Abstract
Bakgrunn
Lynch syndrom (LS) er en arvelig tilstand som øker risikoen for livmor og andre kreftformer. Identifiseringen av livmorkreft (EF) pasienter med LS har potensial til å påvirke livreddende tiltak. Vi forsøkte å studere forekomsten av LS blant EU-pasienter i vår befolkning.
Metoder
Universal screening for LS ble søkt om en sammenhengende serie EC. Tumor testing med mikro ustabilitet (MSI), immunhistokjemi (IHC) for mismatch-reparasjon (MMR) protein uttrykk og
MLH1
metylering analyse, når det er nødvendig, ble brukt til å velge LS-mistenkelige tilfeller. Sekvensering av tilsvarende MMR-genene ble utført.
Resultater
Ett hundre og syttitre EC (gjennomsnittsalder, 63 år) ble undersøkt. Seksti pasienter (35%) hadde unormale IHC eller MSI resultater. Etter
MLH1
metylering analyse, 27 saker ble ansett som mistenkelig av LS. Fra disse 22 ble kontaktet og henvist til genetisk veiledning. Nitten forfulgt genetisk testing og åtte ble diagnostisert av LS. Mutasjoner var hyppigere hos yngre pasienter ( 50 år). Tre tilfeller hadde enten intakt IHC eller MSS og forsterke behovet for å implementere EU-screening med begge teknikkene
Konklusjon
Utbredelsen av LS blant EU-pasienter var 4,6% (8/173).; med en prediktiv frekvens på 6,6% i den spanske befolkningen. Universal screening av EC for LS anbefales
Citation. Egoavil C, Alenda C, Castillejo A, Paya A, Peiro G, Sánchez-Heras A-B, et al. (2013) Utbredelse av Lynch syndrom blant pasienter med nydiagnostisert livmorkreft. PLoS ONE 8 (11): e79737. doi: 10,1371 /journal.pone.0079737
Redaktør: Hiromu Suzuki, Sapporo Medical University, Japan
mottatt: 9 juli 2013; Godkjent: 23 september 2013; Publisert: 07.11.2013
Copyright: © 2013 Egoavil et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne studien ble støttet av Conselleria Sanidad Comunidad Valenciana, Spain (AP /177/10) (https://www.san.gva.es/); Biomedisinske forskningsstiftelser i Alicante universitetssykehus (PI14 /2006 og NI02 /2011) (https://www.dep19.san.gva.es/); og Elche universitetssykehus, Spania (FIBElx-CO11 /03) (https://www.dep20.san.gva.es/). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Identifikasjon av arvelige former for neoplasier blant kreftpasienter er avgjørende for bedre styring og forebygging av andre syndrom-forbundet maligniteter for pasientene og deres familier [1]. Estimert forekomst og dødelighet telling av livmorkreft (EF) i Europa i 2012 var 58 300 og 24 400 kroner. EC står for omtrent 4% av alle krefttilfeller hos kvinner [2]. Forekomsten er økende, og ca 5% av tilfellene antas å skyldes en genetisk predisposisjon [3].
Lynch syndrom (LS) er en autosomal dominant tilstand forårsaket av en mutasjon i mismatch reparasjon (MMR) gener
MLH1
,
MSH2
,
MSH6 Hotell og
PMS2 product: [4]. Mutasjonsbærere er utsatt for tidlig debut kolorektal kreft (CRC), EC og et spektrum av andre tumorer så som eggstokk, mage, tynntarm, bukspyttkjertel, hepatobiliære, hjerne og urothelial neoplasmer i [5]. Den kumulative levetid risiko for EC for kvinnelige bærere av en MMR mutasjon er 50-60% og overgår risikoen for CRC [6].
Identifisering av pasienter med EF og LS har potensial til å påvirke livs besparende tiltak gjennom personlig rådgivning og intensiv kreft overvåking med tidlig oppdagelse, screening og forebygging av andre LS-assosiert kreft. Genetisk testing er nå en akseptert del av behandling av pasienter med slike kreftformer. Den Mallorca gruppe [7] anbefales å teste alle tilfeller av CRC (eller personer med en CRC alderen 70 år) og alle tilfeller av EF (eller personer med et EF alderen 70 år) ved immunhistokjemi (IHC) for MMR gener eller kromosommikro ustabilitet (MSI).
utbredelsen av LS blant uselekterte tilfeller av CRC har blitt studert også. Resultatene indikerer at 0,7% til 3,6% av alle slike tilfeller kan være forårsaket av kimlinje-mutasjoner i genene MMR [8-12]. Tvert imot, forskning på LS-relaterte egenkapitalbevis er fortsatt i utvikling, og lite er kjent om genetiske komponenter blant pasienter med EF. Aktuelle data om utbredelsen av LS blant uselekterte tilfeller av EF i Nord-Amerika varierer mellom 1,8% og 4,5% [13-15]. Signifikante forskjeller i forekomsten av arvelige syndromer blir ofte observert mellom ulike befolkningsgrupper [12]. Her rapporterer vi på utbredelsen av LS i en rekke av pasienter med EF fra den spanske befolkningen.
Materialer og metoder
etiske problemstillinger
svulstvev og blodprøver fra pasienter med EC ble hentet fra Biobank av Alicante universitetssykehus (HGUA) i Spania. Skriftlig samtykke til å være med i biobanken ble innhentet fra hver pasient. Den etiske komiteen for HGUA godkjent studiet.
Fag
Ett hundre syttitre påfølgende pasienter med nylig diagnostisert egenkapitalbevis ble inkludert i denne studien. De ble diagnostisert og behandlet på HGUA 2004-2009. For hvert tilfelle, ble alle tilgjengelige hematoksylin-eosin lysbilder anmeldt og klassifisert ved hjelp av 2003 World Health Organization kriterier [16]. Andre histopatologiske funksjoner innspilte var tilstedeværelsen av lymphovascular invasjon (LVI), tumor-infiltrerende lymfocytter (Tīlss), myometriets invasjon, og klasse og scene ifølge International Federation of Obstetrics og gynekologi (FIGO). De adenokarsinomer ble klassifisert i endometrioid (type I) og spesielle (type II) i henhold til Peiro et al 2013 [17]. En familiær historie av kreft ble evaluert i henhold til de reviderte Bethesda retningslinjer (RBG) og Amsterdam II kriterier (Amii) [18].
Immunohistochemistry av MMR proteiner
IHC analyse av uttrykk for MLH1, MSH2, MSH6 og PMS2 proteiner ble utført ved hjelp av en vev microarray (TMA). Tissue sylindere med diameter 1 mm ble stanset ut fra utvalgte områder og innarbeidet i en mottaker parafin blokk ved hjelp av en TMA instrument (MTA-en, Beecher Instrument, Wisconsin USA). Fire millimeter tykke snitt ble fremstilt fra TMA prøvene. Platene ble plassert på en Autostainer Link48 (Dako, Danmark) og inkubert i 30 minutter ved romtemperatur med primære antistoffer til MLH1 (klon G168-15; 1:30; BD Biosciences Pharmingen, Franklin Lakes, NJ, USA), MSH2 ( klone 44, fortynning 1: 100; BD Transduction Laboratories, San Diego, CA, USA), MSH6 (klone FE11, fortynning 1:30; Calbiochem, Merck Millipore, Billerica, MA, USA) og PMS2 (klone A16-4; fortynning 1: 100; BD Biosciences Pharmingen). Antistoffer ble påvist ved hjelp av Envision teknikk (Dako-Biotech). Tumorceller ble bedømt som negative for protein ekspresjon bare hvis de manglet IHC-farging i en prøve hvor normale endometriale celler og stromaceller ble farget samtidig. Resultatene ble betraktet som upålitelige i de tilfeller hvor ingen immunofarging av normalt vev kan bli demonstrert. De behandlet IHC lysbilder ble blindet evaluert av to patologer (CE og CA) [19].
DNA-ekstraksjon
Genomisk DNA ble isolert fra parafinvoks-embedded tumorvev. To 1 mm vev sylinderne ble stanset ut av tumorområdene er valgt som tidligere. DNA fra perifert blod leukocytter eller fra parafinvoks-embedded nontumorous endometrium vev ble også hentet fra de tilfeller hvor LS ble mistenkt. En DNeasy Blood Tissue kit og Qiacube (Qiagen, Valencia, CA, USA) automatisk system ble brukt til å isolere DNA, i henhold til produsentens protokoll.
mikroanalyse og MMR status
MSI status ble analysert ved hjelp av multiplex polymerase-kjedereaksjon (PCR) mønstre ved monomorfe repeterende markører: BAT26, BAT25, NR21, NR24 og NR27 [20]. Amplicon deteksjon og analyse ble utført ved hjelp av en ABI Prism 3130 Genetic Analyzer, og Genotyper programvare (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA), henholdsvis. Diagnosen MSI ble ansett positiv når to eller flere markører viste et endret mønster. Tumorer med MSI og /eller tap av ekspresjon av hvilken som helst av MMR-proteiner ble betraktet som MMR-mangelfull. Svulster med fravær av MSI og bevart MMR protein uttrykk ble ansett som MMR-positive svulster.
MLH1
arrangøren hypermethylation analyse
Saker med tap av MLH1 uttrykk ble testet for
MLH1
metylering i svulsten DNA. Eventuelle saker med slike metylering ble deretter analysert for
MLH1
metylering i DNA fra blodlegemer til å identifisere mistenkte konstitusjonell
MLH1
epimutations (figur 1). Vi brukte metyleringen-spesifikke multiplex ringsavhengig sonde-amplifikasjon teknikk (MS-MLPA Kit ME011, MRC-Holland, Amsterdam, Nederland) for å studere metylering status av
MLH1
, i henhold til produsentens protokoller. Måltallene regionene for
MLH1
genet Slå av hypermethylation ligger i C og D deler av
MLH1
promoter (fra nukleotid posisjoner -248 til -178 og -109-15) [ ,,,0],21], som ble testet ved hjelp av sondene
MLH1
-3 og -4, henholdsvis. De midlere resultater for disse to probene ble beregnet for å oppnå den metylering forholdet. Terskelen for metylert versus unmethylated status ble satt til 15%, basert på en tidligere studie av
MLH1
genet Slå [22]. MS-MPLA fragmenter ble analysert ved hjelp av en ABI Prism 3130 Genetic Analyzer, og Genotyper programvare (Life Technologies).
kimcellelinje mutasjoner
Pasienter som vi mistenkte LS og var kandidater for genetisk testing ble henvist til genetisk rådgivning divisjon i vår enhet. Mistanke om LS var basert på MMR status (IHC og MSI resultater) og
MLH1
denaturert status, i henhold til vår beslutning treet algoritme (figur 1).
MLH1
gentesting ble utført i tilfeller hvor svulster viste tap av protein uttrykk og unmethylated
MLH1
.
MSH2
mutasjonsanalyse ble utført i de tilfeller med
MSH2-
negativ farge svulster.
MSH6
kimcellelinje analyse ble gjort hos pasienter med mangel på MSH6 protein uttrykk, men med normal uttrykk for MSH2. Svulster med en kombinert mangel på MSH2 og MSH6 proteiner med en uoppdaget mutasjon i
MSH2
ble også testet for
MSH6
genetiske endringer. Saker som ble testet for
MSH2 Hotell og
MSH6
uten mutasjon oppdaget ble også analysert for store rearrangements på
EpCAM
locus. Genetisk testing for
PMS2
ble utført bare i de pasienter med svulster som viser tap av uttrykk for PMS2 og normal uttrykk for MLH1.
kimcellelinje mutasjonsstudier ble utført på genomisk DNA isolert fra perifert blod leukocytter eller fra nontumorous endometrievev. Deteksjon av punktmutasjoner ble utført ved anvendelse av PCR og direkte sekvensering av hele kodende sekvens og intron-ekson-grenser for hvert gen [12]. Store rearrangements (slettinger og /eller innsettinger) for MMR gener ble undersøkt av MLPA henhold til produsentens protokoller (Salsa MLPA kits P003, P072 og P008, MRC-Holland). Bekreftelse testing ble også utført ved hjelp av MLPA med en annen kombinasjon av sonder (Salsa MLPA kit P248, MRC-Holland). Analyse av slettinger på
EpCAM
locus ble også gjort ved hjelp av MLPA (Salsa MLPA kit P072-B1, MRC-Holland). Tolkningen av genetiske analyseresultatene var basert på American College of Medical Genetics (ACMG) Anbefalinger for standarder for tolkning av Sequence Variasjoner [23], innsikt databasen [24], og referansene der ble anmeldt for å klassifisere genetiske varianter.
databehandling og statistisk analyse
analysen ble utført ved hjelp av
R
programvare, versjon 2.15.2 (R Project for Statistiske Computing Tilgjengelig:. http: //www.r -project.org. nås 2013 21 oktober) og Epicalc epidemiologisk analysepakke [25]. Aktuelle tiltak for sentraltendens (middel, median og interkvartilt områder for skjeve data) ble brukt til å utforske dataene. Chi-squared test ble brukt for å sammenligne kvalitative variabler. Elevens
t
test ble brukt for å sammenligne normalfordelte kontinuerlige variabler. Signifikans ble satt til
p
0,05 og resultatene er presentert som odds ratio (OR) og 95% konfidensintervall (KI).
Resultater
Totalt 173 uselekterte pasienter med egenkapitalbevis var inkludert. Gjennomsnittsalderen ved diagnose var 63,3 år (spredning 29-90). Alle pasientene gjennomgikk biopsi eller hysterektomi og parafinvoks-embedded vev var tilgjengelig for IHC og molekylær testing. De kliniske og histopatologiske egenskapene til de tumorer er vist i tabell 1. De fleste tumorene var av endometrioid histologi (79,2%) og FIGO klasse 1 (54,9%). Ingen innvekst i myometriet ble funnet i 10,3% av pasientene (15/146). Om 63,7% av tilfellene hadde myometriets invasjon ≤50% (96/146) og 26% (38/146) hadde myometriets invasjon 50%. Tīlss var til stede i 29,4% av svulster (47/160) og 17,9% av svulstene hadde LVI (24/134). Tjueseks pasienter (17,1%) hadde synkron livmor og eggstokkreft
. Variabel
N product: []
Antall pasienter 173Mean alder (SD) og varierer i years63.27 (+/- 12.37 ) 29-90N% Stage ved førstegangsdiagnose 158I 11975.3II63.8III3119.6IV21.3Histology 173Endometroid13779.2Poorly Diferenciated84.6Papilary Serous137.5Clear Cell116.4Mülerian Mixet Tumor42.3Grade (FIGO) 17319554.922916.834928.3Myometrial invasjon 146None 1510.3≤50% 9363,7 50% 3826.0Tumor infiltrere lymfocytter 160No11370.6Yes 4729.4Lymphovascular invasion134No11082.1Yes 2417.9Low Uterin Segment173No15790.8Yes 169.2Synchronous eggstokkreft 152No 12682.9Yes2617.1Table 1. Kliniske og patologiske egenskaper.
CSV ned CSV
Familiære historier av kreft, histopatologiske og molekylære egenskaper når det gjelder LS er vist i Tabell 2. Åtte pasienter (4,6%) hadde en historie med tykktarmskreft og 10 (5,8%) hadde en historie med brystkreft og andre neoplasier. En familiær historie av kreft var tilgjengelig i 87 tilfeller: 42 (48,3%) oppfylte RBG kriteriene, og fire (4,6%) oppfylte Amii kriterier. Familie historie av kreft fra de resterende 86 tilfellene var utilgjengelig fordi ubekreftet familiens historie, ble ikke fulgt opp eller avdøde.
Variabel
N
%
Lynch syndrom criteria87Reviewed Bethesda criteria3843.68Amsterdam II kriteriene 44.60No Fullfill4551.72Personal History of Colorectal Lesions8Colon cancer63.47
* Polyps21.16
* Personlige Historie Annet Tumors15Breast cancer105.78
* Lung cancer21.16
* Pleura10.58
* Thyrod kreft (Medular) 10.58
* urothelial Cancer10.58
* IHC protein uttrykk: Tap av MLH1 /MSH2 /MSH6 /PMS2 173No 11566.47Yes5833.53MSI Status173MSS12672.83MSI4727.17Mismatch reparasjonsstatus 173Proficient11264.74Deficient6135.26Table 2. funksjoner knyttet til Lynch syndrom. product: * Beregnet fra hele serien (n = 173). CSV Last ned CSV
Vi har funnet en endret MMR bilde (tap av MMR protein uttrykk og /eller MSI) i 61 pasienter (35,3%). Tap av MLH1 ekspresjon ble funnet i 44 pasienter (25,4%). Fra disse, 34 (77,3%) viste
MLH1
hypermethylation i svulsten. Deretter
MLH1
hypermethylation analyse ble gjort i ni av disse tilfellene der DNA fra blodceller var tilgjengelig, men ga negative resultater i alle av dem. Dermed er alle svulster med
MLH1
hypermethylation ble ansett sporadisk egenkapitalbevis.
Tap av MSH2 /MSH6 ble påvist hos fem pasienter (2,9%), mens tap av bare MSH6, eller bare PMS2 protein uttrykk, ble observert i åtte (4,6%). Ett tilfelle, med både tap av MSH6 og PMS2 ble funnet (tabell S1 i File S1). Alle disse sakene, sammen med ytterligere 10 tilfeller med tap av MLH1 uttrykk og fravær av
MLH1
metylering ble ansett som mistenkelig av LS og egnet for genetisk testing.
En signifikant sammenheng ble funnet mellom IHC og resultater MSI (
p
0.0001) som viser samsvar i 90,2% av tilfellene (156/173). Discordances mellom IHC og MSI ble funnet i 17 tilfeller (9,8%). Tap av uttrykk for MMR proteiner og MSS ble funnet i 14 tilfeller. Normal uttrykk for MMR proteiner og MSI ble funnet i tre tilfeller.
Vi har ikke bevis for en sporadisk opprinnelsen til disse svulstene slik de ble også ansett som mistenkt LS. Til slutt ble totalt 27 (15,6%) tilfeller inkludert i genetiske analyser for germline mutasjon screening.
Komparativ analyse blant de mistenkte tilfeller av LS og saker med MMR dyktigere egenkapitalbevis viste at den mistenkte arvelig tilstand var mer ofte finnes hos kvinner yngre enn 50 år (OR 2,84; 95% KI 1,04 til 7,77). Ingen signifikante forskjeller ble funnet i noen andre kliniske eller patologiske variabler (tabell 3). Lignende resultater ble oppnådd når vi sammenlignet med pasienter som viser unormal MMR med dem som har beholdt funksjonen MMR (tabell S2 i File S1), med unntak av TIL og LIV, som var sterkt assosiert med unormal MMR tumorer (OR 5,88; 95% CI 2.80- 12.31 og OR 3,03; 95% KI 1,22 til 7,56, henholdsvis)
Mistenkt LS
MMR dyktig
p
Antall pasienter
27
146
Middelalder (SD) 57.70 (12.45) 64,31 (12,12) 0,01 N% N% OR (IC 95%) side 50 yrs725.931610.96 2,84 (1,04 til 7,77) 0.04≥50 yrs2074.0713089.04Histology endometroide (type I) 2281.4812384.250.82 (0,28 til 2,39) 0.72Special (type II) 518.522315.75Grade (FIGO) High933.334027.401.32 (0,5 til 3,19) 0.53Low1866.6710672.60Myometrial invasjon (n = 146) 50% 625.003226.230.93 (0,34 til 2,57) 0.90≤50% 1875.009073.77Tumor infiltrere lymfocytter (n = 160) Ja 933.333828.571.25 (0,52 til 3,03) 0.62No 1866.679571.43Lymphovascular invasjon (n = 134) Ja 730.431715.322.42 (0,87 til 6,76) 0.09No 1669.579484.68Low Uterin SegmentYes414.81128.221.94 (0,57 til 6,54) 0.28No 2385.1913491.78Synchronous eggstokkreft (n = 152) Yes518.522217.601.06 (0,36 til 3,11) 0.91No 2281,4810382. 40Reviewed Bethesda kriterier (n = 86) Fullfill1460.872844.441.94 (0.73-5.14) 0.18No Fullfill939.133555.56Amsterdam II kriteriene (n = 17) Fullfill333.33112.503.50 (0,28 til 43,16) 0.31No Fullfill666.67787.50Table 3. Sammen analyse av pasienter med mistanke om Lynch syndrom og MMR dyktige livmorkreft.
CSV ned CSV
kimcellelinje mutasjonsanalyser ble utført for 19 pasienter med mistenkt LS gruppen (19/27, 70,4%). Genetiske testresultater for de resterende åtte pasientene var utilgjengelig fordi de forkastet testing (3/27, 11,1%), ble ikke fulgt opp (3/27, 11,1%) eller døde (2/27, 7,4%).
Vi fant åtte pasienter med sykdomsfremkallende mutasjoner (8/19, 42,1%) som representerer 4,6% av hele serien; en i
MLH1
, tre i
MSH2
, tre i
MSH6 Hotell og ett i
PMS2
gener (Tabell 4). Gjennomsnittsalderen for disse pasientene var 49 år, betydelig lavere enn i den ikke-LS EC gruppen (tabell S3 i File S1). Tjuefem prosent av dem ikke oppfylte rBth kriteriene, og en annen 25% viste negative MSI (med isolert tap av protein uttrykk i MSH6 og PMS2) (tabell S4 i File S1). To pasienter hadde synkrone eggstokk-kreft, og man hadde en synkron tarmkreft (tabell 5). Tilstedeværelsen av synkrone ovarial kreft og tumor infiltrerende lymfocytter var forbundet til bekreftet LS tilfeller sammenlignet med ikke-LS EC (tabell S3 i File S1).
IHC mønster
Mistenkt Lynch
germline mutasjon /analysert tilfeller
Tap av MLH1 ingen Methylated101 /6Loss av MSH2 /MSH653 /4Loss av MSH672 /5Loss av PMS211 /1Loss av MSH6 /PMS210 /1MSI + normal IHC31 /2TOTAL278 /19Table 4. IHC mønstre mistenkt Lynch syndrom.
CSV ned CSV sak
RBG
Age
MSI status
IHC tap
Gene
nukleotid nomenklatur
Protein nomenklatur
Synkron tumor/lesions
End131Yes41MSIMLH1/PMS2
MLH1
c.2154_2157insAACA
#p.His718Glnfs*5Colonic PolypEnd111Yes45MSIMSH2 /MSH6
MSH2
C.1 -? _ 645+ del Sletting av exon 1-3 p Colon cancerEnd091Yes40MSIMSH2 /MSH6
MSH2
c.1226_1227delAGp.Gln409Argfs * 7Ovarian cancerEnd003Yes60MSIMSH2 /MSH6
MSH2
c.1387 -? _ 1661del Sletting av exon 9-10 p?NoneEnd014No61MSIMSH6
MSH6
c.2731CTp.Arg911*NoneEnd088Yes45MSSMSH6
MSH6
c.1367GA
#p.Trp456*Ovarian cancerEnd137No56MSINo tap
MSH6
c.1367GA
# p.Trp456 * NoneEnd034Yes44MSSPMS2
PMS2
c.538 -? _ 705+ del Sletting av exon 6
# p? NoneTable 5. Kjennetegn på pasienter med germline mutasjon.
#Not beskrevet på innsikt database. CSV Last ned CSV
Tre av mutasjoner (37,5%) var store strykninger (to i
MSH2
og en i
PMS2
), en annen tre (37,5%) var nonsense mutasjoner (alle i
MSH6
genet) og to (25%) var rammeskifte mutasjoner (en innføring i
MLH1 Hotell og en sletting i
MSH2
). Ytterligere to pasienter viste genetiske missense varianter av ukjent klinisk betydning, både i
MSH6 plakater (c.116GA, p.Gly39Glu, og c.1109TC, p.Leu370Ser). Tippe hjelp Polyphen-2 (https://genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) klassifisert begge variantene som sannsynligvis sykdomsfremkallende. I tillegg har begge svulster viste tap av uttrykk for MSH6 med konservert uttrykk for MSH2, og fravær av MSI.
I foreningen studie som sammenligner mutert med nonmutated tilfeller ble bare alder funnet å være signifikant. Mutasjoner ble oftere funnet hos pasienter med EF diagnostisert før 50 års alder (OR 16,67; 95% CI 1,01 til 588,03;
p
= 0,048). Ingen signifikante sammenhenger ble funnet om RBG kriterier, IHC, MSI status, histopatologi eller tilstedeværelse av synkrone svulster.
Diskusjoner
En liten andel av egenkapitalbevis kan være et resultat av en genetisk risiko tilstand [ ,,,0],3]. LS er den viktigste syndrom som er involvert i slike tilfeller [5,6], selv om eksistensen av en familiær setespesifikk EC genetisk enhet atskilt fra LS er blitt suge [26]. Den nåværende data om utbredelsen av LS blant pasienter med EC er begrenset og begrenset til populasjoner fra USA [13-15]. Forskjeller i forekomsten av genetiske sykdommer er ofte observert mellom ulike populasjoner, spesielt for syndromer hvor pene er ufullstendig og andre genetiske og miljømessige faktorer kan virke som penetrans modifikatorer.
Vi forsøkte å fastslå utbredelsen av LS blant pasienter med egenkapitalbevis i vår spanske befolkningen, for å etablere riktig screening strategier for å identifisere personer med genetiske predisposisjoner til andre svulster; følgelig å identifisere familiemedlemmer i fare og etablere personlig oppfølging anbefalinger.
Vi brukte en prevalens studie ved hjelp av etablerte anbefalinger og konsensus algoritmer for screening og mutasjonsanalyse [7]. For å maksimere vår mutasjon følsomhet, ble ingen begrensning på alder ved diagnose vurderes. IHC og MSI analyse ble utført for alle tumorer.
MLH1
metylering ble testet i tumorer og også i blodet når det er nødvendig og mutasjonsanalyse ble gjort for de fire felles MMR og
EpCAM
gener.
IHC og MSI screening oppdaget 35,3% (61/173) av svulster med mangelfull MMR, som er høyere enn de 22,8% (124/543) og 25,3% (62/245) funnet ved Hampel et al
, etter 2006 og Moline m.fl. 2013, henholdsvis. Vi fant normal IHC uttrykk for MMR proteiner sammen med MSI i 3/61 tilfeller (4,9%). Lignende resultater ble oppnådd ved Hampel et al. 2006 (6,3%, 6/96) [13]. Videre fant vi at ca 23% (14/61) av svulster hadde tap av uttrykk for en MMR protein og MSI. Den forventede andel av tap av uttrykk og MSI i Hampel (2006) studie [13] vil være ca 15%. Interessant nok har vi funnet at to ubeslektede pasienter med disse tilsynelatende discordances hadde den samme mutasjon i
MSH6 plakater (c.1367GA; p.Trp456 *), noe som tyder på at i noen tilfeller arten av det andre treff kan være bestemmende for svulsten IHC og MSI egenskaper (Tabell 5). Våre data viser at pasienter med EF, kanskje opp til 27,9% av tilfellene med MMR-mangel har enten normalt IHC resultater eller MSI og forsterker behovet for å gjennomføre screening med begge teknikkene.
Komparativ analyse av vår MMR mangel versus positive tilfeller gjorde viser en signifikant sammenheng med LVI og Tīls, som beskrevet andre steder [27,28]. Men ingen sammenheng ble funnet mellom alder ved diagnose og RBG eller Amii kriterier (tabell S2 i File S1). Disse resultatene kan forklares med den hyppige forekomsten av somatiske MMR mangel på egenkapitalbevis [13].
MLH1
metylering og
BRAF
mutasjon analyser tillater en å identifisere sporadiske former CRC blant MMR-mangel svulster. Vi fant ingen sak mutert i
BRAF plakater (data ikke vist). Dermed gjør dette genet ikke har en viktig rolle i EC og bør ikke inngå i screening algoritmen [15]. I motsetning til dette,
MLH1
promoter metylering var til stede i de fleste tumorer sammen med tap av ekspresjon av MLH1 (77,3%, 34/44). Denne andelen var betydelig lavere enn 94% (79/84) funnet ved Hampel et al, 2006 [13]. Forskjeller mellom de to kohortene og ulike metoder for metylering analyse (MS-MLPA vs MS-PCR) kan ha bidratt til dette misforholdet.
konstitusjons epimutations til
MLH1
genet i tilfeller av EF er svært sjeldne [29]. Ingen av de ni tilfeller analysert med svulst metylering hadde
MLH1
metylering i blodet DNA. Dermed vil en svulst med
MLH1
metylering er usannsynlig å være LS-forbundet. I kontrast er sannsynlig å bli assosiert med LS en svulst som viser et tap på MLH1 og PMS2 av IHC, med ingen bevis for metylering, [1].
Etter den innledende screening, valgte vi 27 pasienter (15,61%) er mistenkt for LS. Gjennomsnittsalderen i denne gruppen var 57,7 år og pasienter yngre enn 50 var hyppigere (Tabell 3). Ingen andre patologiske eller klinisk karakteristiske ble funnet å være assosiert med mistanke LS tilfeller. Foreløpig har det vært forsøk på å identifisere patologiske faktorer i LS-assosierte EC. Noen forfattere har identifisert tumorlokalisering rapporterer en signifikant høyere forekomst av nedre livmor segment svulster hos pasienter med LS [30,31]. Westin et al. konkluderte med at screening for LS bør vurderes i tilfeller med egenkapitalbevis opprinnelse i den nedre livmor segmentet [30]. Denne plasseringen kan være en kilde til diagnostisk bestyrtelse fordi det kan være vert for både endometrial og endocervikale karsinom, noe som resulterer i tumor feilklassifisering [32].
Mutasjoner ble funnet i åtte pasienter (42,1%) med en gjennomsnittsalder på 49 år .
MSH6 Hotell og
MSH2
ble mutert i seks tilfeller (tabell 5). To tilfeller med mutasjoner
MSH6
(alder 56 og 61 år) ikke oppfyller RBG kriteriene, og ingen andre synkrone svulsten var til stede ved diagnose. Dermed kan om lag 25% av pasientene med EF i forbindelse med LS synes å ha sporadiske svulster og gå udiagnostisert når RBG kriterier er brukt til å teste en mistanke om LS. LS-relaterte egenkapitalbevis vanligvis skyldes mutasjoner i
MSH6 Hotell og oppstår ved senere alder enn gjør mutasjoner i
MLH1 Hotell og
MSH2 product: [33,34]. For pasienter med LS-relaterte ECS, blir risikoen for å utvikle en andre kreft etter den innledende EC diagnose anslått til 25% i løpet av 10 år, og 50% etter 15 år [35,36]. Den 20 år kumulativ risiko for kreft etter livmorkreft har nylig blitt rapportert med 48% risiko for CRC; 11% for cancer i nyre, nyrebekken, urinleder eller; 9% for kreft i urinblæren; og 11% for brystcancer [37]. Blant pasienter med LS, 50% av ECS tilstede før en diagnose av CRC, hvis diagnoser er ikke synkron. Derfor kan EU fungere som en «sentinel» kreft for pasienter og potensielt for deres familiemedlemmer [38].
I vår studie, mutasjoner ble funnet hyppigere hos pasienter med egenkapitalbevis diagnostisert før 50 års alder, og ingen foreningen ble funnet om RBG kriteriene, IHC eller MSI status, histopatologi og tilstedeværelsen av synkrone svulster. Det er imidlertid mulig at den begrensede utvalgsstørrelsen kan være gjemt noen annen forening.
Det er flere muligheter for å forklare de tilfeller med uoppdaget germline mutasjoner. Først nærværet av mutasjoner ved testede regulatoriske regioner av de analyserte genene; andre, en MMR mangel forårsaket av somatiske biallelic inaktivering; tredje, genetisk mosaicism; fjerde, germline mutasjoner i andre gener direkte eller indirekte involvert med MMR-funksjon, slik som
SETD2 product: [39],
POLE Hotell og
POLD1 product: [40], og til slutt andre ukjente genetiske eller epigenetiske mekanismer (figur 1).
Mange institusjoner og politiske grupper vurderer om du skal gjennomføre screening for pasienter med LS blant pasienter med egenkapitalbevis. Ulike screening strategier for kvinner med EU har vist seg å være kostnadseffektive [41,42]. IHC triage av alle tilfeller av EF kan identifisere de fleste mutasjonsbærere, men til betydelig kostnad. Inkluderingen av minst ett første-grad i forhold til en LS-assosiert kreft i alle aldre, kan vise seg å være kostnadseffektive [42]. Likevel er det viktig å understreke at flere lokale faktorer kan forstyrre i effektiviteten av andre prosesser. Nye metoder for å gjøre universell screening av pasienter med EF av IHC mer kostnadseffektiv pågår. Nyere data tyder på at en to-antistoff panel testing for PMS2 og MSH6 er like effektiv som den fire-antistoff-panel for å påvise unormaliteter MMR [43,44]. Vi observerte at for å øke følsomhet i LS diagnose bør vurderes en analyse av MSI kombinert med IHC fordi ca 5% (3/61) av pasienter med mistanke om LS og en åttendedel av bekreftet LS tilfeller i vår studie hadde MSI med intakt IHC.
utbredelsen av LS vi funnet blant pasienter med EF var 4,6% (8/173); med en prediktiv frekvens på 6,6% for den spanske befolkningen. Denne spådommen ble gjort ekstrapolere funnet hyppigheten av muterte saker og vurderer mulig fravær av tapte saker. Er viktig å merke seg at dette arbeidet er en prevalens studie utført i et enkelt sykehus fra Spania, derfor ekstrapolering av data til hele spanske befolkningen kan være forutinntatt.
Tidligere studier fra nordamerikanske populasjoner viste en prevalens som spenner fra 1,8% til 4,5% [13-15]. I vår befolkning, har vi funnet at forekomsten av LS blant pasienter med EC er seksdoblet høyere enn forekomsten av LS blant pasienter med CRC (4,6% vs 0,7%) [12].
I konklusjonen, vi har funnet en høy forekomst av LS blant pasienter med egenkapitalbevis (4.6 til 6.6%). I motsetning til CRC, ble bare pasientens alder ved diagnose funnet å være assosiert med LS. I samsvar med disse resultatene, anser vi at universell screening av alle pasienter med egenkapitalbevis ved IHC, MSI og
bør anbefales MLH1
metylering analyse.
Hjelpemiddel Informasjon
Fil S1.
Støtte informasjon.
