Abstract
Bakgrunn
metastaser forbundet i lunge adenokarsinom transkripsjon-en (MALAT- 1) er overuttrykt i løpet av kreft progresjon og fremmer celle migrasjon og invasjon i mange solide tumorer. Men fortsatt sin rolle i eggstokkreft dårlig forstått.
Metoder
Uttrykk for Malat-1 ble påvist i 37 friske eggstokkene vev og 45 eggstokkreft vev ved revers transkripsjon polymerase chain reaction (RT- PCR). Celleproliferasjon ble observert av CCK-8-analyse; Strømningscytometri ble brukt for å måle cellesyklus og apoptose; Cellemigrering ble påvist ved transwell migrering og invasjon assay. For å evaluere funksjonen av Malat-1, shRNA kombinert med DNA mikroarray og Functional anrikning analyse ble utført for å bestemme de transkripsjonelle effekter av Malat-en stanse i OVCAR3 celler. RNA og protein uttrykk ble målt ved henholdsvis QRT-PCR og Western blotting,.
Resultater
Vi fant at oppregulering av Malat-1 mRNA i eggstokkreft vev og forbedret Malat-1 uttrykk var assosiert med FIGO stadium. Knockdown av Malat-1 uttrykk i OVCAR3 celler hemmet celledeling, migrasjon og invasjon, som fører til G0 /G1 cellesyklus og apoptose. Overexpressed Malat-1 uttrykk i SKOV3 celler fremmet celleproliferasjon, migrasjon og invasjon. Nedregulering av Malat-1 resulterte i en betydelig endring av genekspresjon (minst to ganger) i 449 gener som regulerer proliferasjon, cellesyklus, og adhesjon. Som en konsekvens av Malat-en knockdown, redusert MMP13 protein uttrykk, mens uttrykk for MMP19 og ADAMTS1 ble økt.
Konklusjoner
Denne studien fant at Malat-en er sterkt uttrykt i eggstokkene svulster. Malat-en fremmer vekst og migrasjon av eggstokkreft celler, noe som tyder på at Malat-en kan være en viktig bidragsyter til eggstokkreft utvikling
Citation. Zhou Y, Xu X, Lv H, Wen Q, Li J Tan L, et al. (2016) The Long kodende RNA Malat-en uttrykkes sterkt i Eggstokkreft og induserer cellevekst og migrasjon. PLoS ONE 11 (5): e0155250. doi: 10,1371 /journal.pone.0155250
Redaktør: Zhiqian Zhang, Peking University Cancer Hospital Institute, KINA
mottatt: 04.01.2016; Godkjent: 26 april 2016; Publisert: May 26, 2016
Copyright: © 2016 Zhou et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. All relevant data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering:. Denne studien ble støttet med tilskudd fra Science and Information Technology Agency of Guangzhou (nr 2010GNE00221) og mekanismen Study of MALAT1 fremme invasjon og metastasering av eggstokkreft ved målrettet Regulering STAT3 signalveien (No. 2014A020212517)
konkurrerende interesser:.. forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
epitelovarialcancer karsinom ( EOC) er den dødeligste gynekologisk kreft, og står for betydelig kreftdød hvert år [1]. og [2]. På grunn av uspesifikke symptomer i tidlig stadium av sykdommen og mangel på effektive screening teknikker i klinikken, de fleste (opp til 75%) av pasientene blir diagnostisert på avanserte stadier når sykdommen allerede har spredd seg utover bekkenet, noe som resulterer i en dårlig prognose [3,4]. Til tross for kontinuerlig med å forbedre EOC diagnose og behandling, tumorresidiv og metastase forbli store hindringer for vellykket behandling av EOC pasienter [5]. Dermed er forskning på kreft i eggstokkene tidlig oppdagelse og forbedring av dagens behandlingsstrategier presserende behov.
Det er allment akseptert at kreftutvikling er et resultat av endret genekspresjon og /eller strukturelle endringer av proteinkodende gener. Imidlertid genomsekvenseringsdata viste at tusener av gener mangler protein-kodende kapasitet, mens de spiller viktige roller i regulering av cellevekst, overlevelse og apoptose, og tumorigenese eller andre sykdommer [6]. Vår forskning er fokusert på Malat-1, som opprinnelig ble identifisert i ikke-småcellet lungekreft, er en stor ikke-kodende RNA som er nært forbundet med tumormetastase og regulerer ekspresjon av forskjellige metastase-assosierte gener [7]. Malat-en ligger på kromosom 11q13.1, spenner over et 8.7kb genomisk region, og er mye uttrykkes i normale vev, særlig i lunge og bukspyttkjertel [8] ,. Malat-1 er spesielt beholdt i de nukleære flekker [9] hvor pre-mRNA-skjøting faktorer er anriket og dermed kunne fungere som en sammenstilling, lagring og /eller modifisering rommet [10]. Malat-1 har også vært implisert i tumorprogresjon [11]. Data har indikert at Malat-en var involvert i kreftutvikling gjennom regulering av alternativ spleising av sine mål gener [12] eller genuttrykk [13,14]. Malat-1-ekspresjonen er blitt funnet å være oppregulert i mange faste tumorer, for eksempel lunge [8], lever [15], og prostata cancer [16] og har et tumorfremmende funksjon. I denne studien målte vi Malat-1 uttrykk nivåer i grunnskolen normale eggstokk og eggstokkreft tumorvev og undersøkte den biologiske rollen Malat-1 i eggstokkreft patogenesen.
Materialer og metoder
2,1 Tissue prøvene
37 epitelceller eksemplarer av normal eggstokk og 45 eksemplarer av eggstokkreft vev ble hentet fra The Third Affiliated Hospital i Guangzhou Medical University i løpet av 2009-2013. Alle eggstokkreft tilfeller ikke får behandling før operasjonen og ble diagnostisert histologisk ifølge WHO bok gynekologisk patologi (tabell 1). Disse vevsprøver ble hurtigfrosset i flytende nitrogen og lagret ved -80 ° C inntil bruk. Denne studien ble godkjent av institusjonelle gjennomgang av bred Guangzhou Medical University og et skriftlig informert samtykke ble innhentet fra alle pasienter før deltakelse i denne studien.
2,2 Cellelinje og kultur
eggstokk-kreft cellelinje OVCAR3, SKOV3 ble oppnådd fra American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) og dyrket i Dulbeccos modifiserte Eagles medium (DMEM) supplert med 10% føtalt bovint serum (FBS) og 1% streptomycin /penicillin ved 37 ° C i 5% CO
2. Cellene ble høstet i logaritmisk vekstfase for alle eksperimentene beskrevet nedenfor.
2,3 RNA isolering og QRT-PCR
Totalt cellulært RNA ble isolert fra vev og cellelinje ved hjelp Trizol reagens (Takara Bio, Inc., Shiga, Japan) og deretter reversely transkribert til cDNA ved hjelp PrimeScript RT mester Mix (Takara) i henhold til produsentens instruksjoner. qPCR ble utført for å bestemme ekspresjon av Malat-1, MMP-13, MMP-19, ADAMTS1, og β-aktin mRNA ved anvendelse av en SYBR grønn MIX kit fra Promega (Madison, WI, USA) i henhold til produsentens protokoller. Grunning sekvenser er vist i Tabell 2. p-aktin mRNA nivåer ble brukt som en intern slutning.
2.4 Prosjektering og bygging av Malat-1vectors og genet transfeksjon
For å vurdere rollen av Malat-en i eggstokkreft, vi slått ned Malat-1 uttrykk ved hjelp shRNAs og overexpressed Malat-1 uttrykk ved hjelp pcDNA3.1 (+) – Malat-en (en-Malat-1). Vi designet og bygget fire sett med Malat-en shRNA oligonukleotider (shM1-M4) og klonet dem inn i pGPU6 /GFP /Neo vektor (Jima, Shanghai, Kina). Sekvensene ble Malat-1-shM1, 5′-GCCGAAATAAATGAGAGAT GA-3 «; shM2, 5»-GG CAGCTGTTAACAGATAAGT-3 «; shM3, 5»-GCTGTGGAGTTCTTA AATATC-3 «; shM4, 5»-GGGCTTCAGTGATGGGATAGT-3 «. Den pGPU6 /GFP /neo-vektoren som inneholder et tilfeldig DNA-sekvens ble anvendt som en kontroll krafse (SHNC). Etter kloning, amplifisering, og DNA-sekvensering, transfektert vi disse vektorene inn i OVCAR3 celler. I korte trekk ble celler sådd ut i en 6-brønns plate og dyrket over natten ved nådde 70-80% konfluens. OVCAR3 ble transfektert med shM1, shM2, shM3, shM4 eller SHNC hjelp Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) i henhold til produsentens instruksjoner. SKOV3 ble transfektert med pcDNA3.1 (+) – Malat-1 og pcDNA3.1 (SKOV3-NC). Celler ble undersøkt 48 timer etter transfeksjon under en omvendt fluorescens mikroskop for å vurdere transfeksjon effektivitet. Cellene ble deretter høstet og underkastet QRT-PCR-analyse av Malat-1-ekspresjon. Fordi Malat-en shM3 var mest effektive for å oppnå knockdown av Malat-1 uttrykk, ble alle etterfølgende eksperimenter utført ved hjelp av denne shRNA.
2,5 Celleproliferering analysen
For å vurdere virkningene av Malat-en i eggstokkreft celler, vi først sådd-celler i 96-brønners plater med 5 x 10
3cells /brønn og dyrket over natten. Cellene ble deretter tilført med Malat-en-shM3, SHNC, aMALAT-en og SKOV3-NC. Celleproliferasjon ble målt ved hjelp av CCK-8 analysen (Biyuntian, Shanghai, Kina) i trinn på 24 timer i opptil 96 timer. I korte trekk ble 10 pl CCK-8-løsning tilsatt til hver brønn av cellekultur og platene ble ytterligere inkubert i en annen 2,5 timer. Den optiske tetthet ble deretter målt ved FACS-analyse ved absorbans på 450 nm. Forsøk ble utført in triplo og gjentatt minst tre ganger uavhengig av hverandre.
2,6 Transwell tumorcellemigrering og invasjon assay
Transwell kamre med 8 um porer ble oppnådd fra Corning (Corning, NY, USA ). -Celler transfektert ble høstet, resuspendert i DMEM uten FBS ved en konsentrasjon på 1 x 10
6-celler i 100 ul, og deretter sådd inn i de øvre kamrene i 24-brønns plate. De nederste kamre ble fylt med 600 mL DMEM inneholder 10% FBS. Cellene ble deretter inkubert i 24 timer. Ved slutten av eksperimentet, ble cellene som migrerte til den motsatte side av Transwell membranen fiksert med metanol, farget med krystallfiolett, og deretter tellet under et lysmikroskop ved x100 forstørrelse. Et gjennomsnitt av fem synsfelt ble undersøkt. For tumorcellen invasjon assay den Transwell membran ble forhåndsbelagt med 30 pl av Matrigel (1: 3 blandet med PBS, BD Biosciences, Heidelberg, Tyskland) og fortsatte på samme måte som beskrevet ovenfor
2,7 Cell. syklus og apoptose strømningscytometri-analyse
cellene ble høstet og resuspendert i en tetthet på 5-10 x 10
6 celler /ml og deretter fiksert med 75% iskald etanol og farget med 400 ul propidiumjodid (PI) løsning (BestBio, Shanghai) i 30 minutter og deretter underkastet syklusanalyse med et strømningscytometer (BD). For apoptose-analyse ble celler farget med 5 mL av Annexin V-FITC (BD Biosciences) i 15 minutter og 5 pl PI for en annen 5 minutter før de ble utsatt for strømningscytometri-analyse.
2,8 Profilering av differensial gen uttrykk etter Malat-en knockdown i eggstokkreft celler
Total RNA ble ekstrahert med TRIZOL reagens og kvantifisert ved Nanodrop ND-2000 (Thermo Scientific). Integriteten til RNA ble vurdert ved hjelp Agilent Bioanalyzer 2100 (Agilent Technologies). cDNA-samlinger ble konstruert fra prøver med et RNA integritet nummer (RIN) ≥7.0. Totalt RNA ble transkribert til dobbel tråd cDNA og deretter syntetisert CRNAs. Deretter ble 2. syklus cDNA syntetisert fra CRNAs. Fulgte fragmentering og biotinmerking ble 2. sykkel cDNA hybridiserte på microarray. Etter vask og farging, ble arrays skannes av Affymetrix Scanner 3000 (Affymetrix)
2,9 genekspresjonsanalyser
Genespring programvaren (versjon 12.5, Agilent Technologies). Ble brukt til å fullføre genekspresjon analyse. Differensielt uttrykte gener (DEG) ble identifisert ved hjelp av ganger endring samt P verdiberegninger. Terskelen for å velge forskjellig uttrykt gener var en fold endring 2,0 og en P-verdi 0,05. KEGG og GO-analyse ble utført for å bestemme trasé og GO vilkår knyttet til forskjellig uttrykt mRNA. Hierarkisk Clustering (HCL) ble utført for å vise skilles genet «uttrykk mønster blant prøvene.
2.10 Analyse av mRNA uttrykk for degs av QRT-PCR
For å verifisere microarray resultater, tolv forskjellig uttrykt gener ble valgt for QRT-PCR godkjenning ved en SYBR GREEN MIX kit (Promega, USA) og en FAST 7500 real-Time PCR system å følge produsentens instruksjoner, usingβ-aktin som en intern kontroll. Sammenlignings kvantifisering ble bestemt ved 2-ΔΔCt beregningsmetode. Kandidatgener andβ-aktin-genet ble amplifisert i den samme reaksjonen og utført in triplo. PCR primersekvenser var oppført i tabell 2.
2,11 Protein ekstraksjon og Western blot
Totalt cellulært protein ekstrahert fra transfekterte celler og proteinkonsentrasjonen ble bestemt ved bruk av en BCA proteinanalysesett (Beyotime, Beijing , Kina). Disse proteinprøver ble løst i 10% SDS-polyakrylamidgel denaturert og overført til PVDF-membraner med en porestørrelse på 0,45 um (Millipore, Billerica, MA, USA). Etter blokkering i 5% skummet melk i Tris-baserte saltvann-Tween 20 (TBST) i 60 minutter ved romtemperatur ble membranene inkubert med mus /kanin-anti-humane antistoffer ved den anbefalte fortynning [ADAMTS1 og MMP19 ved en fortynning på 1: 1000, MMP13 på 1: 500 (alt fra Abcam, Cambridge, MA, USA)] natten ved 4 ° C. Etter å ha vasket i TBST, ble membranene inkubert videre med et sekundært anti-mus (1: 2500) eller anti-kanin (1: 10000) antistoff i 1 time. Forbedret chemiluminescence (ECL) løsning ble lagt inn på membraner og protein uttrykk ble kvantifisert ved hjelp av laboratoriearbeidet Image Acquisition og analyse programvare (UVP, Upland, CA, USA). Glyseraldehyd 3-fosfat dehydrogenase (GAPDH) ble anvendt som en kontroll lasting.
2,12 Statistisk analyse
Alle data ble uttrykt som gjennomsnitt ± SD. Forskjeller mellom to grupper ble vurdert ved hjelp av nøyaktig Fisher test eller Student
t
test, mens forskjellen mellom flere grupper ble analysert ved hjelp av enveis ANOVA etterfulgt av Bonferroni multippel sammenligninger test. Differensielt uttrykte gener etter knockdown av Malat-1 uttrykk ble vurdert ved hjelp av cDNA microarray (Affymetrix HTA 2.0), identifisert som fold endringer og analysert ved hjelp av Student
t
test. p. 0,05 ble ansett som statistisk signifikant
Resultater
3,1 Differential uttrykk for Malat-1 mRNA i eggstokkreft vevsprøver
Malat-1 mRNA uttrykk i kontroll normal eggstokk og primære eggstokkreft vev ble evaluert ved QRT-PCR og normalisert til en intern kontroll (β-aktin). Ekspresjon av Malat-1 in ovarian cancer vev er betydelig høyere enn den for i normal ovarie (Figur 1). Videre er Malat-1 uttrykk signifikant assosiert med Figo etapper, men ingen sammenheng ble identifisert mellom Malat-1 uttrykk og alder, histologisk type klasse, eller tilstedeværelse av ascites (tabell 1). Disse data antydet at høyt nivå av Malat-1 uttrykk var assosiert med kreft progresjon eggstokkreft.
Malat-1 uttrykk er vesentlig høyere i eggstokkreft vev. *
p
0,05.
3,2 Malat-en er knyttet til spredning, migrasjon og invasjon av eggstokkreft celler
Deretter konstruerte vi fire shRNAs målretting Malat-en. shRNA3 var den mest effektive i å stanse Malat-1-ekspresjon i OVCAR3 celler (figur 2A). Derfor brukte vi dette shRNA i alle de følgende eksperimenter. Malat-en knockdown betydelig redusert eggstokkreft celledeling begynner på dag 2 nå de høyeste nivåene av dag 5 (fig 3A). I tillegg Malat-1 knockdown også i betydelig grad undertrykkes OVCAR3 migrering og invasjon kapasitet (fig 3C og 3E). SKOV3 var sterkt uttrykt av transfekterte av pcDNA3.1 (+) -. Malat-1 og oppregulering av Malat-1 indusert SKOV3 proliferasjon, migrering og invasjon (figur 3B og 3D og 3F)
(A) qRT- PCR-analyse av Malat-1 uttrykket etter shRNA knockdown. OVCAR3-celler ble dyrket og transfektert med fire forskjellige Malat-1 shRNA vektorer (shM1 til shM4) og deretter utsatt for QRT-PCR-analyse. *
p
. 0,05 versus kontrollgrupper (B) SKOV3-celler ble dyrket og transfektert med pcDNA3.1 (+) – Malat-1 og pcDNA3.1 (NC) og underkastet QRT-PCR-analyse, *
p
0,05 versus kontrollgrupper.
(A) og (B) Celleproliferasjon CCK-8-analyse. Eggstokkreft celler ble dyrket og transfektert og deretter utsatt for CCK-8-analyse. *
p
0,05 versus kontrollgrupper. (C) og (D) Transwell tumorcellemigrering assay. Eggstokkreft celler ble dyrket og transfektert og deretter underkastet transwell tumorcellemigrering assay. (E) og (F) Transwell tumorcelle-invasjon assay. Eggstokkreft celler ble dyrket og transfektert og deretter utsatt for Transwell tumorcelle invasjon analysen **
p
0,0001 mot kontrollgrupper.
3,3 knockdown av Malat-1 uttrykk induserer apoptose og arrestasjoner cellesyklus ved G0 /G1 fase
På grunn knockdown av Malat-1 hemmet celleproliferasjon (fig 3A ), så undersøkte vi Malat-1 funksjon ved regulering av ovarialcancer cellesyklusprogresjon og apoptose. Våre data viser at de apoptotiske celler i OVCAR3-shM3 celler ble markert øket til 17,8%, sammenlignet med 0,03% i de OVCAR3-SHNC celler, og 0,02% i paren OVCAR3 celler (p 0,001, figur 4A og 4C). Videre er cellesyklusanalyse ved strømningscytometri viste at knockdown av Malat-1-ekspresjon arrestert OVCAR3-shM3 cellene ved det Go /G1-fasen av cellesyklusen og prosentandelen av celler i S og G2 /M-fasene ble også redusert (P 0,0001 versus kontroller. (D) Kvantifisering av data i B, * p 0,05 versus kontroller.
3,4 nedregulering av Malat-1 påvirker uttrykket av et stort antall gener
genuttrykk profiler av OVCAR3-SHNC og OVCAR3-shM3 celler ble analysert ved mikromatriseanalyse, og 449 signifikant differensielt uttrykte gener (mer enn 2-ganger) ble identifisert. Blant dem, ble 206 gener nedregulert, mens 243 gener ble oppregulert i eggstokkreft celler med shRNA-mediert Malat -1-stanse sammenlignet med kontrollen OVCAR3 celler. En distinkt liste av gener er regulert av Malat-en som demonstrert av unsupervised hierarkisk clustering (Fig 5A). Vi utførte QRT-PCR for 12 tilfeldig valgt genesto bekrefte microarray resultater. QRT-PCR resultatene er svært sammenlignbare med resultatene fra cDNA microarray analyse, der
FRK
,
MUC16
,
MAP2K6
,
FXYD3
,
FDCSP
,
MAOB
,
GBP2
, og
TNFSF10
ble ned- regulert,
NEXN
,
TSPAN2
,
ANKRD1
, og
BHLHE41
ble oppregulert i OVCAR3-shM3 celler i forhold til SHNC celler (figur 6). Videre GO og KEGG berikelse analyse av de mest opp- og ned-regulerte gener henholdsvis identifisert betydelig overrepresentert funksjoner fremhever en rolle Malat -1 knyttet til invasjon og metastasering av eggstokkreft celler. Videre regul asjon av transkripsjon, positiv regulering av celleproliferasjon, cellesyklus, cellevekst og celleadhesjon av MAPK signal eller P53 signalbaner som er påvirket av Malat-1-ekspresjon. (S1-S4 figurene).
Unsupervised hierarkisk clustering analyse av de globale uttrykk profiler av forskjellig uttrykte gener. Kolonne representerer sampl og rad representerer genet, representerer grønn et lavere nivå genekspresjon og rødt representerer en relativ høyere av genekspresjon.
Grafen viser gjennomsnittlig ganger forskjell, FRK, MUC16, MAP2K6, FXYD3 , FDCSP, MAOB, GBP2, TNFSF10 ble nedregulert, NEXN, TSPAN2, NKRD1, BHLHE41 var oppregulert i OVCAR3-shM3 celler. (P 0,05)
3,5 Malat-en kan involvert i eggstokkreft ved å regulere uttrykket av
MMP13
,
MMP19
,
ADAMTS1
Blant disse degs, ble 79 gener signifikant oppregulert eller nedregulert med minst 3-fold. Ifølge de siste studiene,
MMP19
,
ADAMTS1 Hotell og
MMP13
gener er nært knyttet til metastasering og utvikling av ondartede svulster. Vi utførte QRT-PCR og Western blotting for å bekrefte uttrykk for
MMP19
,
ADAMTS1 Hotell og
MMP13
gener mellom OVCAR3-shM3 og OVCAR3-SHNC celler. MRNA uttrykk for
MMP13
er nedregulert i shM3 cellene, mens uttrykket av
MMP19 og ADAMTS1
økte (** P 0,01, figur 7A). Proteinekspresjon var i overensstemmelse med mRNA-resultater (figur 7B). Undertrykkelse av Malat-en resulterte i downregulating uttrykk for
MMP13 Hotell og opp-regulerer uttrykket av
MMP19 og ADAMTS1
gener, noe som indikerer at Malat-en kan involvert i eggstokkreft ved å regulere uttrykket av
MMP13
,
MMP19
,
og ADAMTS1
gener.
(A) mRNA uttrykk for ADAMTS1, MMP13, og MMP19 er regulert av Malat -1. * P 0,05 versus kontrollgrupper. (B) ADAMTS1, MMP13, MMP19 og protein ekspresjon endres som et resultat av Malat-1 knockdown. (C) Kvantifisering av B. * p 0,05 versus kontroll.
diskusjon
i det humane genomet, og DNA-sekvensering data viser at selv om tusener av gener som mangler protein-kodende kapasitet, kan de likevel spille viktige roller i regulering cellevekst, overlevelse, apoptose, og tumorigenesis [6]. Ikke-kodende RNA kan klassifiseres i henhold til deres størrelse i mirnas (22 nt), piRNAs (18-30 nt), korte translasjonsforskning regulerende RNA (100-200nt), og mye lengre ncRNAs (opp til 10 000 nt) [17] . Den lange ikke-kodende RNA med en lengde på 200 nt fått betydelig oppmerksomhet i det siste. I denne studien undersøkte vi Malat-1 uttrykk i ovarialcancer vev og undersøkt hvilken rolle Malat-en i regulering av svulst celle migrasjon og invasjon in vitro. Vi fant ut at Malat-1 mRNA ble overuttrykt i tumor tissuesand Malat-1 uttrykk var assosiert med kreft progresjon eggstokkene. Knockdown av Malat-1-ekspresjon undertrykket tumorcelle-proliferasjon, migrering og invasjon, stansede celler ved G0 /G1 fasen av cellesyklusen, og induserte apoptose. Vi videre identifisert 79 gener som uttrykk ble vesentlig endret ( 3-fold) etter Malat-en knockdown. Interessant, tre av disse genene,
MMP19
,
ADAMTS1
, og
MMP13
, har tidligere blitt innblandet i regulering av angiogenese, ekstracellulære matriks, celle adhesjon, og kreft progresjon. Dermed tyder våre data på at overekspresjon av Malat-en kan fremme eggstokkreft progresjon ved å regulere uttrykket av
MMP19
,
ADAMTS1 Hotell og
MMP13
gener.
metastaser er den viktigste årsaken til dødelighet hos kreftpasienter. Den underliggende mekanismen for tumormetastase og tilbakefall er svært kompleks, inkludert svulst celle adhesjon, invasjon, intravasation, sirkulasjon, bloduttredelse, og veksten i fjerne organisasjoner [18]. Endringer i intracellulære signalveier som kontrollerer celleproliferasjon og apoptose samt ekstracellulær sekresjon av proteiner som er involvert i celleadhesjon, migrering og proteolyse er av avgjørende betydning for kreft metastase [19]. Nylig er funksjonen av ikke-kodende RNA, slik som Malat-en, i løpet av metastase i ferd med å bli verdsatt [8, 14]. I gynekologiske kreftformer, er eggstokkreft vanligvis diagnostisert som en metastatisk sykdom. Vår nåværende undersøkelse viser at oppregulering av Malat-1 er assosiert med kreft progresjon eggstokkene. Faktisk har tidligere undersøkelser vist at Malat-1 var signifikant oppregulert i flere typer kreft, inkludert lungekreft, lever, bukspyttkjertel, og prostata cancer. Dessuten har Malat-en fungerte som en metastatisk og tilbakefall biomarkør for ikke-småcellet lungekreft og leverkreft [15]. Imidlertid er fremtidige studier med større prøvestørrelsen som kreves for å bekrefte resultatene.
Tidligere studier har vist at tumorceller var istand til å produsere faktorer som induserer tumor angiogenese, så vel som metalloproteinaser og relaterte molekyler for å degradere ekstracellulære matriks [20 ]. Vår nåværende studie viste Malat-1 knockdown modulert ekspresjon av MMP13 og MMP19, medlemmer av matriks-metalloproteinase (MMP) familie av proteiner som er involvert i endret ekstracellulær matriks metabolisme, tumorprogresjon og metastase [21, 22]. Noen tidligere studier viste at MMP13 blir unormalt uttrykt i visse faste tumorer, slik som papillær thyroideakarsinom og kolorektal kreft og er forbundet med progresjon og metastase [23,24]. I motsetning til dette, MMP19, som viser unike strukturelle egenskaper, spiller en dobbeltrolle i vev. På den ene siden, MMP19 mangel øket tidlig angiogene respons, som virker som en negativ regulator av invasjon. Imidlertid, MMP-19, som er oppregulert på ulike kreft vev, letter tumorinvasjon [25]. I samsvar med den anti-angiogene effekt av MMP19, har flere rapporter vist at metallopeptidase med thrombospondin type-1 motiv (ADAMTS1), som ble oppregulert i Malat-1-tie-celler for å inhibere angiogenese [26-28]
, og redusert ADAMTS1 stimulert migrasjon og invasjon av brystkreft celler [29].
til dags dato er det ingen rapport impliserer Malat-en i reguleringen av MMP eller ADAMTS1 uttrykk i eggstokkreft. Likevel, basert på våre nåværende data, hypotese vi at effekten av Malat-en i å fremme eggstokkreft progresjon kan være mediert av oppregulering av MMP13 og nedregulering av MMP19 og ADAMTS1.
For ytterligere å belyse molekylære mekanismer for Malat-1-indusert metastaser, vi identifisert gener som reguleres av Malat-1 uttrykk, ved å sammenligne shRNA-hemmet versus kontroll eggstokkreft celler. Videre utforskning av målgener og signalveien vil gi ny innsikt i de molekylære mekanismene for Malat-en er involvert i kreft progresjon eggstokkreft og skal hjelpe til med byggingen av en sterkere prediksjon og forebygging regel i eggstokkreft.
Støtte Informasjon
S1 fig. GÅ berikelse analyse av biologisk prosess med oppregulert og ned-regulert gener
doi:. 10,1371 /journal.pone.0155250.s001 plakater (JPG)
S2 Fig. GÅ berikelse analyse av mobilnettet komponent av oppregulert og nedregulert transkripsjoner
doi:. 10,1371 /journal.pone.0155250.s002 plakater (JPG)
S3 Fig. GÅ berikelse analyse av molekylære funksjoner av oppregulert og nedregulert transkripsjoner
doi:. 10,1371 /journal.pone.0155250.s003 plakater (JPG)
S4 Fig. KEGG berikelse analyse (pathway analyse)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0155250.s004 plakater (JPG)
Takk
Vi takker Jiachun Lv for nyttige råd med eksperimenter .
