Abstract
preoperativ diagnostikk av eggstokkene svulster stole på ultralydavbildning og serum biomarkører CA125 og HE4. Imidlertid kan disse markørene være forhøyet i ikke-neoplastiske tilstander, og kan mislykkes i å identifisere de fleste ikke-serøse epiteliale kreft subtyper. Målet med denne studien var å identifisere histotype spesifikke serum biomarkører for mucinous eggstokkreft. Kandidatgener med mucinous histotype spesifikke uttrykk profilen ble identifisert fra offentlig tilgjengelige gen-uttrykk databaser og videre i silico data mining ble utført utnytte MediSapiens database. Kandidat biomarkør validering ble gjort ved hjelp QRT-PCR, western blotting og immunhistokjemisk farging av tumorvev mikromatriser. Ekspresjonsnivået av kandidaten genet i serum ble sammenlignet med serum CA125 og HE4 nivåer i en pasient kohort av prospektivt oppsamlet fremskreden kreft i eggstokkene. Databasesøk identifisert REG4 som en potensiell biomarkør med spesifisitet for mucinous eggstokkreft subtype. Den spesifikke uttrykk innenfor epiteliale ovarietumorer ble ytterligere bekreftet av mRNA-analyse. Immunhistokjemisk farging av eggstokkene svulstvev arrays viste karakteristiske cytoplasmatiske uttrykk mønster bare i mucinkjertler karsinomer og foreslo differensial uttrykk mellom godartede og ondartede mucinkjertler svulster. Til slutt, en ELISA basert serum biomarkør analysen vist økt uttrykk bare hos pasienter med mucinous eggstokkreft. Denne studien identifiserer REG4 som en potensiell serum biomarkør for histotype-spesifikk påvisning av mucinous eggstokkreft og foreslår serum REG4 måling som en ikke-invasiv diagnostisk verktøy for postoperativ oppfølging av pasienter med mucinous eggstokkreft
Citation.: Lehtinen L, Vesterkvist P, Roering P, Korpela T, Hattara L, Kaipio K, et al. (2016) REG4 uttrykkes sterkt i mucinous Ovarian kreft: en potensiell Novel Serum Biomarker. PLoS ONE 11 (3): e0151590. doi: 10,1371 /journal.pone.0151590
Redaktør: Kwong-Kwok Wong, The University of Texas MD Anderson Cancer Center, UNITED STATES
mottatt: 19 november 2015; Godkjent: 01.03.2016; Publisert: 16 mars 2016
Copyright: © 2016 Lehtinen et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. All relevant data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering:. Denne studien ble støttet av Sigrid Juselius Foundation, https://www.sigridjuselius.fi/foundation, til LL, TK, KK; Finsk Kreftforeningen, https://www.cancersociety.fi/grants/, til LL, PR, TK, KK; Turku universitetssykehus forskningsfond, https://www.vsshp.fi/en/toimipaikat/tyks/Pages/default.aspx, til LL, PR, KK; European Regional Development Fund (A31859), https://ec.europa.eu/regional_policy/EN/funding/erdf/, til LL, PR, KK, PV, LH, KI, HS, OC. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
ovarialcancer (EOC) er den mest dødelige gynekologisk kreft [1]. Selv om nye behandlingsmetoder har forlenget overlevelse i løpet av de siste tiårene, har den samlede prognosen ikke bedret [2,3]. De symptomer som magesmerter, økt magestørrelse, oppblåsthet eller kvalme, er ofte uspesifikke før sent i sykdomsprogresjon, noe som fører til forsinket diagnose. De fleste pasienter er diagnostisert på et avansert stadium og behandles med kirurgi kombinert med platina-taxan kjemoterapi. EOC består av seks hoved histologiske undergrupper (histotypes); lavgradig serøs karsinom (LGSC), høyverdig serøs karsinom (HGSC), klarcellet karsinom (CC), endometrioid karsinom (EF), mucinous karsinom (MC) og overgangsordning celle carcinoma (TC) med forskjellige genetiske profiler, biologisk atferd og utfall.
diagnosen eggstokkreft er avhengig av kliniske funksjoner, ultralydavbildning og serum biomarkør Cancer antigen 125 (ca125). I tillegg kan de nye serum biomarkør menneske bitestikkelen 4 (HE4) bringe ytterligere informasjon i differensialdiagnostikk av kvinner med bekken masse [4]. Disse biomarkører, men er ikke helt pålitelig for diagnostisering ikke serøs histotypes. CA125 verdier har vist seg å være lavere for pasienter med MC sammenlignet med pasienter med SC [5,6]. Siden diagnosen ikke kan være basert på dagens serum biomarkører, i de fleste tilfeller riktig diagnose er bare avdekket ved kirurgiske inngrep. Globalt mucinkjertler karsinom står for ~ 11% av EOC [7]. Selv om prognosen er vanligvis gunstig, i noen tilfeller karsinomer gjenta seg og fremgang offensivt [8,9]. Videre har mucinkjertler ovarietumorer vist seg å ha lavere svarprosenten til platina-basert kjemoterapi sammenlignet med HGSC [5,6]. Et økende antall studier viser at ulike eggstokkreft histotypes bør betraktes som forskjellige sykdommer, og derfor krever forskjellig behandling [10]. Ikke-invasive diagnostiske metoder, slik som histotype skille serumprøver, kan være verdifulle for optimalisering av behandlingsstrategi før operasjonen.
Denne studien tar sikte på identifisering av mucinous histotype spesifikke serum biomarkører for eggstokkreft. Basert på
i silico
analyser, studerte vi uttrykk for Regenerating Islet-Avledet Protein IV (REG4) i et sett med mucinkjertler eggstokkreft vev, pasientsera og ascitesvæsker. I tillegg ble REG4 konsentrasjon målt i en tidsserie av serumprøver for å bestemme korrelasjonen til tumorbyrde. Videre undersøkte vi CA125, HE4 og REG4 i de samme prøvene for å sammenligne sine resultater.
Materialer og metoder
I silico
data mining
MediSapiens database (www.medisapiens.com) ble anvendt for å studere genekspresjon nivåene på tvers av alle normale og neoplastiske humane vev [11]. Prøvene som er inkludert i denne databasen har blitt analysert på Affymetrix plattformen, og på grunn av de unike normaliserings og datakvalitet verifikasjoner, kan genekspresjonsprofiler innsamlet fra ulike studier bli kombinert for å generere en oversikt av uttrykket profilen i humant vev. Dataene fra normal eggstokk (n = 10) og eggstokkreft prøver (n = 288) tilgjengelig i MediSapiens databasen ble benyttet i vev bestemt uttrykk analyse.
Klinisk materialet
studier med klinisk materialet er utført i samsvar med de etiske normer nedfelt i 1975 Helsinkideklarasjonen. Den eggstokkvev microarray (TMA) ble konstruert fra kirurgiske prøver innsamlet fra vevet arkiv av Avdeling for patologi, Turku Universitets Central Hospital som tidligere beskrevet [12]. Bruken av prøvene ble godkjent av Den etiske komiteen av Hospital District of Egentliga Finland. Pasientserum og en del av de frosne tumorvev Prøver ble samlet fra pasienter som er behandlet ved Turku universitetssykehuset. Serumprøvene omfattet både behandlingsnaive preoperative prøver og lengdeprøver under behandlingen. Bruken av all klinisk materiale ble godkjent av etikkomiteen av Hospital District of Egentliga Finland (ETMK, 53/180/2009 § 238) og den nasjonale tilsynsmyndighet for velferd og helse (Valvira, DNRO 6550 /05.01.00.06 /2010 og STH507A). Tilleggs Dypfryst mucinous ovarial tumor materiale ble hentet fra Oslo Universitetssykehus, Norge. Studier godkjenning ble gitt av Regional komité for medisinsk forskningsetikk i Norge og informert samtykke ble signert av norske pasienter.
Tissue microarray og immunhistokjemi
TMA inneholdt 185 prøver fra 100 pasienter med eggstokkreft svulster ; serøs cystadenomas (n = 16), serøs borderline tumorer (n = 27), serøs karsinom (n = 47), mucinkjertler cystadenomas (n = 14), mucinkjertler karsinom (n = 36), endometroide karsinom (n = 45). Den TMA var farget med muse-monoklonalt antistoff REG4 [13], som beskrevet [14]. REG4 farging ble uavhengig evaluert av to etterforskere (TK og OC); i tilfelle disconcordance en konsensus poengsum ble brukt for videre evaluering.
Kvantitativ RT-PCR
Total RNA ble ekstrahert fra frosne eggstokkene tumorprøver (10 mg stykke) og primærceller ved hjelp RNeasy Mini kit (Qiagen) ifølge produsentens protokoll og behandlet for å cDNA (Applied Biosystems, Foster City, CA). TaqMan prober ble kjøpt fra Universal Probe Library (Roche Diagnostics, Espoo, Finland) og primere ble bestilt fra oliqomer (Helsinki, Finland) for REG4 (forover: atgcggctgctcctattg; omvendt: taaaaccatccaggagcaca) og GAPDH (forover: tggctctaccttagaaccctga; omvendt: ttttgctctttgccgtacct) . Real-time kvantitativ RT-PCR (QRT-PCR) ble utført med ABI Prism 7900 (Applied Biosystems). Kvantifisering ble utført med RQ leder 1.2 programvare ved hjelp av
ΔΔCT metode (Applied Biosystems). Tre eller flere gjentatte prøver ble benyttet for å studere mRNA-ekspresjon av REG4 og GAPDH. Gjennomsnitt ekspresjon av kontrollprøvene ble ansett for beregning av brette endringer og GAPDH ble anvendt som en endogen kontroll. Tre eller flere gjentatte prøver ble undersøkt for påvisning av mRNA-ekspresjon. Statistisk signifikans ble bestemt med t-test, og p-verdier 0,05 ble ansett som statistisk signifikant.
Western blotting
For proteinlysatene, ca 20 mg stykker ble kuttet fra frosne svulster og lysert med sonikering i RIPA lysebuffer. Protein konsentrasjoner ble målt ved hjelp av BioRad proteinanalysesett i henhold til produsentens instruksjoner (Bio-Rad Laboratories, CA). Prøver ble fremstilt å blande passende mengder av protein lysatet med 5 x Laemmli-buffer og kokt i 5 minutter. Like mengder av protein (20 pg) ble separert på 15% SDS-PAGE-gel og overført til nitrocellulosemembran (pore bredde 0,2 um). Lik lasting ble bekreftet med Ponceau farging. Membranene ble blokkert med 5% melk-TBST og probet med polyklonalt REG4 antistoff (1: 1000, AF1379, R 0,001, figur 1C). Med andre eggstokkreft histotypes,
REG4
mRNA uttrykk holdt seg på nivået av friskt vev
(A) Ondartede vev med høy REG4 mRNA uttrykket (exp verdi .. 500, n = 14 ). (B) REG4 mRNA-ekspresjon i tilsvarende friskt vev (hvis tilgjengelig, n = 8). (C) En detaljert analyse av REG4 mRNA-ekspresjon hos friske og maligne eggstokk vev. Boksen viser til kvartil distribusjon (25-75%) rekkevidde, med median vist som en vertikal linje (grønn hos friske prøver, rød i ondartet). Data observasjoner som ligger mer enn 1,5 * inter-kvartil range høyere enn i tredje kvartil, regnes som uteliggere og indikert separat.
REG4 er sterkt uttrykt i tumorprøver hentet fra mucinous eggstokkreft
i silico
analyse indikerte bestemt uttrykk for
REG4
mRNA i mucinous histotype av ovarietumorer. For å validere disse dataene,
REG4
mRNA og protein uttrykk ble undersøkt i prøver fra mucinous (MUC) og høyverdig serøs (SER) ovarietumorer.
REG4
mRNA uttrykk ble undersøkt med QRT-PCR ved hjelp av mRNA fra serøs svulster som negativ kontroll. Resultatene er oppsummert i figur 2A. Den REG4 mRNA viste høy samlet uttrykk i mucinkjertler karsinom (MUC_C_4-10, fig 2A) mens ingen uttrykk ble påvist i høy grad serøs tumorer (SER_1-3). Interessant,
REG4
ble ikke uttrykt i mucinous cystadenoma (MUC_A_1) og viste betydelig lavere mRNA uttrykk nivåer også i mucinkjertler borderline tumorer (MUC_B_2-3). REG4 protein ekspresjon i det samme settet av tumorprøver ble vurdert med western blotting. Resultatene indikerte høy REG4 protein nivåer i
REG4
mRNA positive tumorer (figur 2B). Totalt sett REG4 protein uttrykk var enten svært høy eller svært lav i disse prøvene, mens mRNA-analyse også identifisert prøver med middels eller lav uttrykk. Disse resultatene validere funnene i
i silico
analyse og indikerer at REG4 uttrykk er spesifikk for mucinous eggstokkreft histotype.
(A) Kvantitativ RT-PCR analyse av REG4 mRNA uttrykk i serøs karsinom (SER_C), mucinkjertler cystadenomas (MUC_A), mucinkjertler borderline tumorer (MUC_B) og mucinkjertler karsinomer (MUC_C). (B) Western blot-analyse av REG4 protein ekspresjon i det samme sett av prøver. Den totale proteininnholdet i hver prøve var 20 mikrogram og lik belastning ble bekreftet med ponceau farging.
REG4 uttrykkes ved slimlignende celler av ondartet mucinkjertler ovarietumorer
REG4 uttrykk mønster ble undersøkt i TMA inneholder kliniske prøver fra ovarietumorer med forskjellige histotypes. Resultatene er oppsummert i tabell 1 og på figur 3. Concurring med de foregående analysene, ble ingen farging detektert i serøs (n = 90) eller endometrioid neoplasmer (n = 45), mens positive REG4 farging ble funnet i 83% (30 /36) av mucinkjertler karsinomer. Dette indikerer at REG4 uttrykk er spesifikk for mucinous histotype. I alle REG4 positive prøver fargingen var veldig sterk. De mucinkjertler vevsprøver ble bekreftet å være av primær eggstokktumor opprinnelse ved å undersøke lengde elektroniske journalinformasjon fra hver pasient med særlig henvisning til tidligere diagnoser, diagnostiske undersøkelser og laparotomi status, så vel som med CK7 /CK20 farging. Den TMA inneholdt også prøver av godartede mucinkjertler cystadenomas (n = 14). Viktigere var det ingen ekspresjon REG4 påvist i disse prøvene. Korrelasjon av flekker resultater med pasientdata viste ingen sammenslutning av REG4 uttrykk for annet enn mucinous histotype. Sterk REG4 farging ble oppdaget like ved lav og høy klasse mucinkjertler karsinomer. Nærmere undersøkelse av REG4 fargemønster viste den sterkeste flekker på innsiden og mellom mucinkjertler slutninger av slimaktige tumorceller. Videre REG4 ble lokalisert utelukkende på den apikale overflate av tumorcellene, mens stroma var negativ.
Immunohistokjemisk farging av REG4 i en TMA av maligne ovarian vev. Eksempler på serøs karsinom (AB), endometrioid karsinom (CD) og mucinous karsinom (EF) presenteres.
Utskilt REG4 kan oppdages fra serum og ascites av mucinkjertler kreftpasienter
for å analysere potensialet for REG4 som et serum biomarkør for mucinous eggstokkreft, brukte vi en REG4 bestemt sandwich-ELISA-analysen. Prøvene tatt sera og ascitesvæske fra pasienter med serøs eller mucinkjertler ovarietumorer. Detaljert beskrivelse prøven og resultatene er presentert i Tabell S2. Serumprøver ble tatt før (pre-operative) og etter (post-operative) kirurgi ved flere tidspunkter i løpet av oppfølgingen. Ascitesvæske ble samlet under operasjonen. For å vurdere spesifisiteten av REG4 for mucinous eggstokkreft histotype, analyserte vi CA125, HE4 og REG4 konsentrasjoner fra preoperative serumprøver av eggstokkreft pasienter med serøs (n = 4) eller mucinous (n = 3) kreft høyverdig. Alt preoperative sera var fra pasienter med disseminert (stadium III-IV) sykdom. Resultatene er vist i figur 4A. For å være i stand til å direkte sammenligne ELISA-analyser med forskjellige måleenheter, er resultatene presentert som fold-endring (FC) av det respektive malignitet som indikerer cut-off verdi (35 kU /l for CA125 og 150 pM for HE4 ). De valgte cut-off verdier er basert på gjeldende anbefalinger. Numeriske verdier er presentert i Tabell S2. For REG4 cut-off-verdien ble innstilt på 2 ug /l basert på den høyeste konsentrasjonen REG4 oppnås fra friske menn og et større sett av ikke-mucinkjertler serum-kontroller (S3 Table). En FC verdi 1 er ansett som et positivt resultat tankevekkende for malignitet,
i
.
e
. høyere markør konsentrasjon enn normalt tilstede hos friske individer. FC verdier ≤ 1 anses som et negativt resultat. Den brukte serum biomarkører CA125 og HE4 viste forhøyede konsentrasjoner i serum med høy grad av serøs kreftpasienter (FC 1), mens REG4 konsentrasjonen forble under cut-off-verdien (FC 1) (figur 4A). I sera hos mucinkjertler kreftpasienter, er konsentrasjonen av CA125 og HE4 forble lav. I disse tre prøver den REG4 nivå var 10-70 ganger over cut-off-verdi. Selv om mengden av prøvene var lavt, indikerer disse resultatene at REG4 er spesifikk for mucinkjertler typen tumorer og kan påvises ved høye konsentrasjoner i sera av pasienter med disseminert mucinous kreft. I tillegg til serumprøver, ble REG4 konsentrasjon målt fra cellefrie ascitesvæsker fra to pasienter med mucinkjertler tumorer (M1 og M2, S2 tabell). Begge prøver var positive (33 pg /ml og 187 pg /ml, henholdsvis) for REG4 protein indikerer at mucinkjertler tumorceller utskiller REG4 også til ascitesvæsken.
(A) ELISA-analyse av REG4 proteinkonsentrasjon i sera av pasienter diagnostisert med serøs (SER) eller mucinkjertler (MUC) eggstokkene karsinomer. (B) REG4 proteinkonsentrasjoner i en serie av pre- (dag -1) og postoperative serumprøver fra en pasient diagnostisert med mucinous karsinom.
For å bestemme korrelasjonen av REG4, CA125 og HE4 konsentrasjoner til tumorbyrde, serumprøver ble målt på flere tidspunkter fra en pasient (M1) behandlet for disseminert mucinous karsinom (se S4 tabell for detaljerte resultater). Resultatene (FC av cut-off-verdi, figur 4B) viste at den høye konsentrasjon av REG4 (FC = 73,6) som detekteres i den preoperative prøven (dag 0) falt raskt etter kirurgi (dag 13; FC = 4,9) og holdt på en lavt nivå riktignok høyere enn cut-off-verdien 2 ug /l. Konsentrasjonen av CA125 angitt malignitet i de første tre tidspunkter (47 kU /l, 67 kU /l og 43 kU /l, henholdsvis) hvoretter den falt under cut-off-verdi på 35 kU /l, mens nivåene av HE4 forble under cut-off-verdien på 150 pM i alle prøver. Dette tyder på at REG4 konsentrasjonen korrelerer til tumorbyrde bedre enn CA125 eller HE4 i mucinous eggstokkreft. Mens CA125 måling indikert kreftform i preoperative prøven, mislyktes HE4 måling for å påvise tumor i serumprøver.
diskusjon
Ovarian neoplasmer varierer i deres genetiske profiler, biologisk oppførsel og utfall, og bør behandles som distinkte sykdommer allerede under kirurgiske inngrep. Således er en spesifikk preoperativ diagnose avgjørende for valg av optimal behandlingsstrategi. Foreløpig er det ingen metoder for preoperativ diskriminering av eggstokkreft subtyper og spesifikk diagnose er nådd bare ved perioperativ frosne delen eller postoperativ histopatologisk analyse. Her foreslår vi REG4 som en lovende serum biomarkør for å skille mucinkjertler kreft fra andre ovarialcancer subtyper. Ifølge våre resultater, kan serum REG4 analyse også ha potensial for differensiering mellom godartede og ondartede mucinkjertler svulster og for oppfølging av mucinkjertler kreftpasienter på eggstokkene.
Den spesifikke mucinous avstamning uttrykk for REG4 innen eggstokkene svulster ble demonstrert av flere måter. Den første bevis ble hentet fra
i silico
analyser, som indikerte svært spesifikke mRNA uttrykk profilen til REG4 i mucinkjertler kreft blant ulike eggstokkene tumor subtyper. REG4 uttrykk ble ytterligere validert med QRT-PCR og Western blotting fra Dypfryst eggstokkene tumor vevsprøver som stammer fra serøse og mucinkjertler subtyper. Som forventet, basert på
i silikoaluminofosfater
data, REG4 ble sterkt uttrykt bare i maligne mucinkjertler ovarietumorer. Endelig immunhistokjemisk farging av en svulst vev microarray består av 185 kreftkjerner fra godartede og ondartede serøs, endometroide og mucinkjertler svulster bekreftet begrenset uttrykk i mucinous avstamning. Interessant nok ble det ikke REG4 ekspresjon detektert i mucinkjertler cystadenomas tyder på at immunhistokjemisk analyse REG4 kunne brukes som en tilleggsmetode for å skille mellom godartede og ondartede mucinkjertler ovarietumorer. Alle mucinkjertler prøvene ble bekreftet å være av primær ovarial tumor opprinnelse. Vår prøvesett ikke inneholde eksemplarer av de mer sjeldne typer mucinous ovarialcancer; slik som endocervikale /seromucinous eller foveolar typer. Derfor, for å fastslå den sanne potensialet i REG4 som en immunhistokjemisk markør, tilleggsanalyser med bredere spekter av ulike typer prøver er nødvendig.
serum biomarkører CA125 og HE4 brukes for eggstokkreft diagnostikk og følge opp. Disse markørene hovedsakelig detektere serøse-kreft [4,18,19], men er upålitelige for diagnose av ikke-serøse histotypes, spesielt mucinous undertypen [20,21]. Her sammenlignet vi serumprøver fra pasienter med høyverdig serøs eller mucinous eggstokkreft. Våre resultater underbygge med tidligere studier siden i vårt utvalg satt både CA125 og HE4 ble signifikant forhøyet i preoperative serumprøver av serøs karsinom pasienter, men holdt seg lav i mucinkjertler karsinomer. I kontrast, i alle tre mucinkjertler kreftpasienters sera, ble REG4 nivå forhøyet mer enn ti ganger i løpet av den høyeste verdien av kontrollsera. Serum REG4 nivået ble ikke forhøyet i en hvilken som helst av de serøse kreftpasientserumprøver. Dermed kan en kombinasjon av REG4 med CA125 og HE4 gi en mer helhetlig markør panel for preoperativ diagnose av potensielt neoplastiske eggstokkene massene, og gjøre det mulig forskjellsbehandling av mucinous eggstokkreft fra andre eggstokkreft histotypes. Men som noen ondartede svulster ikke viste positiv REG4 farging, vi kan ikke utelukke at en brøkdel av mucinkjertler kreft kan forbli påvises i serum REG4 analyse. Siden vår serumprøve samling var begrenset, er videre analyser for å fullt ut bestemme hvilken rolle REG4 serum måling som en pre-operative metode for mucinous eggstokkreft diagnose.
REG4 har tidligere blitt antydet som et serum biomarkør i mage , colorectal og prostatakreft [22-24]. Således kan REG4 serum analyse alene ikke være i stand til å skille mellom primær mucinous eggstokk-kreft og eggstokk-metastaser som stammer fra mage-tarmkanalen. På den annen side kan tilsetning av REG4 analyse fra serum på siden av CA125 og /eller HE4 tilveiebringe en mulighet for postoperativ oppfølging av mucinkjertler kreftpasienter ovarian med en bekreftet diagnose. Indikasjon for dette kom fra en langsgående serie av serumprøver fra en pasient med mucinous kreft. I denne pasienten ble høy preoperativ serum REG4 konsentrasjonen reduseres raskt etter operasjonen og holdt seg lav i løpet av begivenhetsløs oppfølgingsperiode. For å få klart bevis på nytten av serum REG4 i sykdomskontroll, bør imidlertid flere pasienter med langsgående serumprøver testes.
Funksjonen REG4 i eggstokkreft er dårlig forstått, og har ikke vært mye undersøkt. En fersk studie antyder at REG4 modulerer spredning, apoptose, migrasjon og invasjon av eggstokkreft celler, og har en viktig rolle i tidlig eggstokkkreftutvikling [25]. Denne studien rapporterer også immunhistokjemisk farging av REG4 fra ulike eggstokkreft subtyper. Serum REG4 verdier ble ikke kvantifisert i noen eggstokkreft subtyper. I motsetning til våre resultater, positiv REG4 farging (fra svak til sterk) ble også funnet i serøs prøver. I vårt materiale REG4 proteinekspresjon var enten meget høy eller meget lav, og ingen mellomliggende farging ble observert. Men QRT-PCR analyse av REG4 mRNA uttrykk fra Dypfryst mucinkjertler ovarietumorer identifisert prøver med middels eller lav uttrykk, men ingen uttrykk ble påvist i prøver fra serøs ovarietumorer. Dette kan skyldes forskjeller i antistoff spesifisitet og skalering av flekker styrke.
I konklusjonen, identifiserte vi REG4 som en potensiell biomarkør for subtype spesifikk diagnose av mucinous eggstokkreft, samt for sykdom oppfølging. I henhold til våre resultater REG4 proteinet blir utskilt inn i sirkulasjonen ved mucinkjertler ovarietumorceller og kan påvises med et ELISA-basert test. Vi målte tre biomarkører fra pasientsera; CA125, HE4 og REG4 og funnet høye konsentrasjoner av REG4 i preoperative prøver av mucinkjertler kreftpasienter på eggstokkene, mens CA125 og HE4 ikke klarte å overbevis oppdage kreft i disse prøvene. Vår studie tyder på at å kombinere REG4 med ca125 og HE4 kan gi merverdi for preoperativ diagnostikk av eggstokkene masser av potensiale neoplastisk opprinnelse, og gjøre det mulig forskjellsbehandling av mucinous eggstokkreft fra andre eggstokkreft undergrupper med ikke-invasive metoder.
Hjelpemiddel informasjon
S1 Table. Gener med mucinous spesifikke uttrykk profil i kliniske eggstokkreft prøver
doi:. 10,1371 /journal.pone.0151590.s001 plakater (XLSX)
S2 Table. Detaljert sample beskrivelse og resultater av ELISA-analysen
doi:. 10,1371 /journal.pone.0151590.s002 plakater (docx)
S3 Table. REG4 cut-off verdi er satt basert på den høyeste REG4 konsentrasjon hentet fra friske menn og et større sett av ikke-mucinkjertler serumkontroller
doi:. 10,1371 /journal.pone.0151590.s003 plakater (docx)
S4 Table. Detaljerte resultater fra serum ELISA-analyser på flere tidspunkter fra en pasient
doi:. 10,1371 /journal.pone.0151590.s004 plakater (docx)
S1 Fig. .
I Silico
analyse av
REG4
mRNA uttrykk i MediSapiens database over ondartede menneskelige vevsprøver (n = 15392)
doi: 10,1371 /journal.pone.0151590.s005
(PDF)
S2 fig. .
I Silico
analyse av
REG4
mRNA uttrykk i MediSapiens database over sunne menneskelige vevsprøver (n = 3082)
doi: 10,1371 /journal.pone.0151590.s006
(PDF)
takk
Vi ønsker å takke Sinikka Kollanus og Piia Mikkonen for utmerket teknisk assistanse. Doctor Kaisa Huhtinen takkes for veiledning i data-analyse.
