Abstract
Bakgrunn
Et vell av bevis innhentet ved hjelp av musemodeller viser at CD4
+ CD25
+ foxp3
+ regulatoriske T-celler (Treg) opprettholde perifer toleranse overfor selv-antigener, og også inhiberer anti-tumor immunresponser. Til dags dato er det begrenset informasjon om CD4
+ T-celle responser hos pasienter med tykktarmskreft (CRC). Vi dro ut for å måle T celle responser til et tumorassosiert antigen og undersøke om treg hemmende på de anti-tumor immunresponser hos CRC pasienter.
Metodikk og hovedfunnene
Treg ble identifisert og karakterisert som CD4
+ CD25
+ foxp3
+ ved hjelp av flowcytometri. En økt frekvens av treg ble demonstrert i både perifere blod og mesenteriske lymfeknuter hos pasienter med kolorektal kreft (CRC), sammenlignet med enten friske kontrollpersoner eller pasienter med inflammatorisk tarmsykdom (IBD). Uttømming av treg fra perifere mononukleære blodceller (PBMC) fra CRC pasienter avslørt CD4
+ T-celle responser, som observert av IFNy frigivelse, til det tumorassosierte antigen 5T4, mens ingen virkning ble observert i en sunn samme alder kontrollgruppe .
Konklusjoner /Betydningen
Sammen er disse data viser at treg stand til å inhibere tumorassosierte antigen-spesifikke immunresponser er anriket i pasienter med CRC. Disse resultatene støtter en begrunnelse for å manipulere treg å forbedre kreft immunterapi
Citation. Clarke SL, Betts GJ, Plant A, Wright KL, El-Shanawany TM, Harrop R, et al. (2006) CD4
+ CD25
+ foxp3
+ regulatoriske T-celler Dempe anti-tumor immunrespons hos pasienter med tykktarmskreft. PLoS ONE 1 (1): E129. doi: 10,1371 /journal.pone.0000129
Academic Redaktør: Christopher Arendt, Sanofi-Aventis, USA
mottatt: 08.09.2006; Godkjent: 14 november 2006; Publisert: 27.12.2006
Copyright: © 2006 Clarke et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av midler fra Tenovus Cancer Charity, Cardiff, og et lite tilskudd award fra Cardiff og Vale NHS Trust. KLW ble finansiert av en Wellcome Trust prosjektstøtte og Association of International Cancer Research. AMG er en MRC senior stipendiat
Konkurrerende interesser:. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Tykktarmskreft (CRC) er den fjerde mest. diagnostisert ondartet sykdom med anslagsvis 1 million nye tilfeller og over 500 000 dødsfall hvert år på verdensbasis [1]. Den nåværende ledelsen av pasienter med CRC dreier seg om fjerning av primærtumor og de lokale lymfeknuter og selektiv bruk av 5-fluorouracil (5-FU, hemmer tymidylatsyntase) basert kjemoterapi [2]. Nylige fremskritt i preoperativ avbildning, kirurgisk teknikk og bruk av neo-adjuvant kjemoterapi har bedret resultatene, men kolorektal kreft er fortsatt den nest største årsaken til død av kreft i vestlige land med 40-50% av pasientene som gjennomgår en potensielt kurativ operasjon, gjennomgår tilbakefall eller død av metastatisk sykdom.
klinisk-patologisk iscenesettelse av sykdommen korrelerer sterkt med prognose. Interessant er forbedret klinisk resultat også assosiert med tilstedeværelse av tumor-infiltrerende lymfocytter (Tīls), spesielt dersom lymfocyttene invadere kjertel elementer av tumoren [3], [4]. Dette tyder på at anti-tumor immunresponser kan hemmende på veksten av primærtumor, og kan ha en viktig rolle i å kontrollere metastatisk sykdom. Indirekte bevis for betydningen av immunrespons hos kreftpasienter er den epidemiologiske foreningen i enkelte befolkningsgrupper mellom økt forekomst av svulster og immunsuppresjon etter organtransplantasjon [5].
Mye interesse har nylig oppstått i rollen som en naturlig forekommende populasjon av CD4
+ CD25
+ regulatoriske T-celler (treg), kjennetegnet ved ekspresjon av gaffelhodet transkripsjonsfaktor foxp3, og økte nivåer av overflatemarkører CD45RO, CTLA-4, og GITR [6 ], [7], [8]. Treg er blitt vist å kontrollere selv-antigen-spesifikke responser i periferien, og følgelig kan spille en rolle i kontroll av anti-tumor immunresponser. Flere grupper, inkludert vår egen, har vist at uttømming av treg fremmer dannelsen av anti-tumor immunresponser og tumor avvisning i murine modeller (oversikt i [9]). Det er bevis som tyder på at disse beskyttende tiltak rettet mot både tumorspesifikke antigener samt felles tumorantigener [10], [11].
I den senere tid har flere studier observert en økt forekomst av CD4
+ CD25
+ T-celler i perifert blod fra pasienter med forskjellige typer kreft, selv om de fleste av disse studiene ikke bekrefte at disse var treg ved farging for foxp3 (oversikt i [9]). Tilstedeværelsen av foxp3
+ Treg innenfor Tīlss for ovarial cancer har, imidlertid, blitt identifisert som en uavhengig risikofaktor for dårligere prognose. Videre, etter rensing fra tumor ascites, ble disse Treg vist seg å undertrykke Her2-spesifikke T-celle responser
in vitro product: [12].
Den menneskelige onko-føtal antigen, 5T4, er en 72kDa leucin-rik membran glykoprotein som uttrykkes ved høye nivåer i morkake og også på et bredt spekter av humane karsinomer inkludert kolorektal, gastrisk, renal og ovarie, men sjelden på normalt vev [13], [14], [15], [16 ], [17], [18]. I denne studien har vi testet hypotesen om at Treg utvikle seg CRC pasienter som undertrykker 5T4-spesifikke immunresponser. Prøver fra pasienter med CRC eller IBD, og friske kontroller ble undersøkt for å ta opp tre spørsmål: er frekvensen av treg (CD25
hiCD4
+ foxp3
+ T-celler) øket i blod eller lymfeknuter fra pasienter med CRC; kan antitumor T-celle responser på 5T4 identifiseres i CRC-pasienter; og gjør Treg påvirket disse anti-tumor immunresponser?
Metoder
Eksempel grupper
CRC pasienter ble identifisert fra tverrfaglig teammøter med den første presentasjonen av en adenokarsinom og ingen rapporterte fjernmetastaser på tverrsnittsavbildning (TNM stadium I-III, Duke etappe A-C). IBD pasienter (ulcerøs kolitt eller Crohns sykdom) deltar på klinikken eller som gjennomgår elektiv kirurgisk reseksjon ble rekruttert til studien. Lokal etisk komité godkjennelse ble gitt for studie av Bro Taf lokale forskningsetiske komité.
antigener
Renset protein derivat (PPD) (Statens Serum Institut, Danmark), hemaglutinin (HA) var en slags gave fra Dr John Skehel (Nimr, Mill Hill), ble 5T4 produsert som beskrevet tidligere [19] (Oxford Biomedica). Alle antigener ble anvendt ved en sluttkonsentrasjon på 1 pg /ml.
Rensing av lymfocytter
30-50 ml blod ble tatt fra pasienter eller kontroller og heparinisert (10 U /ml). PBMC ble hentet ved sentrifugering i løpet Lymphoprep (Axis-Shield, Oslo, Norge). Cellene ble vasket to ganger i RPMI før videre bruk. Lymfeknuter ble dissekert fra ferske prøver innen 30 minutter etter kirurgi, vasket i RPMI, most gjennom et sterilt celle sil og samlet ved sentrifugering.
flowcytometrisk analyse av lymfocytter fra blod og lymfeknuter
prøvene ble farget med fluoresceinmerkede antistoffer mot CD4 (klone RPA-T4), CD25 (klon M-A251), CD45RO (klone UCHL1) og CTLA4 (klone BNI3) (BD Pharmingen), CD4 (klone S3.5) (Caltag ) og CD25 (klon 4E3) (Miltenyi Biotec). All farging ble utført i fosfatbufret saltvann (PBS), 2,5% FCS, 5 mM EDTA og intracellulær farging ble utført ved hjelp av cytofix, cytoperm sett (BD Pharmingen). Foxp3 farging ble utført ved anvendelse av FITC-anti-human foxp3 farging kit (klon PCH101) (71-5776 eBioscience). Lymfocytter ble separert på fremover og side scatter profiler. All flowcytometri ble utført på en BD FACSCalibur og analysert ved hjelp av Summit v3.1 analyseprogram (build 839 Dakocytomation, Fort Collins, Colorado).
CD4
+ CD25
hi add-back eksperimenter
Renset PBMC ble beriket for CD4
+ celler og deretter delt inn i CD4
+ CD25
hei og CD4
+ CD25
– fraksjoner ved hjelp av magnetiske kuler (Miltenyi CD4
+ CD25
+ regulatoriske isolasjon kit). Flowcytometri av hver fraksjon viste at nivåene av CD25
+ celle utvalg av Miltenyi CD4
+ CD25
+ regulatoriske isolasjon kit og Miltenyi anti-CD25 perler var sammenlignbare. En spredning analysen ble satt opp ved hjelp 2×10
4 CD4
+ CD25
– celler, aktiveres med 0,5 mikrogram /ml plate-bundet anti-CD3 (klon OKT3) (eBioscience) og 1 mikrogram /ml løselig anti -CD28 (klon 28.2) (BD Pharmingen) antistoffer i RPMI 1640 supplert med 10% varmebehandlet FCS, 100 U /ml penicillin, 100 ug /ml streptomycin, 2 mM L-glutamin og 1 mM natriumpyruvat. CD4
+ CD25
– celler ble aktivert alene eller i nærvær av CD4
+ CD25
hei på celler varierende forhold på 01:01, 1:0.1, 1:0.01 og 1:0.001 CD4
+ CD25
-:CD4
+ CD25
hi celler. Proliferasjon ble målt på dag 3 ved tilsetning av 0,037 MBq /brønn (1 uCi) av [
metyl
-3H] -tymidin (Amersham Biosciences) for de siste 18 timer av kulturen. Cellene ble høstet på trykte filtermat A filtre (Wallac, Turku, Finland leverandør Perkin Elmer) ved hjelp av en TomTek cellehøster. Når filtre var tørre, meltilex en smelte på scintillatoren ark (Wallac) ble tilsatt, og filtrene ble avlest ved anvendelse av en Trilux Micro 1450 væskescintillasjons og luminescens teller (Wallac).
IFN-γ ELISPOT-analyser
Antistoffer ble innhentet fra Mabtech (Natka, Sverige) og ELISPOT ble utviklet ved hjelp av alkalisk fosfatase underlaget kit fra Bio-Rad (Hercules, California). Effekten av treg uttømming på antigen-spesifikke IFN-γ produksjon ble vurdert i parallelle analyser. CD25
hi celler ble tømt ved hjelp av magnetisk separasjon med MAC CD25 mikroperler (Miltenyi Biotec, Tyskland). I korthet, 1,5 x 10
7 PBMC ble inkubert med 15 ul anti-CD25-belagte perler i totalt reaksjonsvolum på 150 ul buffer (1 x PBS, 0,5% BSA, 5 mM EDTA) ved 4 ° C i 15 min . Overskytende Kulene ble vasket av og PBMC ble kjørt ned en kolonne MS. Kolonnen ble vasket med 3 x 1 ml vaskinger i buffer. Effekten av uttømming ble bekreftet ved strømningscytometri. Analyser ble satt opp ved bruk av enten 3,5 x 10
5 undepleted eller CD25
hi-uttømte celler i RPMI 1640 supplert med 5% varmebehandlet FCS, 100 U /ml penicillin, 100 ug /ml streptomycin, 2 mM L -glutamine og 1 mM natrium pyruvat pr brønn av et polymerforsterket 96-brønn filtreringsplate (MAIP-S-4510) (Millipore, Moslheim, Frankrike) i et totalt reaksjonsvolum på 100 ul /brønn. Konsentrasjonene av antistoffer som brukes og vasketrinnene ble i henhold til produsentens instruksjoner, alle antistoff inkuberinger ble med 50 ul /brønn. Fremgangsmåten er tidligere beskrevet [20]. PPD, HA og 5T4 ble testet i to brønner, etter å ha blitt tilsatt til en sluttkonsentrasjon på 1 ug /ml, og sammenlignet med kontrollbrønner uten protein. Platen ble inkubert ved 37 ° C, 5% CO
2 i 18 timer. Aktiverte T-celler ble nummerert ved enkelt-celle-nivå ved å telle antallet flekker pr brønn ved hjelp av en automatisert ELISPOT-leser (Cadama). Respondere ble identifisert som har minst 5 stikkdannende celler (SFC) per 10
6 PBMC, etter subtraksjon av bakgrunnen, og en økning på minst 50% over bakgrunnen.
Statistisk analyse
Flowcytometrisk data ble analysert ved hjelp av uparet studentens
t
-test (GraphPad Prism versjon 2.0 (GraphPad programvare). andelen av kreftpasienter og friske kontroller monterings et svar på 5T4 ble sammenlignet ved hjelp av en lukket skjema metode for å sammenligne forskjeller og beregning av konfidensintervall [21].
Resultater
Definere den menneskelige treg befolkningen
Ved hjelp av de strenge port parametere rapportert nylig [8], treg var identifisert som CD4-positive celler med lysere CD25-farging enn den for CD4-negative pasienter (figur 1a). frekvensen av treg ble beregnet som prosentandelen av CD4
+ CD25
hi-celler i CD4
+ befolkning, og var i størrelsesorden 0,09 til 1,44% av CD4
+ celler i PBMC av sunne alders matchet kontroller. i tråd med tidligere rapporter, de aller fleste av CD4
+ CD25
hi cellene CTLA4-positive og uttrykkes CD45RO (mer enn 97%) [6], [7], [8]. Den CD25
hi befolkningen ble videre analysert av uttrykket av foxp3. Som vist i figur 1b, over 95% av CD4
+ CD25
hi-celler uttrykte foxp3, sammenlignet med ca. 30% av CD4
+ CD25
int celler. Dette mønsteret av flekker var den samme for både friske kontroller og CRC pasienter. Foxp3 uttrykk var ubetydelig i CD4
+ CD25
– celler (Figur 1b)
(A) CD4
+ CD25
-., CD4
+ CD25
int og CD4
+ CD25
hi celler ble identifisert som vist. CD4
+ CD25
hi celler er de der CD25 uttrykk var høyere enn på CD4
– befolkning. (B) foxp3 uttrykk innenfor hver populasjon ble vurdert av intracellulær farging. (C) Fersk isolert CD4
+ CD25
– T-celler (2 × 10
4 celler /brønn) ble dyrket alene (CD25- /lav) eller med CD4
+ CD25
hi T-celler ved forskjellige forhold, og stimulert med plate-bundet anti-CD3 og anti-CD28 oppløselige. Proliferasjon ble bestemt ved (
3 H) -tymidin-inkorporering. Resultatene representerer gjennomsnittet av tredoble brønner med standardavvik, fra en representant analysen.
For å bekrefte den regulatoriske fenotype av denne populasjonen av CD4
+ CD25
hi celler, deres evne til å undertrykke aktivering av CD4
+ CD25
– celler ble vurdert ved hjelp av en co-kultur
in vitro
spredning analysen. CD4
+ CD25
– og CD4
+ CD25
hi-celler ble separert fra PBMC, som beskrevet i metodene. Tilsetningen av CD4
+ CD25
hi-celler til polyclonally stimulerte CD4
+ T-celler klart undertrykt proliferasjon av CD4
+ CD25
– T-celler og, som rapportert av andre, denne undertrykkelse ble doseavhengig [8], [22], [23] (Figur 1c).
CRC pasienter har økt antall treg i perifert blod
treg ble fenotypisk definert som skissert ovenfor . Figur 2a viser frekvensene for treg i PBMC av CRC pasienter (n = 12, aldersgruppe 58-80 år) sammenlignet med alderstilpassede friske kontroller (n = 11, aldersgruppe 48-93 år) og pasienter med inflammatorisk tarmsykdom (n = 22, i alderen 19-80 år). I alle grupper hyppigheten av treg var mindre enn 2% av CD4
+ T-celler. Imidlertid, den midlere frekvens i CRC-pasienter (1,13%) var betydelig økt sammenlignet med kontrollgruppene (IBD-pasienter 0,56%, friske kontroll 0,46%). Det var ingen signifikant forskjell i hyppigheten av treg hos friske kontroller og IBD pasienter.
(A) Fersk isolert PBMC fra 12 CRC pasienter, 11 friske alder-matchet kontroller og 22 IBD pasienter ble farget med antistoffer mot CD4 og CD25. Ved hjelp av portstyrings strategien er skissert i figur 1, ble treg oppregnet. (B) mesenteriske lymfeknuteprøver (LN) ble samlet inn fra kirurgiske prøver av 8 CRC og 7 IBD pasienter og farget og gated som ovenfor. Dataene viser prosentandelen av CD4
+ celler som var CD25
hi i hver prøve. Hvert symbol representerer en pasient. De p-verdiene ble beregnet ved hjelp av en uparet studentens
t
-test.
CRC pasienter har økt antall treg i mesenteriets lymfeknuter
Innhenting kontroll lymfeknuter fra motiver uten magesykdom var ikke mulig. IBD pasienter har en colonic sykdom kontrollgruppe til CRC pasienter, sistnevnte også ofte demonstrerer områder med betennelse rundt svulsten. Videre har resultatene fra PBMC, ingen signifikant endring i frekvensene til Treg hos pasienter med IBD sammenlignet med friske kontroller. Derfor vurderte vi det rimelig å bruke mesenteriets lymfeknuter hentet fra IBD pasienter som gjennomgår kirurgi som en kontrollgruppe som å undersøke treg i videregående lymfevev.
Friske lymfeknuter ble hentet fra kirurgisk resected prøvene og forberedt som skissert i metoder. Frekvensene for treg i mesenteriske lymfeknuter hentet fra CRC-pasienter (n = 8), og IBD-pasienter (n = 7) ble sammenlignet (figur 2b). CRC pasientene viste igjen en signifikant økning i hyppigheten av treg, noe som reflekterer økningen som allerede er beskrevet i perifert blod. Lymfeknute-avledet CD25
hi Treg hadde samme fenotype til de som finnes i blodet (data ikke vist). Ingen forskjell ble observert i den totale andelen av CD4
+ eller CD8
+ T-celler (data ikke vist).
Pasienter med ikke-metastatisk CRC demonstrere sprek CD4
+ T-celle responser å huske antigener
PBMC ble renset fra CRC pasienter (n = 14) før operasjonen og den spesifikke CD4
+ T celle respons til kontroll tilbakekalling antigener PPD og HA målt ved IFN-γ utgivelse. Disse resultatene ble sammenlignet med friske alders-tilpassede kontroller (n = 11) (figur 3). CD4 og CD8 uttømming eksperimenter bekreftet at disse var CD4
+ T-celleresponser (data ikke vist). Det var ingen bevis for at pasientene ble immunsupprimerte; alle fag svart på minst ett antigen. Celle proliferasjon ble også undersøkt i parallelle forsøk som et mål på T-celleaktivering, og igjen ingen bevis for immunsuppresjon ble funnet før operasjon (data ikke vist).
Hele PBMC fra 11 alders-tilpassede kontroller og 14 CRC pasienter ble vurdert for svarene på antigener PPD og HA, målt ved IFN-γ ELISPOT. Renset PBMC ble tilsatt ved 3,5 x 10
5-celler /brønn, og inkubert i 18 timer i nærvær av enten 1 pg /ml PPD, 1 ug /ml HA eller uten antigen. Brønnene ble satt opp i to eksemplarer. Færre enn 5 stikkdannende celler /10
6 PBMC ble ansett negative.
Treg ha en markert effekt på anti-tumor immunresponser i blodet hos pasienter med CRC
En serie forsøk ble utført på CRC-pasienter (n = 14) og alders-tilpassede kontroller (n = 11) for å bestemme hvorvidt fjernelse av CD25
hi-celler endret immunresponsen for å hente antigener og tumorassosierte antigen 5T4. Vi optimalisert isolasjonssystem utviklet spesielt for å utarme bare CD25
hi celler fra våre prøver som beskrevet i metoder (figur 4a). Fersk isolerte PBMC ble brukt i
ex vivo
IFN-y ELISPOT-analyser som beskrevet ovenfor for å bestemme svarene på recall antigener og svulst antigen 5T4, før og etter uttømming av treg. I det hele tatt, uttømming av treg avdekket noen svar å huske antigener i CRC pasienter og kontroller (figur 4b). Imidlertid, i tilfellet med det tumorassosierte antigenet 5T4, var det en slående forskjell mellom kontroller og CRC-pasienter. En 5T4-spesifikk
ex vivo
respons ble funnet i 1/11 av friske kontroller og utarming av treg forbedret dette svaret. Mens uttømming av treg utvidet den 5T4-spesifikk reaksjon i 1/14 av CRC pasienter, utarming av denne befolkningen førte til
avsløring
av en 5T4 respons i 5/14 av pasientene som ble testet (95% konfidensintervall for sammenkoblede forskjeller er -0,83 til -0,22 avsløre en betydelig forskjell i 5T4 respons mellom CRC pasienter og friske kontroller). Disse dataene tyder på at treg er undertrykkende anti-5T4 immunresponser spesielt hos pasienter med tykktarmskreft. Disse seks pasienter som vist forbedret 5T4 responser hadde lignende treg frekvenser i perifert blod (område 0,82 til 2,35% gjennomsnitt 1,14%) til de frekvenser som måles på hele CRC populasjonen (gjennomsnittlig 1,13%). Mens IFN-γ-release, målt direkte
ex vivo
, aktiverte anti-5T4 responser å bli oppdaget, vi fant ikke sprek proliferative responser til 5T4 i enten CRC pasienter eller kontroller. Men med flere runder med re-stimulering og tillegg av IL-2, har vi vokst ut HLA-DR-begrenset 5T4-spesifikke linjer (data ikke vist).
(A) PBMC ble renset og to prøvene forberedt: hele PBMC og PBMC utarmet av CD25
hi celler. (B) Hele PBMC og CD25
hi-utarmet PBMC fra 11 alderskontrollpersoner (åpne søyler) og 14 CRC pasienter (solide søyler) ble satt opp i parallell i en IFN-y ELISPOT analysen (3,5 × 10
5 celler /brønn) med PPD (øverst graf), HA (midten graf) eller 5T4 (lavere graf). Antall respondere er vist for hvert antigen. I hvert fall den prosent til venstre er frekvensen av reaksjoner som økte etter Treg mangel (Økning), er andelen i midten hyppigheten av ikke-respondere som hadde en respons etter mangel (New Response) og på riktig hyppigheten av reaksjoner som viste en nedgang eller ingen endring i respons etter treg mangel (reduksjon /NC). Den 95% konfidensintervall for parede forskjeller proporsjonene mellom pasienter og kontroller er -0,83 til -0,22 avsløre en betydelig forskjell for 5T4 svar. (C) De 6 CRC pasienter med respons på 5T4 er vist i mer detalj. Stolpene representerer spotdannende celler /10
6 PBMC etter subtraksjon av bakgrunns flekker, hele PBMC (lys grå) og CD25
hi-utarmet PBMC (mørk grå). Svarene ble kun observert i CD25
hi-utarmet PBMC av pasienter 1-5, mens en respons ble observert i begge PBMC populasjoner fra pasient 6. I alle analysene, ble brønner satt opp i to eksemplarer.
diskusjon
Vi sammenlignet frekvensen av nøye definerte CD4
+ CD25
+ foxp3
+ regulatoriske T-celler (treg) i CRC pasienter med friske alder-matchet kontroller og IBD pasienter. CRC pasienter har en økt frekvens av treg og det er bevis for at disse Treg målet anti-tumor immunresponser.
Vi har vurdert om forbedrede antall treg i CRC pasienter korrelerte med generell immunsuppresjon. En kombinasjon av IFN-γ ELISPOT-analyser og proliferasjonsanalyser å overvåke responser til tilbakekall antigener PPD og HA, demonstrerte like sterke responser hos CRC-pasienter og friske kontroller, hvilket indikerer at immunresponser mot ikke-tumorantigener er usvekket i CRC-pasienter.
mønsteret av immun reaktivitet var påfallende forskjellig mellom CRC pasienter og friske kontroller når immunresponser mot tumorassosiert onko-føtal antigen, 5T4, ble sammenlignet. 5T4-spesifikke responser ble observert i en andel av friske kontroller, men disse reaksjonene var stort sett uendret av treg uttømming. I motsetning til dette ble en 5T4-spesifikk respons påvist i mer enn en tredjedel av CRC pasienter kun etter fjerning av treg, noe som tyder på at treg i CRC pasienter undertrykke den tumor-spesifikke immunrespons. Denne gruppen av CRC pasienter som demonstrerte anti-5T4 reaksjoner etter Treg uttømming syntes å ha lignende treg frekvenser i forhold til den generelle CRC gruppen, selv om større studier vil være nødvendig for å bekrefte dette. Siden 5T4-responsene ikke ble avslørt ved Treg uttømming i friske kontroller Disse data indikerer også at treg-celler som kan undertrykke 5T4-spesifikke responser utvikle seg i respons til tumoren. Den nøyaktige mekanismen ved hvilken dette skjer er uklart i dag, men det er mulig at cytokinet miljøet inne i svulsten fremmer generering av treg å gjenkjenne tumorassosierte antigener. Nye rapporter indikerer en rolle for TGFB i utvidelsen av treg [24], [25]. I en gnager tumormodell har det vist seg at bare dendrittiske celler (DCS) fra tumorbærende, men ikke tumorfrie dyr fremme proliferasjon av treg. Interessant DC fra tumorfrie dyr kunne utvide treg, men bare hvis pre-inkubert med tumor-cellesupernatanter. Disse effektene kan bli hemmet
in vitro
bruker anti-TGFB antistoffer [26]. Til sammen tyder disse data på at treg kreve både en tumor antigen-spesifikk stimulering og cytokiner, slik som TGFp for å proliferere og undertrykke anti-tumor immunresponser.
5T4 er en attraktiv kandidat for tumorvaksiner som den er uttrykkes på mange epiteltumorer. Imidlertid antyder dette studie som treg gjenkjenne antigenet og muligens spiller en rolle i undertrykkende anti-tumorrespons, antagelig til skade for den enkelte. To andre studier har vist at treg gjenkjenne tumorantigener (LAGE-1 og ARTC-1) i pasienter med melanom [27], [28]. Det er viktig å sikre at vaksinestrategier ved hjelp av tumorassosierte antigener ikke øke regulerende arm av immunsystemet og dermed begrenser potensiell antitumorimmunitet. En tilnærming kan være å utarme Treg før vaksinasjon, som nylig demonstrert for nyrecellekreft [29]. Det vil være av stor interesse derfor å bestemme i fremtidige studier om en slik strategi vil resultere i målbare kliniske respons i CRC-pasienter.
Takk
Forfatterne ønsker å takke professor Robert Newcombe, Avdeling for epidemiologi, statistikk og Public Health, Cardiff University for statistisk råd.
