Abstract
Bakgrunn
Mye tyder på en konfunderende effekt av mismatch reparasjon (MMR) status på immunrespons hos tykktarmskreft. Identifiseringen av medfødte og ervervede immunceller, som kan utfylle den etablerte prognostiske effekten av CD8 i MMR-dyktige kolorektalkreft pasienter, som representerer 85% av alle tilfeller ikke er utført.
Metodikk /hovedfunnene
kolorektal kreft fra en test (n = 1197) og ekstern validering (n = 209) kohort av MMR-dyktige kolorektal kreft ble montert på én og flere slag microarray. Immunhistokjemisk kvantifisering (skår 0-3) ble utført for CD3, CD4, CD8, CD45RO, CD68, CD163, foxp3, GranzymeB, iNOS, mast celle tryptase, MUM1, PD1 og TIA-en tumor-infiltrerende (Tīlss) reaktive celler. Koekspresjon eksperimenter på friske kolorektal kreft prøver ved hjelp av spesifikke cellepopulasjon markører ble utført. I testgruppen, økt antall CD3 + (p 0,001), CD4 + (p = 0,029), CD8 + (p 0,001), CD45RO + (p = 0,048), foxp3 + (p 0,001), GranzymeB + (p 0,001), iNOS + (p = 0,035), MUM1 + (p = 0,014), PD1 + (p = 0,034) og TIA-1 + Tīlss (p 0,001) var knyttet til gunstig utfall. Justert for alder, kjønn, TNM stadium og postoperativ behandling, høyere CD8 + (p 0,001; HR (95% CI): 0,66 (0,64 til 0,68)) og TIA-1 + (p 0,001; HR (95% KI ): 0,56 (0,5-0,6)) var uavhengige prognostiske faktorer. Videre blant pasienter med CD8 + infiltrater, TIA-en videre stratifisert 355 (35,6%) pasienter i prognostiske undergrupper (p 0,001; HR (95% CI): 0,89 (95% KI: = 0,8-0,9)). Resultatene ble bekreftet på validerings kohort (p = 0,006). TIA-1 + -celler var for det meste CD8 + (57%), men også farget for TCRγδ (22%), CD66b (13%) og bare sjelden til CD4 +, macrophage og NK-cellemarkører.
Konklusjoner
TIA-en legger prognostisk informasjon til TNM stadium og adjuvant behandling i MMR-dyktige kolorektal kreftpasienter. Den prognostiske effekten av CD8 + Tīlss er blitt til skamme ved tilstedeværelse av TIA-1 + som oversettes til økt risiko stratifisering for ca 35% av alle pasienter med MMR-dyktig kolorektal kreft
Citation. Zlobec jeg, Karamitopoulou E, Terracciano L, Piscuoglio S, Iezzi G, Muraro MG, et al. (2010) TIA-en cytotoksiske Granule-Associated RNA Binding Protein Forbedrer Prognostic Utførelse av CD8 i Mismatch Repair-Dyktig tykktarmskreft. PLoS ONE 5 (12): e14282. doi: 10,1371 /journal.pone.0014282
Redaktør: Alfons Navarro, Universitetet i Barcelona, Spania
mottatt: 03.06.2010; Godkjent: 16 november 2010; Publisert: 10.12.2010
Copyright: © 2010 Zlobec et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Forfatterne ble finansiert av institutt for patologi, Universitetssykehuset i Basel, forskning basseng konto. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
prognosen for pasienter med tykktarmskreft kan ses som et samspill mellom tumor- og vertsrelaterte faktorer [1]. Eksperimentelle bevis i løpet av de siste 20 årene gir støtte for begrepet immunosurveilllance i kreft, impliserer både medfødte og ervervede immunresponser [2]. I tykktarmskreft, har CD3, CD4, CD8, CD20, granzyme B, og foxp3 + tumor-infiltrerende lymfocytter (Tīlss) blitt identifisert som mulige indikatorer på resultatet, samtidig som identifisering av cytotoksiske T-lymfocytter, mastceller og dendrittiske celler som elicitors anti -tumor svar har understreket nye veier for potensielle immunterapi [3], [4], [5].
i tykktarmskreft, balansen mellom vert og kreftrelaterte faktorer er eksemplifisert ved mismatch reparasjon (MMR) -deficient sporadiske tilfeller, og står for ca 15% av alle svulster og preget av defekt MMR maskiner [6]. Pasienter med disse MMR-manglende kreft er beskrevet som å ha rikelig CD8 + cytotoksiske T-celle infiltrere [7] og er ofte knyttet til mer «gode» tumor-relaterte funksjoner, nemlig nærværet av en skyve tumor kant konfigurasjon, tilstedeværelsen av en særegen band av peritumoral lymfatisk betennelse og litt svulst spirende, sistnevnte en histomorphological kjennetegn på epitel mesenchymale overgang [8]. Dette fenotypiske konstellasjon, med «tipping skalaen» i favør av et sterkt forsvar kan delvis være ansvarlig for mer gunstig generelle prognosen for pasienter med MMR-mangelfull i forhold til MMR-dyktige svulster [9]. Interessant, til tross for den kjente konfunderende effekten av MMR status på immunologiske reaksjoner i kolorektal kreft, omfattende analyser av celletyper som er involvert i immunrespons og betennelser har ennå ikke blitt systematisk utført for MMR-dyktig kreft, som omfatter 85% av alle kolorektal krefttilfeller.
Derfor er målet med denne studien var å fastslå den ekstra prognostisk fordel, over resultatene av CD8 alene, 12 vev-baserte immunologiske biomarkører i MMR-dyktig kolorektal kreftpasienter. Disse proteinmarkører inkludert CD3, CD4, CD45RO, CD68, CD163, foxp3, GranzymeB, iNOS, mast celle tryptase, MUM1p, PD1 og TIA-en var spesielt utvalgt for å dekke et bredt spekter av mulige celletyper som er involvert i medfødte og ervervede immunresponser . Dette ble oppnådd ved hjelp av en innledende testgruppe av 1197 pasienter og en ekstern validering kohort av 209 pasienter, henholdsvis med komplett klinisk-patologiske og oppfølgingsdata.
Metoder
Etikk erklæringen
skriftlig samtykke er gitt fra pasienter for deres informasjon som skal lagres i databasen sykehus og anvendt for forskning. Bruken av vev ble godkjent av de tilsvarende etiske komiteer av Universitetssykehuset i Basel og University of Athens. Fersk skåret kliniske prøver som inngår i denne studien ble samlet inn fra samtykkende pasienter som gjennomgår kirurgisk behandling ved Basel universitetssykehus.
Test Gruppe
Pasient og prøveegenskaper.
1420 primær pre- operativt ubehandlede, uselekterte sporadiske kolorektal kreft pasienter behandlet ved Universitetssykehuset i Basel mellom årene 1987 og 1996 ble inkludert i denne studien. Haematoxylin og eosin (H E) beiset lysbilder ble anmeldt av en erfaren gastrointestinal patolog (L.T.) og kliniske data ble hentet fra pasientjournaler, der tilgjengelig. Kliniske resultatet av interesse var kreftspesifikk overlevelse. En vev microarray av disse 1420 pasientene ble bygget. Fra hver pasient, ble en representant tumor blokk hullet ved hjelp av et vev sylinder 0,6 mm i diameter. Vev ble brakt inn i en mottaker parafin blokk (3 × 2,5 cm) med en hjemmelaget semi-automatisert vev arrayer. 57 vev fra normal kolorektal slimhinne ble inkludert som en kontroll.
analysemetoder.
vevet microarray ble immunostained for 13 immunologiske proteinmarkører og mismatch reparasjon markører. Protokoller for MLH1, MSH2, MSH6, CD8 og foxp3 har blitt beskrevet andre steder [10]. Kort beskrevet, ble de gjenværende protokollene utført som følger: CD163; NeoMarkers, MS-1103, monoklonalt, 01:40, citratbuffer pH 6, 100 ° C, 30 «; CD20; Dako, M0755, monoklonale, 01:50 citratbuffer pH 6, 100 ° C, 30 «; CD4; NeoMarkers, MS-1528, monoklonalt, 01:40, citratbuffer pH 6, 100 ° C, 60 «; CD68; Dako, M0876, monoklonale, 1:200, citratbuffer pH 6, 100 ° C, 15 «; GranzymeB; Novocastra, NCL-L-A-B GRAN, 01:10, citratbuffer pH 6, 120 ° C, 10 «, iNOS; Abcam, ab15323, polyklonale, 1:100 ER1 buffer, 20 «, Mast celle tryptase; Dako, M7052, monoklonalt, 1:2000, ingen henting; Mum1; Dako, M7259, monoklonale, 01:50, citratbuffer pH 6, 100 ° C, 30 «; PD1; R TIA-1; Immunotech, IM2550, monoklonalt, 1:250, ingen henting; CD3; Dako, monoklonalt, Citrate buffer; 01:50; og CD45RO; Thermo Scientific UCHL-en, monoklonalt, Citrate buffer, 1:500. Negative kontroll vev ble testet og gjennomgikk samme protokoll med det primære antistoff utelatt.
Protein markører ble scoret av tre observatører (A. L., S.P., A.T.) ved å analysere antall positive celler per vev microarray punch. Ingen bildeanalyse programvare ble brukt. Det totale antall immunoreaktive celler i tumoren mikromiljøet ble evaluert, uavhengig av lokalisering (intratumoral eller stroma). Det totale antall celler per vev microarray slag fikk score fra 0 når ingen positive celler var tilstede, og scorer 1, 2 og 3 når 1-10 positive celler, 11-50 positive celler og 50 positive celler per slag kan være observert, respektivt. For PD1 og iNOS, tilfeller scoret som fullstendig fravær eller nærvær av noen positive celler.
Validering Gruppe
221 uselekterte, ikke-sammenhengende kolorektal kreftpasienter behandlet ved Attikon universitetssykehus, Universitetet av Athen, Hellas mellom årene 2004 og 2006 ble inkludert som en uavhengig validering gruppe. H E lysbilder ble anmeldt og kliniske data hentet fra pasientjournaler (tabell 1). Kliniske resultatet av interesse var kreftspesifikk overlevelse. En vev microarray av primære kolorektal kreft resections fra disse 221 pasientene ble bygget. For å utelukke skjevhet på grunn av mulig tumor heterogenitet, hver pasient hadde flere vev og tumor slag tatt fra formalinfikserte, parafininnstøpte blokker med en vev sylinder med en diameter på 0,6 mm som deretter ble overført til en mottaker parafin blokk ved hjelp av en hjemmelaget semiautomated vev arrayer. Hver pasient hadde et gjennomsnitt på 4 tumor slag inkludert på området, inkludert to fra svulsten sentrum og to fra invasive fronten. Immunhistokjemi ble utført i vevet microarray i henhold til protokollene beskrevet ovenfor for testgruppen. Protein uttrykket ble evaluert i henhold til scoring metoden beskrevet ovenfor av en erfaren mage-tarm patologen (EK).
Flowcytometri analyse på ferske kliniske prøver
Ti fersk skåret kliniske prøver var innsamlede og tumorfragmenter ble oppmalt og enzymatisk spaltet for å oppnå en enkelt cellesuspensjon. Celler ble overflate farget med fluorescens (FITC) -merket antistoffer spesifikke for CD4, CD16 eller CD66b (BD Pharmingen, San Diego, California) eller T-celle-reseptor (TCR) γδ (eBioscience, La Jolla, California) molekyler og med APC-merket antistoffer spesifikke for CD56 eller Vα24-Jα18 TCR (BD Pharmingen). Etter vask ble cellene fiksert med 2% formaldehyd og deretter permeabilized med 0,5% saponin før intracellulær farging med PE-merket TIA-1-spesifikke antistoffer (Immunotech, Marseille, Frankrike).
Study Design
den studiedesign er skissert i figur 1. Kort etter utelukkelse av MMR-mangelfulle saker fra testen årsklasse, univariat analyse og multivariable overlevelse tid modeller ble vurdert til å identifisere de sterkeste uavhengige prognostiske proteinmarkører og deres samlede verdi. Den uavhengige prognostiske verdien ble deretter evaluert på MMR-dyktig pasienter med kolorektal kreft fra Validering konsernet.
(A) 1420 kolorektal kreft ble montert på microarray og immunostained for 13 proteinmarkører og mismatch reparasjon (MMR) proteiner. MMR-mangel svulster ble ekskludert. (B) 221 kolorektal kreft ble montert inn i en flere-punsj vev microarray og immunostained for uavhengige prognostiske faktorer identifisert i testgruppen. MMR-mangel svulster ble ekskludert fra analyse og validering av prognostiske effekter utført på de resterende 209 pasienter.
Statistical Analysis
For å unngå skjevhet fra dichotomizing protein immunoreaktivitets, analyser var utføres ved å undersøke score 0, 1, 2 og 3 [11]. Kaplan-Meier-kurvene ble brukt for å vurdere innvirkningen av proteinet uttrykket i generell cancer-spesifikk overlevelse. Betydning ble vurdert i univariat analyse med log-rank test. Cox proporsjonal-farer modeller ble anvendt for å teste den samtidige innvirkning på den samlede cancer-spesifikk overlevelse av protein ekspresjon sammen med kjente prognostiske faktorer og under forutsetning av proporsjonal fare ble testet ved å evaluere log (-log (overlevelse)) versus log av overlevelsestid grafer. Snarere enn å utføre split-gruppeanalyse, ble alle multivariable modeller validert og 95% KI oppnådd gjennom 200 bootstrapped reproduksjoner av data [12], [13]. Alle testene var tosidig. Manglende variabler ble vurdert til å mangle på måfå. Ingen imputering ble utført snarere tilfelle messig sletting ble utført ved behov. P-verdier er rapportert uten justering for multiple korreksjoner [14]. Alle analyser ble utført med SAS V9.1 (SAS Institute, Cary, NC, USA).
Resultater
Test Gruppe
Kreft spesifikk overlevelse analyse- Univariat ( Figur 2)
Mer gunstig overlevelse ble observert hos pasienter med høyere antall CD3 + (p. 0,001), CD4 + (p = 0,029), CD8 + (p 0,001), CD45RO + (p = 0,048), foxp3 + (p 0,001), GranzymeB + (p 0,001), iNOS + (p = 0,035), MUM + 1 (p = 0,014), PD1 + (p = 0,034) og TIA-1 + Tīlss (p 0,001). Representative mikrofotografier av disse proteinmarkører og immunreaktive celler er vist i Figur 3.
Uthevet markører er de som viser en signifikant sammenheng med prognose.
A) CD3, B) CD4, C ) CD8, D) CD45RO, E) foxp3, F) granzyme B, G) iNOS, H) MUM1, I) PD1, J) TIA-en.
Kreft spesifikk overlevelse analyse-multivariabel .
Betydelige markører ble testet i to multivariable modeller. Vi vurderte først den prognostiske effekten av markørene justering for effekten av alder på diagnose, kjønn, pt, pn, tumor klasse og vaskulær invasjon. CD3 (n = 945, 434 dødsfall; p = 0,128), CD4 (n = 1026; 491 dødsfall; p = 0,463), CD45RO (n = 866, 401 dødsfall; p = 0,181), foxp3 (n = 1091; 519 dødsfall ; p = 0,185), GranzymeB (n = 987, 479 dødsfall, p = 0,091), iNOS (n = 1023; 493 dødsfall, p = 727), MUM1 (n = 1082; 516 dødsfall; p = 0,173), og PD1 (n = 1096; 523 dødsfall, p = 0,389) viste ingen effekt på overlevelse etter justering for disse etablerte prognostiske parametre. I motsetning til CD8 (n = 1019; 489 dødsfall; p 0,001) og TIA-1 (n = 1005; 481 dødsfall; p 0,001) opprettholdt sin svært positive og betydelig innvirkning på pasientenes prognose
I. en andre overlevelsestid modell (tabell 2) virkningen av CD8 og TIA-1 ble igjen testet denne gang sammen med pasientens alder ved diagnose, kjønn, pt, pn, metastase og adjuvant terapi. Resultatene understreker en svært signifikant positiv effekt av to markører: (1) CD8 + (n = 292, 75 dødsfall, HR: 0,66 (95% CI: 0,64 til 0,68) og (2) TIA-1 + (n = 290; 82 dødsfall ; HR: 0,56 (95% KI: 0,5-0,6))
Karakterisering av TIA-en-uttrykkende celler
Gitt at TIA-en er en hypotese som en markør for.. aktiverte CD8 + T-celler, har vi bekreftet at koekspresjon av TIA-1 på CD8 + -T-celler ved flow cytometri på tumor-infiltrerende lymfocytter (Tīlss) fra 10 friskt uttatt kliniske prøver. Prosentvise samlede TIA-1 + celler varierte 0,86 til 6,52 (bety .: 3,7 ± 1,6) (figur 4A) Costaining med markører spesifikke for definerte cellepopulasjoner bekreftet at hovedpopulasjonen av TIA-1 + celler er representert ved CD8 + T-celler (57 ± 8%), etterfulgt av TCRγδ celler (22 ± 10% ) og CD66b + neutrofiler (13 ± 12%). i motsetning til dette neglisjerbare andeler av CD4 + T-celler, makrofager (identifisert som CD16 + CD56- celler), NK-celler (identifisert som CD56 + -celler), og NK /T-celler (som uttrykker Va24-Ja18 TCR), ble observert (figur 4 B, C). TIA-1-ekspresjonen ble påvist på et flertall av infiltrerende CD8 + -celler (64 ± 22%), mens den resterende del (35 ± 22%) ble TIA-1 negativ (figur 4C, D).
enkelcelle suspensjoner hentet fra ferske skåret vevsprøver (n = 10) var flate farget med FITC- eller APC-merkede antistoffer spesifikke for de angitte overflatemarkører og intracellulært farget med PE-merket anti-TIA-1-antistoffer. A) Prosenter av totale TIA-1 + celler B) Prosenter av CD8 + celler, TCRγδ celler, nøytrofile (identifisert som CD66b + celler), CD4 + celler, makrofager (identifisert som CD16 + CD56- celler), NK-celler (CD16 + CD56 +) og NKT celler (Vα24-Jα18 TCR +) observert innenfor gated TIA-1 + celler. C) Representant dot-plot som illustrerer samtidig uttrykk for TIA-en og CD8 molekyler innenfor gated lymfocytter på totalt celler hentet fra en klinisk prøve. D) Prosenter av TIA-1 + og TIA-1- celler i gated CD8 + celler.
Fenotypiske kombinasjoner av CD8 /TIA-en.
Vi neste analysert fenotypiske frekvenser av de 1019 kolorektal kreft med både evaluerbare CD8 og TIA-en flekker. Tre store fenotyper ble observert: svulster negativ for både CD8 (Karakter 0) og TIA-en (Karakter 0) (n = 223; 21,9%), svulster positive for CD8 men negativt for TIA-1 (n = 366; 36%) og svulster positive for både CD8 og TIA-1 (n = 350, 34,3%). Bare 80 tumorer var negative for CD8 og positivt for TIA-1 (7,8%). På grunn av disse små tall, ble gruppen av CD8 negative svulster klassifisert som en enkelt undergruppe uavhengig av TIA-1 uttrykk.
Kreft spesifikk overlevelse analyse av CD8 + Tīlss stratifisert etter TIA-en.
overlevelses~~POS=TRUNC ble analysert for de tre CD8 /TIA-1 fenotyper i 998 pasienter som overlevelsestid var også tilgjengelig. Alt i alt, en signifikant forskjell i kreftspesifikke overlevelsestider ble observert mellom de tre gruppene med pasienter med høyere mengder av CD8 + /TIA-1 + Tīlss opplever det gunstigste resultat, etterfulgt av CD8 + /TIA-1- tilfeller, og til slutt ved CD8- pasienter (p 0,0001, figur 5). Vi neste utført multivariabel analyse inkludert prognostiske faktorer alder, kjønn, pt, pn pM scenen samt postoperativ behandling og bestemt den ekstra fordelen av stratifisering pasienter med svulster med høyere mengder av CD8 + Tīlss av TIA-en. Blant pasienter med CD8-positive svulster, en relativ risiko for død på 0,89 (95% KI: 0,8-0,9) ble observert for de med samtidige TIA-1-positive svulster (p 0,001; Tabell 2). Disse resultater indikerer at tilsetningen av TIA-1 i tilfeller av CD8-positivitet øker risikoen for lagdeling 35.6% (n = 355) av pasientene.
Validering gruppe
En ekstern valideringssettet ble analysert for CD8 + og TIA-1 + Tīlss. I denne gruppen av MMR-dyktig tykktarmskreft, bare 7 pasienter hadde svulster med CD8 + /TIA-1- Tīlss i univariable analyse, overlevelsestidsforskjeller for pasienter med CD8 + /TIA-1 + Tīlss var betydelig høyere sammenlignet med pasienter med fravær av CD8 + Tīlss (p 0,0001). Overlevelsestid forskjeller mellom pasienter med forskjellig CD8 /TIA-1 fenotyper ble evaluert i multivariabel analyse med pT stadium, pN scene, pM og adjuvant terapi. Blant pasienter med CD8-positive svulster, TIA-en positivitet førte til en relativ risiko på 0,79 (95% KI: 0,7-0,9). Sammenlignet med pasienter med TIA-en-negative kreft (p = 0,006)
diskusjon
De nye funnene i denne studien på 1406 MMR-dyktig kolorektal kreftpasienter foreslår for det første at høyere antall TIA-1 + Tīlss representerer en gunstig og uavhengig prognostisk parameter og andre som i tillegg til CD8, TIA- 1 forbedrer prognostisk lagdeling av pasienter med 35%.
Selv om prognostisk betydning av rikelig CD8 + Tīlss har tidligere blitt etablert [3], [5], [15], [16], [17], denne studien går ett skritt videre for å identifisere markør TIA-en som en svært relevant prognostisk parameter i tykktarmskreft og spesielt i svulster med markert cytotoksiske CD8 + Tīlss. TIA-1 er en cytoplasmisk granul-assosierte RNA-bindende protein velig uttrykt i celler med cytolytisk potensial, inkludert 50-60% av CD8 + T-lymfocytter [18]. TIA-1 er blitt vist å være involvert i Fas-mediert apoptose i en rekke humane ondartede sykdommer, og for å sensibilisere endotelceller til pro-apoptotiske stimuli samtidig øke NK-celle cytotoksisk aktivitet [19], [20], [21]. Våre resultater er i samsvar med disse funnene. Her viser vi at 64% av CD8 + Tīlss co-express TIA-en. I tillegg identifiserer vi en liten populasjon av CD8- men TIA-1 + tumor infiltrerende celler som representerer populasjoner av TCRγδ celler og neutrofiler og i mindre grad CD4 + T-celler, makrofager, NK-celler og NK /T-celler.
Undersøkelser på de kliniske og prognostiske implikasjoner av TIA-1 + lymfocytter er stort sett begrenset til hematologisk kreft med både gunstige og ugunstige effekter knyttet til overuttrykk av dette proteinet [22], [23]. Bare en håndfull studier har evaluert TIA-1 uttrykk på Tīlss i tykktarmskreft, om oppregulering til apoptose og et økt antall TIA-1 + Tīlss i MMR-manglende svulster [24], [25]. Interessant, i våre MMR-dyktig tilfeller, vi kunne ikke finne noen sammenheng mellom høyere antall TIA-1 + celler og tumor uttrykk for anti-apoptotiske markør BCL-2, pro-apoptotiske markører apoptose Aktivere Factor-1 (APAF-1 ) og pattedyr Sterile20-lignende kinase 1 (MST-1), og heller ikke med p53 eller spredning Ki67 (data ikke vist). Imidlertid er vi ikke bare rapporten at økt antall TIA-1 + Tīlss sterkt assosiert med en forbedret klinisk utfall, men representerer en selvstendig prognostisk faktor, i test og validering studiekohorter. Viktigst våre resultater indikerer at effekten av TIA-1 på utfallet er additiv til CD8, et resultat som har betydning for 35% av alle pasientene. Derfor er betydelig mer gunstig utfall av pasienter med CD8 + /TIA-1 + Tīlss forhold til saker med CD8 + /TIA-1- Tīlss kan være en indikasjon på en mer effektiv immunosurveillance ved Tīlss med en aktivert og svært cytotoksiske potensial.
Resultatene av denne studien også identifisert flere andre typer Tīlss innen svulsten sentrum som å ha en positiv innvirkning på prognosen, for eksempel foxp3. Den prognostisk rolle Tregs synes å variere betydelig fra tumor type muligens indikerer differensial rollene til disse cellene i et vev avhengig måte [26] – [28]. I tykktarmskreft, de fleste studier er i tråd med våre funn indikerer at et høyt antall foxp3 tregs er en gunstig prognostisk faktor for sykdomsfrie og total overlevelse tid [10], [29], [30]. Men denne effekten, som fremhevet her, synes ikke å være uavhengig av CD8 +.
Selv om vår studie kan være begrenset av ufullstendig klinisk informasjon i noen tilfeller, vi kan fortsatt bekrefte uavhengig prognostisk effekt av TIA-en og dens modifisering effekt på CD8 i 500 pasienter med komplett TNM og behandlingsinformasjon. Den MMR status ble analysert ved ekspresjon av protein markører MLH1, MSH2 og MSH6 og bare svulster med positivitet i alle tre merkene ble inkludert i denne analysen. Disse markørene samt TIA-en og CD8 blir rutinemessig brukt i diagnostisk patologi, de to sistnevnte for T-celle avstamning besluttsomhet og inndeling i undergrupper av lymfomer og dermed støtter deres verdi som pålitelig forskning verktøy samt [31], [32]. Bruken av TMA hever ofte bekymring for at protein uttrykk for heterogene svulster ikke er tilstrekkelig representert ved hjelp av denne teknikken. Men i det daglige diagnostisk arbeid, er forekomsten av Tīlss kjent for å være ganske homogen og mens en svulst slag ble samplet i testgruppen, den ekstra inkludering av en validering kohort med et gjennomsnitt på 4 tumor slag per svulst samplede bør redusere skjevhet fra mulig tumor heterogenitet [33]. Videre våre studie fordeler fra bruk av test- og validerings kohorter, sistnevnte representerer en uavhengig, ekstern validering undergruppe av hvilke proteinmarkører ble vurdert av flere uavhengige patologer, og dermed ytterligere bekrefter reproduserbarheten av CD8 /TIA-en scoring system og effekt på utfallet.
for å oppsummere, TIA-en er en robust prognostisk immunologisk biomarkør som bidrar til klinisk utfall hos pasienter med MMR-dyktig kolorektal kreft uavhengig av TNM stadium og adjuvant behandling. Den kombinerte analysen av CD8 /TIA-en identifiserer en stor undergruppe av pasienter, som drar nytte av økt risiko lagdeling, som skal hjelpe til å skreddersy mer individuell klinisk behandling for pasienter med kolorektal kreft pasient, samtidig som det gir en ny potensiell avenue etterforskning for utvikling målrettet immunterapi.
