I en enkelt test for leverkreft, pasienter som har ervervet sorafenib og doxorubicin hadde sammen noe lenger gjennomsnittstider progresjonsfri overlevelse og total overlevelse enn pasienter som fikk doxorubicin alene. Nok et lite molekyl kinase inhibitor med en stor bindende affinitet for ZAK er nilotinib, som også stopper stoppunkt cluster region Abelson og skjer for å være i klinisk bruk for behandling av kronisk myelogen leukemi.
Selv om bindingsaffinitetene av sorafenib og nilotinib for ZAK er rapportert, har verken agenten blitt testet for deres evne til å begrense ZAK aktivitet. Disse midlene ble administrert av oss å HaCaT celler 30 min før behandling med doksorubicin i 24 timer, for å finne ut om sorafenib eller nilotinib kan begrense nedstrøms handlinger ZAK. Den klare nærvær av enten kjemisk sterkt undertrykt doxorubicin stimulert fosforylering av p38 og JNK MAPK. Akkurat som i HaCaT celler eksponert for ZAK siRNA, til dekning av disse cellene sorafenib eller nilotinib redusert basal fosforylering av p38 MAPK. Romidepsin produsenten
Sorafenib og nilotinib også redusert spalting av caspase 3 og PARP, noe som indikerer at doxorubicin mediert apoptose ble også undertrykt. Zak hemmere blokkere daunorubicin indusert MAP K service og apoptose i HaCaT celler. Daunorubicin kan være et antracyklin som er ansett for å jobbe med tilsvarende mekanismer som doxorubicin men viser mindre potent antitumor aktivitet. For å fastslå om hemming av ZAK utfall daunorubicin indusert apoptose og MAPK aktivisering, vi forbehandlet HaCaT celler med sorafenib eller nilotinib tett fulgt av daunorubicin i 24 timer.
I likhet med funnene med doxorubicin, den klare tilstedeværelsen av enten kjemisk sterkt undertrykt daunorubicin stimulert fosforylering av JNK og p38 MAPK. Sorafenib og nilotinib også betalt av kløyving av caspase 3 og PARP, noe som indikerer at daunorubicin mediert apoptose ble også undertrykt. Doxorubicininduced apoptose er delvis blokkert av hemmere av JNK eller p38 i HaCaT celler. ZAK er bare en MAP3K som har vist seg å føre til fosforylering av p38 MAPK og JNK.
For å avgjøre om tilbaketrekking av JNK eller p38 MAPK kan hindre doxorubicin aktivert apoptose, brukte vi SB 203580, SP 600 125, eller begge i kombinasjon for å HaCaT celler 30 min før behandling med 25 M doxorubicin i 24 timer. Nærværet av enten inhibitor eller en blanding av begge resulterte i spaltning av kaspase 3 og PARP, noe som indikerer at p38 MAPK og JNK deltok i en utstrekning i doksorubicin mediert apoptose. I nærvær av den pancaspase kjemiske, zVAD FMK, doxorubicininduced apoptose var fullstendig hemmet. ZAK siRNA og Zak hemmere hindrer ikke doxorubicininduced apoptose i HeLa celler. For å prøve om Zak hemmere vil redusere celledød i en kreftcellelinje vi forbehandlet HeLa celler med sorafenib eller nilotinib fulgt av doksorubicin i 24 timer.
I motsetning til deres evne til å beherske PARP og caspase 3 cleavage i HaCaT celler, nilotinib og sorafenib ikke lavere PARP eller caspase 3 cleavage i HeLa celler. I HeLa-celler, doxorubicin ikke klarte å øke fosforylering av JNK og p38 MAPK, sannsynligvis fordi de basale nivåene av disse fosforylerte SAPKs allerede var forhøyet i fravær av en induser. Likevel ble fosforyleringen av SAPKs trykkes ved sorafenib og nilotinib, noe som indikerer at inhibitorene var effektiv til å kontrollere ZAK i disse cellene. Disse data tyder på at økt endogen utøvelse av ZAK i HeLa-celler kan være ansvarlig for den økte basal fosforylering av JNK og p38 MAPK.
