Abstract
Bakgrunn
Tumor nekrose faktor- α (TNF-α) spiller en avgjørende rolle i utvikling og progresjon av magekreft. En funksjonell polymorfisme, -308 G A (rs1800629), som ligger i promoteren
TNFa
-genet, har blitt foreslått for å endre produksjon av TNF-α og påvirke kreftrisiko. I denne studien, forsøkte vi å undersøke om dette polymorphism har effekt på risikoen og progresjon av magekreft i en kinesisk befolkning.
Metoder
Vi genotypede
TNFa
-308 G en polymorfisme med TaqMan metoden i en to-trinns case-control studie som omfattet totalt 1686 magekreftpasienter og 1895 kreftfrie fag. Den logistisk regresjon ble brukt for å vurdere de genetiske assosiasjoner med forekomst og progresjon av magekreft.
Resultater
Vi har funnet en signifikant sammenheng mellom variant genotyper og økt risiko for magekreft [
P
= 0,034, odds ratio (OR) = 1,39, 95% konfidensintervall (KI) = 1,01 til 1,67, GA /AA vs. GG]. Lignende resultater ble observert i oppfølgings replikering studien. Når kombinert data fra de to studiene, fant vi en mer signifikant sammenheng (
P
= 0,001, OR = 1,34, 95% CI = 1,13 til 1,59), særlig for eldre pasienter ( 65 år). Videre pasientene bærer variant genotyper hadde en betydelig større forekomst av T4 stadium av sykdommen (
P
= 0,001, OR = 2,19, 95% CI = 1,39 til 3,47) og fjernmetastaser (
P
= 0,013, OR = 1,61, 95% CI = 1,10 til 2,35)
Konklusjoner
Våre resultater tyder på at den funksjonelle arrangøren -308 G . En polymorfisme i
TNFa
påvirke mottakelighet og progresjon av magekreft i den kinesiske befolkningen
Citation. Hong Y, Ge Z, Jing C, Shi J, Dong X, Zhou F et al. (2013) Funksjonell Arrangøren -308G en variant i tumornekrosefaktor a Gene er forbundet med risiko og progresjon av magekreft i en kinesisk befolkning. PLoS ONE 8 (1): e50856. doi: 10,1371 /journal.pone.0050856
Redaktør: Ramon Andrade de Mello, Universitetet i Porto, Portugal
mottatt: May 27, 2012; Godkjent: 29 oktober 2012; Publisert: 10 januar 2013
Copyright: © 2013 Hong et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet delvis av «Six talent Summit» Project i Jiangsu-provinsen (SWYY-71-028), Natural Science Foundation National Jiangsu (BK2011194) og Natural Science Foundation National of China (30872084, 30972444, og 81001274). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Magekreft kreft~~POS=HEADCOMP er den fjerde vanligste kreftformen og den nest største årsaken til kreft-relaterte dødsfall på verdensbasis, og spesielt utbredt i enkelte land, inkludert Kina [1], [2]. Selv om den eksakte etiologien av magekreft gjenstår å bli identifisert, samler epidemiologiske studier har vist at kosthold, røyking, alkohol og spesielt
Helicobacter pylori product: (
H. Pylori
) infeksjon, er godt kjent årsakene til magekreft [3], [4]. Men ikke en høy forekomst av disse risikofaktorene ikke alltid resultere i en høy forekomst av magekreft, noe som tyder på at andre mottakelige faktorer som genetiske variasjoner og miljømessige forskjeller kan i tillegg bidra til magekreftutvikling. Nylig har voksende bevis antydet at genetiske polymorfismer i kandidatgener var forbundet med følsomhet overfor magekreft [5], [6], [7].
Det har vært antydet at kronisk betennelse i gastrisk mucosa indusert av
H. pylori
infeksjon er et kritisk punkt i utviklingen av magekreft [8], [9]. I så fall kan genetiske variasjoner i inflammasjonsrelaterte cytokingener være mulige følsomhet faktorer for denne sykdommen. En av de viktige cytokiner assosiert med
H. pylori
infeksjon er den tumornekrosefaktor (TNF) -α som er kodet av
TNFa
genet [10]. TNF-α er en pleiotropisk cytokin som hovedsakelig produseres av aktiverte monocytter og makrofager, og spiller en viktig rolle i den inflammatoriske respons [11]. Det har vært antydet at over uttrykk for TNF-α viste en signifikant alvorlighetsgrad-dose-respons som risikomarkører fra pre-neoplastiske lesjoner til magekreft [12].
TNFa
genet er ligger innenfor human leukocytt-antigen-klasse III region på kromosom 6 (6p21) og er svært polymorfe. Polymorfismer i
TNFa
genet har vist seg å ha stor innflytelse på dens uttrykk nivå [13]. Derfor er mange studier har forsøkt å undersøke hvorvidt polymorfismer i promoteren
TNFa
kunne brukes som putative bestemmende faktor av følsomhet for forskjellige sykdommer, inkludert magekreft. Blant de mange polymorfismer i
TNFa
promoter,
TNFa
-308 G En polymorfisme ble vilt studert, og det er funksjonelt studie tyder på at -308A allelet er assosiert med økt TNF-α produksjon [14]. Som for magekreft, ble det gjennomført en rekke studier for å undersøke assosiasjoner mellom
TNFa
-308 G En polymorfisme og magekreft i ulike populasjoner, men resultatene fra disse studiene være inkluderende [15], [16], [17], [18], [19]. Til dags dato to publiserte metaanalyser i denne saken har antydet at -308 G En polymorfisme var assosiert med magekreft i vestlige populasjoner, men ikke i den asiatiske befolkningen [20], [21]. Heri, i denne studien, gjennomførte vi en relativ stor to-trinns case-control studie som inkluderte totalt 1686 mage kreftpasienter og 1895 kreftfrie fag for å ytterligere evaluere påvirkning av
TNFa
-308 G . en polymorfisme på magekreft risiko og progresjon i en kinesisk befolkning
Materialer og metoder
Etikk uttalelse
studiet ble godkjent av Institutional Review Board of Nanjing Medical University, Nanjing, Kina. Ved rekruttering, ble skriftlig informert samtykke innhentes fra alle deltakerne i denne studien.
Study befolkningen
Dette er en pågående molekylære epidemiologiske studier av magekreft gjennomført i First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University Nanjing, Kina. Utformingen av studien og inklusjonskriteriene av fagene ble tidligere beskrevet andre steder [22]. I korte trekk ble to selvstendige sykehusbasert case-control studier inkludert i denne studien. Totalt sett testsett inkludert 750 mage tilfeller og 835 alders- og kjønns matchet kontroller rekruttert på andre tilknyttet sykehuset i Nanjing Medical University, Nanjing og Cancer Hospital of Nantong, Nantong, Kina fra mars 2006 til januar 2010, og valideringssett inkludert 936 tilfeller og 1,060 kontroller meldt fra Yixing Folkets sykehus, Yixing, Kina fra januar 1999 til desember 2006. Alle fag var etniske Han-kinesere som kommer fra forskjellige familier og hadde ingen blod forholdet. Alle pasientene ble nylig diagnostisert med histopathologically bekreftet, hendelsen magekreft og ble fortløpende rekruttert uten begrensning i alder og kjønn. Histologiske snitt av alle saker ble gjennomgått av to patologer uavhengig. De pasientene som hadde tidligere kreft, spredning kreft fra andre eller ukjent opprinnelse, eller tidligere strålebehandling eller cellegift ble ekskludert. Kontrollene ble rekruttert fra friske personer som søkte fysisk undersøkelse i poliklinikker på tilsvarende sykehus og var frekvens tilpasset sakene etter alder (± 5 år) og kjønn. De kreftfrie kontroller var genetisk relatert til sakene og hadde ingen individuelle historie av kreft. Hver pasient donert 5 ml venøs blod etter å gi et skriftlig informert samtykke. Svarprosenten for case og kontrollpersoner var begge over 85%.
DNA-ekstraksjon og genotyping
Hele genomisk DNA ble isolert og renset fra leukocytter av perifert blod av proteinase K fordøyelse og fenol /kloroform ekstraksjon.
TNFa
-308 G En polymorfisme ble genotypet med TaqMan-MGB-metoden (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA), som bruker to allel-spesifikk TaqMan MGB prober og en PCR-primer paret å oppdage den spesifikke SNP mål. Sekvensen av primere og prober er tilgjengelig på forespørsel. Reaksjonsblandingen på 10 pl inneholdt 20 ng genomisk DNA, 3,5 pl av 2 x TaqMan genotyping Master Mix, 0,25 mL av primere og prober blanding og 6,25 ul dobbeltdestillert vann. Amplifikasjonen ble utført under følgende betingelser: 50 ° C i 2 minutter, 95 ° C i 10 minutter etterfulgt av 45 sykluser på 95 ° C i 15 sek, og 60 ° C i 1 min. Etter produsentens anvisninger, ble presiseringer gjennomført i 384-brønnen ABI 7900HT Real Time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) og alleliske diskriminering ble utført ved hjelp av SDS 2.4 programvare (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). De genotyping priser av disse SNPs var alle over 98%. For å sikre nøyaktigheten av genotyping, ble to negative eksperimentell kontroll (vann) og to positive eksperimentelle kontroller med kjente genotype inngår i hver reaksjonsplate. I tillegg ble om lag 5% av prøvene tilfeldig valgt for gjentatt genotyping for bekreftelse; og resultatene var 100% konkordant
Statistisk analyse
Før videre analyse, allelfrekvensene av
TNFa
-308G . En polymorfisme i kontrollene av testsett, validering satt og kombinerte sett ble vurdert opp mot avreise fra Hardy-Weinberg likevekt (HWE) med en godhet-of-fit χ2-test. Forskjeller i fordelingen av alder, kjønn og frekvenser av genotyper av
TNFa
-308G En polymorfisme mellom sakene og kontroller ble evaluert av Pearsons χ2 test. Foreningene mellom -308G A genotyper og risikoen for magekreft samt kliniske kjennetegn ved pasientene ble målt ved å beregne odds ratio (ORS) og 95% konfidensintervall (CIS) fra ubetinget logistisk regresjonsanalyse med justering for alder og sex. Alle de statistiske analysene ble utført med programvaren SAS 9.1.3 (SAS Institute, Cary, NC, USA) og en to-side
P
verdi på mindre enn 0,05 ble ansett som statistisk signifikant.
Resultatene
kjennetegn på studiepopulasjonen
de frekvensfordelinger av demografiske karakteristika og kliniske trekk ved de to settene med studiegruppen er vist i tabell 1. sakene og kontroller ble matchet av alder og kjønn (
P
= 0,383 og 0,424 i testsettet og
P
= 0,164 og 0,061 i valideringssettet, henholdsvis). Selv om flere eldre pasienter ( 65years) og kvinner ble presentert i testsettet enn i valideringssettet, ble det ikke observert signifikant forskjell i alder og kjønn mellom sakene og styrer når vi kombinert de to populasjonene (tabell 1). I testsettet, var det 295 Cardia magekreft (CGC) pasienter og 455 ikke-Cardia mage kreft (NCGC) pasienter; 406 pasienter diagnostisert som diffus type magekreft og 299 som intestinal type. Klinisk TNM stadium er kategorisert i henhold til dybden av invasjonen, lymfeknutemetastaser og fjernmetastaser. Den prosent av TNM stadium av pasientene i testsettet fra I til IV var 26,8%, 22,0%, 35,5% og 15,7%, respektivt. Av de 936 pasientene i valideringssettet, 358 var CGC og 578 var NCGC; 539 pasienter diagnostisert som diffus type magekreft og 397 som intestinal type. Omtrent 27,7%, 19,8%, 42,2% og 10,3% av pasientene ble funnet å ha TNM stadium I, II, III og IV sykdommer, henholdsvis.
Association mellom
TNFa
-308 G En polymorfisme og magekreft risiko
genotyping resultatene av
TNFa
-308 G En polymorfisme blant pasienter og kontroller i de to studie sett er presentert i tabell 2. de observerte genotypefrekvensene i kontrollene av testsett, validering sett og den kombinerte satt ble alle likedannet HWE (
P
= 0,481, 0,448 og 0,946, henholdsvis). Vi deretter brukt Pearsons χ2 test og logistisk regresjonsanalyse for å vurdere sammenhengen mellom
TNFa
-308 G En polymorfisme og magekreft risiko. I testsettet, fant vi at det var flere variant genotyper (GA /AA) i saken gruppen enn i kontrollgruppen (
P
= 0,034). Sammenlignet med personer med GG genotype, fant vi disse fagene med GA /AA genotyper hadde en økt risiko for magekreft (justert OR = 1,39, 95% CI = 1,01 til 1,67). Lignende foreninger ble observert i replikering studien (GA vs GG: OR = 1,29, 95% CI = 1,02 til 1,65 og GA /AA vs GG: OR = 1,31, 95% CI = 1,03 til 1,65). Når vi kombinerte data fra de to studiene, ble en mer signifikant sammenheng observert (GA vs GG: OR = 1,33, 95% CI = 1,12 til 1,59 og GA /AA vs GG: OR = 1,34, 95CI% = 1,13 til 1,59 )
for å vurdere om
TNFa
-308 G . En polymorfisme spiller annen rolle i undergrupper av alder, kjønn, tumor nettstedet og histologiske typer, så utførte vi stratifisert analyse basert på disse variablene. Som vist i tabell 3, viste stratifisert analyse at den økte risikoen i
TNFa
-308GG /GA genotyper var mer tydelig blant eldre pasienter ( 65years) (
P
0.001, OR = 1,70, 95% CI = 01.28 til 02.25). Dessuten ble ingen signifikant forskjell observert i lagdeling av sex, tumor nettstedet og histologiske typer
Association mellom
TNFa
-308 G . En polymorfisme og kliniske karakteristika av pasientene med magekreft
Polymorfisme i kandidatgener har blitt foreslått å påvirke kreft progresjon. Vi deretter vurdert om den
TNFa
-308 G En polymorfisme har effekter på de kliniske kjennetegn ved pasientene, inkludert TNM stadium, fjernmetastaser, lymfeknutemetastase og dybde av tumorinfiltrasjon. Som vist i tabell 4, fant vi at pasientene bærer variant genotyper hadde en betydelig større forekomst av T4 stadium av invadert dybde (
P
= 0,001, OR = 2,19, 95% CI = 1,39 til 3,47) og fjernmetastaser (
P
= 0,013, OR = 1,61, 95% CI = 1,10 til 2,35), noe som indikerer polymorfisme kan være assosiert med magekreft progresjon.
Diskusjoner
de viktigste funnene i vår studie er signifikant sammenheng mellom
TNFa
-308 G En polymorfisme og magekreft risiko og progresjon. TNF-α er en viktig immunregulator i inflammatorisk respons, og har blitt foreslått å være en endogen tumor promoter i human karsinogenese [23], [24], [25]. I magekreft, Senthilkumar
et al.
Vist at TNF-α mRNA og protein uttrykk ble signifikant økt i pasienter med adenokarsinom, ved hjelp av RT-PCR, western blotting og immunhistokjemi [12]. Påvirkningen av -308G A-polymorfismen på ekspresjonsnivået av
TNFa
har tidligere blitt undersøkt. . Karen
et al
viste at -308G A-polymorfismen kan påvirke affiniteten av faktor binding og resulterer i et faktor binding til -308A allel, men ikke den -308G allele, som deretter fører til en økt ekspresjon av
TNFa product: [14]. Tatt i betraktning at TNF-α er oppregulert i magekreft, er det mulig at personer som bærer -308A allel (f.eks. GA /AA), som er forbundet med økt nivå av TNF-α, har en økt risiko for magekreft. Derfor er det biologisk plausibel at
TNFa
-308G . En overfører individers mottakelighet for magekreft
Til dags dato flere molekylære epidemiologiske studier har blitt gjennomført for å undersøke sammenhengen mellom
TNFa
-308G En polymorfisme og magekreft risiko. Men resultatene fra disse studiene er fortsatt usikker. Det er to publiserte meta-analyser av sammenhengen mellom
TNFa
-308G A og magekreft risiko for at har identifisert denne polymorfisme som en risikofaktor for magekreft i kaukasiske populasjoner, men ikke i den asiatiske befolkningen [20] , [21]. Når anmeldt de to meta-analyser, fant vi bare tre studier med totalt 513 tilfeller og 714 kontroller og 5 studier med til sammen 833 saker og 1375 kontroller i kinesiske populasjoner ble inkludert i meta-analyser av Zhang
et al.
[20] og Gorouhi
et al.
[21], henholdsvis (tabell 5). Det antall studier og prøven størrelsen på disse studiene kan være altfor begrenset til å generere et stabilt resultat. Av disse studiene, bare Lu
et al.
Funnet en signifikant sammenheng mellom
TNFa
-308GA genotype og økt risiko for magekreft risiko (OR = 1,81, 95% CI = 01.04 til 03.14) . Vår studie videre identifisere
TNFa
-308G En polymorfisme som en risikofaktor for magekreft i kinesiske befolkningen, noe som kan være av verdi i å vurdere rollen som TNF-α i magekreftutvikling. Som indikert av makt og Sample Size Beregning programvare, vår studie hadde 96% styrke til å påvise en OR på 1,50 eller høyere og en minimal OR på 0,62 med en eksponering frekvens på 9% på dagens utvalgsstørrelsen (1686 tilfeller og 1895 kontroller) , noe som tyder på at størrelsen på utvalget i vår studie er effektiv
i tillegg fant vi at
TNFa
-308G . En polymorfisme var assosiert med økt risiko for magekreft blant undergrupper av eldre pasienter (alder 65 år) snarere enn yngre pasienter. Denne observasjonen er godt støttet av en stor mengde studier som knytter svakt immunsystem med aldring [26], [27]. Immunsystemet av eldre individer gjennomgår endringer som kan forklare en økt mottakelighet for malignitet [26]. Det er blitt foreslått at høy ekspresjon av TNF-α kan være involvert i tumorvekst og spres gjennom påvirke vev-omforming og stromal utvikling [28], [29]. I vår studie har vi også funnet
TNFa
-308G En polymorfisme var assosiert med klinisk aggressivitet som avansert tumorstadium og fjernmetastaser. Lignende observasjon har også blitt rapportert i andre studier [30]. Hvis bekreftet av flere studier, kan dette polymorfisme bidra til å nøyaktig forutsi den kliniske utviklingen av magekreft. Imidlertid bør disse resultatene tolkes med forsiktig fordi det er mulighet for at de assosiasjoner med dårlig prognose skyldes et sent stadium ved diagnose.
Ved tolkning av resultatene våre, noen andre begrensninger bør også være bekymret. Først, siden vår studie var sykehusbasert design, muligheten for utvalgsskjevhet av fag som var knyttet til en bestemt genotype kan eksistere. Men genotypen utdelinger i våre kontroller var lik utdelinger rapportert i andre kinesiske studier og dannet HWE. Derfor vil utvalget skjevhet i form av genotype distribusjoner ikke være betydelige. For det andre,
H. pylori-infeksjon
status er en kjent årsak til magekreft, og har blitt foreslått for å påvirke ekspresjon av TNF-a α [31]. Genetiske variasjoner i
TNFa
kan samhandle med denne faktoren for å påvirke mage Caner risiko. Dessverre, mangel på tilgjengelig informasjon om
H. pylori
infeksjonsstatus i vår studie begrenset oss til ytterligere å utforske disse interaksjoner. Dermed videre studier med mer detaljerte data om
H. pylori
infeksjon er garantert
I konklusjonen, tyder våre resultater på -308G . En polymorfisme i formidler av
TNFa
har en betydelig innflytelse på forekomst og progresjon av mage i kinesiske befolkningen. Selv om foreninger viste seg å være statistisk signifikant i vår befolkning, bør disse funnene være uavhengig bekreftet av andre prospektive studier med større utvalg samtidig godt matchet kontroller og objektive-matchet homogene deltakere.
