumorvekst når kreft-assosiert stroma eksisterer, noe som indikerer signalveien avhenger av stroma [41]. I prostata, ble det rapportert at stromale faktorer, slik som caveolin-1 og tymidinfosforylase var relatert med tumor aggressivitet [42]. Andre nye proteiner som spiller en rolle i epitel-stromal interaksjon har blitt identifisert av transcriptional profilering i prostata [43]. En av dem, decorin ble nedregulert i prostata kreft [43]. Redusert decorin resulterte i en betydelig reduksjon av E-cadherin både
in vivo Hotell og
in vitro
, og fysisk interaksjon mellom decorin og E-cadherin ble bekreftet av co-immunoprecipitation [34]. Decorin uttrykk er strengt begrenset i mesenkymale /stromale celler, men ikke i epitel-celler i prostata [43], og dets ekspresjon er signifikant redusert i karsinom-assosiert stroma [43]. Enten decorin spiller også en rolle i Shedding av E-cadherin er fortsatt ukjent.
En annen viktig gruppe av ekstracellulære matrix proteiner, MMP, kan være mulige kandidater av stromale regulatorer som påvirket E-cad Shedding. Vi har tidligere vist at PKD1-indusert sekresjon av MMP-2 og -9 øker E-cadherin Shedding og undertrykker celleproliferasjon [24].
I sammendraget, studien demonstrerer mulighetene og nytten av å bruke 3D alginat microsphere modell for å studere parakrin funksjon av celler. Spesielt vi brukte modellen for å utforske epitel-stromal samhandling og viste at normale prostata stromale celler påvirker utskillelsen av SE-Cad av prostatakreft epitelceller ved parakrint interaksjon. Modellen kan brukes til å validere flere cellelinjer og parakrin interaksjon av forskjellige typer celler.
