Abstract
MiR-210 er master hypoxamir som generelt viser onkogene egenskaper i de fleste menneskelige solide tumorer inkludert blærekreft (BC). Imidlertid er det fortsatt ukjent om den kliniske betydningen av sirkulerende MIR-210 nivåer i BC. I denne studien fant vi at serum MIR-210 ble oppregulert hos pasienter med BC, og serumnivåer av MIR-210 økte med stigende scenen og klasse. Videre ble serum Mir-210 uttrykk funnet å være betydelig redusert i sammenkoblede postoperativ prøver og forhøyet hos de fleste pasienter med residiverende BC. Til sammen våre data tyder på at serum MIR-210 kan være en potensiell invasiv biomarkør for screening, forutsi og overvåke BC
Citation. Yang Y, Qu A, Liu J, Wang R, Liu Y, Li G , et al. (2015) Serum MIR-210 Bidrar til Tumor Detection, Stage Tippe og Dynamic Surveillance hos pasienter med blærekreft. PLoS ONE 10 (8): e0135168. doi: 10,1371 /journal.pone.0135168
Redaktør: Ratna B. Ray, Saint Louis University, USA
mottatt: 02.06.2015; Godkjent: 17 juli 2015; Publisert: 07.08.2015
Copyright: © 2015 Yang et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering:. Denne studien ble støttet av National Natural Science Foundation of China (nr 81271916); Foundation of China Shandong-provinsen naturvitenskapelige universitet (Nos ZR2010H004, ZR2013HQ063 og ZR2014HP001.); Grunnforskning Fond i Shandong University (No. 2014QLKY03); Forskningsfondet for doktorgradsutdanning av høyere utdanning i Kina (nr 20120131110055) og National viktige kliniske medisinske spesialiteter Foundation. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Blærekreft (BC), den vanligste kreftformen i urinveiene over hele verden, gir betydelig sykelighet og dødelighet [1]. Ved innledende diagnose, ca 70% av pasientene BC har kreft begrenset til epitelet eller subepiteliale bindevev (non-muskel-blærekreft, NMIBC, består av faser Ta, Tis og T1). Mer enn 50% av disse kreftformene gjenta seg og 15-20% fremgang i muskel-invasiv form (MIBC, iscenesetter T2, T3 og T4) under oppfølging [2]. Sikkert denne høye frekvensen av tilbakefall av sykdommen krever livslang overvåking. Foreløpig er den mest brukte test for ikke-invasiv påvisning av BC urin cytologi. Imidlertid har denne testen begrenset følsomhet, spesielt for påvisning av lav grad av lesjoner [3-6]. Systoskopi styrt biopsi for histologisk evaluering kan gi diagnostisk treffsikkerhet høy, men det er invasiv og kostbar, og upraktisk for generell screening kreft. Derfor er det et behov for nye markører som kan hjelpe i ikke-invasiv påvisning og overvåking av BC.
microRNAs (mirnas, Mirs) er en ny klasse av endogen, små, ikke-kodende RNA-oligonukleotider som kunne negativt regulerer genekspresjon ved å målrette den 3 «ikke-translaterte region (3»-UTR) av det tilsvarende mRNA [7]. Akkumulert bevis tyder på at mirnas ofte dysregulerte i humane kreftformer og utøve betydelig effekt på kreftutvikling [8, 9]. Sirkulasjons microRNAs, stammer fra primære tumor vev, er stabilt påvises i serum /plasma [10-12]. Flere studier har vist at sirkulerende mirnas kan anvendes som nye biomarkører i-kreft [13-15]. Nylig har noen sirkulerende microRNAs som MIR-21, MIR-221, MIR-375, etc. er foreslått som biomarkører for svulst tilstedeværelse eller behandlingsrespons til lokale og systemiske terapier [9, 16]. Imidlertid er bruken av sirkulerende mirnas som blodbaserte, minimalt invasive biomarkører for pasienter med BC fortsatt relativt mindre utforsket.
MiR-210, hoved hypoxamir blir oppregulert i de fleste humane solide svulster og generelt utviser onkogene egenskaper [17, 18]. Nyere studier viser at MIR-210 ble oppregulert i BC vev [19, 20], og overekspresjon av MIR-210 var assosiert med dårlig overlevelse, fremmet cellevekst og migrasjon, og hemmet apoptose av BC celler [21]. Uttrykket og kliniske betydningen av sirkulerende MIR-210 i BC er fortsatt uklart på dette tidspunktet. Det har blitt demonstrert at høy sirkulerende MIR-210 kan tjene som en biomarkør av tumor nærvær og behandling respons til medikamentterapier i pasienter med brystkreft [22]. I lys av disse observasjonene, postulerer vi MIR-210 kan være en kandidat for leting som sirkulerende biomarkører av BC og kan gi prediktiv informasjon for å bedre kreftbehandling.
I denne studien har vi fokusert vår analyse av klinisk effekt av sirkulerende MIR-210 på påvisning og overvåking av BC, med hypotesen om at sirkulerende MIR-210 kan tjene som en minimal invasiv biomarkør for BC pasienter. Vi fant ut at preoperative Mir-210 uttrykk nivåer i serum er nyttig for å oppdage BC, spår muskel invasjon og histologisk grad, og reflektere kreft dynamikk.
Materialer og Metoder
Pasienter og prøver
studien inkluderte 168 pasienter med nylig diagnostisert BC ved Institutt for urologisk kirurgi, Qilu Hospital, Shandong University (Jinan, Kina) mellom 2006 og 2010. Histologiske prøver fra alle pasienter ble anmeldt for å bekrefte diagnosen av BC, og svulstene ble iscenesatt og gradert etter 2002 TNM klassifisering og 1973 WHO karaktersystemet, henholdsvis. Blod ble samlet inn fra 168 f.Kr. pasienter før operasjonen. Parede postoperative blodprøver ble samlet fra 40 pasienter en måned etter operasjonen, og uparede tilbakefall gruppe blodprøver ble samlet fra 30 pasienter. De clinicopathological data for pasienter, inkludert kjønn, alder, histologisk differensiering og tumorstadium ble samlet retrospektivt. I tillegg ble 104 friske kontrollpersoner som besøkte sykehuset for en legesjekk inkludert i studien. Normale kontroller ble valgt med liknende alders- og kjønns proporsjoner til pre-operative kreftpasienter, og de ble siktet for å sikre at de var innenfor normalområdet for alle laboratoriefunn og hadde ingen historie av kreft. Innsamling og analyse av alle prøver ble godkjent av etisk komité Qilu Hospital, Shandong University, og skriftlig informert samtykke ble innhentet fra hver pasient og kontroller.
Hele blodprøver ble innsamlet fra kontroller og pasienter ved venepunksjon. Serum ble separert i løpet av 1 time av blodoppsamlings ved sentrifugering ved 10 000 rpm i 10 min for å fjerne celleavfall. Serumprøvene ble deretter overført til RNase /DNase-fri rør og lagret ved -80 ° C inntil videre analyse. Formalinfiksert parafin-embedded (FFPE) vevsprøver ble samlet fra pasienter som har gjennomgikk radikal cystektomi. Alle FFPE-prøver ble lagret ved romtemperatur inntil bruk.
Cellekultur
BC-cellelinjer (5637 og T24) og en human cellelinje uroepithelial (SV-HH-1) ble anskaffet fra American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA). 5637 og T24 ble dyrket i RMPI1640 medium inneholdende 10% føtalt bovint serum (FBS; Gibco, Carlsbad, CA), mens SV-HH-1 ble dyrket i Dulbeccos modifiserte Eagles medium /F12 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Alle cellelinjer ble inkubert ved 37 ° C i en fuktet atmosfære inneholdende 5% karbondioksyd.
Protokoll for påvisning av mirnas i serum
cDNA av mirnas i serum ble syntetisert med seg One Step PrimeScript miRNA cDNA Synthesis Kit (Takara Bio Inc., Shiga, Japan). Reaksjonsblandingen (20 ul) inneholdt 10 ul av 2 x miRNA reaksjonsbuffer Mix, 2 ul av miRNA Primescript RT enzymblandingen, 2 ul av 0,1% BSA og 3 ul av serum blandet med 3 ul av serumbuffer (2,5% Tween 20, 50 mmol /liter Tris og 1 mmol /L EDTA [23], og ble inkubert ved 37 ° C i 60 min, ved 85 ° C i 5 sekunder og deretter ved 4 ° C i 60 min. etter sentrifugering ved 10 000 rpm i 10 min ved 4 ° C, ble cDNA ble lagret ved -20 ° C inntil bruk.
QRT-PCR for mirnas ble utført i siste bind av 25 ul med SYBR PrimeScript miRNA qPCR Kit (Takara Bio Inc., Shiga, Japan) på ABI PRISM 7500 Sequence Detection System (Applied Biosystems, Foster City, California). reaksjons~~POS=TRUNC reagenser inneholdt 12.5μl av SYBR Premiks Ex Taq II, 0,5 ul av DyeII, 2 ul av 5 pm fremover primer (Ribobio, Guangzhou, Kina), 1 ul av 10 uM Uni-MIR qPCR primer og 2.0μl av templat-cDNA. volumet ble justert med RNA-fri H2O. den reverstranskripsjonsreaksjon ble utført i triplikat for å fjerne eventuelle utliggere. Ifølge vår tidligere forskning, kombinasjonen av MIR-16-5p og speil 193a-5p ble anvendt som referanse-genet [24]. Og miRNA uttrykket ble registrert som forholdet mot det geometriske gjennomsnittet av to referanse gener. I tillegg har vi valgt minimums MIR uttrykket prøven og angir uttrykket verdien av denne prøve som 1. Uttrykket nivåene av alle de andre prøvene ble lik det relative forholdet.
Isolering av RNA, cDNA-syntese og kvantitativ real-time polymerase chain reaction (QRT-PCR)
Total RNA ekstraksjon fra cellene og kultur medieprøver ble utført ved hjelp TRIzol reagens (Ambion, Life Technologies, Carlsbad, CA, USA), mens RNA ekstraksjon fra formalin faste og parafininnstøpte (FFPE) prøver ble utført ved hjelp av miRNA isolasjon Kits (Bioteke, Beijing, Kina). Alle manipulasjoner av RNA ble utført under RNase-frie betingelser. Den isolerte RNA ble lagret ved -80 ° C inntil bruk.
cDNA ble syntetisert ved hjelp av gen-spesifikke primere (Ribobio, Guangzhou, Kina) og M-MLV RT kit (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) i en 20 ul reaksjonsvolum. RT reaksjons reagenser inneholder 1mg RNA mal, 1 ul 10mM dNTP mix, 2 ul 0,1 M DTT, 4 ul første-strand buffer, og 1 ul 40 U /ml RNase inhibitor. Volumet ble justert med RNA-fri H2O. Den reverstranskripsjonsreaksjon ble utført i triplikat for å fjerne eventuelle utliggere. MiRNA uttrykket ble vurdert ved QRT-PCR og en ABI PRISM 7500 Sequence Detection System (Applied Biosystems, Foster City, California). De fold endringer i miRNA uttrykket ble bestemt ved bruk av to-ΔΔCT metoden [10] med U6 små kjernefysiske RNA (U6) som referanse genet for å normalisere dataene. I tillegg setter vi uttrykket verdi av human uroepithelial cellelinje (SV-HH-1) som 1 og uttrykket nivåer av alle de andre prøvene var lik det relative forholdet.
Statistisk analyse
SPSS (Statistical Package for Social Sciences) programvarepakke, versjon 18.0 (Chicago, IL, USA), og MedCalc 9.3.9.0 (MedCalc, Mariakerke, Belgia) programvare ble brukt til å analysere alle data. Vi brukte først Kolmogorov-Smirnov test for å avgjøre fordelingen av dataene i hver gruppe. Dataene er presentert som gjennomsnitt ± standard avvik (SD) eller median (interkvartilt område) når verdiene normalt eller unormalt ble distribuert, respektivt. Statistiske forskjeller mellom gruppene ble testet med Mann-Whitney U-test, Wilcoxon t-test, t-test, eller en Kruskal-Wallis test, som passer. Receiver Operating karakteristiske (ROC) kurver ble etablert for å diskriminere personer med eller uten BC. Forskjeller ble ansett som statistisk signifikant når P 0,05. Multiple-sammenligninger ble ansett statistisk signifikant når p-verdier var mindre enn 0,05 /(antall kontraster utført) ifølge Bonferroni multiple sammenligningstest.
Resultatene
MiR-210-ekspresjon i humane BC vev og BC cellelinjer
for å bekrefte tidligere rapporterte høye Mir-210 uttrykk nivåer i BC vev [25], vi undersøkt Mir-210 uttrykk i 40 par av menneskelige BC vev og tilsvarende ikke-kreft vev ved hjelp qRT- PCR. Resultatene viste at MIR-210-ekspresjon i BC-vev var signifikant oppregulert i forhold til den i tilstøtende normale vev (P 0.001, figur 1A). Også, undersøkte vi MIR-210-ekspresjon i humane BC-cellelinjer (T24 og 5637), og en human cellelinje uroepithelial (SV-HH-1). Resultatene viste at uttrykket nivåer av MIR-210 i BC cellelinjer som var betydelig høyere enn den i den humane uroepithelial cellelinje (figur 1B).
(A) sammenligning av MIR-210 nivåer i 40 par primære BC vev og tilstøtende normalt vev. Uttrykket nivået av MIR-210 var betydelig høyere i primære BC vev enn i tilstøtende normalt vev (
P
0,001). (B) uttrykk nivåer av MIR-210 i BC cellelinjer var høyere enn i en human uroepithelial cellelinje.
MiR-210 uttrykk i serum hos pasienter med BC
uttrykk nivåer av serum MIR-210 i 168 BC pasienter og 104 kontroller ble undersøkt ved hjelp QRT-PCR. For å validere stabiliteten av referansegener, vi sammenlignet uttrykket nivåer av MIR-16-5p, MIR-193a-5p og kombinasjon av MIR-16-5p og MIR-193a-5p (geometrisk gjennomsnitt) i BC pasienter og normale kontroller. Det var ingen bevis for differensial uttrykk for MIR-16-5p, MIR-193a-5p og kombinasjon av MIR-16-5p og MIR-193a-5p mellom BC pasienter og friske kontroller (S1 Fig). Og resultatene viste at nivåene av MIR-210 ble signifikant oppregulert i BC pasienter sammenlignet med friske kontroller (P 0,0001, figur 2A). Representasjon av data ved hjelp av en ROC tomten viste sterk skille mellom begge gruppene, med en AUC på 0,898 (95% CI, 0,855 til 0,931) (fig 2B). Vi brukte ROC kurver med Younden indeksen for å oppdage cutoff-verdier som kan diskriminere blærekreftpasienter fra normale kontroller [26]. Den optimale verdien cutoff ble indikert ved 22.37, med en sensitivitet på 97,6% (95% KI, 94,0% -99,3%) og en spesifisitet på 69,2% (95% KI, 59,4% -77,9%).
(A) serum Mir-210 uttrykk i 168 f.Kr. pasienter og 104 kontroller. De øvre og nedre grenseverdier for bokser og linjer inne i boksene indikerer 75-og 25. percentil og median, henholdsvis. De øvre og nedre strekene viser 90th og 10th persentiler, henholdsvis. (B) mottaker-drift karakteristikk (ROC) kurve analyse av serum MIR-210 for å detektere BC pasienter. AUC for 0,898 (95% KI 0,855 til 0,931) indikerer god diskriminerende effekt.
De statistiske resultatene viste at serum Mir-210 uttrykk i BC pasienter ble signifikant korrelert med T scenen (P = 0.000) og M scenen (P = 0,040). Det var ingen signifikant sammenheng mellom serum Mir-210 uttrykk og pasientens kjønn, alder, N scenen eller Grade (alle P 0,05). (Tabell 1)
Rollen serum MIR-210 for å forutsi tumorstadium i pasienter med BC
i ytterligere analyse, fordelt vi BC pasientene i NMIBC og MIBC, og fant at serum MIR-210 fra både NMIBC og MIBC var signifikant oppregulert i forhold til kontrollene (
P
0,0001 og
P
0,0001, henholdsvis). Enda viktigere, ble det observert en signifikant forskjell i serum ekspresjon av MIR-210 mellom begge grupper av pasienter med NMIBC og MIBC (
P
0,0001, figur 3A). AUC for MIR-210 brukes til å skille NMIBC (Ta-T1) og MIBC (T2-T4) pasienter fra kontrollene var 0,858 (95% CI, 0,800 til 0,904) og 0,938 (95% CI, 0,893 til 0,968), henholdsvis (fig 3B og 3C). Og serum MIR-210 kan sikkert skille NMIBC pasienter fra MIBC pasienter, som gjenspeiles av en AUC verdi på 0,736 (95% CI, 0,662 til 0,800) (fig 3D).
(A) serum MIR-210 uttrykk i 84 NMIBC, 84 MIBC og 104 kontroller. Alle
P
0,05 /3. (B) ROC-kurver for serum MIR-210 for NMIBC gruppe (n = 84) vs friske individer (n = 104). AUC = 0,858 (95% KI 0,800 til 0,904). (C) ROC-kurver for serum MIR-210 for MIBC gruppe (n = 84) vs friske individer (n = 104). AUC = 0,938 (95% KI 0,893 til 0,968). (D) ROC-kurver for serum MIR-210 for NMIBC gruppe (n = 84) vs MIBC gruppe (n = 84). AUC = 0,736 (95% KI 0,662 til 0,800).
Vurdering av om serum MIR-210 kan overvåke kreft dynamikk
Vi valgte 10 BC pasienter med høyest serum MIR-210 uttrykket (høy gruppe) og en annen 10 BC pasienter med lavest serum Mir-210 uttrykk (lav gruppe). De tilsvarende FFPE- vev av disse pasientene ble samlet og deretter Mir-210 uttrykk ble evaluert. Som et resultat, i 9 pasienter av den høye gruppe, MIR-210-ekspresjon i BC FFPE-vev viste høyere (90%) enn i pasienter med lav gruppen (S2 Fig). Videre undersøkte vi de sirkulerende Mir-210 uttrykk nivåer i sammenkoblede pre- og postoperative serumprøver fra 40 BC pasienter som gjennomgikk kurativ cystektomi, og funnet at nivåene av serum MIR-210 ble betydelig redusert i den postoperative gruppen ( P 0,0001) (figur 4A). Vi har også undersøkt serumnivåene av MIR-210 i uparede preoperativ (n = 168), postoperativ (n = 40), og tilbakefall (n = 30) serumprøver, og fant at MIR-210 nivået var signifikant redusert i den postoperative gruppen sammenlignet med det i den pre-operative gruppen (P 0,0001). Nivået av serum MIR-210 i tilbakefall gruppen ble betydelig økt (P 0,0001) og oppviste et lignende nivå som det i den pre-operative prøver (figur 4B). Til sammen funnene viste at sirkulerende nivåer av MIR-210 kan reflektere tumor dynamikk i BC pasienter.
(A) Sammenligning av serum Mir-210 uttrykk mellom pre- og postoperative prøver fra BC pasienter . Serum MIR-210 nivåene ble betydelig redusert i sammenkoblede postoperativ prøvene sammenlignet med de som er i pre-operative prøver (
P
0,0001). (B) Scatter tomt på MIR-210 nivåer i pre-operative (n = 168), postoperativ (n = 40) og tilbakefall (n = 30) serum grupper.
Evaluering av overvåking tumor dynamikk ved hjelp av Mir-210 uttrykk for kulturmedium i BC cellelinjer
det har blitt rapportert at primærtumorceller kan utskille mirnas til omkringliggende miljøer, inkludert tilstøtende celler og blodstrøm [27]. Derfor hypotese vi at kulturkreftceller kan også skille ut flere kreft-assosiert mirnas inn i omkringliggende medium, simulere den gjensidige påvirkningen mellom primære kreftceller og tilstøtende blod. For å bekrefte hypotesen, må vi først undersøkte Mir-210 uttrykk for kulturmedium i BC cellelinjer (5637 og T24) og fant MIR-210 ble uttrykt i dyrkede medium for både 5637 og T24 celler. Da belagt vi 5637 og T24 celler med forskjellige tall og samlet mediet ved forskjellige tidspunkter for detaljert undersøkelse. Som et resultat ble økt tendenser i MIR-210 uttrykk bekreftet i begge celle antalls og tidskursavhengig oppførsel (fig 5). Disse resultatene indikerer at MIR-210 kan bli løslatt fra primær blæren kreftceller i det omkringliggende miljø, noe som tyder på at serum MIR-210 kan stamme fra primær BC celler og dens serum uttrykk nivå kan reflektere tumor dynamikken i kreftpasienter med BC.
Økt tendenser ble bekreftet i celle medium i begge celle antalls og tidskursavhengig oppførsel.
Diskusjoner
Mange genetiske og epigenetiske forandringer er funnet å være involvert i tumorigenese og utviklingen av ulike kreftformer. Tidligere rapporter har identifisert tumorspesifikke endringer i nukleinsyrer i blod av pasienter, og har vist den potensielle verdien av plasma /serum nukleinsyrer som nye ikke-invasive biomarkører hos pasienter med kreft [28, 29]. Spesielt microRNAs som stammer fra kreftceller har vist seg å være stabile og lett detekteres i plasma eller serum fra pasienter med flere kreftformer, noe som kan gjenspeiler uttrykket mønster i de neoplastiske vev [10, 11]. Men faktisk, bare relativt få mirnas som er rikelig uttrykt i kreftceller kan påvises i omløp [30], og nesten 30% av de frigitte mirnas ikke speile uttrykk mønstre av de spesifikke kreftceller [31]. Disse rapportene understreker betydningen av å finne nye sirkulerende microRNAs som biomarkører for kreft.
MiR-210 er den mest konsekvent og robust indusert mikroRNA etter hypoksi og generelt viser onkogene egenskaper i ulike svulster [32, 33]. Hypoksi er et felles trekk ved mange solide tumorer, inkludert BC, og er innblandet i reguleringen av mange gener. Nyere studier viste MIR-210 ble oppregulert i BC vev [19, 20]. I denne studien ble først bekreftet vi de høyere MIR-210 uttrykk i BC-vev og cellelinjer enn i tilstøtende normale vev og et humant uroepithelial cellelinje. Deretter fokuserte vi på den kliniske betydningen av sirkulerende MIR-210 i BC. Vi fant ut at det var betydelig høyere i BC pasienter enn hos friske frivillige, og AUC å diskriminere BC fra friske kontroller var 0,898, med en sensitivitet på 97,6% og en spesifisitet på 69,2%. Denne studien er den første til å demonstrere den potensielle rolle serum MIR-210 i påvisning av BC. Vi har også funnet at høy MIR-210-ekspresjon i serum var assosiert med avansert stadium T og tilstedeværelsen av metastasering. Disse funnene var i samsvar med andre rapporter som høy Mir-210 uttrykk i BC vev ble assosiert med muskel-invasiv aggressivitet [19, 20].
Videre forskning viste MIR-210 nivåer kan ikke bare skille NMIBC pasienter fra friske kontrollpasienter, men også MIBC fra NMIBC med AUC verdi av 0,736. Men den forholdsvis lave AUC og betydelig overlapping i distribusjoner av serum MIR-210 i NMIBC og MIBC indikerer at serum MIR-210 ikke kan brukes til nøyaktig å skille mellom MIBC og NMIBC. Ikke desto mindre, kan serum MIR-210 tjener til å vurdere den relative sannsynlighet for muskel-invasiv BC i fravær av mer pålitelige sirkulerende biomarkører. Dermed kan det være nyttig å preoperativt forutsi tumor stadium med håp om at slik kunnskap kunne veilede terapeutisk valg.
Vi undersøkte også om serum Mir-210 uttrykk nivåer kan reflektere kreft dynamikk i BC. Sammenligningen mellom MIR-210-ekspresjon i paret serum og primære tumorer viste at høye nivåer av MIR-210 representert høyere uttrykk i de fleste tilfeller av primær BC-vev. MIR-210 nivåer ble også sammenlignet i parvise serumprøver innhentet før og etter kurativ kirurgi, som viste signifikant reduksjon postoperativt. Og nivåene av serum MIR-210 fra pasienter med residiverende BC ble oppregulert og nådde nivåer av at i pre-operative pasienter. Videre fant vi ut om MIR-210 nivået i kulturmediet kan gjenspeile status for BC cellelinjer og kan bli løst fra kreftceller. Og våre data viste tydelig at MIR-210 nivåer i kulturmediet BC cellelinjer betydelig økt i både celle nummer-og tidsforløpet-avhengige oppførsel, mens MIR-210 nivåer i kulturmedium av den menneskelige uroepithelial cellelinje uendret (data ikke vist). Disse funn indikerte at serum ekspresjonsnivået av MIR-210 kan være representative for tumor dynamikk og kan overvåke tumorstatus.
Selv om vår nåværende analysen kan være potensielt nyttige for deteksjon BC, var det en begrensning ved å bruke speil 210 som en enkelt biomarkør for diagnostisering av BC. Sirkulerende ekspresjon av MIR-210 er også blitt beskrevet i andre faste kreftformer, slik som brystkreft [22], nyrekreft [34], og kreft i bukspyttkjertelen [35]. Derfor kan det være en utfordring å diskriminere om høy sirkulerende MIR-210 nivå er spesielt knyttet til BC selv eller om dette bare er et vanlig fenomen som manifesterer som følge av forstyrrelser i vertens immunrespons i løpet av progresjon av noen kreft [36] . Vi løst problemet ved å vise at en positiv signifikant korrelasjon eksisterte mellom primær svulstvev og serumnivåer av MIR-210 og at serum MIR-210 nivåer falt postoperativt i en undergruppe av pasienter, fremhever det spesielle ved MIR-210 som en spesifikk biomarkør for BC.
i konklusjonen, våre resultater gir overbevisende bevis for at serum MIR-210 kan brukes som en ikke-invasiv biomarkør for screening, scene forutsi og overvåke BC. Dette konseptet kan bli innarbeidet i kliniske beslutninger i den ikke-så-fjern fremtid venter validering i store prospektive studier.
Hjelpemiddel Informasjon
S1 Fig. Ct-verdier på MIR-16-5p, MIR-193a-5p, kombinasjon av MIR-16-5p og MIR-193a-5p i BC pasienter og friske kontroller (alle
P
0,05).
Ingen signifikant forskjell ble funnet i løpet av 3 referanse gener i begge gruppene
doi:. 10,1371 /journal.pone.0135168.s001 plakater (TIF)
S2 fig. Sammenligning av MIR-210 nivåer i serum og tilsvarende kreftvev
doi:. 10,1371 /journal.pone.0135168.s002 plakater (TIF)
