Abstract
Bakgrunn
epidermal vekstfaktor reseptor (EGFR) genet spiller en nøkkelrolle i svulst overlevelse, invasjon, angiogenese og metastatisk spredning. Nyere studier har vist at magekreft (GC) ble forbundet med polymorfismer i EGFR-genet og miljømessige påvirkninger, som for eksempel livsstilsfaktorer. I denne studien ble sju kjente SNPs i EGFR eksoner undersøkt i en høy-risiko kinesiske befolkningen i Jiangsu-provinsen for å teste om genetiske varianter av EGFR eksoner og livsstil er forbundet med økt risiko for GC.
Metodikk /Principal funn
En sykehusbasert case-control studie ble utført i Jiangsu-provinsen. Resultatene viste at røyking, drikking og preferanse for salt mat var signifikant assosiert med risiko for GC. Forskjellene i livsstil mellom menn og kvinner kan være som årsak av høyere forekomst hos menn enn hos dem som hos kvinner. Syv ekson SNPs ble genotypet rs2227983, rs2072454, rs17337023, rs1050171, rs1140475, rs2293347, og rs28384375. Det ble bemerket at variant rs2072454 T-allel og TT-genotype var signifikant assosiert med en økt risiko for GC. Interessant, vår resultat foreslo ACAGCA haplotype kan være assosiert med redusert risiko for GC. Men ingen signifikant sammenheng ble undersøkt mellom de seks andre SNPs og risiko for GC både i den totale befolkningen og alders-matching befolkningen selv med kjønnsforskjeller.
Konklusjoner
Røyking, drikking og preferanse for salt mat var signifikant assosiert med risiko for GC i Jiangsu-provinsen med kjønnsforskjeller. Selv om bare én SNP (rs2072454) var signifikant assosiert med en økt risiko for GC, kombinert seks EGFR ekson SNP’er sammen kan være nyttig for å forutsi risikoen for GC
relasjon:. Zhang J, Zhan Z, Wu J Zhang C, Yang Y, Tong S, et al. (2013) Association blant Polymorfisme i EGFR Gene Eksoner, livsstil og risikoen for magekreft med Kjønnsforskjeller i kinesisk Han fag. PLoS ONE 8 (3): e59254. doi: 10,1371 /journal.pone.0059254
Redaktør: Eithne Costello, The Liverpool Cancer Research UK Centre, Storbritannia
mottatt: 19 september 2012; Godkjent: 13 februar 2013; Publisert: 29 mars 2013
Copyright: © 2013 Zhang et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne studien ble støttet av Priority Academic Program Utvikling av Jiangsu høgskolerådet (PAPD), Jiangsu Natural Science Foundation (BK2008461), Natural Science Foundation National of China (30973715 og 81001502), forskningsfond for doktorgradsutdanning av høyere utdanning i Kina (20103237110011) , unge lærere i Nanjing University of tradisjonell kinesisk medisin. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Selv om både forekomst og dødelighet av magekreft (GC) har falt de siste årene, GC var den fjerde vanligste kreftformen i verden i 2008, med ca 989 600 nye tilfeller. Menn generelt utvikle GC dobbelt så ofte som kvinner og ca 72% av nye tilfeller forekommer i utviklingsland. Generelt, den høyeste forekomsten er i Asia, spesielt i østasiatiske land som Korea, Japan og Kina [1].
Ja, nesten 40% av alle GC tilfellene oppstår i Kina, og det er en bemerkelsesverdig geografisk variasjon i GC priser gjennom Kina [2]. Mer enn to tredjedeler av pasientene diagnostisert med GC i Kina har inoperabel sykdom og en median overlevelse på seks til ni måneder. Videre, i pasienter med resektable svulster, de lokale og fjernt gjentakelse priser er høye, og 5-års overlevelse er mindre enn 30% [3]. Sun
et al. Product: [4] vurdert effekten av GC på den kinesiske befolkningen ved epidemiologisk analyse av dødeligheten fordeling 1990-1992, viste resultatene at GC var den ledende årsak til kreft-relaterte dødelighet i Kina .
det er nå generelt akseptert at patogenesen av GC innebærer en multi-faktoriell samspillet mellom miljømessige utløsere og genetisk disposisjon. Epidemiologiske studier har identifisert alder, kjønnsforskjeller og en rekke miljøfaktorer som kan bidra til utvikling av GC, inkludert en salt kosthold, tobakksrøyking, alkoholforbruk og
Helicobacter pylori
infeksjon [5] – [8] . Andre studier har identifisert vertsfaktorer og genetiske endringer som også spiller en viktig rolle i utvikling og progresjon av GC gjennom gen-miljø interaksjoner [9], [10].
epidermal vekstfaktor reseptor (EGFR) genet ligger i den korte arm av humant kromosom 7 og frembringer et glykoprotein med en molekylvekt på 170 kDa som har en høy affinitet for dets ligander, inkludert epidermal vekstfaktor (EGF) og transformerende vekstfaktor alfa (TGF-α). EGFR deltar i flere viktige tumorigene mekanismer, slik som tumor overlevelse, invasjon, angiogenese og metastatisk spredning. EGFR-ekspresjon er blitt observert i en rekke humane tumorer, og flere studier har vist at overekspresjon av EGFR korrelerer med en dårlig prognose [11]. I GC, korrelerer EGFR overekspresjon med avansert tumor stadium og det dårlige kliniske resultatet [12]. Men rollene som EGFR overekspresjon og genetiske endringer spille i magekreft fortsatt uklare. Dessuten har bare noen få enkeltnukleotidpolymorfi (SNPs) er funnet å assosiere med GC utvikling og utfall [11], [13].
I denne studien hypotese vi at miljøeksponeringer og kjønnsforskjeller fungere som effekt modifikatorer på bakgrunn av genetisk variasjon i EGFR eksoner som kan påvirke EGFR-funksjon, og dermed forme GC mottakelighet. For å teste denne hypotesen, ble en sykehusbasert studie der 387 GC tilfeller og 392 kreftfrie kontroller i en høy-risiko kinesiske befolkningen ble genotypet for sju kjente SNPs i EGFR eksoner, nemlig rs2227983 A G, rs2072454 C T, rs17337023 A T, rs1050171 G A, rs1140475 C T, rs2293347 G A, og rs28384375 T . C
Materialer og metoder
Rekruttering av saker og kontroll Deltakere
I utgangspunktet 401GC tilfeller og 420 kontroller ble identifisert; 3 tilfeller av kreft mangel på spørreskjemaer, så vel som 11 svulster enn adenokarsinom ble ekskludert; 18 kontroller ble utelatt av overdreven serum kreftrelaterte biomarkører og 10 kontroller ble ekskludert etter den geografiske avvik. Overall, en total befolkning med 387 tilfeller og 392 kontroller var tilgjengelige for den aktuelle studien på bakgrunn av potensielle makt analyser, er det synd at kontrollene var ca 10 år yngre enn tilfeller, og dermed en alderstilpasning befolkningen med 294 tilfeller og 294 kontroller ble hentet fra den totale befolkningen for sammenstilling av alders matching. Alle fag var genetisk urelaterte etniske Han-kinesere. De pasienter med primær GC ble rekruttert fra Institutt for kirurgisk gastroenterologi i Jiangsu Provence Hospital of tradisjonell kinesisk medisin (TCM) mellom januar 2008 og juli 2010 i Nanjing by, Jiangsu-provinsen. De kreftfrie friske kontroller ble fortløpende rekruttert fra Jiangsu Hospital of TCM, og de var sykehus besøkende for en årlig sjekk opp i samme periode. For å bli inkludert i studien, pasientene (a) menn eller kvinner over 20 år, men under 80 år gammel, (b) måtte være av Han-kinesere etnisitet (selvrapportert), (c) kom fra tre regioner i Jiangsu provinsen og måtte være en lokal innbygger i minst 5 år, (d) måtte ha nylig histopathologically diagnostisert primær GC, (e) måtte mangle tidligere ondartede svulster i andre organer, og (f) ikke hadde antitumorterapi før rekruttering , inkludert kjemoterapi og strålebehandling. Utdannede intervjuere brukt en pre-testet spørreskjema for å samle epidemiologiske data fra deltakerne, nemlig demografiske faktorer som alder og kjønn, og kjente risikofaktorer for GC (slik som tobakksrøyking, alkoholforbruk, og en familiehistorie med fordøyelseskanalen kreft) . Personer som røykte én eller flere ganger om dagen i over et år ble definert som røyker, og de som forbrukes tre eller flere alkoholenheter i uken i over seks måneder ble ansett for å være kronisk drinkers [14], [15]. Etter signering informert samtykkeerklæringer, hvert fag donert 3-5 ml perifert blod som skal brukes til genomisk DNA-ekstraksjon. Forskningen protokollen ble godkjent av Institutional Review Board of Jiangsu Provence Hospital of TCM.
Genomisk DNA Isolasjon fra perifere blodceller
En kommersiell blod DNA-ekstraksjon kit (AxyPrep-96 kit, Axygen, CA, USA) ble anvendt for å ekstrahere genomisk DNA fra blodprøvene. De rensede DNA ble lagret ved -20 ° C inntil de ble brukt for genotype testing. Kvaliteten av DNA ble bestemt ved agarosegel-elektroforese.
genotyping
Polymerasekjedereaksjon-ligeringsdeteksjonsaksjon (PCR-LDR) metoder ble anvendt for genotyping [16]. Primere ble syntetisert ved Shanghai Sangon biologiske Engineering Technology and Services (No.698, Xiangmin Rd, Songjiang District, Shanghai, Kina). Hvert sett med ligase påvisningsreaksjon prober består en vanlig sonde og to skjønns prober for de to typene (tabell S1).
Målet DNA-sekvenser ble forsterket ved hjelp av en multipleks PCR-metoden. PCR for hvert fag ble utført i et sluttvolum på 20 ul som inneholdt 1 x PCR-buffer, 3,0 mmol /l MgCl
2, 2,0 mmol /l deoksynukleotidtrifosfater, 1 pl primere, 0,2 ul QIAGEN HotStarTaq Polymerase (QIAGEN, Kina ), 4 ul av 1 x Q-oppløsning, og 10-20 ng genomisk DNA. Termiske sykluser ble utført i fem SNP’er (rs2227983, rs17337023, rs1140475, rs2293347 og rs2072454) i Gene Amp PCR system 9600 (PerkinElmer) med en innledende denaturering i 15 minutter ved 95 ° C, etterfulgt av 35 sykluser med denaturering ved 94 ° C i 30 s, annealing ved 59 ° C i 1 min, og forlengelse ved 72 ° C i 1 minutt, etterfulgt av en endelig forlengelse ved 72 ° C i 7 min. Protokollen for rs28384375 forsterkning bestod av en innledende denaturering i 15 minutter ved 95 ° C, etterfulgt av 35 sykluser med denaturering ved 94 ° C i 30 sekunder, annealing ved 56 ° C i 1 minutt og forlengelse ved 72 ° C i 1 min , etterfulgt av en endelig forlengelse ved 72 ° C i 7 min. Protokollen for rs1050171 bestod av en innledende denaturering i 15 minutter ved 95 ° C, etterfulgt av 35 sykluser med denaturering ved 94 ° C i 30 sekunder, annealing ved 53 ° C i 1 min, og forlengelse ved 72 ° C i 1 min, etterfulgt av en endelig forlengelse ved 72 ° C i 7 min.
Ligeringsreaksjonen rings~~POS=TRUNC for hvert individ ble utført i et sluttvolum på 10 pl inneholdende 1 x NEB Taq DNA-ligase-buffer, 12,5 pmol av hver sonde blanding 0,05 ul Taq DNA ligase [NEB Bioteknologi (Beijing)], og 1 mL av multi-PCR produkt. De probesekvenser er vist i Tabell S2. I alt ble 35 sykluser bestående av 95 ° C i 2 minutter, 94 ° C i 30 s, og 60 ° C i 2 minutter utført. De fluorescerende produkter av ligase deteksjons reaksjoner ble differensiert ved hjelp av en ABI sequencer 377 (figur S1). For å bekrefte nøyaktigheten av den PCR-LDR genotyping metode, ble direkte DNA-sekvensering av tilfeldig utvalgte PCR-produktene utføres. Andelen av sekvenseringsprøver var omtrent 5%. De PCR-LDR genotyping Resultatene viste helt enig med de direkte DNA-sekvense resultater.
Statistiske analyser
Alle statistiske analyser ble utført ved hjelp av SPSS programvare versjon 16.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Å sammenligne de observerte genotypefrekvensene i kontrollgruppen med de forventede frekvensene ble Hardy-Weinberg likevekt (HWE) testet av en godhet-of-fit χ
2-test. Saker og kontroller ble sammenlignet med hensyn til demografiske kjennetegn, livsstilsfaktorer, og allelfrekvenser i hvert SNP med
χ
2
-test. For hver polymorfisme, ble odds ratio (OR) og 95% konfidensintervall (KI) beregnet med betinget logis regresjonsmodeller å anslå den viktigste effekten av hver polymorfisme med GC mens du justerer for kontinuerlige alder, kjønn og livsstilsfaktorer. Logis regresjonsanalyser med store allel som en referanse ble ansatt for å anslå justert Ors, 95% CIS, og
P
verdier. Men vi fant at kjønn og alder variabel ikke i samsvar med forutsetningen om proporsjonalitet. Dermed ble kjønn lagdeling og alders matching brukes til å måle ORS og 95% CIS. For livsstil variabler som viste signifikante sammenhenger med GC i analysene kontrollert for bare matchende faktorer, vi videre vurdert sin uavhengighet i analyser justert for flere potensielle confounders (dvs. røyking, drikking, salt mat, spise tid og spise frokost) i alders-matching befolkning. Og PHASE programvarepakke versjon 2.0 ble brukt til å utlede haplotype frekvenser basert på de observerte EGFR genotyper. Alle
P
verdiene var tosidig og en
P
verdi. 0,05 ble ansett som statistisk signifikant
Resultater
Kjennetegn på forsøkspersonene
Det som kjennetegner disse forsøkspersonene var i samsvar med tidligere beskrevet [17], [18]. I denne utredningen, ble den totale befolkningen med 387 tilfeller og 392 kontroller og en alderstilpasning befolkningen med 294 tilfeller og 294 kontroller som inngår i dagens analyser. Kjønn, alder og geografisk region fordeling av forsøkspersonene er vist i tabell 1.
For å undersøke forskjeller i GC insidens mellom menn og kvinner, ble fordelingen av utvalgte livsstilsvariabler analysert med kjønnsforskjeller. Resultatene viste at seks livsstilsfaktorer (dvs. regelmessig tar måltider, preferanse for salt mat, spise tid, røykestatus, drikking status, og spise frokost) var signifikant korrelert til risiko for GC, og deres effekter kan endres av kjønn og alder. Fire livsstilsfaktorer, dvs. preferanse for salt mat, spise tid, røykestatus og drikke status, var signifikant forskjellig mellom menn og kvinner (
P
0,05) (tabell 2). Det ble bemerket at prosentandelen av hannene bærer usunne kostvaner, slik som preferanse for salt mat, kort spise tid, røyking og drikking, var betydelig høyere enn hunnene (
P
0,05), som kan være som årsak av høyere forekomst hos menn enn hos dem som hos kvinner. I den totale befolkningen, redusert jevnlig tar måltider og spise frokost risikoen for kvinnelige GC, mens drikking kan øke risikoen for mannlige GC (tabell 3). I tillegg er både preferanse for salt mat og røyking økte risikoen for mannlige og kvinnelige GC (
P
0,05). Lignende resultater ble også funnet etter alderstilpasning som regelmessig tar måltider redusert risiko for GC og preferanse for salt mat og røyking økte risikoen for både mannlige og kvinnelige GC (
P
0,05, tabell 4). Men det var to unntak, som ble drikking økt risiko for mannlige GC (
P
0,05), men ikke kvinnelige GC (
P
0,05) kanskje på grunn av den begrensede kvinnelige befolkningen, mens daglig spiser frokost redusert risiko for kvinnelige GC (
P
0,05), men ikke mannlige GC (
P
0,05). (tabell 4)
Genotyping Distribusjon og risikoen for GC
i denne studien, ble bare T allel av missense locus rs28384375 oppdaget. Når det gjelder de seks gjenværende SNPs, de observerte genotypefrekvensene i kontrollene var i HWE. Siden ingen statistisk signifikans ble tapt, bare de justerte statistiske Resultatene er vist i tabellene. I den totale populasjonen ble foreningen mellom fordelingen av EGFR-genet alleler, genotyper og risiko for GC vist i tabell 5. Bare en liten forskjell ble observert i forhold til den alleliske fordeling av rs2072454 (
χ
2
= 3,844,
P =
0,050), og logistisk regresjon analyser avslørte at den variant av denne allel kan være forbundet med risiko GC (justert OR = 1,23, 95% CI = 1,00-1,50). Det ble imidlertid ingen signifikante forskjeller mellom saker og kontroller i form av allelet distribusjon observert med kjønnsforskjeller. Den rs2293347 polymorfisme var forbundet med mannlige GC tilfeller fordi 73,0% av GC tilfeller gjennomført en G-allelet sammenlignet med 29,5% av helsekontroller (justert OR = 6,45, 95% CI = 4,89 til 8,51,
P
0,001 ), men ingen genotyper var signifikant assosiert med risiko for GC. I motsetning kvinnelige befolkningen GA genotype kan redusere risikoen for kvinnelige GC grunn av 34,5% av GC tilfeller bærer en GA genotype sammenlignet med 38,9% av helsekontroller, men ingen signifikante forskjeller mellom fordelingen av allel og genotypefrekvensene (
P
0,05). I tillegg ble det ingen signifikante forskjeller undersøkt på de andre fire SNPs (
P
0,05), dvs. rs2227983, rs17337023, rs1050171 og rs1140475 mellom saker og styrer selv med kjønnsforskjeller
i alders-matching populasjonen ble foreningen mellom fordelingen av EGFR-genet alleler, haplotyper og risiko for GC vist i tabell 6. En signifikant forskjell ble observert i forhold til den alleliske fordeling (
χ
2
= 4,795,
P =
0,029) og genotype distribusjon (
χ
2
= 6,668,
P =
0,036) av rs2072454, annet enn resultatene i tabell 5. i tillegg analyser logistisk regresjon viste at varianten av rs2072454 T allel kunne øke risikoen for GC (justert OR = 0,77, 95% CI = 0,61 til 0,97;
P
0,05 ). Ifølge genotype distribusjon, ble en betydelig forskjell også observert i den mannlige befolkningen (
χ
2
= 7,914,
P =
0,019) snarere enn kvinnelige befolkningen (
χ
2
= 0,452,
P =
0,798). Men det var ingen signifikante forskjeller mellom saker og kontroller selv med kjønnsforskjeller for de resterende SNPs, nemlig rs2227983, rs17337023, rs1140475, rs1050171 og rs2293347 (
P
0,05).
for å utelukke miljøpåvirkning, undersøkte vi sammenhengen mellom de potensielle tre GC-relaterte SNPs og risiko for GC i alders-matching befolkningen bærer helse livsstil (tabell 7). En tydelig forskjell ble undersøkt i forhold til genotype fordelingen av rs2072454 (
χ
2
= 6,036,
P =
0,049). Spesielt, analyser logistisk regresjon viste at TT genotypen betydelig økt risiko for GC i befolkningen med daglig spise frokost (justert OR = 1,92, 95% CI = 1,07 til 3,44,
P
0,05).
Eksoner ikke bare koder for aminosyresekvensen til proteinet, men også inneholder sekvenser som påvirker oversettelse eller mRNA degradering [19]. Den loci ble kombinert og underkastet haplotype slutning analyse ved hjelp av fase 2,0-programmet. Det var fire mulige haplotyper i den totale befolkningen og tre mulige haplotyper i alders-matching befolkningen, med en frekvens på 4% (tabell 8, tabell 9). Sammenlignet med GTTGCG haplotype, analyser logistisk regresjon viste at ACAGCG haplotype var assosiert med en betydelig redusert risiko for GC (OR = 0,67, 95% CI = 0,49 til 0,92,
P
0,05 justert for alder, kjønn og livsstilsfaktorer) i den totale befolkningen (tabell 8) snarere enn den alders matchende befolkningen (OR = 0,83, 95% CI = 0,58 til 1,19,
P
0,05 justert for alder, kjønn og livsstil faktorer) (tabell 9). De andre haplotyper var assosiert med en betydelig redusert risiko for GC (justert OR = 0,69, 95% CI = 0,52 til 0,90 for den totale befolkningen, justert OR = 0,74, 95% CI = 0,56 til 0,99 for alders-matching befolkningen). Sammenlignet med ACAGCG haplotype, kunne ACAACG redusere risikoen for GC (OR = 0,61, 95% CI = 0,40 til 0,94 justert for alder, kjønn og livsstil) i den totale befolkningen, men
P
verdi gjorde ikke statistisk signifikans ved Bonferronikorreksjon (tabell 8).
Diskusjoner
Selv om et stort antall nye GC saker ble sett over hele verden i de siste tiår, eksakte mekanismene bak magekreftutvikling er ennå ikke fullt ut forstått. I likhet med tidligere forskning [20], [21], vår Resultatet viste at menn generelt har utviklet GC dobbelt så ofte som kvinner i Kina. Det ble foreslått av Michael
et al.
At mye av den globale variasjon i forekomsten av kreft har blitt tilskrevet miljømessige påvirkninger, inkludert kosttilskudd preferanser og usunn livsstil faktorer [22]. I denne studien, derfor var vi interessert i å teste om noen usunne livsstilsfaktorer kan øke risikoen for GC med kjønnsforskjeller i Kina. Seks livsstilsfaktorer, inkludert jevnlig tar måltider, preferanse for salt mat, spise tid, røykestatus, drikking status, og spise frokost, ble identifisert til å være påvirket risikoen for GC med kjønnsforskjeller, som var i samsvar med tidligere studier i Øst-Kina [20], [23], [24]. Spesielt preferanse for salt mat, drikking og røyking var de sterkeste og mest konsistente risikofaktorer for GC.
misliker forskere antydet at et høyt inntak av salt (natrium) kan øke risikoen for GC [21], [ ,,,0],24] – [26]. Det ble også dokumentert av vår observasjon at GC pasienter i Jiangsu-provinsen var preferanse for salt mat, for eksempel saltet kjøtt, syltede grønnsaker og syltede grønnsaker juice, som kan være forurenset av N-nitrosoforbindelser. Imidlertid, N-nitroso-forbindelser var den hyppigst foreslått i forbindelse med den økte risikoen for øvre gastrointestinal-kreft [27]. Drikking og røyking, ytterligere to dominerende risikofaktorer for GC i verden [28], ble også undersøkt i denne studien. Vi fant en signifikant sammenheng mellom drikking og GC risiko i Jiangsu-provinsen. Det var bevis ved et laboratorium studie at røyking kan øke apoptose i rottemageslimhinne ved en økning i XO aktivitet [29], og alkoholen kan også øve innflytelse på syreutskillelse, gastrisk tømming, og visse syrerelaterte sykdommer, så som gastritt sammen med skade på mageslimhinnen, og den følgende inflammatorisk reaksjon vil i sin tur fremme gastrisk celleproliferasjon og differensiering [30]. Ved fremgangsmåten kan de N-nitroso-forbindelser og mykotoksiner fra litt salt mat indusere genmutasjoner [31], [32], således preferanse for salt mat, kan være den opprinnelige risikoen for GC. Og bevis pekte på en sammenheng med trasé som er involvert i utviklingsprosesser [33]. Nøkkel molekyler av disse banene var de reseptor-tyrosin-kinaser, som ble funnet å være avvikende aktivert eller overuttrykt i mange tumorer og representerer derfor lovende mål for terapeutisk intervensjon [13].
EGFR var en av de viktigste molekylene , og mange linjer av bevis tyder på at meget inngripende GC er forbundet med avvikende aktivering eller overaktivering av EGFR grunn av genamplifikasjon eller strukturelle forandringer [13]. Ganske nylig, en case-control studie av 61 saker og 20 kontroller i Henan-provinsen, som ligger i midten Kina, viste at EGFR rs28384375 C /T polymorfi kan fremme forekomst og utvikling av GC [34]. Videre er et annet case-control studie av 138 tilfeller og 170 kontroller i Jiangxi-provinsen, som ligger i sør-øst Kina, avslørte at EGFR rs763317 G /A polymorfisme kan assosiere med en økt risiko for GC [35].
EGFR er en vekstfaktor-reseptor-tyrosinkinase og representerer reseptor-tyrosin-kinase-superfamilien, hvis medlemmer er kjennetegnet ved et ekstracellulært domene (hvor ligand-bindende ligandene finner sted), et kort lipofil transmembrandomene og et intracellulært domene som havner tyrosin-kinase aktivitet [36]. EGFR kan aktiveres ved å binde ligander, slik som EGF og TGF-α, og den spiller sentral rolle i utvikling, proliferasjon og differensiering. Aktiveringen av EGFR kan bidra til transformasjon av cellulære fenotyper og gi tumorceller med betydelig vekst og overlevelse fordeler [37]. Mange menneskelige svulster vise EGFR overekspresjon, som er korrelert med en avansert tumor stadium eller en dårlig klinisk utfall, slik som ikke-småcellet lungekreft [38], tykktarmskreft [39], brystkreft [40], hode og nakke kreft [ ,,,0],41], blærekreft, [42], og GC [43].
det er nå en økende interesse i SNP mutasjoner i EGFR, gitt at de kan påvirke effekten av EGFR-tyrosinkinase-inhibitor (TKI) behandling i forskjellige kreft [44], tykktarmskreft [39], ikke-småcellet lungekreft [45], GC [46] – [49]. Det er velkjent at exoner ikke bare koder for aminosyresekvensen til proteinet, men også inneholder sekvenser som påvirker oversettelse eller mRNA degradering [19]. Således kunne EGFR ekson SNP’er påvirke EGFR-genekspresjon og /eller proteinaktivitet og derved forandre affiniteten av EGFR for ikke bare dets ligander, men også for anticancermidler som er rettet mot dette protein. Faktisk Puyo
et al.
Funnet at mutasjoner i exon 18-21 av EGFR øke aktiviteten av TKI, mens delesjonen av exoner 2-7 er forbundet med glioblastom onkogenese [49]. Videre to kliniske studier viste at SNPs i EGFR eksoner 18, 19, 21, og 25 påvirker den kliniske effekten av gefitinib, og kan være potensielle biomarkører for prediksjon av det kliniske utfallet av gefitinib-behandlede pasienter med avansert ikke-småcellet lungekreft (NSCLC) [50], [51].
i denne studien, de seks eksoner SNPs i EGFR ble litt forbundet med risiko for GC både i den totale befolkningen og alders-matching befolkningen selv med kjønn forskjeller. Det ble bemerket at de SNP rs2072454 var signifikant assosiert med risiko for GC. Spesielt ble det variant rs2072454 T-allel og TT genotype forbundet med en økt risiko for GC. Imidlertid gjorde de rs2227983, rs17337023, rs1050171 og rs1140475 SNPs ikke forholde seg med GC risiko. Med hensyn til den missense locus rs28384375, ble bare den T-allelet påvist i kasser og kontroller. Mange rapporter antydet at flere EGFR SNP’er, inkludert rs2227983 (også betegnet som Arg521Lys eller R497K) [39], [52], [53], rs1050171 (også betegnet som Q787Q) [54], [55] og rs2293347 (C2982T) [ ,,,0],56], ble det mer sannsynlig å påvirke den biologiske oppførsel av tumorer (slik som tumorvekst, invasjon, metastase, progresjon og) enn for å definere mottakelighet for kreftutvikling. Siden EGFR, en viktig formidler av angiogenese kan regulere sine mål gener som VEGF, som kan direkte påvirke svulst biologisk atferd. Resultatene ville også forklare hvorfor EGFR SNP’er kan tjene som viktige determinanter av en respons på EGFR-TKI-kjemoterapi [11]. Derfor kan disse genmutasjoner konferere kompleksiteten og forlegenhet for GC behandling og overlevelse [57].
Når Puyo
et al
. [49] analysert sammenhengen mellom spesifikke EGFR funksjonelle polymorfismer og kreft narkotika aktivitet i 60 humane tumorcellelinjer fastsatt av National Cancer Institute, frekvensen på nonsynonymous SNP rs28384375 (også betegnet som Val592Ala) var 0,5, mens heterozygote frekvensen av -216G T SNP (også betegnet som rs287129) var 0,346. Cellelinjene som var heterozygote og variant homozygot for det -216 G T SNP viste signifikant høyere ekspresjon av EGFR-genet enn de homozygote villtype linjer. Videre, sammenlignet med cellelinjer uten en variant allel, cellelinjer med i det minste en variant T allel på -216 G T SNP var mer følsomme overfor erlotinib og mindre følsom for geldanamycin, topoisomerase I og II inhibitorer, og alkyleringsmidler. Interessant, våre resultater viste at GTTGCG haplotype var mer vanlig i GC tilfeller enn i kreft-frie kontroller, og at ACAGCG haplotyper ble assosiert med en signifikant redusert risiko for GC (justert OR = 0,67, 95% CI = 0,49 til 0,92 for ACAGCG, justert OR = 0,69, 95% CI = 0,52 til 0,90 for andre) i den totale befolkningen (tabell 8). Men i en alder-matching befolkningen, ble ingen signifikant sammenheng undersøkt mellom ACAGCA haplotype og risiko for GC (justert OR = 0,83, 95% CI = 0,58 til 1,19) (Tabell 9). Således kan det hende at T lene for rs2072454 og rs17337023, særlig den førstnevnte, være forbundet med risiko for GC. Derfor kan kombineres analyse av de seks SNPs, spesielt T lene av rs2072454 og rs17337023, være nyttig for å forutsi risikoen for GC
Flere begrensninger i denne studien må tas opp. 1) sin utvalgsstørrelsen kan ikke ha vært store nok til å detektere SNP’er med lav variant frekvens, slik som rs28384375; 2) polymorfismer som ble undersøkt i dette studiet ble valgt på grunnlag av deres effekter på EGFR-funksjon, og kan ikke gi en omfattende oversikt av den genetiske variasjon i EGFR exoner; 3) detaljert informasjon om GC tilfellene ble ikke samlet, inkludert pasient overlevelse, om svulstene var tarm eller diffuse typen, om det var metastaser, og hva effekten av medikamentell behandling var.
I konklusjonen, studien antydet at forskjeller i livsstil mellom menn og kvinner kan være som årsak av høyere forekomst hos menn enn hos dem som hos kvinner. Selv om bare én SNP (rs2072454) var signifikant assosiert med en økt risiko for GC, kombinert analysere de andre seks EGFR exon SNP’er sammen kan være nyttig for å forutsi risikoen for GC. Videre studier er garantert å etablere disse funnene, og for å løse de underliggende mekanismene.
Hjelpemiddel Informasjon
Figur S1. Bedrifter Den fluorescerende produkter av LDR ble differensiert etter ABI sequencer 377 for de syv SNPs i EGFR eksoner. Totalt ble mer enn 90% av produktene vellykket differensiert etter ABI sequencer 377.
doi: 10,1371 /journal.pone.0059254.s001 plakater (TIF)
Tabell S1.
PCR primer sekvenser for sju loci i EGFR-genet. Primerne ble designet av Primer Premier seks programvare og syntetisert av Shanghai Sangon biologiske Engineering Technology and Services
doi:. 10,1371 /journal.pone.0059254.s002 plakater (DOC)
Tabell S2.
probe sekvenser av de syv SNPs i EGFR-genet. Primerne ble syntetisert ved Shanghai Sangon biologiske Engineering Technology and Services
doi:. 10,1371 /journal.pone.0059254.s003 plakater (DOC)
Takk
Vi erkjenner Master Jingye Wang og Haixia Xu for hjelp med DNA.
