Abstract
mikroRNA-135a (MIR-135a) ned modulerer parametere av kreft progresjon og dens uttrykk er redusert med metastatisk brystkreft (sammenlignet med ikke-metastatiske tumorer) så vel som i prostata tumorer i forhold til normalt vev. Disse uttrykk og aktivitetsmønstre er motsatt til de av østrogen-relaterte reseptor α (ERRα), et frittstående medlem av den nukleære reseptor-familien. Faktisk høy uttrykk for ERRα korrelerer med dårlig prognose i bryst og prostata kreft, og reseptoren fremmer ulike trekk av kreft aggressivitet inkludert cellen invasjon. Her viser vi at Mir-135a nedregulerer uttrykket av ERRα gjennom spesifikke sekvenser av sin 3’UTR. Som en konsekvens MIR-135a reduserer også uttrykk for nedstrøms mål for ERRα. MIR-135a reduserer også celle invasiv potensial i en ERRα avhengig måte. Våre resultater tyder på at redusert uttrykk av MIR-135a i metastatiske svulster fører til forhøyet ERRα uttrykk, noe som resulterer i økt celle invasjon kapasiteter
Citation. Tribollet V, Barenton B, Kroiss A, Vincent S, Zhang L, Forcet C, et al. (2016) MIR-135a Hemmer invasjonen av kreftceller via Undertrykkelse av ERRα. PLoS ONE 11 (5): e0156445. doi: 10,1371 /journal.pone.0156445
Redaktør: Franky L. Chan, The Chinese University of Hong Kong, Hongkong
mottatt: 28 januar 2016; Godkjent: 13 mai 2016; Publisert: May 26, 2016
Copyright: © 2016 Tribollet et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. All relevant data er i avisen og dens saksdokumenter fil
Finansiering:. Dette arbeidet ble finansiert av Ligue contre le Cancer (comites Puy-de-Dôme https://www.ligue-cancer.net/cd63/journal og Drôme https://www.ligue-cancer.net/cd26/journal) til JS og JMV. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser. Jean-Marc VANACKER er en PLoS ONE Redaksjonell styremedlem. Dette endrer ikke forfatternes tilslutning til PLoS ONE redaksjonelle retningslinjer og kriterier.
Innledning
microRNAs (Mirs) er små ikke-kodende RNA som, gjennom en såkalt «seed boksen» binde seg til spesifikke komplementære sekvenser i 3’UTR av målet mRNA og indusere deres degradering eller blokkere oversettelse av det kodede protein [1]. Følge av den korte størrelsen av mRNA bindende regionen i Mirs og gitt at ufullkommen mir binding er i noen tilfeller er tilstrekkelig til å indusere mRNA regulering, et MIR kan virke på flere mRNA. Dette øker muligheten for at en hel bane /prosess kan styres på flere nivåer gjennom en enkelt mir. Mirs kan fremme eller undertrykke kreft initiering eller progresjon, og deregulering av deres uttrykk er et fellestrekk i disse prosessene [2-5]. Menneskelig MIR-135a kodes av to gener lokalisert på forskjellige kromosomer (3 og 12 for MIR-135a1 og MIR-135a2, henholdsvis), som produserer en identisk, aktiv sekvens. Motstridende resultater har blitt publisert om effektene av MIR-135a om kreft progresjon. Rapporter faktisk tyder på at dette mikroRNA kan fremme eller undertrykke ulike egenskaper knyttet til tumor aggressivitet som spredning, celle migrasjon og invasjon i tykktarm, melanom, bryst- eller prostatakreft cellelinjer [6-12]. Imidlertid ble det vist at MIR-135a uttrykk er sterkt redusert i metastatisk brystsvulster (sammenlignet med ikke-metastatiske kreftformer, [10]), så vel som i prostata tumorer i forhold til normalt vev [11], som tyder på at i det minste i disse tumor typer, motvirker MIR-135a kreft progresjon. I dette henseende, re-ekspresjon av MIR-135a hos ikke-uttrykkende celler reduserer deres invasjon potensial. Minst tre molekylære mekanismer har blitt foreslått å gjøre rede for denne reduksjonen. Avhengig av studien og på mobilmodell, har MIR-135a faktisk vist seg å redusere uttrykket av FAK, Runx2 og ROCK1 /2, alle forskrifter som fører til en reduksjon av cellulær invasjon [9-11].
østrogen-relaterte receptor α (
ESRRA
, heretter kalt ERRα) er et medlem av den nukleære reseptor super. Som sådan kommer der en konservert sentralt DNA-bindende domene og et C-terminalt plassert formodede ligand-bindende domene som kontakter ko-aktivatorer, og er nødvendig for transkripsjonen aktivering [13]. Men ingen naturlig ligand av ERRα har blitt identifisert til nå. ERRα blir således referert til som en «orphan» reseptoren og aktiverer transkripsjon av sine målgener i en tilsynelatende ligand-uavhengig måte. ERRα regulerer flere physiopathological prosesser
in vivo
som osteoblastdifferensiering og beindannelse (anmeldt i [14]), medfødt immunitet [15-16] og energiomsetning (anmeldt i [17-18]). I tillegg høy ERRα uttrykk i kreft korrelerer med dårlig prognose i ulike krefttyper ([19-25], anmeldt i [26-28]). Konsekvent, ERRα har vist seg å fremme en rekke trekk av progresjon av kreft, som strekker seg fra proliferasjon [29-30], epithelio-mesenchymale overgang [31], motstand mot hypoksi [32], angiogenese [33], metabolsk bryter til aerob glykolyse [34 -35], cellemigrasjon og invasjon [36-37]. ERRα øker celle invasjon gjennom minst to molekylære mekanismer. På den ene siden, aktiverer reseptor faktisk Wnt11 avhengig kaskade, på en annen side, ERRα indirekte finjusterer RhoA stabilitet til et nivå som passer for orientert celle migrasjon og invasjon.
Her viser vi at re-introduksjon av MIR-135a hos ikke-uttrykkende celler fører til nedregulering av ekspresjon ERRα på mRNA og proteinnivå. Dette skjer gjennom 3’UTR sekvenser som er komplementære til Mir-135a frø boksen. Konsekvent, uttrykket av ERRα rettet mot gener er modulert av MIR-135a i en ERRα avhengig måte. Videre MIR-135a over-uttrykk synker invasjonen kapasitet MDA-MB231 og PC3 celler (menneskelige mammary og prostata carcinoma celler, henholdsvis). Disse kapasiteter kan bli reddet av gjen uttrykk for en ERRα konstruksjon som ikke er målrettet av MIR-135a. Samlet peker dette til ERRα som et alternativ MIR-135a target involvert i reguleringen av celle invasjon.
Materialer og metoder
Cells og reagenser
MDA-MB231 (human mammary epiteliale celler) og PC3 (humane prostata-celler) ble dyrket i Dulbeccos modifiserte Eagles medium (Invitrogen) supplert med 10% føtalt kalveserum, 10 U /ml penicillin, 10 ug /ml streptomycin. LNCaP (human prostata-celler) ble dyrket i RPMI (Invitrogen) tilsatt på samme måte. Celler ble holdt i en fuktig 5% CO2-atmosfære ved 37 ° C. sirnas og mirnas ble innført i celler ved hjelp Interferine (Ozyme) eller Lipofectamine 2000 (Thermo Fisher), henholdsvis å følge produsentens instruksjoner. ERRα sirnas (sekvenser på S1 tabell) var fra Invitrogen (siERRα # 1) og Dharmacon (siERRα 2 #). Pre-mirnas (PM11126 for MIR-135a; MIR negativ kontroll n ° 2) var fra Ambion
Expression Analysis
Totalt RNA ble hentet av guanidiumtiocyanat /fenol /kloroform og konvertert til først. cDNA ved hjelp IScript cDNA syntese kit (Biorad). Sanntids-PCR ble utført i en 96-brønners plate ved bruk av IQ SYBR grønn Supermix (Biorad). Data ble kvantifisert ved ΔΔ-Ct metode og normalisert til RPLP0 (36b4) mRNA. Sekvensen av primerne anvendt i denne studien er vist i Tabell S1.
For western blot-analyse ble cellene lysert i RIPA buffer. Proteiner (50 mikrogram) ble løst på 10% SDS-PAGE, blottet på PVDF (Millipore), undersøkt med spesifikke antistoffer etter metning og avslørt ved hjelp av en forbedret chemiluminescence deteksjonssystem (ECL kit, Amersham Biosciences) med egnet spesifikk peroxydase konjugert Abs. Antistoffer var fra Gentex (ERRα, GTX108166), Enzo (HSP90, ADI-SPA-830) og Sigma (flagg, F-3165).
plasmider og luciferase Analyser
pSG5Flag-Aa /B-ERRα er blitt beskrevet andre steder [38]. Sekvenser på ESRRA (koding ERRα) 3’UTR som er komplementære til Mir-135a frø boksen ble beregnet med TargetScan (https://www.targetscan.org), PicTar (https://pictar.mdc-berlin.de) og Miranda MiRBase (https://microrna.sanger.ac.uk) on-line tilgjengelige programmer. En 400 bp fragment fra den menneskelige ESRRA 3’UTR omfatter både spådd komplementære sekvenser ble klonet ved PCR ved hjelp av MDA-MB231-opprinnelse retrotranscribed mRNA og primere flankert av Xhol og Sali restriksjonssetene. Komplementære sekvenser ble mutert ved rekombinant PCR. Etter bekreftelse ved sekvensering, ble villtype og muterte fragmenter klonet inn i pmiRGLO dual-ekspresjonsvektoren (Promega) som XhoI-Sall setter nedstrøms for ildflue luciferase reporter-sekvens. Sekvenser av oligonukleotidene anvendt for mutagenese, er tilgjengelige på S1 Tabell.
For transiente transfeksjoner, 10
5 MDA-MB231-celler ble sådd ut i 24-brønners plater og transfektert ved hjelp av Lipofectamine 2000, 50 ng plasmid pmiRGLO og angitt mengde pre-MIR. Cellene ble lysert 48 timer etter transfeksjon og reporter aktiviteter (Renilla og firefly luciferases) ble bestemt ved hjelp av standard metoder.
Invasion Analyser
For invasjon analyser, celler (5. 10
4) ble suspendert i 200 ul DMEM /2% FCS og sådd ut på toppen av Matrigel invasjons kamre (Corning). Celler ble tillatt å migrere mot det nedre kammer inneholdende DMEM /10% FCS i 48 timer. Matrigel ble fjernet ved hjelp av bomullspinner og cellene ble fikset en time med 4% formaldehyd, farget med 0,1% krystallfiolett og microphotographed. Invaderende celler ble talt på hele brønnen ved hjelp av Image J.
Statistical Analysis
Statistisk signifikans ble bestemt ved bruk av Student t-tester mellom gruppene.
Resultater
MIR-135a Reduserer ERRα Expression
i løpet av en tidligere studie, ble konsekvensene av pre-MIR-135a over-uttrykk i LNCaP menneskelige prostata kreft celler analysert i form av mobilnettet genuttrykk ved hjelp av en microarray tilnærming [11]. Det ble observert at ekspresjonen av ERRα orphan nukleær reseptor ble redusert ved en slik behandling. For å validere disse resultatene, vi transient transfektert pre-MIR-135a i LNCaP celler og analysert uttrykket av ERRα protein (fig 1a). Vi har funnet at nivået av denne reseptoren er redusert så raskt som 24 timer etter transfeksjon, en effekt som vedvarte (om enn i en mindre grad) i 48 timer. Lignende resultater ble også oppnådd i MDA-MB231 humane brystkarsinomceller. Den ERRα-tilsvarende mRNA ble også redusert 24t og 48t etter transfeksjon i både LNCaP og MDA-MB231 celler, som bedømmes av real-time PCR eksperimenter (fig 1b), tyder på en direkte effekt på mRNA.
indikerte cellene ble transfektert med pre-MIR-135a eller pre-MIR kontroll (-) for den angitte tiden. en. Uttrykk for de angitte proteiner bestemmes av western blot. HSP90 ble anvendt som en kontroll lasting. Kvantifisering av ERRα proteinekspresjon (vist nedenfor blottene) er uttrykt i forhold at av HSP90, anvendt som en lasting kontroll. b. Uttrykk for ERRα tilsvarende mRNA analysert ved real-time PCR. Data er gitt i forhold til pre-MIR kontrollprøver og uttrykt i forhold til ekspresjon av RPLP0. Vist er gjennomsnittet av eksperimenter utført tre ganger. Feil linjer indikerer SEM. ***:
p
0,005
Vi analyserte den menneskelige ERRα mRNA for mikroRNA anerkjennelse motivene ved hjelp av tre uavhengige prediksjon programmer (TargetScan, PicTar og Miranda), som ga identiske. resultater. To potensielle komplementære sekvenser for Mir-135a ble identifisert i 3’UTR med høyest (8-mer) binding sannsynlighet (figur 2a). Verdt å merke seg sekvensen, så vel som plasseringen av disse to områdene er sterkt konservert hos pattedyr, men ikke i fugler eller amfibier, hvor ingen slik tilsvarende sekvens kan bli identifisert. For å avgjøre hvorvidt disse komplementære sekvenser er funksjonelle for MIR-135a anerkjennelse, ble en 400 bp fragment av 3’UTR (omfatter både potensielle sekvenser) klonet nedstrøms luciferasereportergenet inn pmiRGLO plasmid. Hver komplementære sekvens ble deretter mutert alene eller i kombinasjon. De resulterende konstruksjoner ble transfektert i MDA-MB231-celler sammen med pre-MIR-135a (figur 2b). Villtype ERRα-avledede fragment dratt MIR-135a følsomhet, noe som resulterer i en reduksjon i rapportøraktivitet, 50%. Denne effekten ble opphevet ved mutasjon av to komplementære sekvens, men ikke komplementære sekvens 1. Dette tyder sterkt på en direkte effekt av MIR-135a på den 3’UTR av ERRα, særlig på to komplementære sekvens, noe som resulterer i reduserte nivåer av de tilsvarende mRNA og protein.
a. Komplementære sekvenser 1 og 2 (store bokstaver) på ERRα 3’UTR vises for de angitte arter (
Homo sapiens
,
Mus musculus
,
Bos taurus Hotell og
Felis silvestris
) og justert til Mir-135a sekvens. Stilling av det første nukleotid av hvert komplementære sekvens (cs 1 og 2) er angitt i forhold den første 3’UTR nukleotid og i forhold til human mRNA start (under parentes). Nukleotider i fete bokstaver ble slettet i de tilsvarende mutanter. b. Scheme av de genererte mutanter i pmiR-GLO er avbildet på toppen. MDA-MB231 celler ble transient transfektert med de tilsvarende pmiR-GLO derivater sammen med den angitte konsentrasjon av pre-MIR-135a. Luciferasepreparater aktiviteter ble bestemt 48 timer etter transfeksjon og ildflue luciferase aktiviteten var normalisert til at av Renilla luciferase. Resultatene uttrykkes for hvert plasmid som prosent i forhold til transfeksjon med pre-MIR kontroll og representerer gjennomsnittet av tre uavhengige eksperimenter. Feil barer indikert SEM. **:
p
0,01, ***:.
p
0,005
MIR-135a Regulerer ERRα molekylære og cellulære aktiviteter
for å analysere konsekvensene av denne forskriften, undersøkte vi om funksjonene ERRα kan bli påvirket av MIR-135a. ERRα fungerer som en transkripsjonsfaktor og sine mål gener i MDA-MB231 celler har tidligere blitt identifisert gjennom en transcriptomic RNA-sekvensering tilnærming [37]. Vi tenkte at Mir-135a overekspresjon, som fører til redusert ERRα nivåer, bør også resultere i dereguleringen av uttrykket av disse målgener. Denne hypotesen ble undersøkt på ni utvalgte gener, som er i henhold til vår transcriptomic tilnærming, enten positivt (DHX33, GDAP1, RAB39A, RAPGEF5, TMEM198 og TNFAIP1) eller negativt (PDGFRB, RRAS, CEACAM1) regulert av ERRα. Viktigere, ble disse genene valgt fordi de ikke ble spådd som direkte MIR-135a mål, ifølge TargetScan on-line program. Ved hjelp av to forskjellige siRNA mot reseptoren, vi først bekreftet at ekspresjonen av disse genene er deregulert i fravær av ERRα (figur 3a). Vi analyserte mRNA nivået av disse ERRα målene ved MIR-135a overekspresjon. Som vist på figur 3b, uttrykket av disse genene var tidsavhengig regulert av transfeksjon av pre-MIR-135a. Av notatet, alle MIR-135a-indusert dereguleringer var i samme retning som de indusert av direkte rettet mot ERRα. Dette styrker hypotesen om at effekten av MIR-135a på disse genene er ERRα-mediert. Vi analyserte også uttrykket av fire gener (ROCK1, ROCK2, PTK2 og SMAD5) rapportert som MIR-135a direkte mål i litteraturen [10-11, 39]. Som forventet, er uttrykket av disse genene tidsavhengig redusert på pre-MIR-135a overekspresjon (fig 3c). Imidlertid har ingen av disse fire genene synes deregulert i fravær av ERRα, som forventet fra vår RNA-sekvenseringsdata (figur 3c og [37]). Vi brukte deretter en redning tilnærming til spørsmålet muligheten for en ERRα avhengig effekt av MIR-135a. For å oppnå dette, ble cellene transfektert med en MIR-135a ligne supplert eller ikke ved en ERRα konstruksjon som omfatter ikke sin naturlige 3’UTR (
i
.
e
. Uten MIR-135a komplementære sekvenser). Konsekvent, deregulering av ERRα mål ble reddet av re-introduksjon av reseptoren (fig 3d). I kontrast, ble uttrykket av MIR-135a direkte mål (ROCK1, ROCK2, PTK2 og SMAD5), redusert ved overekspresjon av pre-Mir, ikke restaurert av ERRα transfeksjon. Sammen disse dataene viser at Mir-135a effekter på genuttrykk i ERRα-avhengige og-uavhengig oppførsel.
a. MDA-MB231-celler ble transfektert med de indikerte siRNA (c: tak siRNA) og RNA ble ekstrahert etter 48 timer. b. Cellene ble transfektert med pre-MIR-135a eller kontrollere pre-MIR (-). RNA ble ekstrahert ved den angitte tid etter transfeksjon. Uttrykk for ERRα mål ble undersøkt (a, b). c. Samme eksperiment analysere uttrykk for direkte MIR-135a målgener. d. Cellene ble transfektert med pre-MIR-135a og pSG5Flag tom vektor (MIR-135a) eller ERRα-koding plasmid (MIR-135a + ERRα). Som kontroller ble celler transfektert ved pre-MIR kontroll supplert med pSG5Flag vektorplasmidet. RNA ble hentet etter 48 timer. Uttrykk for de angitte genene ble bestemt ved real-time PCR. Data er gitt i forhold til kontroll og uttrykt i forhold til ekspresjon av RPLP0. Vist er gjennomsnittet av tre uavhengige eksperimenter i tre eksemplarer med feilfelt som indikerer SEM. *:
p
0,05, **:
p
0,01, ***:
p
0,005, ns. Ikke-signifikant
neste spørsmål ved om funksjonelle effekter av MIR-135a kan avhenge ERRα. Denne reseptor er blitt vist å være nødvendig for flere egenskaper relatert til progresjon av kreft inkludert cellemigrering og invasjon [36-37]. På en annen side MIR-135a har vist seg å redusere celle invasjon [9, 11]. Bruke Boyden kammer invasjon analyser, og dermed undersøkte vi om en del av disse sistnevnte aktivitetene kan være mediert av ERRα hemming. Overekspresjon MIR-135a etterligner i MDA-MB231-celler førte til en reduksjon av ERRα ekspresjon, så vel som for hemming av celle invasjon, sammenlignet med kontroller (figur 4a). I kontrast, re-uttrykke et ikke-målrettbar ERRα konstruere fullt restaurert celle invasjon potensial. Identiske eksperimenter utført i PC3 human prostata cellelinje ga lignende resultater (figur 4b). Vi konkluderer med at MIR-135a kan hemme celle invasjon, i det minste delvis, gjennom hemming av ERRα uttrykk.
MDA-MB231 (a) eller PC3 (b) celler ble transfektert med kontroll MIR (MIR-c ) eller MIR-135a ligne (begge supplert med tom pSGFlag plasmid) eller MIR-135a ligne supplert med pSGFlag-Aa /B-ERRα (slettet fra sin 3’UTR). Ekspresjon av de angitte proteiner er vist i de øvre paneler. Cellene fikk invadere Matrigel på Boyden kammer analyser. Invaderende cellene ble fiksert og farget. Typiske microphotographs vises til venstre. Kvantifisering ble utført på hele brønnen ved hjelp av Bilde J. Resultatene er uttrykt i forhold til å kontrollere Mir forhold med feilfelt som indikerer sem. **:
p
0,01, *:
p
0,05, NS. Uten betydelige
Diskusjon
avvikende resultater har blitt publisert om rollen som MIR-135a i kreft progresjon. Faktisk har denne mikroRNA blitt rapportert å fremme eller hemme trekk av kreft aggressivitet [6-12]. Her viser vi at MIR-135a reduserer ekspresjon av ERRα på mRNA og proteinnivåene, noe som resulterer i modulering av ekspresjonen av reseptoren er målgener. Interessant ERRα viser et uttrykk mønster i kreft som er motsatt av MIR-135a. Faktisk reseptor-nivåer (mRNA og protein) er mer opphøyet på tumorer (i forhold til normalt vev) og dens høy ekspresjon korrelerer med dårlig prognose i forskjellige typer kreft, slik som de fra bryst eller prostata (oversikt i [26-28 ]). Denne høye uttrykk kan skyldes flere mekanismer som genomisk forsterkning [40], en transkripsjonsauto sløyfe [41], og nedregulering av microRNAs som er rettet mot ERRα [25, 42]. Her foreslår at en reduksjon i MIR-135a uttrykk kan derepress at av reseptoren. I samsvar med definisjonen som en faktor for dårlig prognose, fremmer ERRα flere trekk av kreft progresjon, slik som EMT, angiogenese, bytte til aerob glykolyse (Warburg effekten) og motstand mot hypoksi [31-35]. Det er ikke kjent om MIR-135a er faktisk involvert i å motvirke fremveksten av disse prosessene. Likevel, MIR-135a undertrykker celle invasjon [11], en parameter som er, i kontrast, fremmet av ERRα [36-37]. Våre foreliggende resultater viser at inaktiveringen av ERRα ved mir-135a er medvirkende til å hindre celle invasjon, siden dette fenomen kan gjenopprettes ved å re-innføring av en ikke-målrettes reseptoren. Minst to ikke-gjensidig utelukkende mekanismer har blitt fremkalt å redegjøre for de pro-invasive aktiviteter reseptoren. På den ene siden, induserer ERRα Wnt11 signalering som direkte regulerer celle invasjon via en autosløyfe som involverer β-catenin [36]. På den annen side, reseptoren positivt regulerer ekspresjonen av TNFAIP1, noe som reduserer RhoA proteinstabilitet, så vel som aktiviteten til sin nedstrøms effektor ROCK1 [37]. I fravær av ERRα økningen i ROCK1 aktivitet fører til en hemming av celle invasjon. Interessant det ble nylig vist at Mir-135a induserer direkte ROCK1 mRNA degradering, også resulterer i hemming av celle invasjonen [11]. I denne forbindelse, kan reduksjon av MIR-135a-ekspresjon i krefttyper resultere i ukontrollert ROCK1 uttrykk som kan bli for stor og derved hemme celle invasjon. Men reduksjon av MIR-135a også sannsynlig fører, i parallell, for å øke ERRα ekspresjon. I sin tur reseptoren reduserer ROCK1 aktivitet ned til et nivå som er egnet for celle invasjon. Oppsummert MIR-135a og ERRα kan danne en multi-flatet regulatoriske nettverk som finjusterer ROCK1 aktivitet.
Perusing litteraturen, synes det mulig at denne MIR-135a- ERRα regulatoriske nettverk kan være effektiv i en helt annen sammenheng. Faktisk har det blitt vist at MIR-135a direkte ned-regulerer ekspresjonen av master-genet av osteoblastdifferensierings, Runx2, for derved å forhindre osteogenesis [39].
Per se
, den observerte BNIP2-indusert reduksjon i MIR-135a uttrykk kan dermed føre til ukontrollert Runx2 over-uttrykk og dermed for tidlig osteoblastdifferensiering. På en annen side, har uavhengige data viste at både Runx2 uttrykk og aktivitet blir undertrykt av ERRα ([43-45], anmeldt i [14]). Reduksjonen i MIR-135a uttrykk kan således direkte derepress ekspresjonen av både Runx2 og ERRα, den sistnevnte i sin tur moderere aktiviteten av førstnevnte. Et slikt nettverk vil til slutt føre til finjustering Runx2 aktivitet, som beskrevet ovenfor for ROCK1. Mer arbeid er nødvendig for å demonstrere nøyaktigheten av denne hypotesen.
Hjelpemiddel Informasjon
S1 Table. Oligonukleotider brukt i denne studien
doi:. 10,1371 /journal.pone.0156445.s001 product: (PDF)
