Abstract
Bioaktive peptider, enten avledet fra naturressurser eller syntetisert av rasjonell design, har vist potensial for terapeutiske midler mot en rekke menneskelige sykdommer, inkludert kreft. Imidlertid er mekanismen av terapeutiske peptider mot kreft har ikke vært godt klarlagt. Her viser vi at PGPIPN, en hexapeptide avledet fra storfe β-kasein, hemmet spredning av menneskelig eggstokkreft celler linjen SKOV
3 samt de primære eggstokkreft celler
in vitro
. Konsekvent, PGPIPIN også redusert svulst vekst i xenograft eggstokkreft modell mus på en doseavhengig måte. Videre studier viste at anti-tumor effekt av PGPIPN er delvis gjennom å fremme celle apoptose ved å hemme BCL2 veien. Således antyder vår studie som PGPIPN er en potensiell terapeutisk middel for behandling av eggstokkreft eller andre typer kreft
relasjon:. Wang W, Gu F, Wei C, Tang Y, X Zheng, Ren M, et al. (2013) PGPIPN, en terapeutisk Hexapeptide, Trykt Menneskelig Eggstokkreft Vekst av målretting BCL2. PLoS ONE 8 (4): e60701. doi: 10,1371 /journal.pone.0060701
Editor: Robert W. Sobol, University of Pittsburgh, USA
mottatt: 15 november 2012; Godkjent: 01.03.2013; Publisert: 08.04.2013
Copyright: © 2013 Wang et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av Natural Science Foundation National of China (30872992) og Science Foundation provinsen Natural Anhui (03043802). Den 300 000 RMB ble gitt for denne forskningen ved Natural Science Foundation National Kina, nettadressen som er https://www.nsfc.gov.cn. Provinsen Natural Science Foundation of Anhui finansiert 100 000 RMB for studien. Finansiører hadde rolle i studiedesign, eksperimenter, datainnsamling og analyse, utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Eggstokkreft er den mest dødelige gynekologisk kreft. Forekomsten av eggstokkreft er den tredje i gynekologisk kreft etter brystkreft og livmorhalskreft blant kvinner, men er flest dødstallene i gynekologisk kreft. Den konvensjonelle behandlingsforløpet for eggstokkreft inkluderer kirurgisk debulking av tumormasse etterfulgt av adjuvant kjemoterapi. Selv om mye fremgang er oppnådd i utviklingen av kreft terapi i de senere år, problemer fortsette å oppstå spesielt med hensyn til kjemoterapi på grunn av bivirkninger, motstand mot og lav spesifisitet for tiden tilgjengelige medikamenter [1]. Derfor er det et behov for å utvikle sikre og effektive anti-kreftmidler [2].
Peptide terapeutika er et lovende felt for nye anti-kreftmidler, hovedsakelig på grunn av at disse peptidene kan lett få enten fra naturens ressurser eller rasjonell design basert på målproteinet struktur. Faktisk har flere studier vist at en rekke av bioaktive peptider inhiberte tumorcellevekst i prekliniske veier [3] – [5]. Spesielt disse terapeutiske peptider har vanligvis ingen eller begrenset toksisitet [2]. For eksempel, et antikreft bioaktivt peptid (ACBP) ekstrahert fra geit milter dramatisk inhiberte human gastrisk tumorvekst i en xenograft modell med ingen åpenbare cytotoksisitet til å være vert [3]. Senere studier antydet at anticancer effekten av visse bioaktive peptider kunne tilskrives deres evner i induksjon av celle apoptose og cellesyklus-stans [3], [6] – [7]. Nyere studier har avdekket noen peptider kan svekke et bestemt signalveien og senere hemmet tumorvekst eller metastasering. Slike som, et peptid av SAH-BCL9 (stabilisert alpha heliks av B-celle lymfom 9) rettet mot beta-catenin hemmet onkogene Wnt aktivitet, undertrykt vekst og metastasering av tykktarmskreft og myelomatose xenograft, og fremmet kreftceller apoptose [8] . Den hydrokarbon stiftes peptid SAHM1 hindret sammenstillingen av den aktive transcriptional kompleks av hakk, og dermed hemmet celleproliferasjon
in vitro
og tumorgenese i en musemodell av NOTCH1 drevet T-celle akutt leukemi og lymfom [9].
i tillegg til sine primære ernæringsmessige verdier, melkeproteiner er viktige kilder til biologisk aktive peptider [10] – [11]. Melkeproteiner er forløpere for mange biologisk aktive peptider som er inaktive i forløperproteiner, men kan frigjøres og aktiveres ved hjelp av enzymatisk proteolyse [12]. Noen peptider avledet fra melkeproteiner er gode kandidater for kliniske anticancermidler eller hjelpestoff, da de lett absorberes med mindre potensiell toksisitet. I tillegg her øker studier som viser at bioaktive melke peptider kan absorberes intakt fra den intestinale lumen inn i blodsirkulasjonen – disse kan således tjene som nye farmasøytiske midler, som ikke fører til vesentlige bivirkninger hos friske human [13]. Faktisk, utforskningen av de anti-kreft effekter av bioaktive peptider fra melkeproteiner fremstår som en av de hotteste regionene nylig. For eksempel, talactoferrin (TLF), en rekombinant human lactoferrin (LF), er en ny utviklet anticancermiddel som har kommet inn fase III kliniske studier [14] -. [15]
PGPIPN (Pro-Gly-Pro -Ile-Pro-Asn, rester 63-68 av P-kasein), et immunmodulerende peptid, ble det oppdaget aktive peptidet fra bovine melkeprotein [16] – [18]. Tidligere studier har vist at dette peptid spiller en viktig rolle i immunforsvaret respons. For eksempel, peptidet forbedrede fagocytisk aktivitet av makrofager
in vitro
mot sau røde blodceller (SRBCs) og beskyttede mus mot infeksjon med Klebsiella pneumoniae
in vivo
. I de senere år har vårt laboratorium dedikert til å utforske de fysiologiske funksjoner PGPIPN. Sammenlignet med andre immunmodulerende peptider, er PGPIPN mer bestandig overfor nedbrytende-enzym-system på grunn av sin rike prolin-innhold [19]. Videre er en forgrenet aminosyre (BCAA) i dette peptidet bidrar i noen grad til å motstå mikroorganismer. Våre tidligere undersøkelser antydet at PGPIPN vesentlig fremmet peritoneal makrofag fagocytose og røde blodceller immunitet hos rotter. Det kan også stimulere proliferasjonen av lymfocytter i både rotter og mus [20] – [21]. Videre vår senere studie vist at dette peptidet har god antioksidant effekt
in vivo product: [22].
Her viser vi at hexapeptide PGPIPN effektivt kan hemme kreft i eggstokkene celleproliferasjon, indusere kreft celle apoptose og redusere tumorvekst i xenograft modell eggstokkreft. Funnene i denne studien gir bevis for å bruke PGPIPN som en potensiell terapeutisk middel for behandling av eggstokkreft.
Materialer og metoder
Reagenser
PGPIPN (renhet ble bekreftet av RP-HPLC å være 99,5%) ble gitt av Shanghai Sangon biologiske Engineering Technology. Tunel kit ble kjøpt fra Roche. Gene Eluer pattedyr Genomisk DNA Miniprep Kit ble kjøpt fra Sigma. Muse monoklonale antistoffer BCL2, Bax, og β-Actin ble kjøpt fra Santa Cruz Biotechnology, Inc.
cellekulturer
Menneskelig eggstokkreft cellelinje SKOV
3 og menneskelig normal levercelle linjen LO2 ble opprinnelig kjøpt fra ATCC. Murine embryo fibroblast celler (MEFs) opprinnelig fra Harvard Medical School i USA,
p
53 gen som hadde blitt slått ut, ble presentert av professor Bing Zhang i Chinese Academy of Medical Sciences Peking Union Medical College, Kina. Disse cellelinjene ble dyrket i DMEM med 10% FBS i 5% CO
2 ved 37 ° C. For primær eggstokkceller kultur, frisk primær eggstokk svulstvev, som ble vurdert og klassifisert som serøs eggstokkene adenokarsinom (I-II klasse) i henhold til WHO-kriteriene, ble innhentet fra 5 pasienter med eggstokkreft ved første gangs debulking kirurgi i første Affiliated Hospital Anhui Medical University. Alle pasientene undertegnet skriftlig samtykke dokumenterer donasjon av deres vev for forskningsformål i henhold til Helsinkideklarasjonen før vev deponering. Denne studien ble godkjent av Anhui Medical University Review Board. De tumorvev ble kuttet i små biter omtrent 1,0 mm
3, og renset med PBS to ganger og spaltet med 0,25% trypsin i sterilt sentrifugerør ved 37 ° C i 30 minutter. For å oppnå de enkle suspensjonsceller, ble de ovenfor fordøyde vevet ble filtrert med 100 um cellefilter. Etter sentrifugert ved 1000 opm i fem minutter, cellepelleten ble resuspendert i DMEM-medium supplerende med 10% humant serum. Når cellene vokste til 70-80% konfluens, ble kulturmediet i kolben tømt; cellene ble spaltet med 0,25% kollagenase II. Når det er omtrent 1/3 celler falle ned ved observasjon under et mikroskop, ble fordøyelse umiddelbart stanset og kulturmediet i kolben ble tømt på nytt. På grunn av sin Shedding første, ble det meste av fibroblaster elimineres ved collagenase fordøyelsen. De forble Cellene ble dyrket kontinuerlig i celleproliferasjonsanalyse. Den del av disse cellene ble gjort til cellen lysbilde og identifisert ved hjelp av immunfluorescens av cytokeratin 7 for å bestemme deres renhetsgrad.
Cell Proliferation Assay
SKOV
3-celler ble sådd på 96- brønners plater i octuplicate på en starttetthet på 5 × 10
3 celler /brønn. Etter natten kultur, ble PGPIPN lagt på de endelige konsentrasjoner på 0 (som kontroll), 3 x 10
-8, 3 × 10
-7, 3 × 10
-6, 3 × 10
-5, 3 x 10
-4, 3 x 10
-3 og 3 x 10
-2 g /l, henholdsvis. 5-fluorouracil (5-FU) ved 3 x 10
-3 g /l ble tilsatt i den samme plate som positiv kontroll. Proliferasjonen av cellene ble målt ved forskjellige tidspunkt ved MTT-metoden, som beskrevet [23]. Den følgende formel ble brukt til å beregne cellevekst inhibering ratio (IR): IR (%) = (1 – forsøksgruppen A
490 nm verdi /kontrollgruppe A
490 nm verdi) x 100%. Hvert eksperiment ble triplicated uavhengig av hverandre.
Ved anvendelse av samme fremgangsmåte, ble vekstinhibering av PGPIPN på primære eggstokkreft celler også analysert, med unntak av de endelige konsentrasjoner av PGPIPN ved 0 (som kontroll), 3 x 10
-6, 3 x 10
-5, 3 x 10
-4, 3 x 10
-3 og 3 x 10
-2 g /l, henholdsvis. Forsøkene ble duplisert med primære eggstokkreft celler fra fem pasienter, henholdsvis.
For påvisning av giftigheten av PGPIPN, de vekstinhibering av PGPIPN på ikke-transformerte cellelinjer og LO2 MEFs ble analysert med den samme prosedyre som i SKOV
3-celler, med unntak av de endelige konsentrasjoner av PGPIPN ved 0 (som kontroll), 3 x 10
-4, 3 x 10
-3, 3 x 10
-2, 3 x 10
-1 og 3 g /l, henholdsvis. Hvert eksperiment ble triplicated uavhengig.
Morfologisk Observasjon av celler behandlet med PGPIPN
De dynamiske morfologiske endringer av SKOV
3 celler behandlet med PGPIPN ble observert med optisk mikroskop. Glasset dekke av kryp celle var forberedt. Dekkglasset nesten full av celle på sin overflate ble tatt for H a = den største diameter av tumor; b = de fleste stier av tumor. På den fjerde helgen etter planting, ble alle nakne mus avlivet, og xenografttumorer ble vektet. De xenografttumorer ble frosset i flytende nitrogen for senere eksperimenter.
TUNEL (TdT-mediert dUTP Nick-End Merking) Analyse
De vevsprøver ble fiksert og innebygd med parafin. Tunel Analysen ble utført som produksjon håndboken (Roche). Til slutt ble seksjonene motfarget med hematoksylin. Apoptotiske celler ble kvantifisert ved lysmikroskopi med hematoxylin og eosin (HE) fargete snitt som gjennomsnittet av antall celler med homogent tett kromatin eller karyorrhectic nukleære fragmenter i fotografier av fem tilfeldig valgte x 40 felt. Sakene ble vurdert av to uavhengige sensorer. Apoptose indeks (AI) ble beregnet som følgende formel: AI = (antall apoptotisk celle /det totale antall celler) x 100%
Fragmentering-analysen av DNA ved agarosegelelektroforese
DNA. fragmenter i tumorvev ble analysert ved agarosegelelektroforese i henhold til den metode som er beskrevet av Sambrook 0,05
Resultater
PGPIPN Behandling celleproliferering Hemming og apoptose av SKOV
3 eggstokkreft celler
i vitro
PGPIPN har vist seg å spille en viktig rolle i immunmodulerende terapi og andre effekter i mange forskere [19] – [22], [28] – [29]. Dette fascinerer oss å undersøke om PGPIPN kan brukes som antikreftmiddel. For dette formål vi først undersøkte effekten av PGPIPN på proliferasjonen av SKOV
3-celler. Til vår overraskelse, kan PGPIPN effektivt undertrykke SKOV
3 celler vekst selv ved lav dose på 3 x 10
8 g /l (figur 1A). Denne hemmingen kapasitet på PGPIPN ble sammenlignet med 5-FU-behandling når cellene ble eksponert for høy konsentrasjon av 3 x 10
3 g /l. Hemming effekten av PGPIPN viste også tids- og doseavhengig herregården. Videre, sammenlignet med kontrollen, PGPIPN behandling førte til åpenbare morfologiske endringer i SKOV
3-celler, inkludert celle krymper, karyopyknosis, og utseende av de cytoplasmiske vakuoler i noen celler (dato ikke vist). Det viste også en dypt farget i den kjernefysiske delen og en stor mengde cytoplasma organer eller små brikker i PGPIPN-behandlede celler, som er de typiske karakteristikkene av apoptic celler (data ikke vist). For å validere denne observasjonen, utførte vi apoptose analysen med Annexin V-TITC og PI dobbelt farging metoden. PFPIPN behandling klart indusert SKOV
3 celler gikk apoptose etter 48 timers eksponering for legemidlet på ulike konsentrasjoner (Figur 1b).
(A) PGPIPN ved forskjellige konsentrasjoner hemmer spredning av SKOV
3 celler, målt ved forskjellige tidspunkter. Data er middel ±
SD
av tre uavhengige eksperimenter, *
P
0,05, **
P
0,01 sammenlignet med kontroll (kjøretøygruppe). (B) Flowcytometri analyse viser at PGPIPN behandling indusert Skov
3 celler apoptose etter 48 h legemiddeleksponering. Denne målingen ble biologisk triplicated.
PGPIPN kan effektivt hemme humane primære Ovarian kreft celle vekst
in vitro
Neste, vi ytterligere teste om PGPIPN kan også hemme human primær kreft celler vekst. Vi lykkes ikke utsettes for solstråler og etablert 5 primære kreftceller fra 5 pasienter med eggstokkreft ved første gangs debulking kirurgi i første Affiliated Hospital Anhui Medical University. Disse primære celler var kultur i vårt laboratorium. Disse celle er morfologisk presentert som typiske epitel celler (Figur 2A venstre og midtre panelet). Disse primære eggstokkreft celler ble ytterligere identifisert ved immunocytochemistry analysen med (panel figur 2A høyre) anti-cytokeratin 7 farging. Den gjennomsnittlige renheten av ovarialcancer cellene var omtrent 85% basert på cytokeratin 7 farging. For å undersøke hvorvidt PGPIPN kan redusere veksten av primære eggstokkreft celler, sådd vi disse cellene i 96-brønners plater. Etter at over-natten vekst disse cellene ble behandlet med PGPIPN ved forskjellige konsentrasjoner etter 24, 48 og 72 timer. Som vist i figur 2B, behandling med forskjellige konsentrasjoner av PGPIPN førte til en signifikant inhibering av ovarialcancer celleproliferasjon, og inhiberingen effekt viste tids- og doseavhengig gods. Alle disse tyder på at de primære eggstokkreft celler er også følsomme for PGPIPN behandling.
(A) A representerer morfologi av ovarian carcinoma celler fra en pasient vokser i primærkulturmedium (x 100, venstre panel), H E farget (midtre panelet) og anti-cytokeratin 7-FITC farget (høyre panel). (B) celleproliferasjonsanalyse viser at PGPIPN ved forskjellige konsentrasjoner trykkes primære ovarieceller vekst. Data er beregnet ut fra 5 primære kreftceller målinger og presentert som gjennomsnitt, og feil barer refererer til SD av decuplicate analyser, *
P
0,05, **
P
0,01 sammenlignet med kontroll (kjøretøygruppe).
PGPIPN hadde liten eller ingen effekt på ikke-transformerte cellevekst
in vitro
Cytotoksisiteten for PGPIPN mot ikke-transformerte cellelinjer ble undersøkt . MTT-analysen ble utført for å analysere virkningene av PGPIPN på proliferations av normalt humant levercellelinje LO2 og murine embryo fibroblast celler (MEFs). Peptidet ble funnet å ha noen effekt på proliferasjonen av lo2-celler (figur 3A). Spredning av MEFs ble svakt påvirket av PGPIPN, som ble betydelig inhibert bare ved en høy dose (0,3 g /l) av peptidet i 72 timer, men innflytelsen var mye mindre sammenlignet med positiv kontrollgruppe (5-FU gruppe) ( Figur 3B). Følgelig PGPIPN oppviste liten eller ingen cytotoksisitet overfor ikke-transformerte celle, sammenlignet med de tradisjonelle anticancer legemidler (5-FU).
(A) PGPIPN hadde ingen virkning på proliferasjonen av celler lo2. (B) PGPIPN litt påvirket spredning av MEFs, som ble betydelig inhibert bare ved en høy dose (0,3 g /l) av peptidet i 72 timer. Resultatene er uttrykt som gjennomsnitt ±
SD
fra tre uavhengige eksperimenter, *
P
0,05, **
P
0,01 sammenlignet med kontroll (kjøretøygruppe) .
PGPIPN betydelig redusert xenopodet tumorvekst
in vivo
For å avgjøre om PGPIPN har en anti-tumor effekt
in vivo
, vi innpodet Skov
3 celler subkutant i nakne mus. Tjue-fire mus ble tilfeldig delt inn i fire grupper: NS (normal saltoppløsning), lavdose PGPIPN, høy dose PGPIPN og 5-FU (som positiv kontroll) grupper, som beskrevet i Materialer og Metoder. PGPIPN ble administrert intraperitonealt hver dag med start fra den andre dagen etter inokulasjon av tumorceller. Saltløsning tjente som en negativ kontroll, og 5-fluoruracil ble anvendt som en positiv kontroll. Disse mus ble behandlet i 4 uker. På den fjerde helgen, ble tumorene fjernet og målt. Begge doser av PGPIPN kan i betydelig grad hemme tumorvekst i forhold til NS-gruppen (figur 4A). Svulster i NS gruppen vokste til en gjennomsnittlig volum (1370,25 ± 303,12) mm
3. I kontrast, svulster i PGPIPN lavdose gruppe, PGPIPN høydose gruppen og 5-FU gruppen vokste til en gjennomsnittlig volum (845,43 ± 205,09) mm
3, (346,78 ± 97,16) mm
3 og (705,82 ± 124,47) mm
3, henholdsvis (figur 4A). Sammenlignet med NS-gruppen, de hemmende priser i PGPIPN lavdose gruppe, PGPIPN høydose gruppen og 5-FU gruppen var 36,92%, henholdsvis 68,46% og 41,54%. Gående, tumorstørrelser (figur 4B) eller vekter (figur 4C) ble bemerkelsesverdig redusert i alle medikamenter behandlingsgruppene sammenlignet med kontrollgruppen. Sammen indikerer disse data at PGPIPN effektivt kan hemme tumorvekst xenopodet
in vivo
, som er i forhold til den tradisjonelle anti-ovarie medikament, 5-fluorouracil.
PGPIPN bemerkelsesverdig hemmet tumorvekst etter fire -weeks behandling (A) og redusert tumor-størrelse (B) og tumorvekt (C) ved slutten av behandlingen. Data er presentert som gjennomsnitt ±
SD
av 6 mus, *
P
0,05, **
P
. 0,01 sammenlignet med NS gruppe
tumorvekstinhibitering indusert av PGPIPN er assosiert med Cell apoptose
in vivo
Flowcytometri analyse viste at PGPIPN-indusert SKOV
3 celler gikk apoptose
i vitro product: (Figur 1B). For å teste om PGPIPN kan også indusere celle apoptose i tumorbehandling
in vivo
, utførte vi TUNEL analysen på tumorprøver hentet fra innpodet nakne mus. Antallet TUNEL-positive celler i tumorprøver hentet fra PGPIPN behandlingsgruppene var signifikant øket (figur 5 A og B). I samsvar med denne observasjonen, DNA fragment analysen viste også bemerkelsesverdig DNA nedbrytning i PGPIPN-behandlede svulster prøver, som indikerer høy prosent apoptotiske celler i disse prøvene (figur 5 C). I motsetning til NS behandlet tumorprøver viste ikke dette typisk DNA stigen mønster i elektroforese (figur 5 C). Tatt sammen tyder disse resultater på at PGPIPN hemmer tumorvekst gjennom induksjon av tumorceller som gjennomgår apoptose.
(A) TUNEL-analysen viser de apoptotiske tumorceller i PGPIPN-behandlede prøver ekstrahert fra xenograft mus (x 400). (B) apoptotisk indeksen ble beregnet som følgende formel: AI = (antall apoptotisk celle /det totale antall celler) x 100% (gjennomsnitt ±
SD
, n = 6) **
P
0,01. (C) DNA-fragment analyse viser at PGPIPN induserte tumor-DNA degradering i høy dose PGPIPN gruppe (høy) og lav dose PGPIPN gruppe (lav), men ikke i normalt saltvann gruppe (NS). (D) Protein nivåer av BCL2 og Bax ble undersøkt ved western blot i tumorprøver hentet fra xenopodet mus (øverste panel). Bandet intensiteter ble målt ved Imaging J programvare og oppsummert (nederst panel). Dataene er fra 6 svulster i hver gruppe, *
P
0,05, **
P
. 0,01 sammenlignet med NS gruppe
For ytterligere bekrefter at induksjon av apoptose er involvert i regresjon av tumorvekst etter PGPIPN behandling, to apoptose relaterte gener,
BCL2 Hotell og
Bax
, ble evaluert via western blotting analyse. Immunoblot analyse med BCL2 og Bax antistoffer viste at BCL2 protein nivåene ble betydelig redusert i PGPIPN-behandlede grupper (
P
0,05 eller
P
0,01) sammenlignet med det fra kontrollgruppen (figur 5D). I motsetning til dette uttrykk for Bax ble dramatisk oppregulert i PGPIPN-behandlede grupper sammenlignet med kontrollgruppen (figur 5D). Disse dataene antyder klart at PGPIPN hemmet tumorvekst i det minste delvis gjennom å indusere celle apoptose.
Diskusjoner
Mange bioaktive peptider som stammer fra melkeprotein er inaktive innenfor sine foreldre melkeproteiner, og ved frigjøres under fordøyelse eller matvareindustrien, kan de fungere som regulatoriske forbindelser med biologiske aktiviteter. I denne studien, er vi de første til å vise at PGPIPN kan dypt hemme humane eggstokkreft celler både i xenograft mus modell samt i de primære kreftcellene uten ikke-spesifikke toksiske effekter, noe som tyder PGPIPN kan være en roman antikreftmiddel og bør vurderes for videre prekliniske rettssak i andre krefttyper.
den terapeutiske peptider kan gjennom ulike mekanismer gjennomgå kreft effekter avhengig av deres egenskaper. Noen peptider som interagere spesifikt med meget cykliner og /eller cyklin-avhengige kinaser eller med medlemmer av apoptotiske kaskader [30] – [31]. Nyere studier har vist at peptidene kan svekke de spesifikke signalveier og deretter inhiberte tumorvekst eller metastase [8] – [9], [32]. I vår undersøkelse den antiovarian kreft PGPIPN var hovedsakelig gjennom induksjon av apoptose mediert av nedregulering av BCL2 (figur 5). I samsvar med denne observasjonen, vi fant også mange morfologiske endringer knyttet til celle apoptose, for eksempel celle pigger, overflate blemmer, blemmer og mobil avrunding og kjerne disintegration (dato ikke vist).
Nøyaktig hvordan PGPIPN ned- regulert BCL2 uttrykk er ennå ikke bestemt. Tidligere undersøkelser viste at de to peptider avledet fra human β-kasein (GLF og VEPIPY), kan bindes til cellemembranen [33] – [34]. Nylige undersøkelser indikerte at noen bioaktive peptider avledet fra bovine melkeproteiner var i stand til å binde og å påvirke celler [13], [35] – [38]. For eksempel, Kreider RB et al. [13] rapporterte at en ny melke peptidblanding hemmet tyrosinkinaseaktiviteten av epidermal vekstfaktor-reseptor (EGFR), vaskulær endotelial vekstfaktor reseptor 2 (VEGFR2) og insulinreseptor (IR) respektivt. Denne multi-kinase inhibitor forårsaket apoptose i HT-29 tykktarm kreft celler
in vitro
, mens melke peptider blandingen var trygt å konsumere muntlig for friske frivillige og ingen klinisk signifikante bivirkninger ble rapportert [13]. Fiedorowicz E, et al. rapporterte det bioaktive peptider-casomorfin-7 (YPFPGPI), kan casoxin-D (YVPFPPF) og casoxin-6 (SRYPSY) fra bovine kaseiner binde μ-opioid reseptor på cytomembrane å påvirke proliferasjon og cytokin sekresjon av humane perifere mononukleære blodceller ( PBMC) [35]. Almansour NM et al. [2], [39] rapporterte at myxoma virus peptid analog kan målrette Akt signalveien som en mulig celledød sti i menneskelig hud kreftceller.
I vår pågående forsøket, observerte vi at PGPIPN merket med fluoresceinisotiocyanat (FITC) fremkom på SKOV
3 cellemembran i henhold konfokal laser scanning mikroskop (CLSM) (dato ikke vist), noe som indikerer dette peptid kan bindes til cellemembranen, som noen andre peptider fra melkeprotein. Vi antok at PGPIPN kan bindes til cellespesifikk reseptor (er) og dysregulate cellulær signaltransduksjonsveiene, og redusert BCL uttrykk, så indusert celle-apoptose. Alle disse må undersøkes i det videre arbeidet. Selvfølgelig kan PGPIPN gjennom via andre mekanismer for å påvirke celleveksten.
I sammendrag, heksapeptid PGPIPN kan effektivt inhiberte ovariecancer celleproliferasjon både in vitro og in vivo. Denne hemmingen effekten er hovedsakelig gjennom PGPIPN indusert kreft celle apoptose. Disse data tyder på at PGPIPN er en potent terapeutisk peptid for behandling av eggstokkreft, og gi en begrunnelse for videre evaluering i klinikken.
Takk
Vi vil gjerne takke Lianfang Zhang og Liyu Cao fra den første Affiliated Hospital Anhui Medical University, for deres hjelp i å plukke opp, vurdere og klassifisere frisk primær eggstokk svulstvev, fra 5 pasienter med eggstokkreft ved første gangs debulking kirurgi i første Affiliated Hospital Anhui Medical University.
