Abstract
Mål
De fleste livmorkreft blir oppdaget tidlig og ha en god prognose, mens noen livmorkreft er meget inngripende, metastaserer tidlig og svare suboptimalt på behandling. Foreløpig passende modellsystemer for å studere den aggressive arten av disse svulstene mangler. Målet med denne studien var å etablere en mus xenograft modell av endometrial svulster avledet fra pasienter for å studere biologiske aggressive egenskaper som ligger til grunn for invasjon og metastasering.
Metoder
Livmor svulst vev fragmenter ( 1,5 mm x 1,5 mm) fra pasienter som gjennomgår kirurgi, ble transplantert under nyrekapselen av NOD
SCID
gamma mus. Etter 6-8 uker ble tumorene skåret ut og i serie transplantert inn i flere mus for formering. Immunhistokjemisk analyse av svulstene ble gjort for ulike tumormarkører.
Resultater
Fire tilfeller av ulike undergrupper av livmorkreft ble dyrket og dyrket i mus. Tre av de fire tumor tilfeller invadert inn i nyrene og til tilstøtende organer. Mens alle tumorer oppviste minimalt eller ingen farging for østrogen reseptor α ble progesteronreseptoren farging observert for tumor grafts. I tillegg nivåer og lokalisering av E-cadherin, cytokeratin og vimentin variert avhengig av subtype. Til slutt, alle tumorxenotransplantater farget positivt for urokinase plasminogen aktivator mens tre tumorxenotransplantater, som viste invasive egenskaper, farget positivt for urokinase plasminogen aktivator reseptoren.
Konklusjon
Endometriebiopsier svulster transplantert under nyrekapselen utstillings vekst, invasjon og lokal spredning. Disse svulstene kan spres og brukes til å studere aggressiv livmorkreft
Citation. Unno K, Ono M, Winder AD, Maniar KP, Paintal AS, Yu Y, et al. (2014) Etablering av menneskelig pasient-Avledet livmorkreft xenografter i NOD
SCID
Gamma Mus for studier av invasjon og metastasering. PLoS ONE 9 (12): e116064. doi: 10,1371 /journal.pone.0116064
Redaktør: Eric Asselin, University of Quebec i Trois-Rivieres, Canada
mottatt: 10 juli 2014; Godkjent: 01.12.2014; Publisert: 26.12.2014
Copyright: © 2014 Unno et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. Den forfatterne bekrefter at alle data som underbygger funnene er fullt tilgjengelig uten restriksjoner. Alle relevante data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering:. National Cancer Institute RO1CA155513. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Livmorkreft kreft~~POS=HEADCOMP er den fjerde vanligste ondartet svulst blant kvinner i USA, med om lag 49 500 nye tilfeller og 8200 dødsfall i 2013 [1]. Det finnes to typer av livmorkreft kategorisert som type I og type II, avhengig av histologiske og kliniske resultater. Type I som forekommer hos ca. 75% -85% av tilfellene av endometriekreft er forbundet med uhindret østrogen virkning med risikofaktorer inkludert fedme, anovulasjon, og polycystisk ovariesyndrom. Type 1 svulster er adenokarsinomer, også kalt endometrioid livmorkreft (EØF) [2]. EEC er preget av en rekke genetiske endringer, inkludert PTEN, β-catenin, PIK3CA, ARID1A, KRAS og ARID5B mutasjoner [3]. Type II kreft inkluderer serøs karsinom, klarcellet karsinom, dårlig differensiert grad 3 endometrioid karsinom, og carcinosarcoma eller ondartet blandet Mullerian svulst (MMMT). Disse kreft har dårligere prognoser og står for 40% av dødsfall på grunn av livmorkreft [4], [5]. Uterin serøs karsinom (USC) er et meget aggressivt lesjon i hvilken epithelial morfologi er lik ovarian carcinoma serøs [6]. USC har en tendens til å spre seg i stor utstrekning i vaskulære rom og inn i myometrium [4]. Disse svulstene ofte spre seg til magen og lymfeknuter [7]. Det mest bemerkelsesverdige genetisk endring av USC er p53 mutasjon, som oppstår i omtrent 90% av tilfellene [3]. Den p53 mutasjon fører til protein overekspresjon anses å være et tidlig ved USC kreftutvikling, og MSI eller mutasjon av PTEN er ikke så utbredt [3].
Hittil xenograft studier av livmorkreft har vært begrenset til subkutane og ortotopiske (uterine) injeksjoner av udødeliggjorte cellelinjer [8] – [12]. Mens veksten av subkutane xenografter lett kan overvåkes på en ikke-invasiv måte, xenografter i ortotopiske eller andre ektopisk i kroppen hulrom gi en annen mikromiljøet for svulster til å vokse, ofte gir bedre vekst, overlevelse og vaskularisering. Nyrene av NOD
SCID
gamma er et område som har vært mye brukt for vev pode fordi dette organet gir høy grad av blod og lymfe strømningsrater, og et positivt interstitiell væsketrykk [13]. Celler og vev fra både godartede og ondartede vev har blitt podet under nyrekapselen i disse musene. Disse omfatter menneskelige endometrial og Leiomyomer vev [14] -. [16], prostatakreft, brystkreft vev [17], [18], eggstokkene tumorvev [19], [20]
Derfor målene denne studien var å etablere og spre svulster fra primær avansert livmorkreft under nyre kapsel av NOD
SCID
gamma mus og å karakterisere svulster ved hjelp av ulike markører for svulst subtype, EMT, steroidreseptorer, og invasjon.
Materialer og metoder
Tissue samling
Endometriebiopsier svulster ble oppnådd fra kvinner som gjennomgår hysterektomier ved Northwestern Memorial Hospital. Pasienter gitt skriftlig samtykke før operasjonen. Denne studien ble godkjent av Human Subject Committee of Northwestern University i henhold til US Department of Health forskrift.
Subrenal poding av humane primære endometriekreft vev
Alle prosedyrer som involverer dyr ble godkjent av Northwestern University Animal Care og bruk Committee (Protocol # 2012-2867). Alle kirurgiske prosedyrer ble utført under bedøvelse ved intraperitoneal injeksjon av ketamin /xylazin (90/8 mg /kg), og alle forsøk ble gjennomført for å redusere lidelse. Voksen hunn NOD
SCID
gamma (NSG) mus (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME), var ovariektomiserte (OVX) og supplert med eller uten 0,36 mg E2 i form av 90-dagers utslipp pellets (Innovative Forskning of America Inc., Sarasota, Fl) som ble implantert subkutant. Endometrial tumor-vev fragmenter ble oppnådd fra pasienter med post-kirurgi. Svulster ble skåret opp i små fragmenter (1,5 mm x 1,5 mm) og podet under nyrekapselen av voksne hunn NSG-mus (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) som tidligere beskrevet [14]. To fragmenter pr nyre ble podet på den fremre og kaudale sider og begge nyrer ble anvendt. Etter 6-8 uker med poding, ble tumorene fjernet, skåret i mindre fragmenter (1,5 mm x 1,5 mm) og deretter transplantert under nyrekapselen av NSG mus for seriell utbredelse. Xenopodet vev ble merket som passasje 0 (P0), P1, P2, osv avhengig av antall passeringer fra den opprinnelige tumor. Tumorvev ble fiksert i 10% nøytral bufret formalin som inneholder 3,8% formaldehyd (VWR International, West Chester, PA) og deretter parafin innebygd for histologisk analyse. Porsjoner av tumoren ble også hurtigfrosset i flytende nitrogen eller kryopreservert og lagret ved -80C for ytterligere analyse.
Mus ble plassert i en barriere-anlegget, er det patogen fri, i bur med miljø- berikelse, og matet bestrålt gnager Teklad kosthold. Mus ble oppbevart i 14 timer lys og 10 timer mørke syklus. Musene ble gitt analgetika (Meloxicam) for smertebehandling i to dager etter operasjonen og observert på en daglig basis for tegn på stress som bremset åndedrett, svikt i stell og pels rusket og unnlatelse av å svare på buret tapping. På slutten av 6-8 uker, ble musene avlivet av CO
2 etterfulgt av cervical forvridning.
Immunohistochemistry
Parafin-embedded seksjoner ble deparaffinized og farget med Envision DAB HRP kit (Dako) eller hematoxylin og eosin (H E). De følgende primære antistoffer ble brukt til IHC; kanin polyklonale anti-progesteron reseptor 1:1000 (Dako, Cat # A0098), kanin monoklonalt anti-østrogen reseptor α 1:5000 (Abgent, Cat # AJ1268a), rotte monoklonalt anti-Ki67 1:31250 (Dako, Cat # M7249) , geit polyklonale anti-CD31 1:1000 (Santa Cruz, Cat # Sc-1506), mus monoklonalt anti-E-cadherin 1:50 (BD Transduction Laboratories, Cat # 610181), mus monoklonalt anti-Pan-cytokeratin (erkjenner cytokeratins 4, 5, 6, 8, 10, 13 og 18) 1:500 (Cell Signaling, Cat # 4545), kanin monoklonalt anti-vimentin 1:2500 (Abcam, ab92547), kanin monoklonalt anti-p53 1:160 (Cell signalering, Cat # 2527), kanin monoklonalt anti-PTEN 1:125 (Cell Signaling, Cat # 9188), mus monoklonalt anti-uPA 01:50 (American Diagnostic GmbH, Cat # ADG3689). For PTEN antistoff, SignalStain antistoffdiluent for primær antistoff fortynning og SignalStain Boost (HRP, kanin) for påvisning fra Cell Signaling ble brukt. UPAR (ATN-617 mus) antistoff 1:300 ble vennlig levert av Dr. Andrew Mazar (Northwestern University). Etter inkubasjon av primære antistoffer, ble objektglass skyllet i TBS-T og artsspesifikke (anti-kanin-anti-mus og anti-geit) sekundært antistoff konjugert til et dekstran merket polymer og pepperrotperoksydase ble påført og farges ved hjelp av DAB-løsning. Bilder ble tatt opp med et Leica DM5000B mikroskop.
kryokonservering xenopodet vev
Tissue fragmenter av 1,5 mm x 1,5 mm størrelse (ca 10 stykker per rør) ble plassert i en løsning av 10% DMSO og 90% FBS og lagret ved -80 ° C. Tumorfragmenter for EEC4 ble tint ved værelsestemperatur, vaskes to ganger med PBS og umiddelbart podet under nyrekapselen på to OVX-mus. Sju uker etter pode, ble musene dissekert og tumorvekst ble analysert.
Resultater
Etablering av xenografter under nyrekapselen
Endometriebiopsier svulster ble innhentet fra totalt 11 pasienter . Fire tilfeller av type II livmor serøs karsinom (USC), 1 tilfelle av type II livmor klarcellet karsinom (UCCC), 1 tilfelle av ondartet blandet Mullerian svulst (MMMT), og 5 tilfeller av endometrioid livmorkreft (EØF) ble transplantert under nedsatt kapsel av NSG mus. Blant disse svulstene, USC1, MMMT1, EEC2 og EEC4, etablert og vokste under nyrekapselen (tabell 1). Innpodingen take Hastighetene ble beregnet som prosentandelen av antall diagrammer som vokste fra det totale antall transplanterte vev fragmenter. USC1 og EEC4 ta priser skilte seg ikke om østradiol var til stede eller ikke i ovariectomized mus. Innpodingen ta hastighet for MMMT1 var høyere i fravær av estradiol, mens EEC2 hadde høyere take priser med østradiol, demonstrerte differensial avhengighet av østrogen for vekst. Grafisk fremstilling av xenotransplantater fra 4 tilfeller og tilsvarende H E farging er vist i fig. 1 og 2. Mus som bærer de xenotransplantater viste ingen synlige tegn på ubehag i løpet av den eksperimentelle perioden, til tross for tung tumorbelastning i noen tilfeller. I tillegg gjorde mus ikke dø i løpet av de 6-8 ukene av svulst inkubasjon.
Primær vev fra livmor serøs karsinom (USC1), ble transplantert under nyrekapselen av immunodefficient ovariektomiserte (OVX) mus med E2 pellet. På 6 til 8 uker etter transplantasjonen, var svulsten høstet og kuttet i flere 1,5 x 1,5 mm
3 stykker, som ble podet under nyrekapselen (1-2 stk /nyre) for kontinuerlig passasje. Ved passasje 3 (P3), ble vev transplantert i OVX-mus med eller uten E2. USC1 vev grafts og H E stainings vises. T, Tumor; K, Nyre. Scale bar; 200 um.
A) Primære vev fra ondartet blandet Mullerian svulst (MMMT1), ble transplantert under nyrekapselen av NSG mus som var OVX med eller uten E2. På 6 til 8 uker etter transplantasjonen, var svulsten høstet og re-podet inn i andre mus (1-2 stk /nyre). På P2 er invasjon av MMMT1 vev til bukspyttkjertelen vist. B) Primære vev fra endometrioid adenokarsinom (EEC2), ble transplantert under nyrekapselen OVX mus med E2. På 6 til 8 uker etter transplantasjonen, var svulsten høstet og re-podet inn i andre mus (1-2 stk /nyre). På P4, ble vev transplantert i OVX mus uten E2 pellet. På P1, er invasjon av EEC2 vev til livmoren vist. C) Primære vev fra endometrioid adenokarsinom (EEC4), ble transplantert under nyrekapselen på OVX-mus med eller uten E2. På 6 til 8 uker etter transplantasjonen, var svulsten høstet og re-podet inn i andre mus (1-2 stk /nyre). På P3, er invasjon av EEC4 vev til livmor vist. Venstre panelene viser H E stainings av primære vev. Midt panelene viser passert vev grafts og H E stainings. Høyre panel viser invasjon av vev grafts og dets H E stainings. T, Tumor; K, Nyre; S, Spleen; P, bukspyttkjertel; Peri, peritoneum; U, Livmor; V, Vagina. Scale bar; 200 um.
USC1 ble hentet fra en pasient med en endelig patologi diagnosen stadium IA grad 3 USC, med lymphovascular plass invasjon (Lvsi). Engraftment take hastigheten var høy for dette vevet med vekst i de fleste grafts (tabell 2). Histologisk undersøkelse av tumoren på nyrene viste ingen signifikant invasjon inn i nyrene med en klar grense mellom nyre og tumor (fig. 1). Uavhengig av hvorvidt østradiol var til stede eller ikke, USC1 tumorer vokste på tilsvarende måte (fig. 1, tabell 2).
MMMT1 fra en pasient diagnostisert med ondartet svulst blandet mullerian med Lvsi resulterte i en innpoding ta sats på 42% i nærvær av østradiol og 79% uten estradiol i mus (tabell 2). I tillegg tumorer var mindre hos mus behandlet med østradiol sammenlignet med ingen estradiol (fig. 2A). Synlig vekst skjedde utenfor nyrene og også infiltrert inn i nyrene. Bemerkelsesverdig, svulster på andre passering viste infiltrasjon i hele nyre, med lokal spredning og invasjonen i bukspyttkjertelen, som i musen er i umiddelbar nærhet av nyrene (Fig. 2A, Tabell 3). Formering av P2 svulster hos mus med estradiol resulterte i suboptimal vekst, noe som indikerer en negativ effekt av E2 på vekst av MMMT1.
EEC2 var avledet fra en pasient med stadium IA grad 2 endometrioid adenokarsinom uten Lvsi. EEC2 svulster ble dyrket i OVX mus med E2 implantater. For å bestemme E2 avhengighet, ble vevet på passering 4 transplantert i OVX mus uten E2. Som et resultat av bare en vev med 16 økte (tabell 2). H E farging viste nekrotiske områder i vev (figur 2B.). I nærvær av østradiol, EEC2 tumorer infiltrert nyre og spre seg lokalt for å proksimale organer, inkludert livmoren og bukspyttkjertel med en lokal spredning grad på 11,4% og 2,9%, henholdsvis (fig. 2B, tabell 3). Lokal spredning forholdet ble beregnet som prosentandelen av antall invaderte organer med unntak av nyrer fra det totale antall transplanterte vev fragmenter (1-2 stk /nyre).
EEC4 stammer fra en pasient med stadiet IIIC2 grad 3 endometrioid adenokarsinom med omfattende Lvsi. Denne tumoren var den mest aggressive, med en innpoding ta forhold på 81% og 85% med eller uten østradiol, og betydelig invasjon og lokal spredning til tilstøtende organer. Tumor ble funnet i livmoren, milt, lever, peritoneum og bukspyttkjertel (fig. 2C, tabell 3). I tillegg ble det metastatiske tumorer observert i lever (tabell 3). Ingen E2 avhengighet ble observert for vekst av denne tumor som tar og sprer ratene var lik enten E2 var til stede eller ikke. For denne svulsten også vurdert vi om cryopreserved svulster kan være re-spres. Etter tining ble vev transplantert under nyrekapselen på to mus og 7 uker senere vekst av tumoren ble observert med tilsvar invasiv og spredningsmønster som original xenotransplantater.
Ekspresjon av ER, PR, Ki67 og CD31
USC1, MMMT1, EEC2 og EEC4 xenopodet vev, ble farget for steroidhormonreseptorer, PR og ERα, markøren spredning, Ki67 og endotelceller markør CD31. Mens USC1 og EEC2 hadde samlings punktat PR flekker i bestemte områder av svulsten, MMMT1 og EEC4 hadde en mer diffus fargemønster, med EEC4 utviser minimal eller ingen flekker. I EEC2 xenotransplantater ble PR uttrykt for det meste i området ved den fremre invaderende inn i nyrene (fig. 3). ERα nivåer var lav til fraværende i USC1, MMMT1, EEC2 og EEC4 (Fig. 3). Flertallet av cellene var positive for Ki67 i USC1, MMMT1, EEC2 og EEC4 vev, ved 6 uker etter transplantasjon som indikerer aktiv proliferasjon av tumorceller (Fig. 3). CD31 flekker var utbredt innen svulsten xenograft i MMMT1, EEC2 og EEC4, spesielt på invaderende foran. Nivået av CD31 flekker i USC1 ble lavere i forhold til de andre svulster (Fig. 3).
farging for PR, ERα, Ki67 og CD31 av USC1, MMMT1, EEC2 og EEC4 xenopodet vev ble gjort. Svulster fra OVX mus (ingen E2) for USC1, MMMT1 og EEC4 og med E2 for EEC2 vises. USC1, MMMT1, EEC2 og EEC4 vev ble farget ved passering 3, 2, 1 og 0, respectivelyT, Tumor; K, Nyre. Scale bar; 200 um.
Expression of cytokeratin, vimentin og E-cadherin
invasjon og metastasering av kreft celler er assosiert med epitelial-mesenchymale overgang (EMT) hvor epitelceller kan forvandle seg til motile mesenchymale celler [21]. Tumorxenotransplantater ble farget for markører for EMT inkludert cytokeratin, vimentin, og E-cadherin og sammenlignet med normal endometrium, hyperplastic endometrium, og klasse 1 livmorkreft (Fig. 4). Kjertel epitel farget sterkt positiv for cytokeratin i normal endometrium, hyperplasi og klasse 1 kreft (Fig. 4). Interessant, USC1 xenografter farget positivt for cytokeratin i kjernen, mens MMMT1 og EEC2 utstilt cytoplasma farging og EEC4 hadde svært svak eller ingen flekker. Både primære og xenopodet vev viste lignende mønstre av farging med unntak av USC1 hvor xenografter farget for det meste i kjernen for cytokeratin (fig. 4, S1 fig.).
Immunhistokjemisk farging ble utført for cytokeratin, vimentin og E -cadherin i xenopodet USC1, MMMT1, EEC2 og EEC4 svulster ved passering 5, 1, 1 og 0, henholdsvis. Brun farge betyr positiv farging. Scale bar; 200 um.
vimentin var sterkt positiv i begge xenopodet og primære vev for USC1, EEC2 og EEC4 vev samt stromale celler i normal endometrium (Fig. 4, S2 fig.). Grad 1 endometriekreft og hyperplasi vev var svakt positiv for vimentin både epitel og stromale celler (S2 fig.). Kjertel del av MMMT1, viste ingen farging for vimentin både xenopodet og primær vev mens stroma var positive (Fig. 4, S2 fig.).
E-cadherin farging i normal og hyperplastisk endometrium og klasse 1 tumorer lokalisert hovedsakelig i kjertelrommet og først på cytoplasmiske (fig. 4, S3 fig.). I kontrast, ble kjernefysiske farging av E-cadherin observert i xenotransplantater og primære svulster USC1, EEC2 og EEC4 mens MMMT1 utstilt mørk cytoplasma farging. Mangelen på E-cadherin på overflaten av cellene ville forandre adhesjonsegenskapene celler fremme en mer motile fenotype.
Ekspresjon av p53 og PTEN
den mest utbredte genetisk endring i skjer i USC p53-genet hos omtrent 90% av tilfellene [3]. Den mutasjon i p53 manifesterer seg ofte som en økning i p53-proteinnivåer [22]. Nivåene av p53 protein var umulig å oppdage i kjertler og stroma av normal og hyperplastisk endometrium og klasse 1 livmorkreft (S4 fig.). På samme måte, p53-farging var minimal å fraværende i MMMT1, EEC2 og EEC4 både i xenopodet og primærtumorer (fig. 5, S4 fig.). I motsetning til dette var p53 farging sterkt positiv i USC1 xenopodet og primære svulster. Type I EEC er kjennetegnet ved en rekke genetiske endringer med de mest vanlige mutasjoner i PTEN-genet [3]. Alle xenopodet og primærtumorer farget for PTEN med unntak av EEC2 som viste minimal til ingen farging i tumorcellene (fig. 5, S5 Fig.). Relativt, kjertelrommet hyperplasi og klasse 1 livmorkreft viste ingen farging av PTEN mens normal endometrium farget for PTEN i kjertler og stroma (S5 fig.).
Immunhistokjemisk farging ble gjort for p53, PTEN, uPA og uPAR i xenopodet USC1, MMMT1, EEC2 og EEC4 svulster ved passering 5, 1, 1 og 0, henholdsvis. Brun farge betyr positiv farging. Scale bar; 200 um.
Uttrykk av Urokinase plasminogen aktivator (UPA) system
UPA og dens reseptor uPAR fremmer proteolyse som forbedrer tumorvekst og invasjon. Både UPA og uPAR har vist seg å bli uttrykt i avansert kreft [23]. Alle tumorxenotransplantater og primærsvulster farget positivt for UPA (Fig. 5, S6 Fig.). Tilsvarende normal og hyperplastisk endometrium og klasse 1 livmorkreft, beiset for UPA i både kjertel og stromal avdelinger (S6 fig.). I motsetning til dette, farging for uPAR var tydelig i de invasive tumorer, MMMT1, EEC2 og EEC4 med lite farging ble observert i USC1 (fig. 5). UPAR nivåene var fraværende i klasse 1 livmorkreft og normal endometrium (S7 fig.). Disse resultatene tyder på at uttrykket av uPAR kan bidra til invasiv natur endometrial svulster i vårt system.
Diskusjoner
Hensikten med denne studien var å etablere pasient avledet tumorxenotransplantater av primær livmorkreft vev for fortsatt forplantning for å tilveiebringe en modell for å studere invasjon og metastase. Vi rapporterer her etablering av svulster fra fire pasienter av ulike endometriekreft typer og karakterer som viser differensial invasiv og metastatisk kapasitet. De xenografter beholde egenskapene til den opprinnelige svulsten og vise egenskaper som er unike for type 1 eller type II livmorkreft.
Som endometrial svulster blir mer aggressiv og dårlig differensiert uttrykk for hormonreseptorer, ER og PR avtar, og deres hormon respons endringer. Avhengigheten av tumor grafts til E2 ble demonstrert her. USC1, MMMT1, og EEC4 ikke krever E2 for grafts å vokse. Dette kan være på grunn av den lave nivåer av ER i tumorene. I motsetning til dette opprettholdes EEC2 E2 avhengighet til tross for de lave nivåer av ER som detekteres. E2 kan være en ligand av G-proteinkoblet reseptor 30 (GPR30), som blir overuttrykt i høy grad endometrial cancer [24]. I tillegg er det mulig at GPR30 medierer ikke-transkripsjonelle effekter av østrogen på aktivering av PI3K /Akt vei i denne svulsten, og fremme vekst [25]. Interessant, mens alle fire xenopodet vev var ERα lav til negativ, alle podet svulster uttrykte varierende grad av PR. PR uttrykker cellene EEC2 ble lokalisert rundt invaderende foran nyrene. Grunnen for ekspresjon av PR i dette spesielle området, og dens rolle i invasjonen er fortsatt uklar. Faktisk er virkningsmekanismen av progesteron gjennom sin reseptor i avanserte, invasiv endometrial carcinoma ukjent. Gener som er regulert av PR i normal endometrium er annerledes enn de i livmorkreft [26]. Gitt pleiotropisk aktivitet av PR som er avhengig av det cellulære miljø [15], er det mulig at PR kan ha både vekst-, invasion- og metastasis- fremme eller inhibere virkninger på tumorcellen. Vår pasient xenograft modell vil være et nyttig verktøy for å dechiffrere rolle progesteron på disse svulstene.
For at kreftcellene å invadere, må celle-celle adhesjon være tapt for få cellemotilitet og bryte vekk fra svulsten vev. EMT er involvert i formidling av individuelle carcinoma celler fra primære karsinom vev, enten forbigående eller stabilt [27], [28]. Tap av E-cadherin er det første trinnet av EMT, tillater invasjon og metastasering i mange karsinomer. I USC1, EEC2 og EEC4, ble E-cadherin lokalisert til kjernen, mens MMMT1, klasse 1 livmorkreft, høyt blodtrykk, og normal endometrium utstilt mørk cytoplasma farging. Studier har vist nukleær lokalisering av E-cadherin i både godartede og ondartede tumorer [29], [30]. Spaltede fragmenter av E-cadherin har blitt rapportert å translocate til kjernen [31]. Tap av intakt transmembrane E-cadherin uunngåelig ville redusere celle til celle adhesjon.
urokinase-plasminogen-aktivator (UPA) systemet kan føre til nedbrytning av ekstracellulær matriks, forbedre angiogenese og føre til invasjon og metastase [32]. Det er lite kjent om UPA system i livmorkreft. Tidligere identifiserte vi øket UPA-mRNA-ekspresjon i en livmor serøs carcinoma cellelinje (SPEC2) sammenlignet med den lave grad endometrioid carcinoma cellelinje (Ishikawa) [33]. Reseptoren uPAR har vist seg å være til stede på høyere nivåer hos pasienter med aggressive og sent stadium livmorkreft [32], [34]. I vår studie ble UPA farging observert i alle svulstene som ble testet mens uPAR ble uttrykt i svulstene som invaderte gjennom nyrene og lokale organer som tyder på at uPAR kan være målrettet for å hindre invasjonen i avansert livmorkreft.
I sammendraget vi har opprettet og spredte pasient avledet endometrial svulster fra 4 tilfeller med nyrekapselen xenograft system. Denne modellen kan brukes til å teste nye forbindelser, så vel som kombinasjons-terapier, og er overlegne i forhold til de konvensjonelle cellelinje xenograft-modeller. I tillegg kan biologi av svulsten lett bli vurdert for å identifisere prediktive markører for respons på behandlingsregimer som i dag mangler for avansert og tilbakevendende livmorkreft. Til tross for god prognose som er assosiert med lav grad av endometrial cancer, spesielt når det oppdages tidlig, er avanserte tilfeller er dødelige med meget liten eller ingen effektiv behandling for denne sykdommen. Studerer pasient svulster som xenografter vil gi mye nødvendig informasjon for å forbedre behandling for aggressiv livmorkreft.
Hjelpemiddel Informasjon
S1 Fig.
Cytokeratin i grunnskolen og xenopodet vev. Immunhistokjemisk farging ble gjort for vimentin i grunnskolen og xenopodet USC1, MMMT1, EEC2 og EEC4 svulster ved passering 5, 1, 1 og 0, henholdsvis. Farging ble gjort for normale og hyperplastiske endometrium og klasse 1 endometrial kreft vev. Brun farge betyr positiv farging. Scale bar; 200 um
doi:. 10,1371 /journal.pone.0116064.s001 plakater (TIFF)
S2 Fig.
vimentin i grunnskolen og xenopodet vev. Immunhistokjemisk farging ble gjort for vimentin i grunnskolen og xenopodet USC1, MMMT1, EEC2 og EEC4 svulster ved passering 5, 1, 1 og 0, henholdsvis. Farging ble gjort for normale og hyperplastiske endometrium og klasse 1 endometrial kreft vev. Brun farge betyr positiv farging. Scale bar; 200 um
doi:. 10,1371 /journal.pone.0116064.s002 plakater (TIFF)
S3 Fig.
E-cadherin i grunnskolen og xenopodet vev. Immunhistokjemisk farging ble gjort for E-cadherin i grunnskolen og xenopodet USC1, MMMT1, EEC2 og EEC4 svulster ved passering 5, 1, 1 og 0, henholdsvis. Farging ble gjort for normale og hyperplastiske endometrium og klasse 1 endometrial kreft vev. Brun farge betyr positiv farging. Scale bar; 200 um
doi:. 10,1371 /journal.pone.0116064.s003 plakater (TIFF)
S4 Fig.
p53 i grunnskolen og xenopodet vev. Immunhistokjemisk farging ble gjort for p53 i grunnskolen og xenopodet USC1, MMMT1, EEC2 og EEC4 svulster ved passering 5, 1, 1 og 0, henholdsvis. Farging ble gjort for normale og hyperplastiske endometrium og klasse 1 endometrial kreft vev. Brun farge betyr positiv farging. Scale bar; 200 um
doi:. 10,1371 /journal.pone.0116064.s004 plakater (TIFF)
S5 Fig.
PTEN i grunnskolen og xenopodet vev. Immunhistokjemisk farging ble gjort for PTEN i grunnskolen og xenopodet USC1, MMMT1, EEC2 og EEC4 svulster ved passering 5, 1, 1 og 0, henholdsvis. Farging ble gjort for normale og hyperplastiske endometrium og klasse 1 endometrial kreft vev. Pilene viser PTEN positive celler i EEC2. K, Nyre; Brun farge betyr positiv farging. Scale bar; 200 um
doi:. 10,1371 /journal.pone.0116064.s005 plakater (TIFF)
S6 Fig.
UPA i grunnskolen og xenopodet vev. Immunhistokjemisk farging ble gjort for UPA i grunnskolen og xenopodet USC1, MMMT1, EEC2 og EEC4 svulster ved passering 3, 1, 1 og 0, henholdsvis. Farging ble gjort for normale og hyperplastiske endometrium og klasse 1 endometrial kreft vev. Brun farge betyr positiv farging. Scale bar; 200 um
doi:. 10,1371 /journal.pone.0116064.s006 plakater (TIFF)
S7 Fig.
uPAR nivåer i grunnskolen og xenopodet vev. Immunhistokjemisk farging ble gjort for uPAR i grunnskolen og xenopodet USC1, MMMT1, EEC2 og EEC4 svulster ved passering 5, 1, 1 og 0, henholdsvis. Farging ble gjort for normal endometrium og klasse 1 endometriekreft vev. Brun farge betyr positiv farging. Scale bar; 200 um
doi:. 10,1371 /journal.pone.0116064.s007 plakater (TIFF)
S8 Fig.
ANKOMMER sjekkliste
doi:. 10,1371 /journal.pone.0116064.s008 product: (PDF)
Takk
Vi er takknemlige til gynekologisk onkologi Team, Doreine Carson , Cary Passaglia, Racher Bers, Dr. Mario J. Pineda og Dr. Kristina M. Mori for samtykkende pasienter og skaffe vev, Dr. Andrew P. Mazar for å gi uPAR antistoff (ATN-617), Vanida A. Serna og Lindsey M. Butler for teknisk hjelp, og de Mouse histologi og fenotyping kjernefasilitetene på Robert Lurie Cancer Center ved Northwestern University.
