Abstract
Tumor-initiere celler er en undergruppe i aggressive kreftformer som viser trekk felles med stamceller, inkludert muligheten til å fornye seg selv og skille, ofte referert til som stemness. I tillegg er slike celler er resistent mot kjemoterapi og strålebehandling utgjør en terapeutisk utfordring. For å avdekke stemness-assosiert funksjoner i glioma-initiere celler (GICS), ble transkriptom profiler i forhold til nevrale stamceller (NSC) og genet ontologi analyse identifisert en berikelse av Ca
2 + signale gener i NSC og mer stilk-lignende (NSC-proksimale) GICS. Funksjonell analyse i et sett av ulike GIC linjer om følsomhet for forstyrret homeostase ved hjelp A23187 og Thapsigargin, avslørte at NSC-proksimale GICS var mer følsomme, bekreftende transkriptom data. Videre ble Ca
2 + narkotika følsomhet redusert i GICS etter differensiering, med mest potente effekt i NSC-proksimale GIC, som støtter en stemness-forbundet Ca
2 + følsomhet. NSCs og NSC-proksimale GIC linje uttrykt et større antall av ionekanaler permeable til kalium, natrium og Ca
2 +. Motsatt, et høyere antall og høyere uttrykk nivåer av Ca
2+ bindende gener som kan bufre Ca
2 +, ble uttrykt i NSC-distale GICS. Spesielt ekspresjon av AMPA-glutamatreseptoren subenhet GRIA1, ble funnet å assosiere med Ca
2 + sensitive NSC-proksimale GICS, og reduseres etter hvert som GICS differensierte sammen med redusert Ca
2+ medikamentsensitivitet. Sammenhengen mellom høy uttrykk for Ca
2 + kanaler (som GRIA1) og følsomhet for Ca
2 + narkotika ble bekreftet i ytterligere ni nye GIC linjer. Kalsium narkotika følsomhet også korrelert med uttrykk av NSC markører nestin (NES) og FABP7 (BLBP, hjerne lipid-bindende protein) i denne utvidede analysen. I sammendraget, NSC-forbundet NES
+ /FABP7
+ /GRIA1
+ GICS var selektivt følsomme for forstyrrelser i Ca
2 + homeostase, og gir et potensielt mål mekanisme for utrydding av en umoden bestand av ondartede celler
Citation:. Wee S, Niklasson M, Marinescu VD, Segerman A, Schmidt L, Hermansson A, et al. (2014) Selektiv Kalsium følsomhet i Umodne Glioma kreftstamceller. PLoS ONE 9 (12): e115698. doi: 10,1371 /journal.pone.0115698
Redaktør: Alfredo Quinones-Hinojosa, Johns Hopkins University, USA
mottatt: 24 juli 2014; Godkjent: 26 november 2014; Publisert: 22.12.2014
Copyright: © 2014 Wee et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. Den forfatterne bekrefter at alle data som underbygger funnene er fullt tilgjengelig uten restriksjoner. Alle relevante data er i avisen og saksdokumenter filer
Finansiering:. Svenske Childhood Cancer Foundation PR2013-0084 (www.barncancerfonden.se), svensk Cancer Foundation CAN 2011/783 (www.cancerfonden.se), Vetenskapsrådet 2011-4567 (vr.se), Karolinska Institutet (www.ki.se), Linnaeus sentrum i utviklingsbiologi for Regenerative Medicine (www.dbrm.se). SW ble delvis finansiert av Karolinska Institutet PhD stipendprogram. MN ble finansiert av en post-doc stipend fra den svenske Cancer Foundation. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
glioblastoma multiforme (GBM) er en svært ondartet form for hjernekreft med dårlig prognose for berørte personer. Til tross for den kombinasjon av kirurgi, kjemoterapi og radioterapi, mer enn 90% av pasientene viser tilbakefall [1], og median overlevelse forblir så lav som 14-16 måneder [2]. Selv om ondartede glioma svulster er svært heterogen, en undergruppe av umodne celler, kalt gliom initiere celler (GICS) [2] – [6] sameksistere med mer differensierte cellepopulasjoner. GICS har vist seg å være motstandsdyktig mot radio- og kjemoterapi, og er antatt å være ansvarlig for tumoren tilbakefall [7]. Reflekterer umodenhet av GICS og deres evne til å skille [8], har disse cellene vist seg å dele en stamcelle (stemness) -associated genuttrykk med stamcellepopulasjoner, som Teratom dannende normale embryonale stamceller [9] – [ ,,,0],11], og det foreslås at GICS kontinuerlig forsyne bulk kreftceller gjennom selvfornyelse og differensiering [11], [12]. Mye av stoffet utviklingsforskning for GBM behandling har fokusert på målretting bulk celler, de fleste som mangler tumor-initiering kapasitet. En stor utfordring som gjenstår er å øke effekten av kreftbehandling målretting GICS som disse cellene vise motstand mot kjemoterapi og strålebehandling med dagens strategier.
Selv om flere signalveier som Notch, Hedgehog-Gli, RTK-Akt, BMP /TGF-β, WNT-β-catenin og STAT3 har vist seg å støtte selvfornyelse av stamceller og umodne kreftceller [13], potensielle terapeutiske mål som selektivt kan utrydde GICS er få [14]. En alternativ strategi for å gjengi GICS mindre aggressive ble demonstrert ved BMP-indusert differensiering terapi [8]. Også dopamin D2 reseptorantagonister har blitt identifisert til å kjøre differensiering av relativt differensiering bestandig leukemi og brystkreft initiere celler [15].
ionekanaler har lenge blitt tildelt rollen som regulerer grunnleggende cellulære prosesser i tillegg til elektriske eksitabilitet og for eksempel kalium og Ca
2 + kanal signalekontroll ulike funksjoner som spredning og migrasjon i stamceller og kreftcellelinjer [16], [17]. Ca
2 + har også vært innblandet i kreftcelleoverlevelse [18]. Nylig ble det også vist at innblanding med en Ca
2 + kanal subenheten ble i stand til å drive levertumor initiere celler i apoptose [19].
I denne studien, satt vi å undersøke mekanismer unike for de stemness-forbundet funksjoner i glioma celler og konkludere med at stilk-lignende celler er mer følsomme for Ca
2 + forstyrrelser sammenlignet med mer modne celletyper.
Materialer og metoder
celle~~POS=TRUNC kultur~~POS=HEADCOMP
GliNS1, G179NS og G166NS GIC linjer ble dyrket i kultur som tidligere beskrevet [6], [11]. Kort fortalt cellene ble først dyrket som kuler i den første uken før de overføres til laminin-belagt retter, hvor de ble dyrket som tilhenger monolag i serumfritt menneske Neurocult NS-A basal media (StemCell Technologies) supplert med Glutamax, Hepes, N2 , B27 (Invitrogen), EGF (10 ng /ml) og bFGF (10 ng /ml) (R G179NS G166NS (Fig. 1B). Mens GliNS1 linjen var transkripsjonelt relatert til NSCs (NSC-proksimale), den G166NS linje, utgjøres den distale ende av plasseringen i forhold til NSCs (NSC-distal), som uttrykker markører delt med mikroglia og reaktive astrocytter og er forbundet med betennelse, f.eks IL-6, CXCL2 (MIP-2), og CCL20 (fig. 1B).
(A) GIC linjer ordnet i forhold til NSC linjene (andre komponent i et prinsipp komponentanalyse av mikromatrisebasert mRNA-ekspresjon data fra Pollard et al [11], hvor den første komponent segregerer NSCs og GICS fra normalt hjernevev). GliNS1 er avledet fra G144ED linje i Pollard et al studien. (B) Re-analyse av transkriptom profiler i Pollard et al sammenligne GICS til NSCs indikerer en NSC-proksimale klynge av stammelignende GICS med høy likhet med NSCs, dele f.eks SOX2 og BLBP uttrykk. NSC-distale GIC linjer i kontrast til uttrykk microglia markører, for eksempel CXCL2, CXCL5 og CCL20. (C) De novo RNA-sekvensanalyse og parvise sammenligninger av NSCs og tre individuelle GIC linjer (GliNS1, G179NS og G166NS) viste at NSC uttrykte et større antall gener med 10-ganger høyere genekspresjon sammenlignet med alle linjene GIC. (D) Parvise sammenligninger av NSC til GIC linjene GliNS1, G179NS og G166NS, individuelt. Gene berikelse og genet ontologi analyse av sekvensbasert transkriptom profiler, identifisert en berikelse av Ca
2 + signale gener i NSC, som økte med rang for distal til NSC i parvise sammenligninger. (E) Parvise sammenligninger av NSC-proksimale (GliNS1) og NSC-distal (G166NS) GICS. Gene berikelse og genet ontologi analyse foreslått en bryter i Ca
2 + permeable kanaler til Ca
2 + binding gener i NSC-distal GIC linjen (øvre bokser). I vulkan plot, genet navn i grønne betegne ionekanal /pumpe /transporter relaterte gener, mens genet navn i lilla betegne Ca
2 + bindende proteiner gener. Vulkanen tomt på sammenligningen av NSC-proksimale og NSC-distal GICS avdekket et større antall ionekanaler uttrykt i NSC-proksimale GIC (GliNS1).
En de novo dyp RNA sekvensering av tre av GIC linjer som brukes i Pollard
et al
studie (GliNS1, G179NS og G166NS) og en NSC linje (hf5205NS) viste at flere gener ble uttrykt i NSC enn GIC linjer (figur 1C;. S1), eventuelt gjenspeiler deres plastisitet og evne til å differensiere. Parvise NSC-GIC genet berikelse og funksjonell annotering (gen ontologi) analyse uventet viste at Ca
2 + ion binding var den mest betydelig endret kategori i alle tre cellelinjer – en forskjell som økte i flere NSC-distal GIC linjer (Fig . 1D).
Differensial uttrykk for Ca
2 + provokers og buffere gjelder stemness
cytosoliske Ca
2 + signale balansert med ulike aktører, som for eksempel Ca
2+ permeable ionekanaler som øker intracellulær Ca
2+ (f.eks spenning gated Ca
2 + kanaler og glutamatreseptorer, her betegnet Ca
2+ provokers) på den ene siden, og Ca
2 + permer som reduserer fri intracellulær Ca
2+ på den andre (her betegnet Ca
2 + buffere) [26]. Direkte parvise sammenligninger mellom forskjellige GIC linjer viste at NSC-proksimale GIC linje (GliNS1) uttrykte et større antall ionekanal gener som inneholder Ca
2 + provokers forhold til NSC-distale GIC linje (G166NS). Disse varierte fra Ca
2 + permeable ionekanaler (f.eks glutamat reseptorer: GRIA1, GRIA2, GRIK3 og regulatoriske subenheter GRIN2B og GRIN2D), de spenningsstyrte Ca
2 + ionekanaler (CACNA1C /-E /H) og Ca
2 + -aktiverte kaliumkanaler (f.eks KCNN3) (fig. 1E). I kontrast, NSC-distal GIC linjen (G166NS) uttrykte høyere nivåer av sensorer av intracellulær Ca
2 + buffere (for eksempel S100 familie gener og CALB1).
For ytterligere å avgrense forskjeller i Ca
2+ genekspresjon mellom testet GIC linjer og NSCs, ekspresjon av Ca
2+ provokers og buffere ble analysert i større detalj i alle tre GIC linjene (S1 fig.). Som antydet i de foregående parvise sammenligninger, ekspresjon av glutamatreseptorer redusert i NSC-distale GIC linjer (fig. 2A). AMPA-reseptoren GRIA1 (Ca
2 + gjennomtrengelig ionotrope glutamatreseptor), som viste det høyeste uttrykk blant glutamat reseptorer, rangert GIC linjer identisk til den rekkefølgen GliNS1 G179NS G166NS sett i PCA-analyse (fig. 1A) basert på sammenligning med NSC genekspresjon. I kontrast, uttrykk for Ca
2 + buffere /effektorer økt med en invers rangordnet GliNS1 G179NS G166NS (Fig 2B.). Dette ble spesielt slående for S100A6 genet som ble mest rikelig uttrykt i G166NS. I likhet med mRNA-data, western blot analyse av GRIA1 viste en 70% og mer enn 95% lavere ekspresjon i G179NS og G166NS henholdsvis i forhold til den NSC-proksimale GliNS1 linje (fig. 2B og 2E). Western blot-analyse av S100A6 viste en 45% og 90% lavere ekspresjon i G179NS og GliNS1, respektivt, når sammenlignet med den NSC-distale G166NS linje (fig. 2C, 2D og 2E).
Analyse av ekspresjon av Ca
2+ provokers slik som en av de gjennomtrengelige glutamat-reseptor-subenheter GRIA1 (A) eller Ca
2+ buffer S100A6 (B), rangert de 3 GIC linjene (GliNS1 og G166NS, n = 5 hver. G179NS , n = 2.) ifølge Ca
2 + narkotika følsomhet, med glutamat kanaler, for eksempel GRIA1, spår høyere følsomhet og buffer uttrykk forutsi lavere følsomhet (*** p 0,001; Uparet tosidige t-test) . (C) Western blot analyse viste GRIA1 og S100A6 protein uttrykk, med β-actin som lasting kontroll. (D) Protein ekspresjonsnivåer av GRIA1 ble uttrykt som prosentvis endring sammenlignet gangers mot å GliNS1 (n = 3) og (E) S100A6 protein ekspresjonsnivåer ble uttrykt som prosentvis endring sammenlignet gangers mot G166NS (n = 3) (** * p 0,001; ** p 0,01, * p. 0,05 enveis ANOVA)
GIC Ca
2 + narkotika følsomhet korrelerer med transkriptomet nærhet til NSC
i tillegg Ca
2+ provokers og buffere, plasmamembranen lokalisert Ca
2 + transportører, slik som natrium-kalsiumvekslere (NCX) som hører til familien SLC8 og SERCA (Sarco /endoplasmatiske retikulum Ca
2 + ATPase) pumpe lokalisert i det endoplasmatiske retikulum (ER) membran, aktivt fjerne cytosoliske Ca
2+ for å opprettholde homeostase [27] – [30]. Å utforske mulige funksjonelle implikasjoner av en differensial uttrykk for Ca
2 + ionekanaler og Ca
2 + binding gener, ved siden utførte vi en narkotika-mediert utfordringen Ca
2 + homeostase og signalering, i GIC linjer. Celler ble utsatt for enten til målet uavhengig kationet (Ca
2+) A23187 eller SERCA pumpehemmer Thapsigargin (Fig. 3), som øker cytosoliske Ca
2 + nivåer ved to forskjellige mekanismer: A23187 ved å tillate Ca
2+ å krysse normalt ugjennomtrengelig cellemembranen, og Thapsigargin ved å blokkere import av Ca
2+ inn på akuttmottaket. GIC linjer viste forskjeller i følsomhet for både A23187 og Thapsigargin (Fig. 3A og 3B, henholdsvis), bemerkelsesverdig med en rangordnet mellom linjene er identiske med den i NSC-forankret transkriptomet rang rekkefølge, med NSC-proksimale GliNS1 å være mer sensitive enn G179NS, mens NSC-distal G166NS var minst følsom for både narkotika. Funksjonell analyser og dermed vise at NSC-proksimale GICS med et høyere uttrykk av Ca
2 + provokers, er mer følsomme for forstyrrelser i cytosolic Ca
2 + regulering enn GICS med NSC-distal fenotype som uttrykker høyere nivåer av Ca
2 + buffere.
(A) Dose responsanalyse (0,01 til 40 mm) av Ca
2 + A23187 og (B) SERCA Ca
2 + pumpehemmer Thapsigargin viste at Ca
2 + narkotika følsomhet ordnet med transkriptomet likhet med NSC, med høyest følsomhet i NSC-proksimale GICS. NSC proksimale GIC var mer følsom for (C) 40 pM A23187 og (D) 0,156 uM Thapsigargin behandlinger sammenlignet NSC distale linjene (* p 0,05; Uparet to-halet t-test). NSC-proksimale GICS n = 3 og NSC-distal GICS n = 4.
Redusert Ca
2 + narkotika følsomhet på GIC differensiering
Som følsomhet for Ca
2+ narkotika var assosiert med en NSC-lignende uttrykk profil spørsmålet om differensiering av GICS vil påvirke Ca
2 + følsomhet ble undersøkt. For dette formål, ble tre GIC linjer kastes en differensiering protokollen ved hjelp av bovint serum (FBS) føtalt. Validering av differensiering ble gjort av transkriptomet analyse av GIC linjer og deres differensiert avkom ved hjelp av RNA sekvensering (S1 tabell). Prinsipal komponent analyse av det globale datasettet viste at endringer i transcriptome var tydelig og segregerte vesentlig mellom udifferensierte GICS og differensierte GICS (diffGICs) (Fig. 4A). Interessant, GRIA1 uttrykk som korrelert med Ca
2 + narkotika følsomhet, redusert i alle GIC linjer i løpet av differensiering (Fig. 4B), som foreslo at differensiering status kan påvirke Ca
2 + følsomhet. Funksjonell Ca
2 + følsomhet ble derfor analysert ved hjelp A23187 (10 um, 48 timer) i differensierte GICS og sammenlignet med udifferensierte GICS avsløre en klart redusert effekt på celle levedyktighet i alle GIC linjer ved differensiering og med den sterkeste effekten i stoffet sensitiv NSC-proksimale GIC linje (GliNS1) (fig. 4C). Disse funnene støtter data videre at Ca
2 + følsomhet er assosiert med umodne NSC-lignende GICS.
(A) RNA sekvense transkriptomet kartlegging etterfulgt av prinsipal komponent analyse bekreftet segregering mellom udifferensierte og differensierte GICS (GliNS1 , G179NS og G166NS). Høyre panel viser Immunofluorescent stainings av differensiering markører GFAP (rød) og Tuj1 (grønn) ved FBS behandling. (B) Sammenligning av GRIA1 ekspresjonsnivåer i udifferensierte og differensierte GICS (n = 6) viste en reduksjon i gangers endring i GRIA1 ekspresjon på serum-indusert differensiering i alle GIC linjer. (*** P 0,001; Uparet tosidige t-test). (C) Celleviabilitet analyse av relativ sensitivitet til Ca
2 + A23187 etter differensiering viste økt levedyktighet ved differensiering av NSC-proksimale GIC linjen GliNS1 (* p 0,05; Uparet tosidige t-test).
Gene uttrykk korrelere med Ca
2 + narkotika følsomhet
For å utforske mulige ekstra gener som korrelerer med Ca
2 + følsomhet, transkriptom data fra ni nye GIC linjer (avledet i et uavhengig laboratorium) ble sammenlignet med Ca
2 + følsomhet data fra eksponering til Thapsigargin (72 timers eksponering) (fig. 5A og S2 tabell). 7 ut av 9 linjer er blitt vist å rekapitulere moder tumor (S3 tabell). Analyse av korrelasjon (Pearson) mellom NSC-markører og følsomhet for Thapsigargin (1 UM) viste en signifikant korrelasjon for nestin (NES) (Fig. 5B, avvik merket med rødt ble ekskludert fra analysen) og hjernen lipid-bindig protein (BLBP /FABP7) (fig. 5C) mRNA uttrykk, mens ingen sammenheng ble funnet for SOX2 (data ikke vist). Western blot-analyse ytterligere bekreftet at kalsium medikamentsensitive linjer (U3017-MG og MG-U3084) uttrykte mer BLBP protein enn mindre følsomme linjer (U3013-MG og U3035-MG) (fig. 5D). Korrelasjonsanalysen bekreftet også en sammenheng mellom følsomhet for Thapsigargin og GRIA1 uttrykket (fig. 5E), som ble bekreftet ved analyse av proteinnivåer ved Western blot, som GRIA1 protein-ekspresjon ble bare påvist i de følsomme GICS (fig. 5F). Videre genet berikelse og genet ontologi analyser antydet gener involvert i cellesyklusregulering, oksygen, RNA og makromolekyl stoffskifte, og ikke uventet Ca
2 + formidlet signale som korrelerer med Ca
2 + narkotika følsomhet (fig. 6A) .
(A) Ni nye GIC linjer ble utsatt for Thapsigargin dose responsanalyse (0,1-100 mm), som viser forskjellig respons til moderate legemiddeldoser. (B, C) Plot av korrelasjon mellom celle levedyktighet etter Ca
2 + legemiddeleksponering (Thapsigargin, en UM) og (B) NES og (C) FABP7 /BLBP mRNA uttrykk. U3047-MG ble ansett som en avvikende i NES grafen (markert med rødt) og ekskludert skjemaet analysen. (D) Western blot analyse viser BLBP (FABP7) protein uttrykk i valgt Thapsigargin sensitive (U3017-MG og U3084-MG) og mindre sensitiv (U3013-MG og U3035-MG) cellelinjer, med β-actin som lasting kontroll. (E) Plot av korrelasjon mellom celle levedyktighet etter Ca
2 + legemiddeleksponering (Thapsigargin, en UM) og GRIA1 mRNA uttrykk. (F) Western blot analyse viser GRIA1 protein uttrykk i valgt Thapsigargin sensitive (U3017-MG og U3084-MG) og mindre sensitiv (U3013-MG og U3035-MG) cellelinjer. β-actin ble brukt som lasting kontroll.
(A) En korrelasjonsanalyse av genom bredt mRNA uttrykk (microarray analyse) og følsomhet for Thapsigargin (1 UM) i 9 flere GIC linjer, hentet 785 gener korrelere med Ca
2 + narkotika følsomhet. Gene berikelse og ontologi analyser identifiserte involvering av gener som påvirker spredning, oksygen og RNA metabolisme, katabolisme og Ca
2 + formidlet signalering. (B) gener 385 positivt korrelerer med høy følsomhet ble filtrert først for gener uttrykkes også høyere i NSC-proksimale GIC linje GliNS1 og deretter også bli nedregulert på denne linje ved differensiering, som ble funnet å redusere Ca
2+ medikamentsensitivitet , hente et sett med ni gener, inkludert AMPA-reseptoren koding GRIA1.
for å identifisere gener i dette datasettet som også forbundet med en NSC-proksimale stemness signatur i GICS, settet ble ytterligere filtrert for gener, som også (1) hadde en høyere ekspresjon i GliNS1 sammenlignet med G166NS og (2) ble nedregulert ved differensiering (figur 6B.). Dette hentet en kort liste over ni gener, hvorav to koden for ionekanaler som kan øke cytosolic Ca
2+ (Ca
2 + provokers), dvs. GRIA1 og innover likeretter K
+ kanal KCNJ4 , som kan delta i å opprettholde en depolarisert membranpotensialet kreves for å aktivere de spenningsstyrte Ca
2 + kanaler og Ca
2 + permeable glutamatreseptorer. Oppsummert sammenhengen mellom funksjonelle Ca
2 + narkotika følsomhet og genuttrykk antyder deltakelse mot følsomhet for narkotika-fremkalte Ca
2 + overbelastning, av et nettverk av gener involvert i å opprettholde Ca
2+ homeostase og membranpotensialet.
Drug reactome analyse identifiserer Ca
2 + indusert genekspresjon i den globale transkriptomet
for å identifisere intracellulære reaksjoner på Ca
2 + underliggende differensial nivået av Ca
2+ følsomhet i GICS ble NSC-proksimale GliNS1 og NSC-distale G166NS utsettes for A23187 i 7 timer, etterfulgt av transkriptomet analyse av RNA-sekvensering ( «medikament reactome mapping») (S4 tabell). I den mest Ca
2 + legemiddelfølsomme GIC linjen GliNS1, gener med vesentlig endret uttrykk (Benjamini justert p-verdi 0,05) ble analysert ved genet berikelse og genet ontologi, som viste at cellesyklusrelaterte gener ble endret (Fig . 7B og S2 fig.), noe som tyder på cellesyklus-stans før celledød. Ikke uventet gener involvert i ER stressrespons ble også beriket, som var gener i RNA metabolske prosesser. Interessant, RNA metabolske prosessen involvert gener ble også korrelere med Thapsigargin følsomhet i forrige forsøket (Fig. 6A).
Transkripsjonell svar på økt cytosolic Ca
2 + (A23187), ble undersøkt av RNA sekvensering etter 7 timer med eksponering hos NSC-proksimale GIC linje GliiNS1 og NSC-distal linjen G166NS. Volcano plott av signifikant (p 0,05) endret genuttrykk i GliNS1 (A) og G166NS (C) med felles indusert gener merket med rødt og grønt (Ca
2 + aktivert transkripsjonsfaktor NFATC2). Legg merke til forskjellene i x-aksen indikerer høyere all global induksjon av genuttrykk i GliNS1. (B) Gene berikelse og genet ontologi analyse av gener med en betydelig endring i uttrykket (p 0,05) i GliNS1, identifisert gener som er involvert i cellesyklusprogresjon samt ER /Golgi forbundet funksjoner og cellulær stressrespons. (D) Gene berikelse analyse av gener downregulated minst tre ganger i GliNS1 og oppregulert minst 1,5 ganger i G166NS.
Gener med endret uttrykk etter legemiddeleksponering ble plottet mot middel uttrykk verdi (før
