Abstract
Bakgrunn
Kreft-testis antigener (oppfordringer) er potensielle mål for kreft immunterapi. Mange CTAs ligger på X-kromosomet og epigenetiske regulert. Tap av X-kromosom inaktivering (XCI) er observert i bryst- og eggstokk-kreft og er antatt å være knyttet til overekspresjon av CTAs. Vi undersøkte sammenhengen mellom uttrykk for CTAs og tap av XCI i livmorkreft.
Materialer og metoder
Vi brukte data generert av Kreft Genome Atlas Genome Dataanalyse Centers og data for
Xist
knockout mus tilgjengelig på Gene Expression Omnibus.
Resultater
status for XCI ble anslått ved metylering status, og sletting eller gevinst på X-kromosomet. De livmorkreft ble klassifisert i følgende tre grupper: bevart inaktivert X-kromosom (Xi) (n = 281), delvis reaktivering av Xi (n = 52), og to eksemplarer av aktive X-gruppen (n = 38). Tap av XCI var mer vanlig i serøs adenokarsinom. Uttrykk av CTA økt i livmorkreft med tap av XCI, som ble fulgt av global hypometylering. Uttrykk for CTAs økte ikke i
Xist
knockout mus.
Konklusjoner
Tap av XCI er vanlig i serøs adenokarsinom. Global hypometylering, og ikke tap av XCI, er den viktigste mekanismen for overekspresjon av CTAs
Citation. Kang J, Lee HJ jr SY, Park ES, Maeng Ls (2015) Kreft-testikler Antigen Expression i Serøs livmorkreft med Tap av X kromosom inaktivering. PLoS ONE 10 (9): e0137476. doi: 10,1371 /journal.pone.0137476
Redaktør: Riccardo Dolcetti, IRCCS National Cancer Institute, ITALIA
mottatt: Mai 10, 2015; Godkjent: 17 august 2015; Publisert: 11.09.2015
Copyright: © 2015 Kang et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: Relevante data er tilgjengelig på Figshare. https://dx.doi.org/10.6084/m9.figshare.1518535
finansiering:. forfatterne har ingen støtte eller finansiering for å rapportere
Konkurrerende interesser: The forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer.
Innledning
Kreft er immunogen. Kreftceller abnormt uttrykker antigene proteiner som vanligvis ikke blir uttrykt i normale celler. Disse antigene proteinene indusere kreft immunitet. Cancer immunoterapi forbedrer kreft immunitet [1, 2]. Kreft-testis antigener (oppfordringer) er potensielle mål for kreft immunterapi [3, 4]. CTA er antigene, fordi de ikke blir uttrykt i normale celler, bortsett fra i kjønnsceller i testis [5-10]. Mange CTAs ligger på X-kromosomet og epigenetiske regulert [11]. Globalt hypometylering av kreftceller fører til avvikende uttrykk for CTAs i kreftceller [12, 13].
Kvinner har to kopier av X-kromosomer, mens menn har en. For å kompensere X kromosom dosering, er en av de to kopier av X-kromosomer tilfeldig inaktivert under en prosess som kalles X-kromosom inaktivering (XCI) i kvinner. XCI initieres og vedlikeholdes av X-inaktive spesifikk transkripsjon (XIST), en 17 kilobase kodende RNA.
XIST
transkripsjon strøk de inaktive X-kromosomer (XI). Tapet av XCI skjer i eggstokkene og brystkreft [14-17]. Det er antatt at dette tapet øker X-kromosom dosering og ekspresjon av onkogener som ligger på X-kromosomet [18]. I en tidligere studie, viste vi at tap av XCI økt uttrykk av CTAs ligger på X-kromosomet (XCTAs), inkludert X antigen familiemedlem 3 (
XAGE3
) og melanom antigen familie A4 (
MAGEA4
). Dette resultatet tyder på at uttrykket av CTA er regulert av ikke bare global hypometylering men også ved tap av XCI [15].
Tap av XCI oppstår i høyverdig eggstokkreft serøs adenokarsinom og basal-lignende brystkreft [19] . Serøs adenokarsinom i endometrium deler mange clinicopathologic funksjoner og genomiske forandringer med eggstokkene og basal-lignende brystkreft. Livmorkreft er klassifisert i endometrioid adenokarsinom og serøs adenokarsinom [20]. Endometrioid adenokarsinom er forbundet med østrogen overflødig og livmor polypp. Serøs adenokarsinom forekommer hos eldre pasienter, og er ofte forbundet med TP53-mutasjon og høy grad av kromosom kopi nummervariasjoner (CNV) [19].
I denne studien har vi fastslått om tap av XCI skjer i livmorkreft serøs type og om dette tapet fører til økt XCTA uttrykk.
Materialer og metoder
The Cancer Genome Atlas (TCGA) data
Vi brukte åpen kildekode-data generert av TCGA genom dataanalyse sentre [19]. Data om metylering 450K ble lastet ned fra TCGA Portal (https://tcga-data.nci.nih.gov/tcga/tcgaHome2.jsp). Data om CNV og RNA uttrykk ble lastet ned fra Broad genomdataanalyse sentrum Firehose hjemmeside (https://gdac.broadinstitute.org/). Data om RNA uttrykk for
XIST Hotell og kliniske data ble samlet inn ved hjelp av CGDS-R-pakken, som er en pakke med R for spørring Kreft Genomics Data Server og drives av Computational Biology Center på Memorial-Sloan- Kettering Cancer Center [21]. Betaverdiene for DNA metylering status ble estimert ved hjelp av Illumina infinium Menneskelig Metylering 450K arrays. Betaverdien ble beregnet som et estimat av forholdet mellom intensiteter mellom denaturert og unmethylated alleler. Segmentert kopiantall ble beregnet ved log2 av forholdet mellom total intensitet av tumoren og det normale vev ved hjelp Affymetrix SNP6.0. Normalisert RNA-Seq av forventning maksimering (RSEM) ble brukt som estimat for mRNA uttrykk [22]. Detaljert informasjon om pasientene og eksperiment metoder har blitt beskrevet andre steder [19].
genuttrykk Omnibus data
Vi analyserte genuttrykk profildata av
Xist
slettet blodceller, inkludert B-lymfoide, myeloid, erytroide celler og hematopoetiske stamceller fra mus ved hjelp av Cre /loxP-systemet. Dataene ble lastet ned fra Gene Expression Omnibus hjemmeside (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/GDSbrowser?acc=GDS4755) [18]. Uttrykket data ble samlet inn Affymetrix mus Gene 1.0ST arrays (Affimetrix). Detaljerte eksperimentelle metoder har blitt beskrevet andre steder [18].
Etikk uttalelse
Tissue brukes av TCGA ble samlet etter å ha innhentet godkjenning fra lokale institusjonelle gjennomgang boards (https://cancergenome.nih.gov/abouttcga /politikk /informert samtykke). Forfatterne av dyrestudie for vev bestemt
Xist
sletting hadde fått godkjennelse fra Institutional Animal Care og bruk komité [18].
TCGA molekylær subtype
TCGA forskningsnettverk klassifisert livmorkreft i fire TCGA molekylære undergrupper inkludert
POLE plakater (ultramutated), MSI (hypermutated), kopi-nummer lav (endometrioid) og kopiere-nummer høy (serøs-aktig) [19].
POLE
subtype var livmorkreft med høy mutasjonsfrekvens og har
POLE
Eksonuklease mutasjoner. MSI subtype var livmorkreft med høy mutasjonsfrekvens og mikro ustabilitet (MSI) høy. Kopier-nummer lav subtype var livmorkreft med lav grad av CNV og endometrioid histologisk type. Kopier-nummer høy subtype var livmorkreft med høy grad av CNV og serøs histologisk type.
Clustering analyse av X-kromosomet metylering
Vi valgte 5441 metylering array-sonder som er rettet mot CpG øyer på X-kromosomet . CpG øyene er store områder av metylering under XCI. Beta-verdier for utvalgte prober ble analysert ved hjelp av hierarkisk gruppering med fullstendig agglomerering. Den clustering ble gjort separat for hver serøs og livmor histologisk type. Uttrykk for
XIST Hotell og tap av p eller q arm av X-kromosomet ble evaluert for å vurdere status for X-kromosom inaktivering.
uttrykk for CTAs
Vi valgte 48 XCTAs og åtte CTAs ligger på somatiske kromosomer for analyse av TCGA data. Mean RNA uttrykk for den valgte CTAs ble sammenlignet i henhold til TCGA molekylær subtype, histologisk type og status for XCI å bruke
t
-test eller analyse av varians (ANOVA) test. Vi valgte 16 XCTAs (20 array-prober) for analyse av
Xist
knockout mus. Mean RNA uttrykk ble sammenlignet med stripe diagram analyse. Statistisk analyse ble ikke utført på grunn av den lille størrelsen på utvalget. Navnene på utvalgte CTAs ble oppført (S1 tekst).
metylering av somatisk kromosom for å vurdere global hypometylering
Vi valgte 239905 metylering array-sonder som er rettet mot CpG øyer på somatiske kromosomer. Gjennomsnittlig betaverdier for utvalgte prober ble sammenlignet i henhold til TCGA molekylær subtype, histologisk type og status for XCI å bruke
t
-test eller ANOVA test.
Kliniske data og overlevelse
Pasient egenskaper og tumor egenskaper ble sammenlignet i henhold til statusen for XCI. Betydning ble beregnet ved hjelp av Fishers eksakte test for kategoriske variabler og ANOVA test for kontinuerlige variabler. Univariat overlevelse analyse ble utført ved hjelp av log-rank test. Multivariat overlevelsesanalyse ble utført ved hjelp av Cox regresjon tester for å justere for klinisk stadium.
Resultater
Clustering av X-kromosomet metylering
Vi inkluderte to histologiske typer (endometrioid og serøs) i denne studien. Vi klassifisert 276 endometrioid og 95 serøs endometrial carcinoma inn i seks grupper i henhold til X-kromosomet metylering (fig 1A). Statusen for XCI av klynger var preget med
XIST
uttrykk og arm-nivå X kromosom sletting. Data om
XIST
uttrykk var ikke tilgjengelig i 253 (68,2%) tilfeller. Klynger A til C var endometrioid adenokarsinomer og klynger D til F var serøs adenokarsinom. Klynger A og D viste hypermethylation av det meste av loci med på X-kromosomet (fig 1A) og høy
XIST
uttrykk (Fig 1C og 1D). Disse resultatene tyder på at klynger A og D hadde både aktiv (Xa) og Xi. Klynger B og F viste hypometylering på de fleste loci på X-kromosomet (fig 1A) og lav
XIST
uttrykk (Fig 1C og 1D). Både hypometylering av hele X-kromosom og lav
XIST
uttrykk indikerte fravær av Xi. Fraværet av Xi kan enten være et resultat av en Xa med tilhørende delesjon av en hel Xi, eller resultatet av multiple kopier av Xa uten Xi grunn av en feil segregering. Fordi sletting av en hel Xi ikke øke dosen av X-kromosomet, bestemt vi om fravær av Xi ble akkompagnert med sletting av hele Xi eller ikke. Hele X kromosom sletting ble ikke observert i Clusters B eller F (fig 1B). Disse resultatene antydet at Clusters B og F hadde to kopier av Xa. Klynger C og E viste høy
XIST
uttrykk (Fig 1C og 1D), som klynger A og D, men ble bare delvis hypomethylated (fig 1A). Den høye
XIST
uttrykk foreslått tilstedeværelse av Xi. Den delvise hypometylering antydet at Xi av klynger C og E ble delvis reaktivert. Selektiv arm-nivå hypometylering av X-kromosomet ble observert ved p arm (de siste tre tilfeller av Cluster D i figur 1A) og q arm (de siste fem tilfeller av Cluster E og den tredje siste tilfellet Cluster F i figur 1A). Disse selektiv arm-nivå hypometylering samsvarer arm-nivå sletting av X-kromosomet (fig 1B). Den selektive arm-nivå hypometylering antydet at delesjonene oppsto i Xi, men ikke i Xa. De livmorkreft ble klassifisert i følgende tre grupper: 1) «bevart Xi» i tilfeller av Clusters A og D, og i tilfeller med q arm tap av Xi av Clusters E og F; 2) «delvis reaktivering av Xi» (Xa
+) for klynger C og E; og 3) «to kopier av Xa» (to Xa) for Clusters B og F.
A) Clustering av 371 livmorkreft med betaverdi på metylering ved CpG øyer på X-kromosomet. Clustering analyser ble utført separat for serøs og endometrioid adenokarsinomer. Kolonnen viser metylering array-sonder i regi av X-kromosomet plassering. Raden viser TCGA tilfeller bestilt av klyngen gruppen. Venstre side-kolonner angir histologisk type klynge, TCGA subtype og
XIST
uttrykk. De fleste tilfeller av serøs histologisk type er kopitall høy (serøs-aktig) TCGA subtype. Tilfeller av endometrioid histologisk type er blandet med fire TCGA subtyper. B) Farger representerer segmental kopi antall variant av X-kromosomet for livmorkreft. Raden viser TCGA tilfeller arrangert for å korrespondere med metylering klynger. C, D) Tetthet linjene viser fordelingen av
XIST
uttrykk nivå i hver klynge. Klynger er preget av forskjellige farger. Omfanget av X-aksen er log transformert RSEM. A, B) Arrow hoder indikerer arm-nivå sletting av inaktive X-kromosom.
Uttrykk for CTAs og tap av XCI
Av de 371 sakene, 110 saker (29,6%) var ekskludert i analysen av ekspresjon av CTAs, på grunn av fraværet av ekspresjon av data. Ekspresjonsnivået ble variert mellom CTA (figur 2A og figur 3A). De fleste CTA ble sjelden uttrykt og den avvikende uttrykk ble beriket i Xa
+ og to Xa. Men noen CTA ble sterkt uttrykt i de fleste tilfeller og over-uttrykt i Xa
+ og to Xa; de CTA ble Maged genet familie,
Føflekkreft Antigen Family H
, en (
MAGEH1
),
akrosin Binding Protein product: (
ACRBP
) og
CCCTC-Binding Factor (Sink Finger Protein) -lignende product: (
CTCFL)
.
A) fargen på cellene representerer RNA uttrykk nivå (log transformert RSEM). Kolonnen viser kreft-testis antigener som ligger på X-kromosomet. Raden viser tilfeller bestilt av klyngen gruppen. Den venstre side-kolonnen angir gruppen av metylering clustering. B-D) Box plott representerer fordelingen av midlere RNA-ekspresjon av kreft-testis antigener som ligger på X-kromosomet (log transformert RSEM). Toppen og bunnen av boksen er 75-og 25. percentil, henholdsvis, og linjen i boksen er medianen. Uttrykk for kreft-testis antigener sammenlignes i henhold til status av X-kromosom inaktivering i endometrioid histologiske undergruppe (C) og serøs histologiske undergruppe (D). NS: ikke signifikant, *:
P
0,05, **:
P
0.01, ***
P
0.001
A) Fargen på cellene representerer RNA uttrykk nivå (log transformert RSEM). Kolonnen viser kreft-testis antigener som ligger ved somatisk kromosom. Raden viser tilfeller bestilt av klyngen gruppen. Den venstre side-kolonnen angir gruppen av metylering clustering. B-D) Boksplott representerer fordelingen av middel RNA uttrykk for kreft-testis antigener ligger på somatiske kromosomer (log transformert RSEM). Toppen og bunnen av boksen er 75-og 25. percentil, henholdsvis, og linjen i boksen er medianen. D) Expression of Cancer-testis antigener som ligger ved somatisk kromosom sammenlignes i henhold til status av X-kromosom inaktivering i endometrioid histologiske undergruppe (C) og serøs histologiske undergruppe (D). E-G) Boksplott representerer fordelingen av middel metylering av CpG øyer i somatiske kromosomer (beta verdi). Toppen og bunnen av boksen er 75-og 25. percentil, henholdsvis, og linjen i boksen er medianen. G) Mean metylering av CpG øyer i somatiske kromosomer (beta verdi) er sammenlignet i henhold til status av X-kromosom inaktivering i endometrioid histologiske undergruppe (C) og serøs histologiske undergruppe (D). NS: ikke signifikant, *:
P
0,05, **:
P
0.01, ***
P
0.001
XCTAs ble mer høyt uttrykt i kopiantall høy (serøs-aktig) TCGA molekylær subtype og serøs histologisk type enn andre TCGA molekylær subtype og endometrioid histologisk type. Xa
+ og to Xa viste høyere uttrykk av XCTAs enn bevart Xi både endometrioid og serøs histologiske typer. Men
P
verdi var ikke signifikant mellom Xa
+ og bevart Xi i serøs histologisk type (fig 2).
Expression of CTAs ligger på somatiske kromosomer var lik med den av XCTAs . Det var høyere i kopiantall høy (serøs-aktig) TCGA molekylær subtype og serøs histologisk type enn andre TCGA molekylær subtype og endometrioid histologisk type. Xa
+ og to Xa viste høyere uttrykk av CTAs ligger på somatiske kromosomer enn bevart Xi både endometrioid og serøs histologiske typer.
P
verdi var eneste signifikante mellom to Xa og bevart Xi i endometrioid histologisk type, men
P
verdi blant andre var ikke signifikant (figur 3).
Globalt hypometylering
Det gjennomsnittlige betaverdien av CPG øyene somatiske kromosomer var lavere i kopitall høy (serøs-aktig) TCGA molekylær subtype, serøs histologisk type Xa
+ og to Xa enn andre TCGA molekylære subtype, endometrioid histologisk type og bevart Xi (figur 3F-3I).
uttrykk av CTA i
Xist
knockout mus
uttrykk for XCTAs var høyere i blodkreft stamceller enn i andre blodceller, inkludert myeloid, B-celle, og erytroide celler (figur 4A). Det betyr uttrykket for XCTAs var ikke signifikant forskjellig blant annet
Xist
genotyper, inkludert heterozygote sletting, homozygotic sletting, og villtype (figur 4B).
Punktene representerer bety RNA uttrykk for 16 kreft-testis antigener som ligger på X-kromosomet hos blodcelletyper (A) og
Xist
genotyper (B). Barer representerer medianer (B).
Kliniske og tumor egenskaper
Xa
+ og to Xa var hyppigere i serøs histologisk type og kopiere-nummer høy (serøs lignende) TCGA molekylær subtype. Videre Xa
+ og to Xa ble hovedsakelig påvist i kopitall høy (serøs lignende) TCGA molekylær subtype (tabell 1). Xa
+ og to pasienter Xa var eldre og i overgangsalderen tilstand enn bevarte Xi pasienter (tabell 2). Det var ingen statistisk signifikante forskjeller i rase, etnisitet, klinisk stadium, eller resttumor status blant gruppene i henhold til status for Xi.
Prognostic betydning
Av de 371 pasientene, fem (1,3%) og 174 (46,9%) ble ekskludert fra den totale og sykdomsfri overlevelse analyser, henholdsvis, på grunn av fravær av tilgjengelige data. De to pasientene Xa viste dårligere generell og sykdomsfri overlevelse i univariat overlevelse analyse (figur 5A). Den Xa
+ pasientene viste verre total overlevelse, men ikke sykdomsfri overlevelse (figur 5B). Etter justering for klinisk stadium, forskjellen mellom gruppene i henhold til status for Xi var ikke signifikant (Tabell 3). Hazard ratio for uønskede kliniske utfall av tap av XCI var omtrent 1,6, med et bredt konfidensiell interne (0,7 til 3,5). I sub-analyse for hvert histologisk type To Xa viste verre total overlevelse i endometrioid histologisk type og verre sykdomsfri overlevelse i serøs histologisk type; Men
P
-verdi var ikke signifikant (S1 fig). Etter justering for klinisk stadium, to Xa viste signifikant dårligere sykdomsfri overlevelse i serøs histologisk type (S1 tabell).
Generelt (A) og sykdomsfri overlevelse (B) ble sammenlignet i henhold til statusen for X kromosom inaktivering. Betydning ble anslått av den totale log-rank test.
Diskusjoner
Tap av XCI kan være forårsaket av segregering feil, forårsaker datter kreftceller til å arve to uniparental Xa ( to Xa) i stedet for en Xa og en Xi [23]. En annen mekanisme for tap av XCI er demetylering av Xi (Xa
+) forbundet med global hypometylering. Vi har tidligere rapportert at både segregering feil og demetylering av Xi skjer i høy klasse ovarial serøs adenokarsinom [15]. I denne studie forsøkte vi å finne ut om tap av XCI også forekommer i serøs adenokarsinom i endometrium. Vi fant at tap av XCI nesten utelukkende skjedd i serøs adenokarsinom i endometriet eller serøs lignende TCGA molekylær subtype. Som i eggstokk-kreft, er tap av XCI forårsaket av både segregering feil og demetylering av Xi i endometrial cancer. Den eksklusive forekomsten av tap av XCI i serøse adenokarsinomer av endometrium og eggstokk er godt korrelert med den høye grad av CNV i slike karsinomer. Dette tyder på at tapet av XCI kan forekomme i andre krefttyper med en høy grad av CNV, for eksempel tykktarmskreft, ikke-småcellet lungekreft, og hode og hals plateepitelkarsinom [24-27].
I vår tidligere studie, noen XCTAs, inkludert
XAGE3 Hotell og
MAGEA4
, ble overuttrykt i eggstokkreft med et tap på XCI [15]. Vi ønsker å vite om CTA er også overexpressed i livmorkreft med tap av XCI. I denne studien ble samlet ekspresjon av XCTAs økning i livmorkreft med tap av XCI, både i to og Xa Xa
+. Videre har både Xa
+ og to Xa viste global hypometylering og overekspresjon av CTAs ligger på somatiske kromosomer. I vår forrige undersøkelse, ble de to Xa av eggstokkreft globalt hypomethylated, som det av livmorkreft [15]. Det var usikkert om effekten på uttrykk for XCTAs av tap av XCI er uavhengig av global hypometylering. Vi analyserte uttrykk for XCTAs i
Xist
knockout-mus for å finne ut om tapet av Xi øker uttrykk for XCTAs uavhengig av global hypometylering. Uttrykk for XCTAs økte ikke i
Xist
knockout mus. Vi konkluderer med at tap av XCI har en mye mindre effekt på uttrykk for XCTAs enn global hypometylering. Overekspresjon av XCTAs i kreft med tap av XCI kan først og fremst forårsaket av den medfølgende globale hypometylering. Men effekten på ekspresjon av XCTAs av tap av XCI kan ikke generaliseres på andre maligniteter. Videre resultatet av
Xist
knockout mus har begrensning til å bruke menneskelige organ maligniteter. Videre studier er nødvendig for å generalisere den konklusjon.
Tap av XCI er onkogen i mus, noe som tyder på at tapet av XCI kan ha en rolle ved tumorprogresjon eller dårlig prognose pasient. Hazard ratio for uønskede kliniske utfall av tap av XCI var omtrent 1,6 med bred en konfidensiell interne (0,7 til 3,5) som er lik som eggstokkreft [15]. Den sykdomsfri overlevelse resultatet var ikke i samsvar med den generelle overlevelse. Dette avviket kan skyldes skjevhet grunn av en stor andel av manglende data. Trenden med dårligere prognose av to Xa ble observert i sub-analyse av endometrioid og serøse histologiske undergrupper. Samlet våre resultater tyder på at tap av XCI er forbundet med en litt høyere risiko for uønskede kliniske resultater, men med begrenset dokumentasjon.
Konklusjon
Våre observasjoner gi bevis for at tap av XCI er vanlig i serøs adenokarsinom av endometriet og i serøs lignende adenokarsinom, som viste en høy grad av CNV. Dette resultatet tyder på at tapet av XCI forekommer ikke bare i serøs ovarian cancer eller basal-lignende brystkreft, men også i kreft med høy grad av CNV. Vi fant ut at global hypometylering, og ikke tap av XCI, var den viktigste mekanismen for overekspresjon av XCTAs, og at tap av XCI har en litt høyere risiko for uønskede kliniske utfall, men med begrenset dokumentasjon.
Hjelpemiddel Informasjon
S1 tekst. Liste over utvalgte kreft-testis antigener
doi:. 10,1371 /journal.pone.0137476.s001 plakater (docx)
S1 Fig. . Sub-analyse for overlevelse av hver histologiske typen
Betydning ble anslått av den totale log-rank test
doi:. 10,1371 /journal.pone.0137476.s002 plakater (TIF)
S1 Table. Sub-analyse for multivariat Cox regresjon test av hver histologiske typen
doi:. 10,1371 /journal.pone.0137476.s003 plakater (docx)
Takk
Vi brukte data som ble generert av TCGA Research Network. Forfatterne ønsker å takke TCGA Research Network og prøve givere. Vi vil også takke professor Jeannie T. Lee for å tillate oss å bruke data fra knockout mus.
