Abstract
kreft-assosiert fibroblaster (CAF) spiller en avgjørende rolle i å regulere kreft progresjon, men det molekylære determinant som styrer svulsten regulerende rolle av CAF er fortsatt ukjent. Ved hjelp av en mus melanom-modell i hvilken eksogene melanom-celler ble podet på huden av to linjer med mus hvor den genetiske aktivering eller inaktivering av Notch1 signale spesifikt forekommer i naturlig verts stromale fibroblaster, demonstrerte vi at Notch1 pathway aktivitet kunne bestemme den tumor-fremmende eller tumor-undertrykke fenotype i CAF. CAF bæring forhøyet Notch1 aktivitet betydelig hemmet melanom vekst og invasjon, mens de med en null Notch1 fremmet melanom invasjon. Disse funnene identifisere Notch1 sti som en molekylær determinant som styrer regulerende rolle av CAF i melanom hud vekst og invasjon, avslører Notch1 signaliserer som et potensielt terapeutisk mål for melanom og potensielt andre solide tumorer
Citation. Shao H , Kong R, Ferrari ML, Radtke F, Capobianco AJ, Liu ZJ (2015) Notch1 Pathway aktivitet Bestemmer Regulatory rolle kreft-assosiert fibroblaster i melanoma Vekst og invasjon. PLoS ONE 10 (11): e0142815. doi: 10,1371 /journal.pone.0142815
Redaktør: Claudia Daniela andl, Vanderbilt University, USA
mottatt: 18 august 2015; Godkjent: 27 oktober 2015; Publisert: 12.11.2015
Copyright: © 2015 Shao et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering:. Denne studien ble støttet av Bankhead-Coley Cancer Research Program (Award # 09BN-11), kvinner Cancer Association og interne midler fra University of Miami til Z .. Liu
konkurrerende interesser:. forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
CAF er stromale fibroblaster bosatt i og i nærheten av tumormasse. De kommer primært fra aktiverte lokale hvil fibroblaster og rekruttert sirkulerende benmarg stamceller (MSC) [1,2]. CAF er involvert i reguleringen av tumorprogresjon ved utløsning av oppløselige faktorer, ekstracellulære matriks (ECM) [3] og exosomes [4]. Deres bidrag til primære og sekundære maligniteter [5,6], så vel som å ta del i legemiddelresistens og tumorresidiv [7,8] gjøre CAF potensielle mål for terapeutiske intervensjoner på svulsten mikromiljøet (TME). Til tross for omfattende bevis som støtter den avgjørende svulst regulerende rolle CAF, hvordan rollen bestemmes fortsatt et mysterium. Vi og andre tidligere observert at Notch1 pathway aktivitet er inverst korrelert med den av fibroblaster. Hakk pathway aktiviteten er lav i prolifererende fibroblaster, mens høy i hvilende fibroblaster [9]. Tap av
Notch1
i mus embryonale fibroblaster (MEF) resulterte i raskere cellevekst og motilitet hastighet, mens Notch1 aktivering tilbakestående cellevekst og bevegelighet hos humane fibroblaster [9]. Konsekvent, Notch aktivering indusert cellesyklus og apoptose i MEF [10]. I tumor xenograft musemodeller, co-implantert eksperimentelle menneskelige dermale fibroblaster bærer høy Notch1 aktivitet hemmet melanom vekst og angiogenese [11], viser at Notch1 aktivering ensidige tumor-undertrykkende fenotype på eksperimentell CAF. Disse resultatene antydet en avgjørende rolle for Notch signalisering i styrende funksjon av fibroblaster. Men fibroblaster undersøkt i disse tidligere studiene er ikke ekte eller naturlig CAF. Her benyttet vi nye musemodeller for å undersøke hvilken rolle Notch1 signalering ved fastsettelse av regulerende rolle naturlig vert CAF i melanom vekst og invasjon.
Materialer og metoder
Mus
Notch1
loxP /loxP
mus ble beskrevet [12].
ROSA
LSL-N1IC + /+ product: (# 008159) og
Fsp1
.
Cre
+/- product: (# 012641) mus ble kjøpt fra The Jackson Lab (Bar Harbor, ME). Alle disse musene har en C57BL6 bakgrunn. Gain-Of-Funksjon Notch1 (GOF
Notch1.
Fsp1
Cre
+/-
;
ROSA
LSL-N1IC + /+
) og tap-Of-Funksjon Notch1 (LOF
Notch1.
Fsp1
Cre
+ /-
;
Notch1
loxP /loxP + /+) linjer ble generert ved å krysse
ROSA
LSL-N1IC + /+ Hotell og
Notch1
loxP /loxP + /+
med
Fsp1
.
Cre
+/-
mus, og senere krysset
Fsp1
Cre
+/-
;.
ROSA
LSL-N1IC +/-
med
ROSA
LSL-N1IC + /+
mus og
Fsp1
.
Cre
+/-
;
Notch1
loxP /loxP +/- med
Notch1
loxP /loxP + /+
mus, henholdsvis. GOF
ctrl (
FSP1
Cre
– /-
,. ROSA
LSL-N1IC + /+) og LOF
ctrl (
FSP1
Cre
– /-
,. Notch1
loxP /loxP + /+ ) mus ble anvendt som kontroll. Mus ble opprettholdt på DVR dyret anlegget under standardbetingelser. Musene ble bedøvet for alle kirurgiske prosedyrer ved ketamin /xylazin blanding (100/10 mg /kg, IP), og bilde prosedyrer ved å inhalere 3% isofluran gass, og ofret i CO2 kammer. Institutional Animal Care og bruk komité ved University of Miami godkjent alle dyre prosedyrer.
Mus hud modell av melanom
Murine melanomceller, B16-B10 (ATCC
®, CRL-67345
TM), stabilt transduced med Luciferase 2 (Luc2) /lentivirus, ble dyrket med komplett DMEM. For svulst pode eksperimenter, 5 x 10
5 Luc2
+ /B16-F10 celler suspendert i 0,1 ml saltvann ble inokulert (
s
.
c
.
)
på ryggskinnet av seks uker gamle GOF
Notch1 vs. GOF
ctrl og 8-ukers gamle LOF
Notch1 vs. LOF
ctrl mus. B-16-F10 er avledet fra C57BL6 mus og kan være xenopodet på de dannede GOF, LOF og kontrollmusene som har en C57BL6 bakgrunn. Musene ble avlivet ved uke 3 etter poding. Resected svulster ble vektet. Melanom vekst ble vurdert basert på tumor vekt og positivitet av Ki67 celleproliferasjon markør målt ved immunfluorescens i tumorceller, mens melanom lokal invasjon ble evaluert ved histologisk vurdering av vevssnitt av resected melanom.
Histologi, immunfluorescens (IF) Western blot
H E og IF ble utført som beskrevet [11]. Antistoffer gjenkjenne aktivert Notch1, Hes1, Ki67, Luc (ab8925, ab71559, ab15580, ab81823, Abcam, Cambridge, MA), Hey-en, og FSP1 (GTX42614, GTX89197, GeneTex, Irvine, CA). Kjerner ble farget med DAPI (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Kvantifiseringen er gjennomsnitt ± standardavvik (SD) av tellinger fra fem lavt strømforbruk feltet (LPF) per tumorprøve for H E flekker, og fem høy effekt felt (HPF) per seksjon og fem seksjon /svulst for IF farging. For Western blot, ble hud vevsprøver homogenisert i en RIPA buffer (50 mM Tris-Cl, 150 mM natriumklorid 1,0% NP-40, 0,5% natriumdeoksycholat, 0,1% SDS, pH 8,0, 1 mM EDTA og protease inhibitor cocktail ( Roche)). Vevet Suspensjonen ble rotert ved 4 ° C i 30 min. Supernatanter ble samlet opp etter sentrifugering ved 13 000 rpm i 15 min. Konsentrasjonen av protein ble bestemt ved anvendelse av Pierce
TM BCA Protein Assay Kit (# 23225). Western blot ble gjennomført som beskrevet [11]. Uttrykk av mutant N1
IC (muN1
IC, 59Kd) og sletting av Notch1 i mus huden ble oppdaget av to forskjellige anti-Notch1 antistoffer, henholdsvis (ab8925 og ab52627, Abcam).
Bioluminesens avbildning av IVIS
D-luciferin ble injisert intra-peritonealt 15 minutter før bildebehandling (150 mg /kg). Hele kroppen av bedøvet mus ble skannet med IVIS 200B (PerkinElmer, Waltham, MA) med en ett minutt fangst, medium binning. Bioluminesens signalet ble kvantifisert og rapportert som samlet lys utslipp i regionen av interesse (foton /s).
Lentivirus og celle transduksjon
Luc2
+ /lentiviral vektor ble konstruert ved å sette inn
Luc2
cDNA inn
pLenti6 plakater (Invitrogene) vektor. Produksjon av lentivirus og transduksjon av celler ble utført som beskrevet [13].
Statistisk analyse
Dataene ble statistisk analysert ved hjelp av tosidige Student
t
-test og uttrykte som gjennomsnitt ± SD. Verdiene er vurdert som statistisk signifikant når
p
0,05
Resultater
Notch1 aktivering i CAF undertrykker melanom vekst
Uttrykk for fibroblast-spesifikt protein. -1 (FSP1, også kalt S100A4) er vanligvis begrenset til fibroblaster [14,15].
FSP1
.
Cre
mus ble brukt til å skape null alleler i fibroblaster for TGFB type II-reseptorer [16], EP4-reseptorer [17], og PTEN [18]. Vi skapte en
st par GOF
Notch1 vs. GOF
Ctrl mus. GOF
Notch1 mus var levedyktig inntil ansatt i melanom hud pode eksperimenter innen to måneder. Deres kropp utseende og hud vev histologi, inkludert dermis hvor hud fibroblaster i hovedsak bor, dukket normal (S1A figur).
For å undersøke hvilken rolle CAF med høy Notch1 aktivitet i å regulere melanom vekst, 5 x 10
5 Luc2 + /B16-F10 celler ble inokulert på huden av GOF
Notch1 vs. GOF
Ctrl mus. I denne modellen blir de cellulære komponenter i hele svulsten stromafritt, inkludert CAF, bestående av naturlige vertsceller. Metastase ble overvåket av hele kroppen IVIS scanning i uke 3 etter kreft vaksiner. Hudkreft ble resected, vektet og utsatt for immunhistokjemisk analyse etter IVIS skanning.
Hvis farging av hud seksjoner portrayed begrenset og forhøyet uttrykk for N1
IC i kjernen av FSP1
+ fibroblaster av GOF
Notch1 mus sammenlignet med GOF
ctrl mus (fig 1A), men ikke i tilstøtende huden muskelceller (særlig muskelceller presenteres autofluorescence ennå ingen atom signalene var påvisbare). Tilsvarende ble Hey1 uttrykk økt i kjernen av FSP1
+ hud fibroblaster av GOF
Notch1 mus i forhold til GOF
ctrl mus (S1B Fig). Videre uttrykk for transgen-kodet mutant N1
IC protein (muN1
IC: PEST domene-avkortet N1
IC, 59 Kd, (
ROSA
LSL -N1IC + /+
, The Jackson Lab: # 008159)) i huden av GOF
Notch1 mus ble bekreftet ved Western blotting (fig 1B). Resultatene viste effektiv Cre-mediert spesifikke uttrykk for N1
IC og Notch sti aktivering i huden fibroblaster.
A. Representative bilder viser uttrykk for N1
IC i kjerner (pilspisser påpekt) av FSP1
+ hud fibroblaster av GOF
Notch1 vs. GOF
Ctrl mus. B. Uttrykk av transgene-kodet muN1
IC (59 Kd) i huden av GOF
Notch1 mus ble oppdaget av Western blotting. p-aktin ble brukt som lasting kontroll. C. melanoma vekst er tilbakestående i GOF
Notch1 mus (n = 8 /gruppe). Fem representative bilder av resected svulster /gruppen vises. D. Vesentlig mindre Ki67
+ tumorceller (Luc2
+) per HPF i melanom fra GOF
Notch1 enn GOF
ctrl mus. E. Proliferativ aktivitet av melanomceller (Ki67
+) er særlig lav i området (merket) tilstøtende til CAF (FSP1
+) i GOF
Notch1 mus. Kvantifiseringen er teller fra 5 HPF per seksjon og fem seksjon /svulst. Dataene ble statistisk analysert ved hjelp av tosidige Student
t
-test og uttrykt som gjennomsnitt ± SD.
Melanom vekst i GOF
Notch1 mus var betydelig forsinket i forhold som i GOF
ctrl mus (fig 1C). Konsekvent, var det vesentlig mindre Ki67
+ tumorceller (Luc2
+) i melanom vev fra GOF
Notch1 enn fra GOF
ctrl mus (fig 1D). Proliferativ aktivitet (Ki67 positivitet) av melanomceller var meget svakere når tilstøtende til CAF (figur 1E), hvilket antyder at CAF bære høy Notch1 aktivitet i GOF
Notch1 mus kan frigi tumorundertrykkende faktor (er). Resultatene viste at Notch1 aktivering ensidige tumor-undertrykkende fenotype på CAF.
Notch1 aktivering i CAF undertrykker melanom invasjon
Siden spredning melanomceller må samhandle med fibroblaster som ligger i huden dermis (og i nærheten av innpodet melanom), kan fibroblaster ha en betydelig innvirkning på melanom formidling. Vi studerte videre effekten av CAF på melanom invasjon og metastasering i GOF
Notch1 mus. Melanom lokal invasjon ble evaluert ved histologisk vurdering av vevssnitt av resected melanom. H E farging av resected melanom vev illustrert at 83,3% av melanom hadde lokal invasjon inn i tilstøtende hudvevet i GOF
ctrl mus sammenlignet med 22,2% i GOF
Notch1 mus (Fig 2A). Imidlertid, IVIS skanning av hele kroppen og høstet organer, inkludert lunge, lever, milt, nyre og femur, ikke gir målbare luminescerende signaler (data ikke vist), noe som tyder på at ingen fjerntliggende metastaser skjedd ved tidspunktet for analyse. IF viste at CAF i tumor kapselen vises lavere proliferativ aktivitet (mindre Ki67
+ /FSP1
+ celler) i GOF
Notch1 enn i GOF
ctrl mus (Fig 2B 2C). Disse dataene indikerer at CAF i GOF
Notch1 mus er mindre støttende til melanom invasjon.
A.
Venstre
: redusert tumorinvasjon i GOF
Notch1 sammenlignet med GOF
ctrl mus.
Høyre
: to representative H E bilder av tumorsnitt (n = 8 /gruppe). Dash linjene indikerer kreft grenser. Piler peker på invaderende tumorceller. Andel av invasjonen er basert på resultater fra H E flekker i lave kraft felt (LPF) av hver svulst seksjon. B. Fibroblaster i melanom kapselen har lavere proliferativ aktivitet (mindre Ki67
+ /FSP1
+ celler) i GOF
Notch1 enn i GOF
ctrl mus. C. Kvantifisering av Ki67
+ fibroblaster /HPF i melanom kapsel av GOF
Notch1 (svart strek) vs. GOF
Ctrl (hvit bar) mus. Resultatene er teller fra 5 HPF per seksjon og fem seksjon /svulst. Dataene ble analysert ved hjelp av tosidige Student
t
-test og uttrykt som gjennomsnitt ± SD.
Null
Notch1
i CAF påvirker ikke melanom vekst
for å studere rollen til CAF med null Notch1 i regulering melanom vekst og invasjon, skapte vi de 2
nd par av LOF
Notch1 vs. LOF
Ctrl mus. LOF
Notch1 mus var også levedyktig gjennom melanom hud pode eksperimenter og deres kropp utseende og hud vev histologi viste normal (S2A figur).
N1
IC og Hes1 var umulig å oppdage i FSP1
+ hud fibroblaster av LOF
Notch1 mus mens litt påvises i huden av LOF
ctrl mus (figur 3A, S2B fig). N1
IC var også påvises i fibroblaster ved melanom kapsel i LOF
Notch1 mus (melanomceller uttrykker høye nivåer av N1
IC som tidligere rapportert [13], som tjener som en intern kontroll for N1
IC uttrykket), men marginalt påvises i LOF
ctrl mus (fig 3B). Disse dataene indikerer inaktivert status for Notch1 signale forårsaket av
Notch1
sletting i fibroblaster av LOF
Notch1 mus vs. basalnivået statusen Notch1 signalering i fibroblaster Löf
Ctrl mus. I tillegg, Western blotting-analyse bekreftet vellykket sletting av Notch1 i huden fibroblaster av LOF
Notch1 mus. Uttrykk for full lengde Notch1 (271Kd) var umulig å oppdage i LOF
Notch1 mus, selv om det var liten tilstedeværelse av N1
IC (120 kD) (figur 3C). De marginale nivåer av N1
IC i huden av LOF
ctrl mus ble tilskrevet tilstedeværelsen av N1
IC hos ikke-fibroblaster i huden vev.
En. Undetectable vs. marginalt påviselig N1
IC uttrykk i huden fibroblaster av LOF
Notch1 vs. LOF
Ctrl mus. Pilspisser peker på kjernekraft farging av N1
IC i fibroblaster. B. Undetectable vs. påviselig N1
IC som påpekt av pilspisser i fibroblaster ved melanom kapsel i LOF
Notch1 vs. LOF
Ctrl mus. C. Undetectable full lengde Notch1 protein (271Kd) og liten mengde N1
IC (120 Kd, som sannsynligvis ble presentert i ikke-fibroblaster) i huden vev av LOF
Notch1 mus ble utstilt ved Western blotting-analyse . p-aktin ble brukt som lasting kontroll. D. melanoma vekst er sammenlignbare i LOF
Notch1 og LOF
ctrl mus (n = 8 /gruppe). Fem representative bilder av svulster /gruppen viste. E. Numbers av Ki67
+ kreftceller er sammenlignbare i LOF
Notch1 (sort strek) og LOF
Ctrl (hvit bar) mus. Kvantifiseringen er teller fra 5 HPF per seksjon og fem seksjon /svulst. Dataene ble statistisk analysert ved hjelp av tosidige Student
t
-test og uttrykt som gjennomsnitt ± SD.
For å undersøke hvilken rolle CAF med lav eller ingen Notch1 aktivitet i regulering melanom progresjon, 5 x 10
5 Luc2
+ /B16-F10 celler ble inokulert (
s
.
c
.) på ryggskinnet av 8-ukers gamle LOF
Notch1 vs. LOF
Ctrl mus. Melanom hudtransplantasjon og måling av tumorvekst, invasjon og metastase ble utført identisk som beskrevet ovenfor. Størrelsene på kreft grafts resected fra LOF
Notch1 er sammenlignbare med det fra LOF
ctrl mus (Fig 3D). Konsekvent, var det ingen signifikant forskjell i antall Ki67
+ tumorceller (Luc2
+) innen melanom vev (Fig 3E) i LOF
Notch1 vs. LOF
Ctrl mus. Resultatene viste at CAF i LOF
Notch1 mus har liten effekt på melanom hud vekst.
CAF fremmer melanom invasjon i LOF
Notch1 mus
I motsetning innpodet melanom hadde økt lokale invasjon priser i LOF
Notch1 (75%) mus enn i LOF
ctrl (30%) mus (figur 4A) som vurderes av histologisk vurdering av vevssnitt av resected svulst, noe som indikerer at CAF fremme melanom invasjon i LOF
Notch1 mus. Konsekvent, fibroblaster rundt svulsten i LOF
Notch1 mus viste sterkere aktivitet (mer Ki67
+ /FSP1
+ celler) enn i LOF
ctrl mus (fig 4B), noe som tyder på at CAF er mer aktiv og kan favorisere melanom invasjon i LOF
Notch1 mus. Ikke overraskende, ikke fjernmetastaser var detekterbar i begge sett av mus (data ikke vist), siden forekomsten av spontan metastasering av podede B16-celler er meget lav i den syngeniske murine melanoma modell. Den trenger vanligvis reseksjon av primærtumor i rekkefølge for dannelse av fjernmetastaser til å oppstå [19]. Alternativt kan det være utilstrekkelig for en full løpet av metastaser skal være ferdig innen den tidsrammen (3 uker) av våre eksperimenter. Samlet våre resultater viser at sletting av
Notch1
i CAF forbedrer deres regulerende effekt på melanom invasjon.
A.
Venstre
: Økt melanom invasjon i huden av LOF
Notch1 vs. LOF
ctrl mus (n = 8 /gruppe).
Høyre
: to representative H E bilder av tumorsnitt per gruppe vises. Dash linjene indikerer kreft grenser. Piler peker på invaderende tumorceller. Andel av invasjonen er basert på resultater fra H E farging i LPF av hver svulst seksjon. B. Null Notch1 CAF som omgir svulster utviser høyere proliferativ aktivitet som mer Ki67
+ /FSP1
+ celler kan påvises i LOF
Notch1 enn i LOF
ctrl mus. C. Kvantifisering av Ki67
+ fibroblaster /HPF i melanom kapsel av LOF
Notch1 (svart strek) vs. LOF
Ctrl (hvit bar) mus. Kvantifiseringen er teller fra 5 HPF per seksjon og fem seksjon /svulst. Dataene ble statistisk analysert ved hjelp av tosidige Student
t
-test og uttrykt som gjennomsnitt ± SD.
Diskusjoner
Negl B16-F10 cellene på huden av GOF
Notch1 og LOF
Notch1 mus byr på unike syngene murine melanommodeller for å tyde rolle Notch1 signalering i styrings tumor regulerende funksjon av CAF i TME hvori hele cellulære komponenter i tumor stroma er sammensatt av naturlige vertsceller . Våre resultater definert Notch1 signaliserer som en molekylær bryter kontrollere svulst regulerende funksjon av CAF. Slå dette molekylære bryteren PÅ og AV kan omvendt konferere tumor-undertrykkende og tumor-fremme egenskaper på CAF. Derfor kan Notch signalering bli manipulert til å implementere signale Notch-rettet terapi for melanom, og eventuelt andre faste tumorer. Det åpner dermed en ny vei for å målrette TME enten reprograming og konvertere CAF fra «tumorpromotere» til «tumor suppressors» gjennom terapeutisk aktivering av Notch1 sti eller direkte utnytte Notch nedstrøms megler (e), dvs. WISP1 [11]. Selv om det finnes mange alternativer for aktivering av Notch1 veien i CAF, for eksempel ved hjelp av genterapi tilnærming eller roman genom redigering metoden, CRISPR /Cas9 eller CRISPR /Cpf1, å innføre
N1
IC
, eller påføring av Notch sti aktiverende forbindelse, som kan identifiseres gjennom en lignende high-throughput screening-metoden [20], aktiverings Notch1 signale spesifikt i CAF, mens ikke samtidig øker hakk aktivitet i melanomceller, utgjør en terapeutisk utfordring, så den biologiske funksjon av Notch signalering er celle kontekstavhengig [21], og høy Notch aktivitet er onkogene til melanom [13]. Det er uklart hvordan Notch signale forskjellig regulert i CAF og melanom celler i en enkelt mikromiljøet. Det er også fortsatt uklart om Notch /ligander delta i celle-celle kommunikasjon mellom fibroblaster-melanom celler. Ettersom en betydelig del av CAF i tumorvev er avledet fra stamceller (MSC), er en alternativ strategi for å utvikle cellebaserte terapier ved målrettet levering av terapeutiske celler, dvs. autologe MSC-avledet fibroblaster prefabrikkerte «
ex vivo
«til enten bære høy Notch1 aktivitet ved hjelp av metodene beskrevet ovenfor eller overuttrykker WISP1, inn i tumorvev. Fibroblaster uttrykker høy Notch aktivitet har en tendens til å gjennomgå cellesyklus arrest [9,10]. Denne karakteren gjør MSCD-SF bærer høy Notch aktivitet mer attraktivt som terapeutiske celler, fordi de ikke vil utvide uimotståelig etter deres homing til svulstvev og blir til slutt klarert av immunceller. Derfor kan de anvendes flere ganger til pasienter for å forbedre terapeutisk effekt.
I motsetning til de inhiberende virkninger av CAF i GOF
Notch1 mus på både melanom vekst og invasjon, CAF i LOF
Notch1 mus fremme lokal invasjon, men ikke hud vekst av melanom. Mekanismen for slike klare effekter av CAF i GOF
Notch1 mus vs. LOF
Notch1 mus er fortsatt uklart. Muligens blir vekst og invasjonsegenskapene til melanom regulert av ulike løselige faktorer og microenvironmental pekepinner laget av CAF. Sletting av
Notch1
i CAF kan føre til endring av et sett av løselige faktorer og microenvironmental signaler, som fortrinnsvis eller tilstrekkelig påvirker melanom invasjon, men ikke vekst eiendom. På den annen side, løselige faktorer og microenvironmental pekepinner laget av CAF, som avgjør melanom vekst eiendom, kan ikke være nøyaktig omvendt mellom GOF
Notch1 og LOF
Notch1 mus. Den Notch1 veien er hyper-aktivert gjennom uttrykk for N1
IC mutant i CAF av GOF
Notch1 mus, som er forskjellig fra kanonisk, ligand-induserte Notch1 aktivering hvor sletting av Notch1 kan omvendt speil. Dette kan forklare hvorfor CAF i GOF
Notch1 mus utviklingshemmede melanom vekst, mens CAF i LOF
Notch1 mus ikke fremme melanom vekst. Alternativt kan andre Notch isoformer kompensere for Notch1 tap i CAF av LOF
Notch1 mus. Fremtidige studier er garantert å undersøke fullstendige profiler av løselige faktorer og microenvironmental signaler bestemmes av forskjellige CAF (CAF fra GOF
Notch1 mus vs. CAF fra GOF
Ctrl mus og CAF fra LOF
Notch1 mus vs. CAF fra LOF
Ctrl mus).
En annen interessant, men uforklarlige funnet er den distinkte spontane invasjonen forekomst av B16-F10 celler podet på GOF
Ctrl (83,3%) vs. LOF
Ctrl ( 30%) mus, muligens på grunn av ulike genetiske bakgrunn av to linjer med mus. MSC-avledet fibroblaster fra disse to linjer med kontroll mus også ha forskjellige svulstregulerende fenotyper
in vitro
. Fibroblaster fra GOF
Ctrl mus induserte melanomceller for å danne kuler mens de fra LOF
Ctrl mus ikke (upublisert observasjon).
I sammendraget, avdekke vi Notch1 sti som en molekylær determinant som kontroller regulatoriske rolle CAF i melanom vekst og invasjon. Vår studie understreker Notch1 veien som en potensiell terapeutisk mål å bli manipulert til å omprogrammere og konvertere CAF å opptre som tumor suppressors. Disse funnene garanterer fremtidig studie for å belyse molekylære mekanismer for Notch1 bestemte tumor regulerende rolle i CAF.
Hjelpemiddel Informasjon
S1 Fig.
A, Representative utseende bilder av GOFNotch1 og GOFCtrl. Hudvev histologi vises normalt som undersøkes av H E i uke 6. B, forhøyet uttrykk for Hey1 i huden fibroblaster av GOFNotch1 mus sammenlignet med GOFCtrl mus. Pilspisser peker på kjernekraft-lokaliserte Hey1 i fibroblaster. Antistoffet gjenkjenner Hei-en ble kjøpt fra GeneTex (GTX42614)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0142815.s001 product: (PDF)
S2 Fig.
A, Representative utseende bilder av LOFNotch1 og LOFCtrl. Hudvev histologi vises normalt som undersøkes av H E i uke 6. B, er Hes1 uttrykk umulig å oppdage i fibroblaster ligger på kapsel av melanom i LOFNotch1 mus men litt påvises ved kapsel av melanom LOFCtrl mus. Pilspisser peker på kjernekraft-lokaliserte Hes1 i fibroblaster. Antistoffet gjenkjenner Hes1 ble kjøpt fra Abcam (ab71559)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0142815.s002 product: (PDF)
Takk
Vi takker Dr. Omaida C . Velazquez (University of Miami) for nyttig samarbeid, konsultasjon og diskusjoner.
